Ultrasonication е важен метод за обработка за изолиране на вируса на маймуната (MPXV) от аналитични проби, за разпокъсаността на вируса ДНК, както и при производството на ваксина срещу маймунска шарка. За подготовка на пробите преди диагностика и анализ (PCR, ELISA и т.н.) ultrasonication се използва за lyse клетки с цел освобождаване на вируса на маймуната от клетъчния интериор и / или за фрагментиране на ДНК. При производството на ваксини приложенията варират от вирусна частична / ДНК подготовка, капсулираност в носителите на лекарства и формулиране на инокулата.
По-долу можете да намерите подробна информация за ултразвукова маймунска маймунска вирусна проба подготовка, както и ултразвуково подпомагана MPXV ваксина производство.

Какво ще намерите на тази страница:

• Ултразвуков лизис за екстракция на вируса на маймуната
• Ултразвукова фрагментация на ДНК на вируса на маймуната
• Ултразвукови приложения в MPXV ваксина производство

Ултразвуков лизис и фрагментация на ДНК преди полимераза верижна реакция (PCR)

Инфекция с вируса на маймунската шарка се открива чрез тестване за усилване на нуклеинова киселина (NAAT), като се използва верижна реакция в реално време или конвенционална полимераза (PCR), за откриване на уникални поредици от вирусна ДНК. Пробата (напр. от назофарингеален суап или кожни биопсии) съдържа вируса в клетките.
За анализ вирусът трябва да бъде освободен от клетките, ане вирусната ДНК трябва да бъде фрагментирана за PCR.

Ултразвуков лизис:

Ултразвуково прекъсване на клетките / лизис е надежден и ефективен метод за изолиране на вируси от клетъчни проби и по този начин за предпочитане техника над химични агенти, като лизозим, протеиназа К и различни детергенти, които се използват алтернативно за постигане на клетъчен лизис и освобождаване на ДНК.
Използването на такива химически реагенти обаче изисква отнемащо време подготовка на пробата в няколко стъпки преди PCR анализа, за да се предотврати инхибирането на реакцията на PCR. Тъй като PCR инхибиторите влияят на ефективността на усилването, малки вариации на количеството инхибитори, които не са отстранени, могат да доведат до големи вариации в усилването на PCR продукта (Diaco, 1995).
Предимството на ultrasonication за лизис е, че пълното нарушаване на клетъчните структури и освобождаването на ДНК без необходимост от лежещи реагенти и отнемащи време подготовка на пробата са желателни. (срв. Fykse et al., 2003)

Ултразвукова ДНК фрагментация:

Ултразвукова ДНК фрагментация е проста и надеждна, както е произвежда ДНК фрагменти тунинг по дължина (basepairs, bp). Използвайки ултразвук, ДНК може ефективно да бъде фрагментирана до целевата дължина на ДНК. Прецизният контрол върху ултразвуковите параметри и изтънчените възможности за охлаждане предотвратяват разграждането на ДНК.
Прочетете повече за ултразвуковата фрагментация на ДНК!

Ултразвукови приложения във ваксина срещу вируса на маймуната

Ваксините, използвани срещу вируса на маймуната са понастоящем живи вирусни ваксини. Новоразработените ваксини може да използват други платформи като ДНК базирани В момента съдържа модифицирана Vaccinia Ankara viurs, атенюиран, нерепликиращ ортопоксвирус. Съдържа също Tris (трис-аминометан) и натриев хлорид. Ваксината може да съдържа и малки количества ДНК и протеин от клетките на Пилешкия ембрион Фибробласт, които се използват за отглеждане на вируса на ваксината, бензоназата и антибиотичните съединения като гентамицин и ципрофлоксацин.

Ултразвуковата хомогенизация се използва при производството на живи атенюирани вирусни ваксини, ДНК ваксини, многовалентни ДНК коктейли, рРНК ваксини, рекомбинантни протеинови ваксини, вирусоподобни ваксини за частици и др.

Можете да намерите по-задълбочена информация за ултразвукови приложения за подобрено производство на ваксини!

Протокол за ултразвукова изолация на вируса на маймуната

Изследователският екип на Stittelaar (2005) използва ултразвуков лизис за освобождаване на вируса на маймуната от растежа хост клетъчна култура, както и от клетки, получени чрез гърлото суапове от заразени примати.

Подготовка на ваксина срещу маймунки:

Monkeypox вируси са отглеждани на специфични без патогени пиле ембрион фибробластни клетки. След инкубация в продължение на 1 до 2 дни, суспензията вирус-клетка е добита от един кръг на замразяване-размразяване и след това се концентрира чрез центрофугиране. Пелетът беше ресуспендиран и подложен на няколко кръга на ултразвукова хомогенизация.

Monkeypox вирус изолация от ваксинирани макаци:

Пробите бяха размразени три пъти и с ултразвук в ултразвукова CupHorn. Две разреждания (1:10 и 1:100) в транспортната среда, допълнени с 1% серум от фетален едър рогат добитък, са използвани за инокулиране на монослойните клетки vero в шест-кладенец плочи. След 1 з на инкубация при 37°C, инокулата са отстранени и заменени с култура средно допълнени с 1% плода говежди серум. Монослойните са били култивирани в продължение на 5 дни при 37°C и оцветени с кристален виолетов разтвор.
(срв. "Стителаар и др.", 2005 г.)

Ултразвукови средства за анализ на вируси и производство на ваксини

Hielscher Ultrasonics широко продуктово портфолио предлага идеалния ultrasonicator за научни изследвания и аналитични лаборатории, както и за промишлено производство на ваксини.
Hielscher Ultrasonics е специализиран в проектирането, производството и разпространението на високопроизводителни ултразвукови и соно-биореактори за използването в изследователски и аналитични лаборатории, както и за внедряване в промишленото производство на ваксини (напр. ваксини, Апис).
Ултразвукът може да се прилага върху отворени съдове, затворени непрекъснато разбърквани реактори и реактори с непрекъснат поток. Всички части на ултразвуковите системи, които се свързват с течната среда, са направени от неръждаема стомана, титан, или стъкло. Автоклавируемите части и санитарните фитинги осигуряват производството под фармако-клас условия.
Автоматично записване на данни: Интелигентен софтуер записва параметрите на процеса на обработка с ултразвук автоматично на интегрираната SD карта с памет. Прецизният контрол на всички параметри на процеса гарантира Възпроизводимост, стандартизацията на производството, и улеснява изпълнението на стандартите за безопасност на фармацевтичните продукти.
Hielscher Ultrasonics’ ултразвукови процесори са високо надеждни и могат да бъдат прецизно контролирани. Всички индустриални ултразвукови уреди могат да се регулират, за да доставят пълния диапазон от по-ниски до много високи амплитуди. Здравината на ултразвуковите системи на Hielscher позволява 24/7 работа при тежкотоварни и в взискателни среди.

Таблицата по-долу дава индикация за приблизителната капацитет за преработка на нашите ultrasonicators: