Елуиране на антитела чрез соникация с помощта на високопроизводителна соникация

Афинитетната хроматография е мощна техника за пречистване на протеини, която изисква ултразвуково асистирано неспецифично елуиране е надеждна техника за подготовка на проби за получаване на антитела от афинитетна хроматография. Ефективното и възпроизводимо елуиране на целевите антитела, свързани с афинитетните матрици, е значително подобрено чрез ултразвук. Високопроизводителната плоча-ултразвуков UIP400MTP е оптимално подходящ за елуиране на високи номера на пробите в 96-ямка, микротитър и многоямни плаки и улеснява възстановяването на антителата в афинитетната хроматография.

Как Sonication улеснява елуиране?

Използвайки ултразвуково-интензифицирано неспецифично елуиране, лабораторните работници и учените могат ефективно да възстановят пречистени антитела от афинитетни хроматографски колони. Тези пречистени антитела преминават през приложения надолу по веригата в различни области, като имунология, биотехнологии и медицинска диагностика.

Елуирането е етап на подготовка на пробата, който обикновено се използва за афинитетна хроматография: Афинитетната хроматография използва силно специфичните взаимодействия между целева молекула (като антитяло) и лиганд, имобилизиран върху хроматографска матрица. Това позволява селективно пречистване на целевата молекула от сложна смес, като се използва специфичният свързващ афинитет на молекулите, например антитела.
Специфично свързване на антитела: Антителата често се пречистват с помощта на афинитетна хроматография, където селективно се свързват с лиганд, имобилизиран върху хроматографската смола. Това може да бъде антиген, протеин A / G или всяка друга молекула, която взаимодейства специфично с антитялото, което представлява интерес.
Елуиране: След свързването на прицелното антитяло с матрицата, следващата стъпка включва елуиране (или измиване) на свързаното антитяло от смолата. Тази стъпка на елуиране обикновено включва нарушаване на специфичното свързване между антитялото и лиганд. Тази стъпка може да бъде улеснена чрез ултразвук.
Ултразвукова сонда UP50H е лаборатория хомогенизатор често се използва като клетъчен разрушител, диспергатор и емулгатор в лаборатории.Ултразвуково-подпомага неспецифично елуиране: За разлика от специфичните методи за елуиране, които нарушават само взаимодействието антитяло-лиганд, неспецифичните методи за елуиране нарушават всички взаимодействия върху смолата, включително неспецифичните. Това може да бъде изгодно, когато се занимавате със силно свързани замърсители, които могат да попречат на процеса на пречистване. Тук идва ултразвук в игра! Ултразвукови вълни се използват за генериране на кавитация мехурчета в елуиране буфер. Когато тези мехурчета се сринат близо до матрицата на смолата, те произвеждат интензивни локализирани сили на срязване и микрострийминг. Това механично разрушаване помага за прекъсване на неспецифичните взаимодействия между антитялото и лиганд, улеснявайки елуирането на свързаното антитяло от матрицата.

96-ямкови плочи и други многокладенци плочи се обработват най-добре с помощта на UIP400MTP на соникатора. Тази ултразвукова система е идеална за лизис, ДНК фрагментация и клетъчна разтворимост обработка проби в висока производителност.

Високопроизводителен соникатор UIP400MTP улеснява елуирането на антитела и протеини

Искане на информация




Забележете нашите Правила за поверителност,


 

Този урок обяснява какъв тип соникатор е най-подходящ за вашите задачи за подготовка на проби като лизис, разрушаване на клетките, изолиране на протеини, фрагментация на ДНК и РНК в лаборатории, анализ и изследвания. Изберете идеалния тип соникатор за вашето приложение, обем на пробата, номер на пробата и пропускателна способност. Hielscher Ultrasonics има идеален ултразвуков хомогенизатор за вас!

Как да намерим перфектния соникатор за разрушаване на клетките и извличане на протеини в науката и анализа

Миниатюра на видео

 

Предимствата на ултразвуково елуиране с помощта на соникация

Ултразвуковото елуиране предлага няколко предимства, особено в контекста на техниките за пречистване на протеини, като афинитетна хроматография.
Например, ултразвук превъзхожда алтернативни методи по отношение на целостта на протеина, възстановяване, чистота, гъвкавост и ефективност. Тези предимства правят ултразвуковото елуиране предпочитан избор за процесите на пречистване на протеини, особено в приложения, където поддържането на протеиновата структура и активност е от съществено значение. Освен това, ултразвуковото елуиране се откроява със своята простота, ефективност, гъвкавост и съвместимост с широк спектър от протеини и афинитетни матрици. Прилагайки ултразвукови вълни за нарушаване на взаимодействията протеин-матрица, ултразвуковото елуиране предлага нежен и бърз метод за пречистване на протеини, осигурявайки високи нива на възстановяване и запазване на целостта на протеина за приложения надолу по веригата.

По-нежна към протеиновата структура: Елуирането с ниско рН включва използването на киселинни буфери за нарушаване на свързването между целевия протеин (напр. антитела) и матрицата на афинитета. Въпреки това, излагането на ниско рН може да денатурира протеините, като потенциално компрометира тяхната структура и биологична активност. За разлика от това, ултразвуковото елуиране разчита предимно на механично разрушаване, а не на химическо денатурация, което го прави по-нежен към протеиновата структура. Това е особено полезно при пречистване на деликатни протеини или антитела, чувствителни към промени в pH.

  • Намален риск от агрегиране: Елуирането с ниско рН може да увеличи риска от агрегация на протеините поради разгръщането на протеините и излагането на хидрофобни региони. Агрегацията може да доведе до загуба на протеинова активност и трудности при преработката надолу по веригата. Ултразвуковото елуиране, за сравнение, свежда до минимум риска от агрегация чрез използване на механични сили, за да наруши взаимодействията между протеина и афинитетната матрица, без значително да променя естествената конформация на протеина.
  • Подобрено възстановяване и чистота: Ултразвуковото елуиране може да постигне по-високи нива на възстановяване и чистота в сравнение с алтернативните методи за елуиране. Механичното разрушаване, осигурено от ултразвук, ефективно освобождава свързани протеини от матрицата на афинитета, като същевременно свежда до минимум неспецифичните взаимодействия. Това води до подобрено възстановяване на целевия протеин с намалено замърсяване от неспецифично свързани молекули, допринасяйки за по-висока чистота на елуираната фракция.
  • Високопроизводителна обработка: Hielscher Ultrasonics предлага различни соникатори за ултразвук с помощта на протеин пречистване, елуиране и biopanning. Микротитърната плоча-соникатор UIP400MTP позволява масова обработка на проби в 96-ямка и други многокладенци плочи. VialTweeter е идеален за безпроблемно, едновременно ултразвук на до 10 тръби като Eppendorf флакони при същите условия. The CupHorn е универсален соникатор идеален за няколко тръби, малки чаши и други съдове. И разбира се, класическите сонда тип соникатори с microtips са добре установен лабораторен инструмент за подготовка на проби. Hielscher Ultrasonics продуктова гама има идеален соникатор за вашия експеримент настройка и размера на пробата.
  • Универсалност и съвместимост: Ултразвуковото елуиране е съвместимо с широка гама от протеини и афинитетни матрици, предлагащи гъвкавост в приложенията за пречистване. За разлика от това, елуирането с ниско рН може да не е подходящо за някои протеини, които са чувствителни към киселинни условия, или за афинитетни матрици, които са склонни към разграждане или извличане при ниско рН. Ултразвуковото елуиране осигурява нежна и универсално приложима алтернатива, която може да бъде съобразена със специфичните нужди за пречистване, без да се компрометира целостта на протеина или стабилността на матрицата.
  • Време и ефективност: Ултразвуковото елуиране обикновено изисква по-кратко време за елуиране в сравнение с други методи за елуиране. Бързото и ефективно освобождаване на свързани протеини, улеснено от ултразвук, намалява времето за обработка и увеличава общата ефективност на пречистване, което го прави привлекателна възможност за приложения с висока производителност или когато се изискват чувствителни към времето резултати.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP за клетъчен лизис, екстракция на ДНК, фрагментация на ДНК, клетъчно разтваряне и пречистване на протеини.

96-добре плоча соникатор UIP400MTP за ултразвук на многоямкови плаки, PCR и ELISA плаки

 

VialTweeter при ултразвуков процесор UP200ST

VialTweeter соникатор за едновременно ултразвук на 10 проби, например да наруши клетките и да извлече протеини

Ултразвуково-Assisted Biopanning

Биопанирането е критична техника за пречистване на антитела, особено когато трябва да се получат високо специфични антитела за изследвания или медицинска диагностика. Биопанирането е процесът, при който антителата се изолират от смес от антитела, така наречената библиотека с антитела.

Как работи ултразвуковото биопаниране?

Започва с библиотека от антитела, смес от различни антитела. Всяко антитяло се характеризира със собствена уникална форма и специфичност. За анализ и терапия трябва да бъдат изолирани специфични антитела, които разпознават определена цел, като вирус или ракова клетка. Използвайки биопаниране, тези специфични антитела могат да бъдат изолирани. Ultrasonication помага да се улесни процеса на biopanning вземане на пречистване на антитела по-ефективно.

Започвайки с библиотека от антитела, антителата обикновено се показват на повърхността на бактериофаг, дрождева клетка или друга система за показване. Тази библиотека представлява разнообразна гама от антитела.
В първата стъпка тази библиотека е изложена на вашата целева молекула. Антителата, които се свързват с целта, ще се залепят, докато другите ще се измият. За да се отстранят несвързаните антитела, пробите се промиват няколко пъти с буферен разтвор.

Сега имаме проби, съдържащи само свързани антитела. Това обаче означава, че антителата все още са прикрепени към тяхната дисплейна система. За да ги освободите, взаимодействието антитяло-лиганд трябва да бъде нарушено. Тази стъпка е известна като елуиране. Пробите могат да се елуират с помощта на разтвор, който нарушава свързването, например като се използва специфичен елуиращ буфер, хаотропен, понижаващ стойността на рН, прилагане на топлина и т.н. Тези техники за елуиране унищожават свързването на антитяло-лиганд, но също така могат да влошат самите антитела. Ето защо ултразвук се използва като алтернативна техника за внимателно отстраняване на антителата от тяхната цел.

След финализиране на етапа на елуиране, получаваме пречистени антитела, готови за използване в изследвания, диагностика или терапия.

Biopanning е мощна техника в пречистване на антитела и ултразвукова елуиране улеснява и засилва ефективността – което води до високо пречистени, неповредени антитела. Ултразвуковото биопаниране позволява на учените да изолират високо специфични антитела от сложни проби, отваряйки врати за широк спектър от приложения.

Соникатори за пречистване на антитела

Hielscher соникатори са утвърдени инструменти, използвани в най-добрите изследователски съоръжения в световен мащаб. Ценени за тяхното състояние на най-съвременните дизайн и превъзходно изпълнение, Hielscher соникатори се считат за незаменими лабораторни инструменти в областта на биотехнологиите и молекулярната биология. Hielscher Ultrasonics предлага соникатори за единична проба, както и подготовка на проби с висока производителност, които улесняват ефективното пречистване на антитела и елуирането на целеви молекули и дават възможност за ефективно биопаниране за изолиране на специфични антитела с точност и скорост.
В контекста на пречистване на антитела, Hielscher соникатори превъзхождат в улесняването на стъпките на измиване и елуиране чрез ефективно премахване на несвързани антитела, като същевременно се запазва целостта на целевите комплекси. Техният прецизен контрол и мащабируемост позволяват персонализирани условия на обработка, осигурявайки оптимални резултати от пречистването в широк диапазон от обеми и сложности на пробите.
Hielscher соникатори представляват технологичната иновация в ултразвукова обработка, предлагащи несравними възможности за пречистване на антитела, елуиране и biopanning. Със своята прецизност, надеждност и лекота на работа, различните ултразвукови системи предлагат оптимална ефективност и гъвкавост за биофармацевтични изследвания, диагностика и терапия.
Свържете се с нас сега, за да научите повече за Hielscher соникатори за пречистване на антитела, елуиране и биопаниране! Нашият опитен технически персонал се радва да обсъди вашето приложение, свързано с антитела!

Защо Hielscher Ultrasonics?

  • висока ефективност
  • Най-съвременна технология
  • надеждност & устойчивост
  • регулируем, прецизен контрол на процеса
  • партида & в редица
  • за всеки обем
  • интелигентен софтуер
  • интелигентни функции (напр. програмируеми, протоколиране на данни, дистанционно управление)
  • Лесен и безопасен за работа
  • лесна поддръжка
  • CIP (почистване на място)

Искане на информация




Забележете нашите Правила за поверителност,


Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Hielscher ultrasonicators са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват гладкото интегриране на нашите ultrasonicators в промишлени съоръжения. Груби условия и взискателни среди се обработват лесно от Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и постави специален акцент върху високопроизводителни ultrasonicators с участието на най-съвременните технологии и удобство за потребителя. Разбира се, Hielscher ultrasonicators са CE съвместими и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.

Свържете се с нас! / Попитай ни!

Поискайте повече информация

Моля, използвайте формата по-долу, за да изиска допълнителна информация за ултразвукови процесори, приложения и цена. Ще се радваме да обсъдим процеса с вас и да ви предложим ултразвукова система, отговаряща на вашите изисквания!









Моля, обърнете внимание, че нашите Правила за поверителност,


Видеото показва ултразвуковата система за подготовка на проби UIP400MTP, която позволява надеждната подготовка на пробата на всички стандартни много кладенец плочи с помощта на ултразвук с висока интензивност. Типичните приложения на UIP400MTP включват клетъчен лизис, ДНК, РНК, и хроматин срязване, както и екстракция на протеини.

Ултразвуков апарат UIP400MTP за многопластова ултразвукова обработка

Миниатюра на видео

Сравнение на ултразвукова елуиране срещу традиционните техники за елуиране

  1. Елуиране на градиента: При градиентното елуиране силата на свързване между целевия протеин и матрицата на афинитета постепенно се намалява чрез промяна на състава на елуиращия буфер. Това може да включва променящи фактори като рН, концентрация на сол или концентрация на конкурентни лиганди. Градиентното елуиране позволява фина настройка на условията на елуиране за селективно освобождаване на целевия протеин, като същевременно се свежда до минимум неспецифичното свързване.
    Предимства на ултразвукова елуиране: Ултразвуковото елуиране предлага по-бързо и равномерно освобождаване на свързаните протеини в сравнение с градиентното елуиране. Докато градиентното елуиране изисква внимателна оптимизация и мониторинг на условията на елуиране, ултразвуковото елуиране осигурява по-прост и по-ефективен метод за възстановяване на протеини.
  2. Конкурентно елуиране: При конкурентно елуиране в елуиращия буфер се въвежда висока концентрация на конкурентен лиганд, за да се наруши свързването между целевия протеин и матрицата на афинитета. Конкурентният лиганд се конкурира с целевия протеин за местата на свързване на матрицата, като по този начин измества протеина и го освобождава в елуата.
    Предимства на ултразвукова елуиране: Ултразвуковото елуиране предлага по-нежна и по-гъвкава алтернатива на конкурентното елуиране. Конкурентното елуиране може да изисква използването на високи концентрации на хаотропни агенти (т.е. съвместно разтворено вещество, което нарушава мрежата за свързване на водорода между водните молекули и намалява стабилността на естественото състояние на протеините чрез отслабване на хидрофобния ефект) или разяждащи химикали, които могат да повлияят на стабилността и активността на протеините. За разлика от това, ултразвуковото елуиране осигурява механично разрушаване, без да са необходими допълнителни химични агенти, запазвайки целостта на протеините и осигурявайки високи нива на възстановяване.
  3. Температурно индуцирано елуиране: Температурно индуцираното елуиране включва промяна на температурата на елуиращия буфер, за да се наруши свързването между целевия протеин и матрицата на афинитета. Това може да се постигне чрез увеличаване или намаляване на температурата, в зависимост от специфичното взаимодействие протеин-матрица.
    Предимства на ултразвукова елуиране: Ултразвуковото елуиране предлага по-бърз и контролиран метод за елуиране на протеини в сравнение с методите, предизвикани от температурата. Докато температурно индуцираното елуиране може да изисква прецизен контрол на температурните градиенти и по-дълго време за уравновесяване, ултразвуковото елуиране осигурява незабавно механично разрушаване, което води до по-кратки времена на елуиране и подобрена ефективност.
  4. Ензимно елуиране: Ензимното елуиране използва специфични ензими, които разцепват връзките между целевия протеин и афинитетната матрица, освобождавайки протеина в елуата. Този метод е особено полезен за протеини, които са плътно свързани с матрицата или за приложения, изискващи прецизен контрол върху условията на елуиране.
    Предимства на ултразвукова елуиране: Ултразвуковото елуиране предлага неензимна и без химикали алтернатива на ензимното елуиране. Докато ензимното елуиране може да изисква оптимизиране на ензимната концентрация, инкубационното време и рН условията, ултразвуковото елуиране осигурява прост и универсално приложим метод за възстановяване на протеини, без да са необходими допълнителни реагенти или специализирано оборудване.
Соникатор за подготовка на проби с висока производителност! Соникаторът с UIP400MTP плоча улеснява лизис, екстракция на протеини, фрагментация на ДНК и клетъчна разтворимост на биологични проби в 96-ямкови плочи.

Plate соникатор UIP400MTP за всички 96-ямка плочи, микротитърни плочи и мулти-ямка плочи.



Литература / Препратки


Ултразвук с висока производителност! Продуктовата гама Hielscher обхваща пълния спектър от компактния ултразвуков апарат на лабораторията над пейка-топ единици до пълноиндустриални ултразвукови системи.

Hielscher Ultrasonics произвежда високопроизводителни ултразвукови хомогенизатори от лаборатория да се промишлени размери.


Ще се радваме да обсъдим вашия процес.

Да се свържем.