Ultraheli rakendused MonkeyPox Virus
Ultraheli on oluline töötlemismeetod ahvirõugete viiruse (MPXV) eraldamiseks analüütilistest proovidest, viiruse DNA killustumiseks ja ahvirõugete vaktsiini tootmiseks. Proovide ettevalmistamiseks enne diagnostikat ja analüüsi (PCR, ELISA jne) kasutatakse ultraheli rakkude lüüsimiseks, et vabastada ahvirõugete viirus raku sisemusest ja / või dna fragmenteerimiseks. Vaktsiinide tootmisel ulatuvad rakendused viiruseosakeste / DNA ettevalmistamisest, kapseldamisest ravimikandjatesse ja inokulaatide formuleerimisest.
Allpool leiate üksikasjalikku teavet ultraheli ahvirõugete viiruse proovide ettevalmistamise ja ultraheli abil MPXV vaktsiini tootmise kohta.
Mida leiate sellelt lehelt:
- Ultraheli lüüs monkeypoxi viiruse ekstraheerimiseks
- Monkeypoxi viiruse DNA ultraheli killustumine
- Ultraheli rakendused MPXV vaktsiinitootmises
See 2x 1kW ultrasonikaatorite süsteem pideva vooluga tööks on paigaldatud vaktsiinitootmisrajatisse.
Ultraheli lüüs ja DNA killustumine enne polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR)
Ahvirõugete viirusinfektsioon tuvastatakse nukleiinhappe amplifikatsiooni testimisega (NAAT), kasutades reaalajas või tavapärast polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR), et tuvastada viiruse DNA ainulaadseid järjestusi. Proov (nt ninaneelust või nahabiopsiast) sisaldab viirust rakkudes.
Analüüsimiseks tuleb viirus rakkudest vabastada ja viiruse DNA tuleb PCR-i jaoks killustada.
Ultraheli lüüs:
Ultraheli rakkude häirimine / lüüs on usaldusväärne ja tõhus meetod viiruste eraldamiseks rakuproovidest ja seega eelistatavam tehnika keemilistele ainetele, nagu lüsosüüm, proteinaas K ja erinevad detergendid, mida alternatiivselt kasutatakse raku lüüsi ja DNA vabanemise saavutamiseks.
Selliste keemiliste reaktiivide kasutamine nõuab siiski aeganõudvat proovide ettevalmistamist mitmes etapis enne PCR-analüüsi, et vältida PCR-reaktsiooni pärssimist. Kuna PCR-inhibiitorid mõjutavad amplifikatsiooni efektiivsust, võivad eemaldamata inhibiitorite koguse väikesed variatsioonid põhjustada PCR-produkti amplifikatsiooni suuri erinevusi (Diaco, 1995).
Ultraheli lüüsi eeliseks on see, et rakustruktuuride täielik katkestamine ja DNA vabanemine ilma lüüsimisreaktiivide vajaduseta ja aeganõudev proovi ettevalmistamine on soovitav. (vrd Fykse et al., 2003)
Ultraheli DNA killustatus:
Ultraheli DNA killustumine on lihtne ja usaldusväärne, kuna tekitab DNA fragmente, mis on häälestatavad pikkuses (basepairs, bp). Ultraheli abil saab DNA-d tõhusalt killustada sihitud DNA pikkuseni. Ultraheli parameetrite täpne kontroll ja keerukad jahutusvõimalused takistavad DNA lagunemist.
Loe lähemalt ultraheli DNA killustatuse kohta!
Ultraheli rakendused Monkeypoxi viiruse vaktsiinis
Ahvirõugete viiruse vastu kasutatavad vaktsiinid on praegu elusviiruse vaktsiinid. Äsja välja töötatud vaktsiinid võivad kasutada muid platvorme, näiteks DNA-põhist Praegu sisaldab modifitseeritud Vaccinia Ankara viurs, nõrgestatud, mittereplikatiivne ortopoksviirus. Samuti sisaldab see Tris (tris-aminometaan) ja naatriumkloriidi. Vaktsiin võib sisaldada ka väikeses koguses DNA-d ja valku kanaembrüo fibroblastirakkudest, mida kasutatakse vaktsiiniviiruse, bensonaasi ja antibiootiliste ühendite, näiteks gentamütsiini ja tsiprofloksatsiini kasvatamiseks.
Ultraheli homogeniseerimist kasutatakse nõrgestatud elus nõrgestatud viiruse vaktsiinide, DNA vaktsiinide, mitmevalentsete DNA kokteilide, mRNA vaktsiinide, rekombinantsete valguvaktsiinide, viirusetaoliste osakeste vaktsiinide jne tootmisel.
- viiruseosakeste ja -ainete hajumine
- emulgeerimine
- viiruste inaktiveerimine
- ravimikandja koostis (NLC, SLN)
- kapseldamine
- ainete lahustamine
- abiainete valmistamine
- Degaseerimine / de-aeratsioon
Põhjalikumat teavet ultraheli rakenduste kohta leiate vaktsiinide paremaks tootmiseks!
Monkeypoxi viiruse ultraheli isoleerimise protokoll
Stittelaari (2005) uurimisrühm kasutas ultraheli lüüsi, et vabastada ahvirõugete viirus nii kasvu peremeesrakukultuurist kui ka nakatunud primaatide kurgu vahetuste kaudu saadud rakkudest.
Monkeypoxi vaktsiini valmistamine:
Ahvirõugete viiruseid kasvatati spetsiifilise patogeenivabadel kanaembrüo fibroblastrakkudel. Pärast 1-2-päevast inkubeerimist koguti viiruserakkude suspensioon ühe külmsulatustsükliga ja kontsentreeriti seejärel tsentrifuugimise teel. Pellet resuspendeeriti ja allutati mitmele ultraheli homogeniseerimise ringile.
Monkeypoxi viiruse isoleerimine vaktsineeritud makaakidest:
Proovid külmutati-sulatati kolm korda ja ultraheliga CupHorn. Kahte lahjendust (1:10 ja 1:100) transpordikeskkonnas, millele oli lisatud 1% veise looteseerumit, kasutati Vero raku monokihtide inokuleerimiseks kuue süvendiga plaatidel. Pärast 1 h inkubeerimist temperatuuril 37 °C eemaldati inokulaadid ja asendati söötmega, millele oli lisatud 1% veise looteseerumit. Monokihte kultiveeriti 5 päeva 37 °C juures ja värviti kristallvioleti lahusega.
(vrd Stittelaar et al., 2005)
Ultrasonikaatorid viiruseanalüüsiks ja vaktsiinide tootmiseks
Hielscher Ultrasonics lai tooteportfell pakub ideaalset ultrasonikaatorit uurimis- ja analüüsilaboritele ning tööstusliku vaktsiini tootmiseks.
Hielscher Ultrasonics on spetsialiseerunud suure jõudlusega ultrasonikaatorite ja sono-bioreaktorite projekteerimisele, tootmisele ja levitamisele kasutamiseks uurimis- ja analüüsilaborites ning rakendamiseks tööstuslikus vaktsiinitootmises (nt. vaktsiinid, Api)
Sonikatsiooni saab rakendada avatud anumatele, suletud pidevalt segatavatele reaktoritele ja pideva läbivooluga reaktoritele. Kõik ultraheli süsteemide osad, mis puutuvad kokku vedela keskkonnaga, on valmistatud roostevabast terasest, titaanist või klaasist. Autoklaavitavad osad ja sanitaarseadmed tagavad tootmise farmaatsiaklassi tingimused.
Automaatne andmete salvestamine: Intelligentne tarkvara salvestab parameetrid ultrahelitöötluse protsessi automaatselt integreeritud SD mälukaardile. Kõigi protsessiparameetrite täpne kontroll tagab, et Reprodutseeritavus, tootmise standardiminening hõlbustab farmaatsiatoodete ohutusstandardite täitmist.
Hielscher ULTRASONICS’ ultraheli protsessorid on väga usaldusväärsed ja neid saab täpselt kontrollida. Kõiki tööstuslikke ultrasonikaatoreid saab reguleerida, et pakkuda täielikku vahemikku madalamast kuni väga kõrge amplituudini. Hielscheri ultraheli süsteemide töökindlus võimaldab 24/7 operatsiooni raskeveokite ja nõudlikes keskkondades.
Alljärgnev tabel annab teile ülevaate meie ultrahelihitiste ligikaudse töötlemisvõimsusest:
| partii Köide | flow Rate | Soovitatavad seadmed |
|---|---|---|
| mitme kaevu / mikrotiiterplaadid | N/a | Led, mida sa ei pea booking.com-i külastajaid vastu |
| 1 kuni 500 ml | 10 kuni 200 ml / min | UP100H |
| 10 kuni 2000 ml | 20 kuni 400 ml / min | Uf200 ः t, UP400St |
| 0.1 kuni 20 l | 0.2 kuni 4 l / min | UIP2000hdT |
| 10 kuni 100 l | 2 kuni 10 l / min | UIP4000hdT |
| N/a | 10 kuni 100 l / min | UIP16000 |
| N/a | suurem | klastri UIP16000 |
Võta meiega ühendust! / Küsi meiega!
Ultraheli DNA murdepinna
Kohandatud Jkwchuist CC-BY-SA.03 alusel
Kirjandus/viited
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Faktid Tasub teada
Ahvirõugete viirus
Ahvirõuged (MPV, MPXV või hMPXV) on kaheahelalise DNA viiruse liik, mis põhjustab viiruslikku zoonootilist haigust. Seda haigust tuntakse ahvirõugete nakkusena ja see võib esineda inimestel ja loomadel. See kuulub perekonda Orthopoxvirus perekonnas Poxviridae. Ahvirõugete viirus on üks inimese ortopoksviirustest koos variola (VARV), lehmarõugete (CPX) ja vaktsiini (VACV) viirustega. Ortopoksviirustele on iseloomulikud suured tellisekujulised viiruseosakesed, mis sisaldavad kaheahelalist DNA genoomi umbes 200 000 bp.
ELISA analüüs
ELISA tähistab ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi ja on märgistatud immunoanalüüs, mida peetakse immunoanalüüside kuldstandardiks. ELISA on immunoloogiline test, mida hinnatakse selle kõrge diagnostilise tundlikkuse tõttu ja mida kasutatakse molekulide, sealhulgas antikehade, antigeenide, valkude, glükoproteiinide ja hormoonide tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks. ELISA põhimõte põhineb antigeeni ja antikeha koostoimel. Selle antigeeni-antikeha interaktsiooni kaudu seonduvad spetsiifilised antikehad selle sihtantigeeniga. Ainult siis, kui koostoime toimub, võib substraat seonduda ensüümiga ja täheldada järgnevat substraadi muundamist, mis tähendab, et saadakse positiivne tulemus.
Hielscher Ultrasonics toodab suure jõudlusega ultraheli homogenisaatoreid Lab et tööstuslik suurus.