Ultrazvuková příprava séra bohatého na krevní destičky
- Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) je krevní plazma, která byla obohacena o krevní destičky a která se používá k lékařské a estetické léčbě.
- Ultrazvuková lýza a kondicionování je velmi účinná metoda přípravy plazmy bohaté na krevní destičky.
- Hielscher Ultrasonics nabízí různé ultrazvukové systémy, které odpovídají požadavkům na léčbu krve (např. Pro vnitřní a vnější přípravu čisté místnosti).
Sérum bohaté na krevní destičky
Sonikace je spolehlivá a snadná metoda lýzy krevních destiček v autologním krevním séru za účelem uvolnění růstových faktorů. Frakce odvozené od krevních destiček – známé také jako autologní kondiciované sérum (ACS) – se používají k opravě tkání nebo estetickému ošetření. Pro dosažení optimálních výsledků se PRP před injekcí obohacuje.
Aby bylo možné připravit obohacenou plazmu buněčnými růstovými faktory, sonikace je velmi účinná a účinná metoda lýzy buněčných membrán a uvolnění téměř kompletních buněčných růstových faktorů z krevních destiček. Ultrazvukovou lýzou a kondicionováním lze použít i antikoagulovanou krev.
Úprava PRP prostřednictvím sonikace je pohodlný a nákladově efektivní způsob, jak získat koncentrované růstové faktory.
Ultrazvuková lýza plazmy bohaté na krevní destičky (PRP)
Účinky ultrazvukové lýzy
Ultrazvuková léčba krevního séra vede k homogenní lýze krevních destiček za účelem uvolnění zachycených růstových faktorů (růstový faktor AB (PDGF-AB), růstový faktor AA (PDGF-AA), růstový faktor BB (PDGF-BB), vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGF), transformační růstový faktor β (TGF-β), epidermální růstový faktor (EGF), inzulínu podobný růstový faktor (IGF), růstový faktor epiteliálních buněk ECGF a fibroblastický růstový faktor (FGF)). Krevní destičky a jejich alfa-granule jsou narušeny sonikací pomocí jevu Akustická kavitace. Použití ultrazvukové kavitace pro lýzu krevních destiček snižuje možný negativní dopad na aktivitu růstového faktoru při opakované metodě zmrazení a rozmrazení.
Protokol pro přípravu ultrazvukového PRP
Přibližně 16 ml čerstvě odebraného autologního vzorku krve se jemně převrátí 8-10krát do zkumavky, aby se krev a antikoagulancia dobře promíchaly. Poté se vzorek odstředí při 1800 g po dobu 20 minut při pokojové teplotě. Po centrifugaci se na krevních destičkách a mononukleárních článcích vytvoří bělavá vrstva ve spodní části plazmatické vrstvy, která je známá jako plazma bohatá na krevní destičky (PRP). Horní vrstva je známá jako plazma chudá na krevní destičky (PPP). Mononukleární články mohou být odstraněny nebo zůstat ve vzorku. Mononukleární články často zůstávají ve vzorku PRP, aby se předešlo dalším krokům, které s sebou nesou riziko kontaminace.
Poznámka: Ultrazvuková léčba autologního PRP musí být prováděna za sterilních podmínek.
PNP a PPP se oddělují a shromažďují. K PPP se přidá 1,5 ml 10% roztoku chloridu vápenatého a k PRP 0,5 ml 5% ethanolu. Obě suspenze se jemně protřepou a nechají se 5 minut odstát při pokojové teplotě. Nakonec se do suspenze PRP přidá 1 ml PPP a nechá se stát, dokud se nevytvoří fibrinová sraženina.
Ultrazvukové ošetření: Vzhledem k tomu, že vytvořený gel krevních destiček působí jako rezervoár pro uvolněné růstové faktory, musí být fibrinový gel narušen, aby se uvolnily dostupné růstové faktory. Parametry pro ultrazvukovou lýzu a uvolňování růstového faktoru jsou následující: Sonikát s UP200Ht nebo UP200St (200W, 26kHz) se sonotrodou S26d2 vzorek v trubici. Aby se zabránilo přehřátí vzorku krve, může být sonikace prováděna v pulzních cyklech (např. 10 sekund zapnuto, 30 sekund vypnuto). Vzorek by měl být umístěn na led, aby se ochladil, aby byla teplota optimálně udržována mezi 2 – 5°C. Po sonikaci se vzorek odstředí při 16000 g po dobu 5 min. při pokojové teplotě. Supernatant se shromažďuje a může být skladován při teplotě -70 °C.
Koncentrace krevních destiček ve frakci PRP byla obohacena o 1,7 – 4,5krát v sonikované metodě ve srovnání s literárním průměrným počtem krevních destiček v plné krvi.
PRP byla kombinována s terapií kmenovými buňkami získanými z tukové tkáně (ultrazvukem uvolňované autologní kmenové buňky z tukové tkáně, smíchaný s PRP a vstříknutý zpět do pacientovy tkáně k opravě).
Ultrazvuková zařízení
Hielscher Ultrasonics je odborníkem na sofistikované a spolehlivé ultrazvukové technologie. Naše ultrazvukové přístroje se používají po celém světě pro lýzu, extrakci a přípravu vzorků – přímými i nepřímými. Autoklávovatelný stejně jako Na jedno použití Příslušenství zajišťuje a Bez kontaminace Léčba autologních vzorků krve. Většina našich systémů může být použita pro ultrazvukovou lýzu Kmenové buňky a PRP, díky čemuž jsou naše ultrazvukové přístroje ekonomicky ještě efektivnější.
V níže uvedené tabulce jsou uvedeny naše ultrazvukové přístroje, které jsou vhodné pro přípravu plazmy bohaté na krevní destičky, a jejich doporučený objem vzorku. K dispozici jsou také větší ultrasonicators a přizpůsobené systémy.
| Zařízení | Výkon [W] | Frekvence [kHz] | Typ | Objem [ml] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | samostatný | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | Ruční nebo stojanové | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | Ruční nebo stojanové | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | Ruční nebo stojanové | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | Postaveno na stojanu | 0.1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | Postaveno na stojanu | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | samostatný | 30 | – | 500 |
| GDmini2 řekl: | 200 | 26 | Průtočná cela bez kontaminace | |||
Kontaktujte nás ještě dnes! Rádi vám pomůžeme najít optimální ultrazvukový přístroj!
Kontaktujte nás! / Zeptejte se nás!
GDmini2 na UP200St-TD převodník (200 wattů)
Literatura/Odkazy
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Gel z lyzátu krevních destiček a endoteliální progenitory stimulují tvorbu mikrovaskulární sítě in vitro: důsledky tkáňového inženýrství. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) pro akutní poranění svalů: Systematický přehled. PLOS ONE Svazek 9, číslo 2, 2014.
Fakta, která stojí za to vědět
Plazma bohatá na krevní destičky
Plazma bohatá na krevní destičky obsahuje růstový faktor AB (PDGF-AB), růstový faktor AA (PDGF-AA), růstový faktor odvozený od krevních destiček BB (PDGF-BB), vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGF), transformační růstový faktor β (TGF-β), epidermální růstový faktor (EGF), inzulínu podobný růstový faktor (IGF), růstový faktor epiteliálních buněk ECGF a fibroblastický růstový faktor (FGF), které jsou důležitými stimulanty pro růst a obnovu buněk.
Autologní kondicionované sérum (ACS)
Autologní kondiciovaná plazma (ACP) je plazma bohatá na krevní destičky, která se extrahuje z autologní krve a používá se k podpoře regenerace při různých ortopedických stavech a chirurgických zákrocích. Kondicionované sérum se připravuje oddělením plazmy od ostatních složek krve (jako jsou erytrocyty) a její koncentrátem. ACP je plazma bohatá na krevní destičky (PRP). PRP je obecný termín pro typ plazmy, která obsahuje významně vyšší koncentraci trombocytů ve srovnání s plnou krví. Extrahuje se z plné krve. Mezi hlavní složky ACP patří trombocyty (krevní destičky) a několik růstových faktorů, které hrají důležitou roli v procesu hojení. Na rozdíl od jiných plazmatických přípravků bohatých na krevní destičky se ACP vyznačuje nízkou koncentrací bílých krvinek, jako jsou neutrofilní granulocyty, které mohou být škodlivé pro proces hojení, pokud jsou přítomny ve vysokých koncentracích.
Injekce plazmy bohaté na krevní destičky
Plazma bohatá na krevní destičky se používá jako injekce v regenerativní medicíně i při kosmetických zákrocích. Aplikace PRP slibuje výrazné urychlení hojení a regenerace svalů. Kromě toho se úspěšně používá k léčbě zánětů, artritidy, bolesti, ran, pomalu se hojících otevřených ran a vážných popálenin kůže. PRP obsahuje vysoké množství růstových faktorů, které stimulují a chrání hojivé buňky po dobu opravy poškozené tkáně.
U kosmetických ošetření bylo prokázáno, že PRP je účinný při stimulaci růstu vlasů, obnově pokožky (známé také jako léčba upírů).
Růstové faktory odvozené od krevních destiček (PDGF)
Termín růstový faktor odvozený od krevních destiček (PDGF) se vztahuje na faktory PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C a PDGF-D. Jedná se o signální síť čtyř ligandů (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C a PDGF-D) a dvou receptorů, PDGFR-alfa a PDGFR-beta.
Růstové faktory neboli proteiny regulují růst a dělení buněk. Jako hlavní mitogen obsažený v savčím séru, který se uvolňuje z krevních destiček při tvorbě sraženin, hraje významnou roli při tvorbě krevních cév (angiogeneze), růstu krevních cév z již existující cévní tkáně.