Ultrazvuková příprava séra bohatého na krevní destičky

• Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) je krevní plazma obohacená o krevní destičky, která se používá k lékařským a estetickým ošetřením.
• Ultrazvuková lyze a kondicionování představují velmi účinnou metodu přípravy plazmy bohaté na krevní destičky.
• Hielscher Ultrasonics nabízí různé ultrazvukové systémy odpovídající požadavkům na zpracování krve (např. pro přípravu uvnitř i mimo čistý prostor).

Sérum bohaté na krevní destičky

Sonikace je spolehlivá a jednoduchá metoda lyze krevních destiček v autologním krevním séru za účelem uvolnění růstových faktorů. Frakce získané z krevních destiček – známé také jako autologní kondicionované sérum (ACS) – se používají k opravě tkání nebo k estetickým ošetřením. Pro dosažení optimálních výsledků se PRP před injekční aplikací obohacuje.
Pro přípravu plazmy obohacené o buněčné růstové faktory je sonikace velmi účinnou a efektivní metodou, jak lyzovat buněčné membrány a uvolnit z krevních destiček téměř všechny buněčné růstové faktory. Díky ultrazvukové lyzi a kondicionování lze použít i antikoagulovanou krev.
Kondicionování PRP pomocí sonikace je pohodlný a nákladově efektivní způsob, jak získat koncentrované růstové faktory.

Ultrazvuková lyze plazmy bohaté na krevní destičky (PRP)

Účinky ultrazvukové lyze

Ultrazvukové ošetření krevního séra vede k homogenní lyzi krevních destiček za účelem uvolnění uzavřených růstových faktorů (růstový faktor AB (PDGF-AB), růstový faktor AA (PDGF-AA), růstový faktor BB (PDGF-BB), vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGF), transformující růstový faktor β (TGF-β), epidermální růstový faktor (EGF), inzulinu podobný růstový faktor (IGF), růstový faktor epiteliálních buněk ECGF a fibroblastový růstový faktor (FGF)). Krevní destičky a jejich alfa-granula jsou sonikací narušeny s využitím jevu akustické kavitace. Použití ultrazvukové kavitace k lyzi krevních destiček snižuje možný negativní dopad metody opakovaného zmrazování a rozmrazování na aktivitu růstových faktorů.

Protokol ultrazvukové přípravy PRP

Přibližně 16mL čerstvě odebraného autologního vzorku krve se ve zkumavce 8–10krát jemně převrátí, aby se krev a antikoagulancia dobře promísily. Poté se vzorek centrifuguje při 1800 g po dobu 20 min při pokojové teplotě. Po centrifugaci vytvoří krevní destičky a mononukleární buňky na dně plazmatické vrstvy bělavou vrstvu, která je známá jako plazma bohatá na krevní destičky (PRP). Horní vrstva je známá jako plazma chudá na krevní destičky (PPP). Mononukleární buňky lze odstranit, nebo mohou ve vzorku zůstat. Mononukleární buňky často zůstávají ve vzorku PRP, aby se předešlo dalším krokům, které nesou riziko kontaminace.
Poznámka: Ultrazvukové ošetření autologní PRP musí probíhat za sterilních podmínek.
PRP a PPP se oddělí a odeberou. K PPP se přidá 1,5mL 10% roztoku chloridu vápenatého, zatímco k PRP se přidá 0,5mL 5% ethanolu. Obě suspenze se jemně promíchají a nechají se stát 5 min při pokojové teplotě. Nakonec se k suspenzi PRP přidá 1mL PPP a směs se nechá stát, dokud se nevytvoří fibrinová sraženina.
Ultrazvukové ošetření: Protože vytvořený gel z krevních destiček slouží jako rezervoár uvolněných růstových faktorů, musí být fibrinový gel narušen, aby se dostupné růstové faktory uvolnily. Parametry ultrazvukové lyze a uvolňování růstových faktorů jsou následující: Vzorek ve zkumavce sonikujte přístrojem UP200Ht nebo UP200St (200W, 26kHz) se sonotrodou S26d2. Aby se zabránilo přehřátí vzorku krve, lze sonikaci provádět v pulzních cyklech (např. 10 s zapnuto, 30 s vypnuto). Vzorek by měl být chlazen na ledu tak, aby se teplota optimálně udržovala v rozmezí 2–5°C. Po sonikaci se vzorek centrifuguje při 16 000 g po dobu 5 min při pokojové teplotě. Supernatant se odebere a lze jej skladovat při -70°C.
Koncentrace krevních destiček ve frakci PRP byla při sonikační metodě obohacena 1,7–4,5násobně ve srovnání s průměrným počtem krevních destiček v plné krvi uváděným v literatuře.

PRP byla kombinována s terapií kmenovými buňkami z tukové tkáně (autologní kmenové buňky uvolněné z tukové tkáně ultrazvukem, smíchané s PRP a injikované zpět do tkáně pacienta za účelem její opravy).

Ultrazvukové vybavení

Hielscher Ultrasonics je odborníkem na vyspělé a spolehlivé ultrazvukové technologie. Naše ultrazvukové přístroje se celosvětově používají k lyzi, extrakci a přípravě vzorků – přímo i nepřímo. Autoklávovatelné i jednorázové příslušenství zajišťuje bezkontaminační ošetření autologních vzorků krve. Většinu našich systémů lze použít pro ultrazvukovou lyzi kmenových buněk a PRP, díky čemuž jsou naše ultrazvukové přístroje ekonomicky ještě efektivnější.
Níže uvedená tabulka uvádí naše ultrazvukové přístroje vhodné pro přípravu plazmy bohaté na krevní destičky a jejich příslušný doporučený objem vzorku. K dispozici jsou také větší sonikátory a systémy na zakázku.

Kontaktujte nás ještě dnes! Rádi vám pomůžeme najít optimální ultrazvukový přístroj!