Alfa-synuclein-fragmentering ved hjælp af VialTweeter Sonicator

α-synuclein-fibriller og bånd fragmenteres i videnskabelig forskning for at generere mindre fibrillestykker eller endda individuelle proteinmolekyler, som lettere kan analyseres ved hjælp af forskellige eksperimentelle teknikker. VialTweeter Sonicator er en af de mest almindeligt anvendte ultralydapparater til effektiv og pålidelig alfa-synuclein-fragmentering.

α-Synuclein i forskning

Alfa-synucleinfibriller er proteinaggregater, der er stærkt forbundet med neurodegenerative lidelser såsom Parkinsons sygdom og visse former for demens, herunder demens med Lewy-legemer. Forskning fokuseret på alfa-synukleinfibriller har til formål at forstå deres rolle i sygdomsprogression og udvikle potentielle terapeutiske interventioner. Ved at nedbryde alfa-synukleinfibriller i mindre fragmenter kan forskere undersøge deres specifikke strukturelle træk. For eksempel gør fragmentering af alfa-synucleinfibriller det muligt for forskere at undersøge deres interaktioner med andre molekyler, såsom proteiner, lipider eller små molekyler. Ved at producere mindre fragmenter kan bindingsstederne og affiniteten for disse interagerende partnere undersøges mere effektivt. Mindre α-syn-fribriler og bånd kan også vise ændret toksicitet og biokemiske virkninger. Derfor er en pålidelig og effektiv fragmenteringsteknik, der giver reproducerbare resultater i en hurtig og enkel prøvebehandling, afgørende.
Ultralyd alfa-syn-fragmentering: VialTweeter sonicator er det etablerede ultralydsprøveforberedelsessystem, der sonikerer op til 10 hætteglas samtidigt under nøjagtig de samme forhold. Programmerbare indstillinger giver mulighed for enkel og hurtig gentagelse af de samme eksperimenter, hvilket giver meget pålidelige og reproducerbare resultater i alfa-synuclein-fibrillfragmentering.

α-Synuclein Sample Forberedelse med en Sonicator

En tilgang til at studere alfa-synucleinfibriller involverer deres ekstraktion og fragmentering ved hjælp af teknikker såsom sonikering. Sonikering er en proces, der bruger højintensive, lavfrekvente ultralydsbølger til at forstyrre og nedbryde proteinaggregater, hvilket fører til frigivelse af mindre fibriller eller individuelle proteinmolekyler. Sonicatoren VialTweeter er en almindeligt anvendt enhed i α-synuclein-relaterede forskningsundersøgelser til dette formål.

Talrige forskningsundersøgelser beskriver præcise prøveforberedelsesprotokoller for alfa-synucleinfibriller sonikering, som bruger Hielscher VialTweeter til effektiv og pålidelig α-synuclein fibrillfragmentering. Ved at fragmentere fibrillerne ultralydsmæssigt kan forskere analysere de resulterende produkter og undersøge deres struktur, toksicitet og interaktioner med andre molekyler. Denne forskning giver vigtig indsigt i de mekanismer, der ligger til grund for neurodegeneration og potentielt identificerer nye terapeutiske mål. De veletablerede α-synuclein sonikeringsprotokoller ved hjælp af VialTweeter sonicator giver mulighed for pålidelige og reproducerbare resultater.

Øverste billeder: ufragmenterede alfa-synuklein-fibriller
Nederste billeder: Ultralydsfragmenterede alfa-synuclein-fibriller med VialTweeter-sonikeren
(studie og billeder: ©Dieriks et al., 2022)

Ultralydsfragmentering af α-synucleinfibriller – Protokoller

Da mange forskere bruger VialTweeter-sonikeren som foretrukken fragmenteringsteknik til at producere ensartede α-synuclein-fibrillfragmenter, er etablerede protokoller let tilgængelige. Nedenfor kan du finde et par eksempler på fragmenteringsprotokoller.
 

 
KlarTau frøforberedelse: ClearTau-fibrillerne blev fortyndet til 10 μM i dH2O og sonikeret ved 70% amplitude i 50 s med 1 s ON 1 s OFF-cyklus i røret ved hjælp af sonicator UP200St med VialTweeter. Frø var kendetegnet ved elektronmikroskopi.
ThS-fluorescensmåling: ClearTau-fibrillerne blev fortyndet til 2,5 μM i dH2O og sonikeret ved 70% amplitude i 50 sekunder med 1 s ON 1 s OFF-cyklus i røret ved hjælp af UP200St med VialTweeter. 2,5 μM Tau 4R2N monomer i fuld længde blev brugt som kontrol. Til 100 μl-reaktionen blev der tilsat 100 μl ThS (10 μM), hvilket gav en endelig proteinkoncentration på 1,25 μM. Enkeltpunkts ThS-fluorescens blev målt ved hjælp af 96 godt klare bundplader opsat i FLUOstar Omega mikropladelæser med excitation ved 445 nm og emission ved 485 nm blev registreret.
(jf. Limorenko et al., 2023)
 
