Ultrasonication je važna metoda obrade za izolaciju virusa majmunskih boginja (MPXV) iz analitičke uzorke, za fragmentaciju DNK virusa kao i u proizvodnji cjepiva protiv majmunskih boginja. Za pripremu uzoraka prije dijagnostike i analize (PCR, ELISA itd.) ultrasonication se koristi za lizaciju ćelija kako bi se oslobodio virus majmunskih boginja iz unutrašnjosti ćelije i / ili za fragment dnk. U proizvodnji cjepiva, aplikacije se kreću od pripreme čestica virusa / DNK, enkapsulacije u nosačima lijekova i formuliranja inokule.
U nastavku možete pronaći detaljne informacije o ultrazvučnoj pripremi uzoraka virusa majmuna kao i ultrazvučno potpomognutoj proizvodnji MPXV vakcina.

Šta ćete naći na ovoj stranici:

• Ultrazvučna liza za ekstrakciju virusa majmuna
• Ultrazvučna fragmentacija DNK virusa majmuna
• Ultrazvučne aplikacije u MPXV Vaccine Production

Ultrazvučna liza i fragmentacija DNK prije lančane reakcije polimeraze (PCR)

Infekcija virusom majmunskih boginja se otkriva testiranjem pojačavanja nukleinske kiseline (NAAT), koristeći lančanu reakciju u realnom vremenu ili konvencionalnu lančanu reakciju polimeraze (PCR), za otkrivanje jedinstvenih sekvenci virusne DNK. Uzorak (npr. iz nazofaingealne zamjene ili biopsije kože) sadrži virus u ćelijama.
Za analizu, virus se mora osloboditi iz ćelija i virusna DNK mora biti fragmentiran za PCR.

Ultrazvučna Liza:

Ultrazvučni poremećaj / liza ćelija je pouzdana i efikasna metoda izolacije virusa iz uzoraka ćelija i time poželjna tehnika nad hemijskim agensima, kao što su lizozim, proteinaza K i različiti deterdženti koji se alternativno koriste za postizanje lize ćelija i oslobađanje DNK.
Međutim, upotreba takvih hemijskih reagenta zahtijeva pripremu uzorka koja se troši vrijeme u nekoliko koraka prije PCR analize kako bi se spriječila inhibicija PCR reakcije. Pošto PCR inhibitori utiču na efikasnost pojačanja, male varijacije količine inhibitora koje se ne uklanjaju mogu dovesti do velikih varijacija u pojačavanju PCR proizvoda (Diaco, 1995).
Prednost ultrasonication za lizu je da potpuni poremećaj ćelijske strukture i oslobađanje DNK bez potrebe za lizanje reagenta i dugog priprema uzorka su poželjni. (cf. Fykse et al., 2003)

Ultrazvučna fragmentacija DNK:

Ultrazvučna fragmentacija DNK je jednostavna i pouzdana kao i proizvodi FRAGMENTE DNK tunable u dužini (basepairs, bp). Koristeći ultrazvuk, DNK se može efikasno rascjepkati do ciljane dužine DNK. Precizna kontrola nad ultrazvučnim parametrima i sofisticiranim mogućnostima hlađenja sprečavaju degradaciju DNK.
Pročitajte više o ultrazvučnoj fragmentaciji DNK!

Ultrazvučne aplikacije u cjepivu protiv virusa majmuna

Vakcine koje se koriste protiv virusa majmunskih boginja su trenutno žive vakcine protiv virusa. Novo razvijene vakcine mogle bi koristiti druge platforme kao što je DNK-based Trenutno sadrži modificiranu vakcinu Ankara viurs, attenuirani, ne-replicirajući ortopoxvirus. Također sadrži Tris (tris-aminometan) i natrijev hlorid. Cjepivo može sadržavati i male količine DNK i proteina iz pilećih embrija Fibroblast ćelija, koje se koriste za uzgoj virusa cjepiva, benzonaze i antibiotička spoja kao što su gentamicin i ciprofloksacin.

Ultrazvučna homogenizacija se koristi u proizvodnji vakcina protiv virusa, DNA vakcina, multivalentnih DNA koktela, mRNA cjepiva, rekombinantnih proteinskih cjepiva, virusom nalikom cjepiva čestica itd.

Možete pronaći više dubinskih informacija o ultrazvučnim aplikacijama za poboljšanu proizvodnju cjepiva!

Protokol za ultrazvučnu izolaciju virusa majmunskih boginja

Istraživački tim Stittelaar (2005) koristio je ultrazvučnu lizu za oslobađanje virusa majmunskih boginja iz kulture ćelija domaćina rasta, kao i iz ćelija dobivenih putem zamijene grla od zaraženih primata.

Priprema za cjepivo protiv majmunskih boginja:

Virusi majmunskih boginja uzgajani su na specifičnim pilećim embrio fibroblastnim ćelijama bez patogena. Nakon inkubacije 1 do 2 dana, suspenzija virus-ćelija je pobrala jedna runda odmrzanja, a zatim koncentrisana centrifugacijom. Pelet je bio ponovo unaprijeđen i podvrgnut nekoliko rundi ultrazvučne homogenizacije.

Izolacija virusa majmunskih boginja od cijepljenih Makaki:

Uzorci su zamrznuti tri puta i soniciran u ultrazvučnom CupHornu. Dva razlučivanja (1:10 i 1:100) u transportnom mediju dopunjenom sa 1% fetusnog goveda seruma su korištena za inokulaciju Monolaja vero ćelija u šest-bušotinjastih ploča. Nakon 1 h inkubacije na 37°C, inokula je uklonjena i zamijenjena kulturnim medijom dopunjenim sa 1% fetusnog seruma goveda. Monolajeri su bili kulturani 5 dana na 37°C i zatamnjeni kristalnim violetnim rastvorom.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

Ultrasonicators for Virus Analysis and Vaccine Production

Hielscher Ultrasonics široki portfelj proizvoda nudi idealan ultrasonicator za istraživačke i analitičke laboratorije kao i za industrijsku proizvodnju cjepiva.
Hielscher Ultrasonics je specijaliziran za dizajn, proizvodnju i distribuciju ultrasonicatora visokih performansi i sono-bioreaktora za upotrebu u istraživačkim i analitičke laboratorije kao i za implementaciju u industrijskoj proizvodnji cjepiva (npr. vakcine, Apisu).
Sonication se može primijeniti na otvorene posude, zatvorene neprekidno uzburkane reaktore i kontinuirane reaktore protoka. Svi dijelovi ultrazvučnih sistema, koji dodju u dodir s tekućim medijumom, napravljeni su od nehromog čelika, titanija ili stakla. Autoklavablni dijelovi i sanitarija osiguravaju proizvodnju pod Pharma-razreda uslova.
Automatsko snimanje podataka: Inteligentni softver snima parametre procesa sonicacije automatski na integralnim karticama sa memorijom SD. Precizna kontrola svih parametara procesa osigurava reproducibilnost, standardizacija proizvodnje, i olakšava ispunjavanje standarda sigurnosti farmaceutskih proizvoda.
Hielscher Ultrazvuk’ ultrazvučni procesori su vrlo pouzdani i mogu se precizno kontrolirati . Svi industrijski ultrasonikatori mogu se podesiti da isporuče cijeli raspon od nižih do vrlo visokih amplituda. Robusnost Hielscher-ovih ultrazvučnih sistema omogućava 24/7 rad pod teškim dužnostima i u zahtjevnim okruženjima.

Tabela u nastavku daje naznaku približan kapacitet prerade naših ultrasonicators: