Ứng dụng siêu âm trong virus đậu mùa khỉ

Siêu âm là một phương pháp xử lý quan trọng để phân lập virus đậu mùa khỉ (MPXV) từ các mẫu phân tích, phân mảnh DNA của virus cũng như trong sản xuất vắc xin đậu mùa khỉ. Để chuẩn bị mẫu trước khi chẩn đoán và phân tích (PCR, ELISA, v.v.) siêu âm được sử dụng để lyse tế bào nhằm giải phóng virus đậu mùa khỉ từ bên trong tế bào và / hoặc phân mảnh DNA. Trong sản xuất vắc-xin, các ứng dụng bao gồm từ hạt virus / chuẩn bị DNA, đóng gói trong các chất mang thuốc và xây dựng vắc-xin.
Dưới đây bạn có thể tìm thấy thông tin chi tiết về việc chuẩn bị mẫu virus đậu mùa khỉ siêu âm cũng như sản xuất vắc xin MPXV hỗ trợ siêu âm.

Những gì bạn sẽ tìm thấy trên trang này:

• Siêu âm ly giải virus đậu mùa khỉ
• Phân mảnh siêu âm DNA virus đậu mùa khỉ
• Ứng dụng siêu âm trong sản xuất vắc-xin MPXV

Ly giải siêu âm và phân mảnh DNA trước khi phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

Nhiễm virus đậu mùa khỉ được phát hiện bằng xét nghiệm khuếch đại axit nucleic (NAAT), sử dụng phản ứng chuỗi polymerase thông thường hoặc thời gian thực (PCR), để phát hiện các chuỗi DNA virus duy nhất. Mẫu (ví dụ: từ hoán đổi mũi họng hoặc sinh thiết da) có chứa vi-rút trong tế bào.
Để phân tích, virus phải được giải phóng khỏi tế bào và DNA của virus phải được phân mảnh để PCR.

Siêu âm ly giải:

Siêu âm tế bào gián đoạn / ly giải là một phương pháp đáng tin cậy và hiệu quả để phân lập virus từ các mẫu tế bào và do đó một kỹ thuật thích hợp hơn so với các tác nhân hóa học, chẳng hạn như lysozyme, proteinase K và các chất tẩy rửa khác nhau được sử dụng thay thế để đạt được ly giải tế bào và giải phóng DNA.
Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc thử hóa học như vậy đòi hỏi phải mất thời gian chuẩn bị mẫu trong một số bước trước khi phân tích PCR để ngăn chặn ức chế phản ứng PCR. Vì các chất ức chế PCR ảnh hưởng đến hiệu quả khuếch đại, các biến thể nhỏ về lượng chất ức chế không được loại bỏ có thể dẫn đến sự thay đổi lớn trong khuếch đại sản phẩm PCR (Diaco, 1995).
Ưu điểm của ultrasonication cho ly giải là sự phá vỡ hoàn toàn cấu trúc tế bào và phát hành DNA mà không cần thuốc thử lysing và chuẩn bị mẫu tốn thời gian là mong muốn. (cf. Fykse và cộng sự, 2003)

Phân mảnh DNA siêu âm:

Phân mảnh DNA siêu âm là đơn giản và đáng tin cậy như là sản xuất các đoạn DNA có thể điều chỉnh chiều dài (basepairs, bp). Sử dụng siêu âm, DNA có thể được phân mảnh hiệu quả theo chiều dài DNA được nhắm mục tiêu. Kiểm soát chính xác các thông số siêu âm và các tùy chọn làm mát tinh vi ngăn ngừa sự thoái hóa DNA.
Đọc thêm về phân mảnh DNA siêu âm!

Ứng dụng siêu âm trong vắc xin virus đậu mùa khỉ

Vaccine được sử dụng để chống lại virus đậu mùa khỉ hiện là vaccine virus sống. Các vắc xin mới được phát triển có thể sử dụng các nền tảng khác như dựa trên DNA Hiện có chứa một viurs Vaccinia Ankara đã được sửa đổi, một loại orthopoxvirus suy yếu, không sao chép. Nó cũng chứa Tris (tris-aminomethane) và natri clorua. Vắc-xin cũng có thể chứa một lượng nhỏ DNA và protein từ các tế bào nguyên bào sợi phôi gà, được sử dụng để phát triển vi-rút vắc-xin, benzonase và các hợp chất kháng sinh như gentamicin và ciprofloxacin.

Đồng nhất siêu âm được sử dụng trong sản xuất vắc-xin virus sống giảm độc lực, vắc-xin DNA, cocktail DNA đa hóa trị, vắc-xin mRNA, vắc-xin protein tái tổ hợp, vắc-xin hạt giống như virus, v.v.

Bạn có thể tìm thấy thông tin chuyên sâu hơn về các ứng dụng siêu âm để cải thiện sản xuất vắc-xin!

Quy trình cách ly siêu âm virus đậu mùa khỉ

Nhóm nghiên cứu của Stittelaar (2005) đã sử dụng ly giải siêu âm để giải phóng virus đậu mùa khỉ khỏi nuôi cấy tế bào vật chủ tăng trưởng cũng như từ các tế bào thu được thông qua hoán đổi cổ họng từ các loài linh trưởng bị nhiễm bệnh.

Chuẩn bị vắc xin đậu mùa khỉ:

Virus đậu mùa khỉ được nuôi cấy trên các tế bào nguyên bào sợi phôi gà không có mầm bệnh đặc hiệu. Sau khi ủ bệnh từ 1 đến 2 ngày, huyền phù tế bào virus được thu hoạch bằng một đợt đông lạnh và sau đó cô đặc bằng cách ly tâm. Các viên đã được treo lại và chịu nhiều vòng đồng nhất siêu âm.

Phân lập virus đậu mùa khỉ từ khỉ đã tiêm phòng:

Các mẫu đã được đóng băng tan băng ba lần và sonicated trong một siêu âm CupHorn. Hai chất pha loãng (1:10 và 1:100) trong môi trường vận chuyển bổ sung huyết thanh bò thai 1% đã được sử dụng để cấy các lớp đơn tế bào Vero vào các tấm sáu giếng. Sau 1 giờ ủ ở nhiệt độ 37°C, chất tiêm đã được loại bỏ và thay thế bằng môi trường nuôi cấy bổ sung huyết thanh bò thai 1%. Các lớp đơn được nuôi cấy trong 5 ngày ở 37 ° C và nhuộm bằng dung dịch màu tím tinh thể.
(xem Stittelaar và cộng sự, 2005)

Ultrasonicators để phân tích virus và sản xuất vắc-xin

Hielscher Ultrasonics danh mục sản phẩm rộng cung cấp ultrasonicator lý tưởng cho các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích cũng như cho sản xuất vắc-xin công nghiệp.
Hielscher Ultrasonics chuyên thiết kế, sản xuất và phân phối ultrasonicators hiệu suất cao và sono-bioreactors để sử dụng trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích cũng như để thực hiện trong sản xuất vắc-xin công nghiệp (ví dụ: Vaccine, Api).
Sonication có thể được áp dụng cho các tàu mở, lò phản ứng khuấy liên tục và lò phản ứng chảy qua liên tục. Tất cả các bộ phận của hệ thống siêu âm, tiếp xúc với môi trường lỏng, được làm từ thép không gỉ, titan hoặc thủy tinh. Các bộ phận hấp tiệt trùng và phụ kiện vệ sinh đảm bảo sản xuất theo điều kiện cấp dược phẩm.
Ghi dữ liệu tự động: Phần mềm thông minh ghi lại các thông số của quá trình sonication tự động trên thẻ nhớ SD tích hợp. Việc kiểm soát chính xác tất cả các thông số quy trình đảm bảo Khả năng tái tạo, Tiêu chuẩn hóa sản xuấtvà tạo điều kiện thuận lợi cho việc thực hiện các tiêu chuẩn an toàn sản phẩm dược phẩm.
Hielscher Siêu âm’ Bộ vi xử lý siêu âm có độ tin cậy cao và có thể được kiểm soát chính xác. Tất cả các ultrasonicators công nghiệp có thể điều chỉnh để cung cấp đầy đủ phạm vi từ biên độ thấp đến rất cao. Sự mạnh mẽ của hệ thống siêu âm của Hielscher cho phép hoạt động 24/7 dưới nhiệm vụ nặng nề và trong môi trường đòi hỏi khắt khe.

Bảng dưới đây cung cấp cho bạn một dấu hiệu về khả năng xử lý gần đúng của ultrasonicators của chúng tôi: