α-synucleinfibriller og bånd fragmenteres i videnskabelig forskning for at generere mindre fibriluddrag eller endda individuelle proteinmolekyler, som lettere kan analyseres ved hjælp af forskellige eksperimentelle teknikker. VialTweeter Sonicator er en af de mest almindeligt anvendte ultralydapparater til effektiv og pålidelig alfa-synucleinfragmentering.

α-synuclein i forskning

Alfa-synucleinfibriller er proteinaggregater, der er stærkt forbundet med neurodegenerative lidelser såsom Parkinsons sygdom og visse former for demens, herunder demens med Lewy-kroppe. Forskning med fokus på alfa-synucleinfibriller sigter mod at forstå deres rolle i sygdomsprogression og udvikle potentielle terapeutiske interventioner. Ved at nedbryde alfa-synucleinfibriller i mindre fragmenter kan forskere undersøge deres specifikke strukturelle træk. For eksempel gør fragmentering af alfa-synucleinfibriller det muligt for forskere at undersøge deres interaktioner med andre molekyler, såsom proteiner, lipider eller små molekyler. Ved at producere mindre fragmenter kan bindingsstederne og affiniteten for disse interagerende partnere undersøges mere effektivt. Mindre α-Syn fribrils og bånd kan også vise ændret toksicitet og biokemiske virkninger. Derfor er en pålidelig og effektiv fragmenteringsteknik, der giver reproducerbare resultater i en hurtig og enkel prøvebehandling, afgørende.
Ultralyd alfa-syn fragmentering: VialTweeter sonikator er det etablerede ultralydsprøveforberedelsessystem, der sonikerer op til 10 hætteglas samtidigt under nøjagtig de samme betingelser. Programmerbare indstillinger giver mulighed for enkel og hurtig genkørsel af de samme eksperimenter, hvilket giver meget pålidelige og reproducerbare resultater i alfa-synucleinfibrilfragmentering.

α-synuclein prøveforberedelse med en sonikator

En tilgang til at studere alfa-synucleinfibriller involverer deres ekstraktion og fragmentering ved hjælp af teknikker som sonikering. Sonikering er en proces, der bruger højintensitet, lavfrekvente ultralydbølger til at forstyrre og nedbryde proteinaggregater, hvilket fører til frigivelse af mindre fibriller eller individuelle proteinmolekyler. Sonikatoren VialTweeter er en almindeligt anvendt enhed i α-synuclein-relaterede forskningsundersøgelser til dette formål.

Talrige forskningsundersøgelser beskriver præcise prøveforberedelsesprotokoller af alfa-synucleinfibriller sonikering, som bruger Hielscher VialTweeter til effektiv og pålidelig α-synucleinfibrilfragmentering. Ved at fragmentere fibrillerne ultralyd kan forskere analysere de resulterende produkter og undersøge deres struktur, toksicitet og interaktioner med andre molekyler. Denne forskning giver vigtig indsigt i mekanismerne bag neurodegeneration og potentielt identificere nye terapeutiske mål. De veletablerede α-synuclein sonikeringsprotokoller ved hjælp af VialTweeter sonikator giver mulighed for pålidelige og reproducerbare resultater.

Øvre billeder: ufragmenterede alfa-synucleinfibriller
Lavere billeder: Ultralyd fragmenteret alfa-synuclein fibriller med VialTweeter sonikator
(undersøgelse og billeder: ©Dieriks et al., 2022)

Ultralydfragmentering af α-synucleinfibriller – protokoller

Da mange forskere bruger VialTweeter-sonikatoren som foretrukken fragmenteringsteknik til at producere ensartede α-synuclein-fibrilfragmenter, er etablerede protokoller let tilgængelige. Nedenfor kan du finde et par eksemplariske fragmenteringsprotokoller.
 

 
ClearTau frø forberedelse: ClearTau-fibrillerne blev fortyndet til 10 μM i dH2O og sonikeret ved 70% amplitude i 50 s med 1 s ON 1 s OFF cyklus in-tube ved hjælp af sonikatoren UP200St med VialTweeter. Frø blev karakteriseret ved elektronmikroskopi.
ThS fluorescens måling: ClearTau-fibrillerne blev fortyndet til 2,5 μM i dH2O og sonikeret ved 70% amplitude i 50 s med 1 s ON 1 s OFF cyklus i røret ved hjælp af UP200St med VialTweeter. 2,5 μM Tau 4R2N-monomer i fuld længde blev brugt som kontrol. Til 100 μl-reaktionen blev 100 μl ThS (10 μM) tilsat, hvilket gav endelige proteinkoncentrationer på 1,25 μM. Enkeltgangspunktet ThS-fluorescens blev målt ved hjælp af 96 godt klare bundplader opstillet i FLUOstar Omega-mikropladelæser med excitation ved 445 nm og emission ved 485 nm blev registreret.
(jf. Limorenko et al., 2023)
 
Ensartet α-synuclein længde ved hjælp af sonikering: Længdeheterogeniteten af α-syn fibriller og bånd blev reduceret ved sonikering i 20 minutter på is i 2 ml Eppendorf-rør i en VialTweeter indstillet til 75% amplitude, 0,5 s pulser.
(jf. Bousset et al., 2013)
 
Kvalitetskontrol af human rekombinant monomert WT eller S129A a-Syn og de fibrillære polymorfer, de genererer, såvel som a-Syn 1-110, blev udført. Derefter blev de fibrillære polymorfer fragmenteret ved sonikering i 20 minutter i 2 ml Eppendorf-rør i VialTweeter-ultralydatoren for at generere fibrillære partikler med en gennemsnitlig størrelse på 42-52 nm, der er egnede til endocytose.
(jf. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterisering af fem fibrillære α-Syn polymorfer. (A) Transmissionselektronmikrografier af negativt farvede α-Syn-fibrillære polymorfer, fibriller, bånd, fibriller-91, fibriller-65 og fibriller-110 før (øvre bane) og efter fragmentering med VialTweeter (nederste bane) vises. (B) Længdefordelingen af de fragmenterede fibrillære polymorfer er vist. Antallet (n) af fibrillære samlinger, histogrammerne blev afledt af, er angivet.
(undersøgelse og billeder: Shrivastava et al., 2020)

 
α-Syn-fibrillerne blev fragmenteret ved sonikering i 20 minutter i 2 ml Eppendorf-rør i en VialTweeter for at generere fibrillære partikler med en gennemsnitlig størrelse 42-52 nm vurderet ved TEM-analyse.
(jf. Negrini et al., 2022)
 
De resuspenderede fibriller91 (i PBS) blev fragmenteret før tilsætning til cellekulturer ved sonikering i 20 minutter i 2 ml Eppendorf-rør ved hjælp af hætteglassets diskantonator, aliquoteret, flashfrosset i flydende nitrogen og opbevaret indtil brug ved -80 °C.
(jf. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter og lab sonicators til α-syn fragmentering

Hielscher Ultrasonics er verdensomspændende anerkendt som førende producent af banebrydende ultralydapparater. Betroet og etableret i store forskningslaboratorier over hele verden, tilbyder vores ultralydapparater uovertruffen kvalitet og ydeevne til dine kritiske eksperimenter.
Med Hielscher VialTweeter og enhver anden Hielscher sonicator, vil du opleve uovertruffen brugerkomfort, da de er omhyggeligt konstrueret til reproducerbare resultater, brugervenlighed og problemfri drift. Med automatiske dataregistreringsfunktioner kan du fokusere på din forskning, mens vores ultralydapparater omhyggeligt registrerer vigtige data for reproducerbarhed og præcision.
Opnå konsistente og reproducerbare resultater med tillid!
Vores ultralydapparater er konstrueret og fremstillet i Tyskland. Tysk præcision og højeste tekniske kvalitet for at sikre pålidelig og nøjagtig prøveforberedelse såsom alfa-synucleinfibrillerifragmentering hver gang. Ikke flere bekymringer om inkonsekvente resultater - vores ultralydsteknologi sikrer, at din forskning forbliver på forkant med videnskabelige fremskridt.
Men det er ikke alt! Vores forpligtelse til ekspertise strækker sig ud over vores produkter. Vi sætter en ære i vores enestående kundeservice og yder ekspertsupport til at løse eventuelle spørgsmål eller bekymringer, du måtte have. Vores dedikerede team er her for at hjælpe dig på hvert trin i din forskningsrejse og sikre, at du får mest muligt ud af vores ultralydapparater.
Vælg innovation, pålidelighed og enestående brugeroplevelse - vælg vores lab sonikatorer såsom VialTweeter til alfa-synuclein fibril fragmentering. Drag fordel af de allerede etablerede protokoller og deltag i rækken af førende forskere, der stoler på vores teknologi til deres kritiske studier. Løft din forskning og udforsk nye grænser inden for demens og neurodegenerativ sygdomsforskning med vores state-of-the-art ultralydapparater.

Design, fremstilling og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og design standarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydapparater.

Hielscher Ultrasonics er et ISO-certificeret firma og lægger særlig vægt på højtydende ultralydapparater med state-of-the-art teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher-sonikatorer CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.
 
Tabellen nedenfor giver dig en indikation af den omtrentlige behandlingskapacitet af vores ultralydapparater i laboratoriestørrelse: