Ultraheli rakendused MonkeyPox viiruses
Ultraheli on oluline töötlemismeetod ahvirõugete viiruse (MPXV) eraldamiseks analüütilistest proovidest, nii viiruse DNA killustumiseks kui ka ahvirõugete vaktsiini tootmiseks. Proovi ettevalmistamiseks enne diagnostikat ja analüüsi (PCR, ELISA jne) kasutatakse ultraheli rakkude lüüsimiseks, et vabastada ahvirõugete viirus raku sisemusest ja / või DNA fragmenteerimiseks. Vaktsiinide tootmisel ulatuvad rakendused viirusosakeste / DNA valmistamisest, kapseldamisest ravimikandjatesse ja inokulaatide formuleerimisest.
Allpool leiate üksikasjalikku teavet ultraheli ahvirõugete viiruse proovide ettevalmistamise kohta, samuti ultraheli abil MPXV vaktsiini tootmise kohta.
Mida leiate sellelt lehelt:
- Ultraheli lüüs ahvirõugete viiruse ekstraheerimiseks
- Monkeypox viiruse DNA ultraheli killustumine
- Ultraheli rakendused MPXV vaktsiini tootmisel
See 2x 1kW ultrasonikaatorite süsteem pideva vooluga töötamiseks on paigaldatud vaktsiini tootmisrajatisse.
Ultraheli lüüs ja DNA killustumine enne polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR)
Ahvirõugete viirusinfektsioon tuvastatakse nukleiinhappe amplifikatsiooni testimisega (NAAT), kasutades viiruse DNA ainulaadsete järjestuste tuvastamiseks reaalajas või tavapärast polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR). Proov (nt ninaneelu vahetus- või nahabiopsiatest) sisaldab rakkudes olevat viirust.
Analüüsiks tuleb viirus rakkudest vabastada ja viiruse DNA peab olema PCR-i jaoks killustatud.
Ultraheli lüüs:
Ultraheli rakkude katkestamine / lüüs on usaldusväärne ja tõhus meetod viiruste eraldamiseks rakuproovidest ja seega eelistatud tehnika keemiliste ainete, näiteks lüsosüümi, proteinaasi K ja erinevate detergentide ees, mida kasutatakse alternatiivselt rakkude lüüsi ja DNA vabanemise saavutamiseks.
Selliste keemiliste reaktiivide kasutamine nõuab siiski aeganõudvat proovi ettevalmistamist mitmes etapis enne PCR-analüüsi, et vältida PCR-reaktsiooni pärssimist. Kuna PCR-inhibiitorid mõjutavad amplifikatsiooni efektiivsust, võivad inhibiitorite koguse väikesed variatsioonid, mida ei eemaldata, põhjustada PCR-toote amplifikatsiooni suuri variatsioone (Diaco, 1995).
Lüüsi ultraheliuuringu eeliseks on see, et soovitav on rakustruktuuride täielik katkemine ja DNA vabanemine ilma lüüsivate reaktiivide ja aeganõudva proovi ettevalmistamiseta. (vrd Fykse et al., 2003)
Ultraheli DNA killustumine:
Ultraheli DNA killustumine on lihtne ja usaldusväärne, kuna see tekitab DNA fragmente, mis on häälestatavad pikkusega (aluskihid, bp). Ultraheli abil saab DNA-d tõhusalt killustada sihitud DNA pikkuseni. Täpne kontroll ultraheli parameetrite ja keerukate jahutusvõimaluste üle takistavad DNA lagunemist.
Loe lähemalt ultraheli DNA killustatuse kohta!
Ultraheli rakendused Monkeypox Virus vaktsiinis
Ahvirõugete viiruse vastu kasutatavad vaktsiinid on praegu elusviiruse vaktsiinid. Äsja välja töötatud vaktsiinid võivad kasutada muid platvorme, näiteks DNA-põhist Praegu sisaldab modifitseeritud Vaccinia Ankara viurs, nõrgestatud, mitte replikeerivat ortopoksviirust. See sisaldab ka Tris (tris-aminometaan) ja naatriumkloriidi. Vaktsiin võib sisaldada ka väikeses koguses kana embrüo fibroblastide rakkudest pärit DNA-d ja valku, mida kasutatakse vaktsiiniviiruse, bensonaasi ja antibiootikumide, nagu gentamütsiin ja tsiprofloksatsiin, kasvatamiseks.
Ultraheli homogeniseerimist kasutatakse elus-nõrgestatud viirusvaktsiinide, DNA vaktsiinide, mitmevalentsete DNA kokteilide, mRNA vaktsiinide, rekombinantsete valguvaktsiinide, viirusetaoliste osakeste vaktsiinide jne tootmiseks.
- viiruseosakeste ja toimeainete dispersioon
- emulgeerimine
- viiruste inaktiveerimine
- ravimi kandja koostis (NLC, SLN)
- Kapseldus
- Mõjurite lahustamine
- Abiainete valmistamine
- Degaseerimine / õhutustamine
Lisateavet ultraheli rakenduste kohta leiate vaktsiinide paremaks tootmiseks!
Monkeypox viiruse ultraheli eraldamise protokoll
Stittelaari uurimisrühm (2005) kasutas ultraheli lüüsi, et vabastada ahvirõugete viirus kasvu peremeesrakukultuurist, samuti rakkudest, mis on saadud nakatunud primaatide kurguvahetuse kaudu.
Ahvirõugete vaktsiini valmistamine:
Ahvirõugete viirusi kasvatati spetsiifilistel patogeenivabadel kana embrüo fibroblastide rakkudel. Pärast 1-2päevast inkubeerimist koguti viirusrakkude suspensioon ühe külmsulatamisringi abil ja kontsentreeriti seejärel tsentrifuugimise teel. Pellet peatati uuesti ja sellele tehti mitu ultraheli homogeniseerimise vooru.
Ahvirõugete viiruse isoleerimine vaktsineeritud makaakidest:
Proovid külmutati-sulatati kolm korda ja töödeldi ultraheli CupHornis. Vero raku monokihtide inokuleerimiseks kuue auguga plaatidel kasutati kahte lahjendust (1:10 ja 1:100) transportsöötmes, millele oli lisatud 1% loote veiseseerumit. Pärast 1-tunnist inkubeerimist 37 °C juures eemaldati inokulaadid ja asendati söötmega, millele oli lisatud 1% veiselooteseerumit. Monokihte kultiveeriti 5 päeva temperatuuril 37 °C ja värviti kristallvioleti lahusega.
(vrd Stittelaar et al., 2005)
Ultrasonikaatorid viiruse analüüsiks ja vaktsiinide tootmiseks
Hielscher Ultrasonics lai tooteportfell pakub ideaalset ultrasonikaatorit uurimis- ja analüütiliste laborite jaoks, samuti tööstusliku vaktsiini tootmiseks.
Hielscher Ultrasonics on spetsialiseerunud suure jõudlusega ultrasonikaatorite ja sono-bioreaktorite projekteerimisele, tootmisele ja levitamisele, mida kasutatakse uurimis- ja analüütilistes laborites, samuti rakendamiseks tööstuslikus vaktsiinide tootmises (nt Vaktsiinid, Api).
Sonikatsiooni saab rakendada avatud anumatele, suletud pidevalt segatud reaktoritele ja pidevale läbivoolureaktoritele. Kõik ultraheli süsteemide osad, mis puutuvad kokku vedela keskkonnaga, on valmistatud roostevabast terasest, titaanist või klaasist. Autoklaavitavad osad ja sanitaarseadmed tagavad farmaatsiatoodete tingimused.
Automaatne andmete salvestamine: Intelligentne tarkvara salvestab ultrahelitöötluse protsessi parameetrid automaatselt integreeritud SD-mälukaardile. Kõigi protsessiparameetrite täpne kontroll tagab, et Reprodutseeritavuse, tootmise standardiminening hõlbustab farmaatsiatoodete ohutusstandardite täitmist.
Hielscher Ultrasonics’ Ultraheli protsessorid on väga usaldusväärsed ja neid saab täpselt kontrollida. Kõiki tööstuslikke ultrasonikaatoreid saab reguleerida, et pakkuda täielikku vahemikku madalamast kuni väga kõrge amplituudini. Hielscheri ultraheli süsteemide töökindlus võimaldab 24/7 operatsiooni raskeveokite ja nõudlikes keskkondades.
Allolev tabel annab teile ülevaate meie ultrasonikaatorite ligikaudsest töötlemisvõimsusest:
| Partii maht | Voolukiirus | Soovitatavad seadmed |
|---|---|---|
| mitme kaevu / mikrotiitri plaadid | N/a | UIP400MTP |
| 1 kuni 500 ml | 10 kuni 200 ml / min | UP100H |
| 10 kuni 2000 ml | 20 kuni 400 ml / min | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 kuni 20L | 0.2 kuni 4L / min | UIP2000hdT |
| 10 kuni 100L | 2 kuni 10L/min | UIP4000hdT |
| N/a | 10 kuni 100 L / min | UIP16000 |
| N/a | Suurem | klaster UIP16000 |
Võta meiega ühendust! / Küsi meilt!
Ultraheli DNA lõikamine
Kohandatud Jkwchui'st CC-BY-SA.03 all
Kirjandus / Viited
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Faktid, mida tasub teada
ahvirõugete viirus
Monkeypox (MPV, MPXV või hMPXV) on kaheahelalise DNA viiruse liik, mis põhjustab viiruslikku zoonootilist haigust. Seda haigust tuntakse ahvirõugete infektsioonina ja see võib esineda inimestel ja loomadel. See kuulub perekonda Orthopoxvirus perekonnas Poxviridae. Ahvirõugete viirus on üks inimese ortopoksviirustest koos variola (VARV), lehmarõugete (CPX) ja vaktsineerimise (VACV) viirustega. Ortopoksviirustele on iseloomulikud suured telliskivikujulised viiruseosakesed, mis sisaldavad kaheahelalist DNA genoomi umbes 200 000 bp.
ELISA-test
ELISA tähistab ensüümiga seotud immunosorbenttesti ja on märgistatud immunoanalüüs, mida peetakse immunoanalüüside kuldstandardiks. ELISA on immunoloogiline test, mida hinnatakse selle kõrge diagnostilise tundlikkuse tõttu, mida kasutatakse molekulide, sealhulgas antikehade, antigeenide, valkude, glükoproteiinide ja hormoonide tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks. ELISA põhimõte põhineb antigeeni ja antikeha interaktsioonil. Selle antigeeni ja antikeha interaktsiooni kaudu seonduvad spetsiifilised antikehad selle sihtantigeeniga. Alles siis, kui koostoime toimub, võib substraat seonduda ensüümiga ja täheldada järgnevat substraadi muundamist, mis tähendab, et saadakse positiivne tulemus.
Hielscher Ultrasonics toodab suure jõudlusega ultraheli homogenisaatoreid alates Lab kuni tööstuslik suurus.