Hielscher Ultrasonics
Vi vil med glæde diskutere din proces.
Ring til os: +49 3328 437-420
Send os en mail: [email protected]

PMCA til detektion af prioner med høj kapacitet ved hjælp af UIP400MTP Sonicator

Den UIP400MTP multi-brønds plade soniker tilbyder en kraftfuld løsning til prøveforberedelse med høj kapacitet i protein misfolding cyklisk amplifikation (PMCA). Ved at levere ensartet energifordeling på tværs af flere brønde og opretholde præcise sonikeringsparametre muliggør dette system samtidig behandling af adskillige prøver med enestående reproducerbarhed. Disse muligheder er afgørende for at optimere PMCA til at detektere prioner ved lave koncentrationer i udfordrende biologiske prøver, såsom spyt, hvor analysehæmmere kan skjule resultaterne.

Prionsygdomme, såsom chronic wasting disease (CWD) hos hjortedyr og Creutzfeldt-Jakobs sygdom (CJD) hos mennesker, er neurodegenerative lidelser forårsaget af fejlfoldede prionproteiner (PrPSc). Disse sygdomme involverer ofte lave niveauer af infektiøse prioner i kropsvæsker, såsom spyt, blod og urin, hvilket komplicerer diagnose og forskning. Horisontal overførsel af CWD gennem prioner, der udgydes i miljømatricer, har særligt betydelige konsekvenser for forvaltning af vilde dyr og økologisk sundhed. På samme måde er pålidelig amplifikation af fejlfoldede prionproteiner fra humane prøver i sygdomme som Creutzfeldt-Jakobs sygdom afgørende for at fremme diagnostik og forstå sygdomsprogression.

Anmodning om oplysninger



Multi-Sample Sonicator UIP400MTP til sonikering af multi-brøndplader eller hætteglas i et rørstativ giver mulighed for en effektiv PMCA med høj kapacitet (protein misfoldning cyklisk amplifikation) af prioner.

Højeffektiv proteinfejlfoldningsforstærkning med UIP400MTP High-Throughput Sonicator

Gør det lettere at analysere MBEC med pålidelig, hurtig biofilm-forskydning ved hjælp af mikroplade-sonikeren UIP400MTP. UIP400MTP kan håndtere enhver standard analyseplade og afmonterer celler og biofilm effektivt.Anvendelse af en modificeret PMCA-protokol gør det muligt at omgå almindelige analysehæmmere (f.eks. muciner i spyt) og opnå høj følsomhed ved påvisning af prioner, der ellers ville være udetekterbare eller tvetydige ved hjælp af teknikker såsom realtids-quaking-induceret konvertering (RT-QuIC). Disse fremskridt forbedrer priondetektion for forskellige sygdomme, hvilket gør PMCA til et uundværligt værktøj til prionforskning og diagnostik. Multi-brønds plade sonikeren UIP400MTP muliggør PMCA med høj kapacitet sonikering af adskillige prøver i mikroplader (f.eks. 6-, 24- eller 96-brønds plader) eller hætteglas i et rørstativ.

Protokol for højkapacitetsproteinmisfoldning cyklisk amplifikation (PMCA)

Følgende protokol muliggør effektiv behandling af et højt prøveantal under nøjagtig de samme betingelser for robuste forskningsresultater.

Forberedelse af prøve

Startmateriale:
Forbered prøver ved at:

  • Genopholdelse af sarkosylekstraktionspiller i PMCA-substrat.
  • Direkte spiking af hjernehomogenater eller blodprøver med prionfrø.

Substrat:

  • Brug et 10% (vægt/vol) hjernehomogenat fremstillet af transgene mus, der overudtrykker PrPC (f.eks. Tg-mus).
  • Homogeniser hjernevævet i:
    – 1× PBS.
    – 150 mM NaCl.
    – 1% Triton X-100.
  • Opbevar underlaget ved -80ºC indtil brug.

Prøveopsætning i mikroplade eller rør:
Rør:

  • Tilsæt 90 μL hjernehomogenatsubstrat og frø med 10 μL prøve (f.eks. blod, hjernehomogenat eller sarkosylpellet).
  • Placer 3 teflonperler (1,59 mm eller 2,38 mm diameter) i hvert 0,2 ml rør.
  • Monter rørene i et stativ, der er kompatibelt med UIP400MTP sonicator.

6-brønds mikroplade:

  • Tilsæt 5 ml hjernehomogenatsubstrat og frø med 500 μL prøve pr. brønd.
  • Tilsæt 3 teflonperler til hver brønd.

PMCA-procedure

Placering:
Placer rørstativet eller 6-brønds mikropladen i UIP400MTP sonicator i henhold til producentens anvisninger.

Cykelprogram:
Udfør 144 PMCA-cyklusser som følger:

  • Inkubation: 29 minutter og 30 sekunder ved 37°C.
  • Sonikering: 30 sekunder ved 60 % amplitude.
  • Overvåg temperaturen: Brug den stikbare temperatursensor til at overvåge sample temperatur og programmer UIP400MTP til en maks. temperatur på 48–50°C.

Efterfølgende runder:
Efter at have afsluttet den første runde af 144 cyklusser, overføres en alikvot af det forstærkede materiale:

  • Fortynd 10 gange til frisk transgen musehjernehomogenat substrat.
  • Udfør 96 PMCA-cyklusser for efterfølgende runder og opretholder de samme sonikeringsparametre.
  • Fortsæt i det ønskede antal omgange (typisk op til 5).

Påvisning af PrPSc

  1. Proteinase K fordøjelse:
    – Behandl prøver med proteinase K (50 μg/ml) ved 37 °C i 1 time.
    – Afslut fordøjelsen ved at tilsætte SDS-sample buffer og koge i 10 minutter.
  2. Western Blot-analyse:
    – Analyser fordøjede prøver ved hjælp af:
    – 6H4 eller PRC1 anti-PrP antistoffer.
    – Udfør SDS-PAGE og overfør til PVDF-membraner til detektion.
Soniker enhver standard mikroplade og PCR-plade med UIP400MTP.

UIP400MTP sikrer pålidelig prøveforberedelse og en nem integration med eksisterende laboratoriearbejdsgange

 

Hielscher UIP400MTP er den mest fleksible soniker til dine multi-brøndplader, PCR-plader eller prøverør. Med 400 watt kontinuerlig sonikeringsudgang er den lavet til applikationer, såsom: Cellelyse, emulgering, proteinekstraktion, DNA / RNA-fragmentering, deagglomerering, FFPE-ekstraktion, celle- og biofilmløsning eller emulgering.
Det UIP400MTP er ikke et ultralydsbad. Det er et kophorn med høj intensitet til fokuseret sonikering. Denne kraftfulde berøringsfri soniker leverer en ensartet sonikering på tværs af alle brønde i din standard brøndplade. Du har præcis kontrol over amplitude, kraft og pulsering. En indbygget timer og temperatursonde sikrer ensartede resultater. Den UIP400MTP plade sonicator afkøler prøver med vandbad (ekstern køler valgfri).

Soniker til multi-brøndplader - Hielscher UIP400MTP - 400 watt

Video Miniature

 

Behandl flere prøver for mere robuste resultater

UIP400MTP giver mulighed for PMCA (proteinmisfoldning af cyklisk amplifikation) af prioner med høj kapacitet Den UIP400MTP multi-brønds pladesoniker forbedrer effektiviteten og skalerbarheden af protein misfolding cyklisk amplifikation (PMCA), hvilket adresserer procedurens traditionelt tidskrævende karakter. Ved at tillade samtidig behandling af op til 96 prøver i en 96-brønds plade strømliner systemet PMCA-arbejdsgange, samtidig med at der opretholdes præcise og ensartede sonikeringsbetingelser på tværs af alle brønde. Denne kapacitet med høj kapacitet minimerer manuel håndtering, reducerer arbejdskrævende trin og sikrer reproducerbarhed, hvilket gør den til et uundværligt værktøj til prionforskning. Uanset om det drejer sig om chronic wasting disease eller Creutzfeldt-Jakobs sygdom, muliggør UIP400MTP storskalaundersøgelser med større effektivitet, hvilket gør det muligt for forskere at imødekomme kravene til moderne diagnostiske og videnskabelige applikationer.

Bed om mere information

Brug venligst nedenstående formular til at anmode om yderligere oplysninger om UIP400MTP ultralydsapparat med høj gennemstrømning, PMCA-applikationer og priser. Vi vil med glæde diskutere din prøveforberedelse med dig og tilbyde dig den bedste soniker, der opfylder dine krav!




