Υπερηχητικές εφαρμογές στον ιό MonkeyPox
Η υπερήχους είναι μια σημαντική μέθοδος επεξεργασίας για την απομόνωση του ιού του πιθήκου (MPXV) από αναλυτικά δείγματα, για τον κατακερματισμό του DNA του ιού καθώς και για την παρασκευή εμβολίων πιθήκων. Για την προετοιμασία του δείγματος πριν από τη διάγνωση και την ανάλυση (PCR, ELISA κ.λπ.) υπερήχων χρησιμοποιείται για τη λύση των κυττάρων προκειμένου να απελευθερωθεί ο ιός της μαϊμού από το εσωτερικό του κυττάρου ή / και να κατακερματιστεί το DNA. Στην παραγωγή εμβολίων, οι εφαρμογές κυμαίνονται από την προετοιμασία σωματιδίων / DNA του ιού, την ενθυλάκωση σε φορείς φαρμάκων και τη διαμόρφωση του εμβολίου.
Παρακάτω μπορείτε να βρείτε λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με την προετοιμασία δείγματος ιού υπερήχων πιθήκων καθώς και την υπερηχητικά υποβοηθούμενη παραγωγή εμβολίου MPXV.
Τι θα βρείτε σε αυτή τη σελίδα:
- Υπερηχητική λύση για την εκχύλιση του ιού Monkeypox
- Υπερηχητικός κατακερματισμός του DNA του ιού μαϊμού
- Υπερηχητικές εφαρμογές στην παραγωγή εμβολίων MPXV
Αυτό το σύστημα υπερήχων 2x 1kW για λειτουργία συνεχούς ροής εγκαθίσταται σε εγκατάσταση παραγωγής εμβολίων.
Υπερηχητική λύση και κατακερματισμός DNA πριν από την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR)
Μια λοίμωξη από τον ιό του πιθήκου ανιχνεύεται με δοκιμές ενίσχυσης νουκλεϊκών οξέων (NAAT), χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο ή συμβατική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR), για την ανίχνευση μοναδικών αλληλουχιών ιικού DNA. Το δείγμα (π.χ. από ρινοφαρυγγική ανταλλαγή ή βιοψίες δέρματος) περιέχει τον ιό στα κύτταρα.
Για ανάλυση, ο ιός πρέπει να απελευθερωθεί από τα κύτταρα και το ιικό DNA πρέπει να κατακερματιστεί για PCR.
Υπερηχητική λύση:
Η υπερηχητική κυτταρική διαταραχή / λύση είναι μια αξιόπιστη και αποτελεσματική μέθοδος για την απομόνωση ιών από δείγματα κυττάρων και ως εκ τούτου μια προτιμώμενη τεχνική έναντι χημικών παραγόντων, όπως η λυσοζύμη, η πρωτεϊνάση Κ και διαφορετικά απορρυπαντικά που χρησιμοποιούνται εναλλακτικά για την επίτευξη κυτταρικής λύσης και απελευθέρωσης DNA.
Ωστόσο, η χρήση τέτοιων χημικών αντιδραστηρίων απαιτεί χρονοβόρα προετοιμασία δείγματος σε διάφορα στάδια πριν από την ανάλυση PCR για την πρόληψη της αναστολής της αντίδρασης PCR. Δεδομένου ότι οι αναστολείς PCR επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης, μικρές διακυμάνσεις της ποσότητας αναστολέων που δεν αφαιρούνται μπορούν να οδηγήσουν σε μεγάλες διακυμάνσεις στην ενίσχυση του προϊόντος PCR (Diaco, 1995).
Το πλεονέκτημα της υπερήχων για λύση είναι ότι είναι επιθυμητή η πλήρης διαταραχή των κυτταρικών δομών και η απελευθέρωση του DNA χωρίς την ανάγκη για αντιδραστήρια λύσης και χρονοβόρα προετοιμασία δείγματος. (πρβλ. Φυκσέ κ.ά., 2003)
Υπερηχητικός κατακερματισμός DNA:
Ο υπερηχητικός κατακερματισμός DNA είναι απλός και αξιόπιστος καθώς παράγει θραύσματα DNA ρυθμιζόμενα σε μήκος (basepairs, bp). Χρησιμοποιώντας υπερήχους, το DNA μπορεί να κατακερματιστεί αποτελεσματικά στο στοχευόμενο μήκος DNA. Ο ακριβής έλεγχος των παραμέτρων υπερήχων και οι εξελιγμένες επιλογές ψύξης αποτρέπουν την υποβάθμιση του DNA.
Διαβάστε περισσότερα για τον υπερηχητικό κατακερματισμό DNA!
Υπερηχητικές εφαρμογές στο εμβόλιο του ιού Monkeypox
Τα εμβόλια που χρησιμοποιούνται κατά του ιού των πιθήκων είναι επί του παρόντος ζωντανά εμβόλια κατά του ιού. Τα πρόσφατα αναπτυγμένα εμβόλια ενδέχεται να χρησιμοποιούν άλλες πλατφόρμες, όπως το DNA-based Το επί του παρόντος περιέχει ένα τροποποιημένο Vaccinia Ankara viurs, έναν εξασθενημένο, μη αντιγραφόμενο ορθοποξικό ιό. Περιέχει επίσης Tris (τρις-αμινομεθάνιο) και χλωριούχο νάτριο. Το εμβόλιο μπορεί επίσης να περιέχει μικρές ποσότητες DNA και πρωτεΐνης από τα κύτταρα ινοβλαστών εμβρύου κοτόπουλου, τα οποία χρησιμοποιούνται για την ανάπτυξη του ιού του εμβολίου, βενζονάσης και αντιβιοτικών ενώσεων όπως η γενταμυκίνη και η σιπροφλοξασίνη.
Η ομογενοποίηση με υπερήχους χρησιμοποιείται στην παραγωγή εμβολίων ζωντανών εξασθενημένων ιών, εμβολίων DNA, κοκτέιλ πολυδύναμου DNA, εμβολίων mRNA, εμβολίων ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών, εμβολίων σωματιδίων που μοιάζουν με ιούς κ.λπ.
- διασπορά σωματιδίων και παραγόντων του ιού
- γαλακτωματοποίηση
- αδρανοποίηση των ιών
- σκεύασμα φορέα φαρμάκου (NLC, SLN)
- ενθυλάκωση
- διάλυση παραγόντων
- παρασκευή ανοσοενισχυτικών
- Απαέρωση / Αποαερισμός
Πρωτόκολλο για την υπερηχητική απομόνωση του ιού Monkeypox
Η ερευνητική ομάδα του Stittelaar (2005) χρησιμοποίησε υπερηχητική λύση για να απελευθερώσει τον ιό του πιθήκου από την καλλιέργεια κυττάρων ξενιστή ανάπτυξης καθώς και από κύτταρα που λαμβάνονται μέσω ανταλλαγών λαιμού από μολυσμένα πρωτεύοντα.
Προετοιμασία εμβολίου πιθήκων:
Οι ιοί των πιθήκων αναπτύχθηκαν σε κύτταρα ινοβλαστών εμβρύων κοτόπουλου χωρίς ειδικά παθογόνα. Μετά από επώαση για 1 έως 2 ημέρες, το εναιώρημα των κυττάρων του ιού συλλέχθηκε με έναν γύρο κατάψυξης-απόψυξης και στη συνέχεια συμπυκνώθηκε με φυγοκέντρηση. Το σφαιρίδιο επαναιωρήθηκε και υποβλήθηκε σε αρκετούς γύρους ομογενοποίησης υπερήχων.
Απομόνωση του ιού του πιθήκου από εμβολιασμένους μακάκους:
Τα δείγματα καταψύχθηκαν τρεις φορές και υπερήχησαν σε ένα υπερηχητικό CupHorn. Δύο αραιώσεις (1:10 και 1:100) σε μέσο μεταφοράς συμπληρωμένες με 1% εμβρυϊκό ορό βοοειδών χρησιμοποιήθηκαν για τον εμβολιασμό μονοστιβάδων κυττάρων Vero σε τρυβλία έξι κοιλοτήτων. Μετά από 1 ώρα επώασης στους 37°C, τα εμβόλια αφαιρέθηκαν και αντικαταστάθηκαν με θρεπτικό μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με 1% εμβρυϊκό ορό βοοειδών. Οι μονοστιβάδες καλλιεργήθηκαν για 5 ημέρες στους 37°C και χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες διάλυμα.
(πρβλ. Στιτελάρ κ.ά., 2005)
Υπερήχων για ανάλυση ιών και παραγωγή εμβολίων
Hielscher Υπέρηχοι ευρύ χαρτοφυλάκιο προϊόντων προσφέρει το ιδανικό υπερηχητικό για την έρευνα και τα αναλυτικά εργαστήρια, καθώς και για τη βιομηχανική παρασκευή εμβολίων.
Η Hielscher Ultrasonics ειδικεύεται στο σχεδιασμό, την κατασκευή και τη διανομή υπερήχων υψηλής απόδοσης και sono-βιοαντιδραστήρα για χρήση σε ερευνητικά και αναλυτικά εργαστήρια καθώς και για εφαρμογή στη βιομηχανική παραγωγή εμβολίων (π.χ. εμβόλια, Api).
Κατεργασία με υπερήχους μπορεί να εφαρμοστεί σε ανοικτά δοχεία, κλειστούς αντιδραστήρες συνεχούς ανάδευσης και αντιδραστήρες συνεχούς ροής. Όλα τα μέρη των υπερηχητικών συστημάτων, τα οποία έρχονται σε επαφή με το υγρό μέσο, είναι κατασκευασμένα από ανοξείδωτο χάλυβα, τιτάνιο ή γυαλί. Τα αυτόκλειστα εξαρτήματα και τα είδη υγιεινής εξασφαλίζουν την παραγωγή κάτω από συνθήκες φαρμακευτικής ποιότητας.
Αυτόματη καταγραφή δεδομένων: Έξυπνο λογισμικό καταγράφει τις παραμέτρους της διαδικασίας υπερήχων αυτόματα στην ενσωματωμένη κάρτα μνήμης SD. Ο ακριβής έλεγχος όλων των παραμέτρων διεργασίας εξασφαλίζει την αναπαραγωγιμότητας, τυποποίηση της παραγωγής, και διευκολύνει την εκπλήρωση των προτύπων ασφάλειας των φαρμακευτικών προϊόντων.
Hielscher Υπέρηχοι’ οι υπερηχητικοί επεξεργαστές είναι εξαιρετικά αξιόπιστοι και μπορούν να ελεγχθούν με ακρίβεια. Όλοι οι βιομηχανικοί υπερηχητικοί μπορούν να προσαρμοστούν για να παραδώσουν το πλήρες φάσμα από χαμηλότερα έως πολύ υψηλά πλάτη. Η ευρωστία των υπερηχητικών συστημάτων της Hielscher επιτρέπει 24 ώρες το 24ωρο, 7 ημέρες την εβδομάδα λειτουργία υπό βαρέως τύπου και σε απαιτητικά περιβάλλοντα.
Ο παρακάτω πίνακας σας δίνει μια ένδειξη για την κατά προσέγγιση ικανότητα επεξεργασίας των υπερήχων μας:
| Μαζική Όγκος | Ρυθμός ροής | Προτεινόμενες συσκευές |
|---|---|---|
| πλάκες πολλαπλών φρεατίων / μικροτιτλοδότησης | Δ / υ | UIP400MTP |
| 1 έως 500mL | 10 έως 200 ml / λεπτό | UP100H |
| 10 έως 2000mL | 20 έως 400mL / λεπτό | Uf200 ः t, UP400St |
| 0.1 έως 20 λίτρα | 0.2 έως 4 λίτρα / λεπτό | UIP2000hdT |
| 10 έως 100L | 2 έως 10 λίτρα / λεπτό | UIP4000hdT |
| Δ / υ | 10 έως 100 λίτρα / λεπτό | UIP16000 |
| Δ / υ | μεγαλύτερος | σύμπλεγμα UIP16000 |
Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!
Υπερήχων DNA διάτμηση
Προσαρμοσμένο από Jkwchui κάτω από CC-BY-SA.03
Λογοτεχνία / Αναφορές
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζουμε
Ιός των πιθήκων
Ο πίθηκος (MPV, MPXV ή hMPXV) είναι ένα είδος δίκλωνου ιού DNA, ο οποίος προκαλεί μια ιογενή ζωονοσογόνο νόσο. Αυτή η ασθένεια είναι γνωστή ως λοίμωξη από πιθήκους και μπορεί να εμφανιστεί σε ανθρώπους και ζώα. Ανήκει στο γένος Ορθοποξοϊός στην οικογένεια Poxviridae. Ο ιός των πιθήκων είναι ένας από τους ανθρώπινους ορθοποξοϊούς μαζί με τους ιούς variola (VARV), cowpox (CPX) και vaccinia (VACV). Οι ορθοποξοϊοί χαρακτηρίζονται από μεγάλα σωματίδια ιού σε σχήμα τούβλου, που περιέχουν ένα δίκλωνο γονιδίωμα DNA περίπου 200.000 bp.
Δοκιμασία ΕΛΙΖΑ
Το ELISA σημαίνει ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία και είναι μια επισημασμένη ανοσοδοκιμασία που θεωρείται το χρυσό πρότυπο ανοσοδοκιμών. Το ELISA είναι ένα ανοσολογικό τεστ, που αποτιμάται για την υψηλή διαγνωστική ευαισθησία του, χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και ποσοτικοποίηση μορίων, συμπεριλαμβανομένων αντισωμάτων, αντιγόνων, πρωτεϊνών, γλυκοπρωτεϊνών και ορμονών. Η αρχή της ELISA βασίζεται σε μια αλληλεπίδραση αντιγόνου-αντισώματος. Με αυτή την αλληλεπίδραση αντιγόνου-αντισώματος, τα ειδικά αντισώματα συνδέονται με το αντιγόνο-στόχο του. Μόνο όταν λαμβάνει χώρα η αλληλεπίδραση, το υπόστρωμα μπορεί να συνδεθεί με το ένζυμο και μπορεί να παρατηρηθεί επακόλουθη μετατροπή υποστρώματος, πράγμα που σημαίνει ότι επιτυγχάνεται θετικό αποτέλεσμα.
Hielscher υπέρηχοι κατασκευάζει υψηλής απόδοσης υπερήχων ομογενοποιητές από Εργαστήριο προς την βιομηχανικό μέγεθος.