Ultrazvučne aplikacije u Majmunpox virusu

Ultrasonication je važna metoda obrade za izolaciju virusa majmunskih boginja (MPXV) iz analitičke uzorke, za fragmentaciju DNK virusa kao i u proizvodnji cjepiva protiv majmunskih boginja. Za pripremu uzoraka prije dijagnostike i analize (PCR, ELISA itd.) ultrasonication se koristi za lizaciju ćelija kako bi se oslobodio virus majmunskih boginja iz unutrašnjosti ćelije i / ili za fragment dnk. U proizvodnji cjepiva, aplikacije se kreću od pripreme čestica virusa / DNK, enkapsulacije u nosačima lijekova i formuliranja inokule.
U nastavku možete pronaći detaljne informacije o ultrazvučnoj pripremi uzoraka virusa majmuna kao i ultrazvučno potpomognutoj proizvodnji MPXV vakcina.

 

Šta ćete naći na ovoj stranici:

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrasonikatori visokih performansi su kritično sredstvo za obradu u proizvodnji mnogih vakcina.

Ovaj sistem 2x 1kW ultrasonikatora za rad kontinuiranog protoka je instaliran u postrojenju za proizvodnju cjepiva.

Ultrazvučna liza i fragmentacija DNK prije lančane reakcije polimeraze (PCR)

Infekcija virusom majmunskih boginja se otkriva testiranjem pojačavanja nukleinske kiseline (NAAT), koristeći lančanu reakciju u realnom vremenu ili konvencionalnu lančanu reakciju polimeraze (PCR), za otkrivanje jedinstvenih sekvenci virusne DNK. Uzorak (npr. iz nazofaingealne zamjene ili biopsije kože) sadrži virus u ćelijama.
Za analizu, virus se mora osloboditi iz ćelija i virusna DNK mora biti fragmentiran za PCR.

Ultrazvučna Liza:

Ultrasonicator UP200Ht sa mikrotipom S26d2 za ultrazvučnu lizu bioloških uzorakaUltrazvučni poremećaj / liza ćelija je pouzdana i efikasna metoda izolacije virusa iz uzoraka ćelija i time poželjna tehnika nad hemijskim agensima, kao što su lizozim, proteinaza K i različiti deterdženti koji se alternativno koriste za postizanje lize ćelija i oslobađanje DNK.
Međutim, upotreba takvih hemijskih reagenta zahtijeva pripremu uzorka koja se troši vrijeme u nekoliko koraka prije PCR analize kako bi se spriječila inhibicija PCR reakcije. Pošto PCR inhibitori utiču na efikasnost pojačanja, male varijacije količine inhibitora koje se ne uklanjaju mogu dovesti do velikih varijacija u pojačavanju PCR proizvoda (Diaco, 1995).
Prednost ultrasonication za lizu je da potpuni poremećaj ćelijske strukture i oslobađanje DNK bez potrebe za lizanje reagenta i dugog priprema uzorka su poželjni. (cf. Fykse et al., 2003)

Ultrazvučna fragmentacija DNK:

Ultrazvučna fragmentacija DNK je jednostavna i pouzdana kao i proizvodi FRAGMENTE DNK tunable u dužini (basepairs, bp). Koristeći ultrazvuk, DNK se može efikasno rascjepkati do ciljane dužine DNK. Precizna kontrola nad ultrazvučnim parametrima i sofisticiranim mogućnostima hlađenja sprečavaju degradaciju DNK.
Pročitajte više o ultrazvučnoj fragmentaciji DNK!

 

Video prikazuje ultrazvučni sistem pripreme uzoraka UIP400MTP, koji omogućava pouzdanu pripremu uzoraka bilo koje standardne multi-well ploče pomoću ultrazvuka visokog inteziteta. Tipične primjene UIP400MTP uključuju lizu ćelija, DNK, RNK, i šariranje hromatina kao i ekstrakciju proteina.

Ultrasonicator UIP400MTP za multi-well sonication ploča

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrazvučne aplikacije u cjepivu protiv virusa majmuna

Ultrasonication se koristi za proizvodnju cjepiva kao što su cjepiva protiv majmunskih boginja. Vakcine koje se koriste protiv virusa majmunskih boginja su trenutno žive vakcine protiv virusa. Novo razvijene vakcine mogle bi koristiti druge platforme kao što je DNK-based Trenutno sadrži modificiranu vakcinu Ankara viurs, attenuirani, ne-replicirajući ortopoxvirus. Također sadrži Tris (tris-aminometan) i natrijev hlorid. Cjepivo može sadržavati i male količine DNK i proteina iz pilećih embrija Fibroblast ćelija, koje se koriste za uzgoj virusa cjepiva, benzonaze i antibiotička spoja kao što su gentamicin i ciprofloksacin.

Ultrazvučna homogenizacija se koristi u proizvodnji vakcina protiv virusa, DNA vakcina, multivalentnih DNA koktela, mRNA cjepiva, rekombinantnih proteinskih cjepiva, virusom nalikom cjepiva čestica itd.

Primjene ultrazvučnika u proizvodnji cjepiva kreću se od

  • raspršivanje čestica virusa i agenata
  • emulzija
  • inaktivacija virusa
  • formulacija nosača lijekova (NLC, SLN)
  • inkapsulacija
  • rastvaranje agenata
  • priprema adjuvansa
  • Degasing / De-Aeration

 

Možete pronaći više dubinskih informacija o ultrazvučnim aplikacijama za poboljšanu proizvodnju cjepiva!

Protokol za ultrazvučnu izolaciju virusa majmunskih boginja

Istraživački tim Stittelaar (2005) koristio je ultrazvučnu lizu za oslobađanje virusa majmunskih boginja iz kulture ćelija domaćina rasta, kao i iz ćelija dobivenih putem zamijene grla od zaraženih primata.

Priprema za cjepivo protiv majmunskih boginja:

Virusi majmunskih boginja uzgajani su na specifičnim pilećim embrio fibroblastnim ćelijama bez patogena. Nakon inkubacije 1 do 2 dana, suspenzija virus-ćelija je pobrala jedna runda odmrzanja, a zatim koncentrisana centrifugacijom. Pelet je bio ponovo unaprijeđen i podvrgnut nekoliko rundi ultrazvučne homogenizacije.

Izolacija virusa majmunskih boginja od cijepljenih Makaki:

Uzorci su zamrznuti tri puta i soniciran u ultrazvučnom CupHornu. Dva razlučivanja (1:10 i 1:100) u transportnom mediju dopunjenom sa 1% fetusnog goveda seruma su korištena za inokulaciju Monolaja vero ćelija u šest-bušotinjastih ploča. Nakon 1 h inkubacije na 37°C, inokula je uklonjena i zamijenjena kulturnim medijom dopunjenim sa 1% fetusnog seruma goveda. Monolajeri su bili kulturani 5 dana na 37°C i zatamnjeni kristalnim violetnim rastvorom.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

U ovom videu vam pokazujemo 2 kilovat ultrazvučnog sistema za inline rad u ormaru za čistu. Hielscher snabdijeva ultrazvučnu opremu gotovo svim industrijama, kao što su hemijska industrija, farmaceutska, kozmetika, petrokemijski procesi kao i za procese ekstrakcije na bazi otapila. Ovaj ormarić od nehranjivog čelika je dizajniran za rad u opasnim područjima. U tu svrhu, zatvoreni ormar može biti prečišćen od strane kupca sa dušikom ili svježim zrakom kako bi se spriječio ulazak zapaljivih plinova ili para u ormar.

2x 1000 Watts Ultrasonicators in Purgeable Cabinet for Installation in Hazardous Areas

Ultrasonicators for Virus Analysis and Vaccine Production

Hielscher Ultrasonics široki portfelj proizvoda nudi idealan ultrasonicator za istraživačke i analitičke laboratorije kao i za industrijsku proizvodnju cjepiva.
Hielscher Ultrasonics je specijaliziran za dizajn, proizvodnju i distribuciju ultrasonicatora visokih performansi i sono-bioreaktora za upotrebu u istraživačkim i analitičke laboratorije kao i za implementaciju u industrijskoj proizvodnji cjepiva (npr. vakcine, Apisu).
Preciznu kontrolu nad Ultrasonične procesima Hielscher Ultrazvuna' inteligentni softverSonication se može primijeniti na otvorene posude, zatvorene neprekidno uzburkane reaktore i kontinuirane reaktore protoka. Svi dijelovi ultrazvučnih sistema, koji dodju u dodir s tekućim medijumom, napravljeni su od nehromog čelika, titanija ili stakla. Autoklavablni dijelovi i sanitarija osiguravaju proizvodnju pod Pharma-razreda uslova.
Automatsko snimanje podataka: Inteligentni softver snima parametre procesa sonicacije automatski na integralnim karticama sa memorijom SD. Precizna kontrola svih parametara procesa osigurava reproducibilnost, standardizacija proizvodnje, i olakšava ispunjavanje standarda sigurnosti farmaceutskih proizvoda.
Hielscher Ultrazvuk’ ultrazvučni procesori su vrlo pouzdani i mogu se precizno kontrolirati . Svi industrijski ultrasonikatori mogu se podesiti da isporuče cijeli raspon od nižih do vrlo visokih amplituda. Robusnost Hielscher-ovih ultrazvučnih sistema omogućava 24/7 rad pod teškim dužnostima i u zahtjevnim okruženjima.

Tabela u nastavku daje naznaku približan kapacitet prerade naših ultrasonicators:

Batch Volumen protok Preporučeni uređaji
multi-well / mikrotiterske ploce n / a UIP400MTP
1 do 500ml 10 do 200ml / min UP100H
10 do 2000mL 20 do 400mL / min Uf200 ः t, UP400St
00,1 do 20L 00,2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100l 2 do 10L / min UIP4000hdT
n / a 10 do 100L / min UIP16000
n / a veći klaster UIP16000

Kontaktiraj nas! / Pitajte nas!

Traži više informacija

Molimo koristite formular ispod da Zatražit dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Biće nam drago da diskutujemo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrazvučni sistem.









Molim vas, obratite se našem Politika privatnosti.


Ultrazvučni homogenizatori su pouzdani za DNA šišanje

Ultrazvučni DNK Shearing
Adapted from Jkwchui under CC-BY-SA.03



Književnost/reference

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Činjenice vredi znati

Virus majmunskih boginja

Majmunska boginja (MPV, MPXV, ili hMPXV) je vrsta dvostruko nasukanog DNK virusa, koji uzrokuje virusnu zoonotičnu bolest. Ova bolest je poznata kao infekcija majmunskih boginja i može se javiti kod ljudi i životinja. Pripada rodu Orthopoxvirus u porodici Poxviridae. Virus majmunskih boginja je jedan od ljudskih ortopoksvirusa zajedno sa variolom (VARV), kravljim boginjama (CPX) i virusima vakcinije (VACV). Ortopoksviruse karakteriziraju velike čestice virusa u obliku opeke, koje sadrže dvostruko nasukani DNK genom od približno 200.000 bp.

ELISA Assay

ELISA označava Enzim-Linked ImmunoSorbent Assay i je označeni imunoassay koji se smatra zlatnim standardom imunoassays. ELISA je imunološki test, vrednovan zbog visoke dijagnostičke osjetljivosti, koristi se za otkrivanje i kvantitet molekula, uključujući antitijela, antigene, proteine, glikoproteine i hormone. Princip ELISA je zasnovan na interakciji antigen-antitijela. Ovom interakcijom antigen-antitijela, specifična antitijela se veжu za njegov ciljni antigen. Samo kada se interakcija održi, supstrat se može veže za enzim i može se uočti naknadno pretvaranje supstrata, što znači da se dobija pozitivan rezultat.


Ultrazvuka visokih performansi! Hielscherov proizvodni raspon pokriva cijeli spektar od kompaktnog lab ultrasonicatora preko klupa-top jedinica do puno-industrijskih ultrazvučnih sistema.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi od laboratorija u industrijske veličine.