Relaterede emner

Litteratur / Referencer

Fejlfoldning af proteiner cyklisk amplifikation ved hjælp af multi-brønds pladesonikeren UIP400MTP letter prøveforberedelse med høj kapacitet

Mikroplade soniker UIP400MTP til PMCA med høj kapacitet

Ofte stillede spørgsmål

Hvad er Prioner?

Protein misfolding cyklisk amplifikation (PMCA) af prioner forbedres kraftigt af multi-sample sonicator UIP400MTP. Ved at sonikere 96-brønds plader eller rørstativer giver UIP400MTP mulighed for PMCA med høj gennemstrømning.Prioner er fejlfoldede proteiner, der er i stand til at inducere unormal foldning af normale, cellulære proteiner, især i hjernen. I modsætning til bakterier eller vira mangler prioner nukleinsyrer og formerer sig gennem en selvskabelonmekanisme, hvilket fører til progressive neurodegenerative sygdomme som Creutzfeldt-Jakobs sygdom, bovin spongiform encephalopati (kogalskab) og scrapie hos får. Deres modstandsdygtighed over for standard steriliseringsprocesser understreger deres unikke patogenicitet og udgør betydelige udfordringer i medicinske og forskningsmæssige miljøer.

Hvad er PMCA-teknikken?

Protein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA) er en laboratorieteknik, der bruges til at amplificere fejlfoldede prionproteiner (PrP^Sc) in vitro. Det efterligner omdannelsen af normalt cellulært prionprotein (PrP^C) til dets fejlfoldede infektiøse form (PrP^Sc), et kendetegn for prionsygdomme. Processen involverer cyklusser med inkubation og sonikering for at fremskynde aggregeringen af PrP^Sc, hvilket gør det til et kraftfuldt værktøj til påvisning af lave niveauer af prioner.

Hvilken proteinfejlfoldning forårsager Creutzfeldt Jakobs sygdom?

Creutzfeldt-Jakobs sygdom (CJD) skyldes fejlfoldning af prionproteinet (PrP). Den normale isoform (PrP)C) antager en unormal, β-arkrig kropsbygning (PrPSc), der bliver smitsom og danner amyloidaggregater i hjernen, hvilket fører til neurodegeneration.

Hvad er proteinfejlfoldning cyklisk amplifikation af infektiøse prioner?

Protein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA) er en metode til at amplificere den infektiøse form af prioner (PrP)Sc) ved gentagne gange at inkubere normal PrPC med små mængder PrPSc. I løbet af hver cyklus vil PrPSc katalyserer fejlfoldningen af PrPC, og sonikeringsfragmenter aggregater, hvilket skaber flere såsteder. Dette efterligner prionreplikation in vivo og giver mulighed for følsom priondetektion i biologiske prøver.

Hvad får PrP til at folde forkert?

PrP fejlfoldes ind i den patogene PrPSc formular kan udløses af:

  • Spontan fejlfoldning ved sporadiske prionsygdomme.
  • Genetiske mutationer i PRNP-genet (f.eks. familiære prionsygdomme).
  • Eksponering for infektiøs PrPSc via forurenet mad, medicinske procedurer eller andre midler.
  • Miljømæssige eller strukturelle faktorer som pH, metalioner eller co-faktorer, der destabiliserer PrPC.

Hvad er RT-QuIC-testen?

Real-Time Quaking-Induced Conversion (RT-QuIC) er et meget følsomt diagnostisk assay for prionsygdomme. Den registrerer PrPSc ved at forstærke dens evne til at konvertere rekombinant PrPC til fejlfoldede aggregater. Testen bruger fluorescensbaseret påvisning af dannelse af amyloidfibriller, hvilket gør den nyttig til diagnosticering af sygdomme som CJD i cerebrospinalvæske (CSF) eller andet væv.

Højtydende ultralyd! Hielscher-produktsortimentet dækker hele spektret fra den kompakte laboratorieultralydsapparat over bordenheder til fuldindustrielle ultralydssystemer.

Hielscher Ultrasonics fremstiller højtydende ultralydshomogenisatorer fra Lab til industriel størrelse.

Vi vil med glæde diskutere din proces.

✕