Ensartet α-synucleinlængde ved hjælp af sonikering: Længdeheterogeniteten af α-syn-fibriller og bånd blev reduceret ved sonikering i 20 minutter på is i 2 ml Eppendorf-rør i en VialTweeter indstillet til 75% amplitude, 0,5 s impulser.
(jf. Bousset et al., 2013)
 
Kvalitetskontrollen af humant rekombinant monomert WT eller S129A a-Syn og de fibrillære polymorfer, de genererer, samt af a-Syn 1-110 blev udført. Efterfølgende blev de fibrillære polymorfer fragmenteret ved sonikering i 20 minutter i 2-ml Eppendorf-rør i VialTweeter ultralydsapparatet for at generere fibrillære partikler med en gennemsnitlig størrelse på 42-52 nm, der er egnede til endocytose.
(jf. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterisering af fem fibrillære α-Syn polymorfer. (A) Transmissionselektronmikrografer af negativt farvede α-synfibrillære polymorfer fibriller, bånd, fibriller-91, fibriller-65 og fibriller-110 før (øvre bane) og efter fragmentering med VialTweeter (nedre bane) er vist. (B) Længdefordelingen af de fragmenterede fibrillære polymorfer er vist. Antallet (n) af fibrillære samlinger, som histogrammerne blev afledt af, er angivet.
(undersøgelse og billeder: Shrivastava et al., 2020)

 
α-Syn-fibrillerne blev fragmenteret ved sonikering i 20 minutter i 2 ml Eppendorf-rør i en VialTweeter for at generere fibrillære partikler med en gennemsnitlig størrelse 42-52 nm som vurderet ved TEM-analyse.
(jf. Negrini et al., 2022)
 
De resuspenderede fibriller91 (i PBS) blev fragmenteret før tilsætning til cellekulturer ved sonikering i 20 minutter i 2 ml Eppendorf-rør ved hjælp af Vial Tweeter sonicator, alikvoteret, flashfrosset i flydende nitrogen og opbevaret indtil brug ved -80 ̊C.
(jf. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter og Lab Sonicators til α-Syn fragmentering

Hielscher Ultrasonics er verdensomspændende anerkendt som førende producent af banebrydende ultralydapparater. Betroet og etableret i store forskningslaboratorier verden over, tilbyder vores ultralydapparater uovertruffen kvalitet og ydeevne til dine kritiske eksperimenter.
Med Hielscher VialTweeter og enhver anden Hielscher soniker vil du opleve uovertruffen brugerkomfort, da de er omhyggeligt konstrueret til reproducerbare resultater, brugervenlighed og problemfri betjening. Med automatiske dataoptagelsesfunktioner kan du fokusere på din forskning, mens vores ultralydapparater omhyggeligt registrerer vigtige data for reproducerbarhed og præcision.
Opnå ensartede og reproducerbare resultater med tillid!
Vores ultralydapparater er konstrueret og fremstillet i Tyskland. Tysk præcision og højeste tekniske kvalitet for at sikre pålidelig og nøjagtig prøveforberedelse såsom alfa-synuclein fibriller fragmentering hver gang. Ikke flere bekymringer om inkonsekvente resultater – vores ultralydsteknologi sikrer, at din forskning forbliver på forkant med videnskabelige fremskridt.
Men det er ikke alt! Vores forpligtelse til ekspertise rækker ud over vores produkter. Vi sætter en ære i vores enestående kundeservice og yder ekspertsupport til at løse eventuelle spørgsmål eller bekymringer, du måtte have. Vores dedikerede team er her for at hjælpe dig på hvert trin i din forskningsrejse og sikre, at du får mest muligt ud af vores ultralydapparater.
Vælg innovation, pålidelighed og enestående brugeroplevelse - vælg vores laboratoriesonikere såsom VialTweeter til alfa-synuclein fibrillfragmentering. Drag fordel af de allerede etablerede protokoller, og bliv en del af rækken af førende forskere, der stoler på vores teknologi til deres kritiske undersøgelser. Løft din forskning og udforsk nye grænser inden for demens og neurodegenerative sygdomsforskning med vores avancerede ultralydsapparater.

Design, produktion og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og designstandarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydsapparater.

Hielscher Ultrasonics er et ISO-certificeret firma og lægger særlig vægt på højtydende ultralydapparater med avanceret teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher sonikere CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.
 
Tabellen nedenfor giver dig en indikation af den omtrentlige behandlingskapacitet for vores ultralydapparater i laboratoriestørrelse: