Ultrasonication là một phương pháp xử lý quan trọng cho sự cô lập của virus đậu mùa khỉ (MPXV) từ các mẫu phân tích, cho sự phân mảnh DNA virus cũng như trong sản xuất vắc-xin bệnh đậu mùa khỉ. Để chuẩn bị mẫu trước khi chẩn đoán và phân tích (PCR, ELISA vv) ultrasonication được sử dụng để lyse tế bào để giải phóng virus đậu mùa khỉ từ bên trong tế bào và / hoặc để phân mảnh DNA. Trong sản xuất vắc-xin, các ứng dụng bao gồm từ điều chế hạt / DNA của vi-rút, đóng gói trong các chất mang thuốc và xây dựng inocula.
Dưới đây bạn có thể tìm thấy thông tin chi tiết về chuẩn bị mẫu virus monkeypox siêu âm cũng như ultrasonically hỗ trợ sản xuất vắc xin MPXV.

Những gì bạn sẽ tìm thấy trên trang này:

• Siêu âm Lysis cho Monkeypox Virus khai thác
• Siêu âm phân mảnh dna virus monkeypox
• Ứng dụng siêu âm trong sản xuất vắc xin MPXV

Siêu âm Lysis và phân mảnh DNA trước phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

Nhiễm vi-rút đậu mùa khỉ được phát hiện bằng xét nghiệm khuếch đại axit nucleic (NAAT), sử dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) thời gian thực hoặc thông thường, để phát hiện các chuỗi DNA duy nhất của virus. Mẫu (ví dụ: từ hoán đổi mũi họng hoặc sinh thiết da) chứa vi-rút trong tế bào.
Để phân tích, virus phải được giải phóng khỏi các tế bào và DNA của virus phải được phân mảnh để PCR.

Ly giải siêu âm:

Siêu âm tế bào gián đoạn / ly giải là một phương pháp đáng tin cậy và hiệu quả để phân lập virus từ các mẫu tế bào và do đó một kỹ thuật thích hợp hơn so với các tác nhân hóa học, chẳng hạn như lysozyme, proteinase K và các chất tẩy rửa khác nhau được sử dụng thay thế để đạt được ly giải tế bào và giải phóng DNA.
Tuy nhiên, việc sử dụng các thuốc thử hóa học như vậy đòi hỏi phải chuẩn bị mẫu tốn thời gian trong một số bước trước khi phân tích PCR để ngăn chặn sự ức chế phản ứng PCR. Vì các chất ức chế PCR ảnh hưởng đến hiệu quả khuếch đại, các biến thể nhỏ của lượng chất ức chế không được loại bỏ có thể dẫn đến các biến thể lớn trong khuếch đại sản phẩm PCR (Diaco, 1995).
Ưu điểm của ultrasonication cho lysis là sự gián đoạn hoàn toàn của cấu trúc tế bào và giải phóng DNA mà không cần phải nói dối thuốc thử và chuẩn bị mẫu tốn thời gian là mong muốn. (xem Fykse và cộng sự, 2003)

Phân mảnh DNA siêu âm:

Siêu âm DNA phân mảnh là đơn giản và đáng tin cậy như là sản xuất các đoạn DNA có thể điều chỉnh theo chiều dài (basepairs, bp). Sử dụng siêu âm, DNA có thể được phân mảnh hiệu quả đến chiều dài DNA được nhắm mục tiêu. Kiểm soát chính xác các thông số siêu âm và các tùy chọn làm mát tinh vi ngăn chặn sự thoái hóa DNA.
Đọc thêm về phân mảnh DNA siêu âm!

Ứng dụng siêu âm trong Monkeypox Virus Vắc-xin

Vắc-xin được sử dụng để chống lại vi-rút đậu mùa khỉ hiện là vắc-xin vi-rút sống. Các loại vắc-xin mới được phát triển có thể sử dụng các nền tảng khác như dựa trên DNA Hiện đang chứa một loại viurs Vaccinia Ankara đã được sửa đổi, một loại orthopoxvirus suy yếu, không sao chép. Nó cũng chứa Tris (tris-aminomethane) và natri clorua. Vắc-xin cũng có thể chứa một lượng nhỏ DNA và protein từ các tế bào nguyên bào sợi phôi gà, được sử dụng để phát triển virus vắc-xin, benzonase và các hợp chất kháng sinh như gentamicin và ciprofloxacin.

Siêu âm đồng nhất được sử dụng trong sản xuất vắc-xin virus sống suy yếu, vắc-xin DNA, cocktail DNA đa hóa trị, vắc-xin mRNA, vắc-xin protein tái tổ hợp, vắc-xin hạt giống vi-rút, v.v.

Bạn có thể tìm thấy thông tin chuyên sâu hơn về các ứng dụng siêu âm để cải thiện sản xuất vắc xin!

Giao thức cho siêu âm cách ly của Virus Monkeypox

Nhóm nghiên cứu của Stittelaar (2005) đã sử dụng ly giải siêu âm để giải phóng virus đậu mùa khỉ từ nuôi cấy tế bào chủ tăng trưởng cũng như từ các tế bào thu được thông qua hoán đổi cổ họng từ các loài linh trưởng bị nhiễm bệnh.

Chuẩn bị vắc-xin đậu mùa khỉ:

Virus đậu mùa khỉ được phát triển trên các tế bào nguyên bào sợi phôi gà không có mầm bệnh cụ thể. Sau khi ủ trong 1 đến 2 ngày, huyền phù tế bào virus được thu hoạch bằng một đợt đóng băng tan băng và sau đó tập trung bằng cách ly tâm. Viên nén đã được tái sử dụng và chịu một số vòng đồng nhất siêu âm.

Phân lập vi rút bệnh đậu mùa khỉ từ khỉ macaques đã được tiêm chủng:

Các mẫu đã được đóng băng-tan băng ba lần và sonicated trong một CupHorn siêu âm. Hai chất pha loãng (1:10 và 1:100) trong môi trường vận chuyển được bổ sung 1% huyết thanh bò của thai nhi đã được sử dụng để tiêm các lớp đơn tế bào Vero trong các tấm sáu giếng. Sau 1 giờ ủ bệnh ở 37°C, inocula được loại bỏ và thay thế bằng môi trường nuôi cấy được bổ sung 1% huyết thanh bò của thai nhi. Các lớp đơn được nuôi cấy trong 5 ngày ở nhiệt độ 37 ° C và được nhuộm bằng dung dịch pha lê màu tím.
(xem Stittelaar và cộng sự, 2005)

Ultrasonicators để phân tích virus và sản xuất vắc xin

Hielscher Ultrasonics danh mục sản phẩm rộng cung cấp ultrasonicator lý tưởng cho các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích cũng như cho sản xuất vắc xin công nghiệp.
Hielscher Ultrasonics chuyên thiết kế, sản xuất và phân phối ultrasonicators hiệu suất cao và sono-bioreactors để sử dụng trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích cũng như để thực hiện trong sản xuất vắc-xin công nghiệp (ví dụ: Vaccine, Api).
Sonication có thể được áp dụng cho các tàu mở, đóng cửa liên tục khuấy lò phản ứng và liên tục dòng chảy thông qua lò phản ứng. Tất cả các bộ phận của hệ thống siêu âm, mà có được tiếp xúc với môi trường chất lỏng, được làm từ thép không gỉ, titan, hoặc thủy tinh. Các bộ phận hấp tiệt trùng và phụ kiện vệ sinh đảm bảo sản xuất theo điều kiện cấp dược phẩm.
Ghi dữ liệu tự động: Phần mềm thông minh ghi lại các thông số của quá trình sonication tự động trên thẻ nhớ SD tích hợp. Việc kiểm soát chính xác tất cả các thông số quy trình đảm bảo Reproducibility, tiêu chuẩn hóa của sản xuấtvà tạo điều kiện cho việc thực hiện các tiêu chuẩn an toàn sản phẩm dược phẩm.
Hielscher Ultrasonics’ bộ vi xử lý siêu âm có độ tin cậy cao và có thể được kiểm soát chính xác. Tất cả các ultrasonicators công nghiệp có thể điều chỉnh để cung cấp đầy đủ phạm vi từ biên độ thấp hơn đến rất cao. Sự mạnh mẽ của hệ thống siêu âm của Hielscher cho phép hoạt động 24/7 dưới nhiệm vụ nặng nề và trong môi trường đòi hỏi khắt khe.

Bảng dưới đây cho bạn một dấu hiệu về khả năng xử lý gần đúng của máy siêu âm: