Giao thức cho SARS-CoV-2 Coronavirus bất hoạt với Sonication

Hielscher VialTweeter là một đơn vị chuẩn bị đa mẫu siêu âm độc đáo, được sử dụng để bất hoạt coronavirus SARS-COV-2. VialTweeter cho phép chuẩn bị lên đến 10 lọ mẫu cùng một lúc và do đó là đơn vị lý tưởng để xử lý mẫu khối lượng.

Ngừng hoạt động của SARS-CoV-2 Coronavirus với VialTweeter

Sau khi loại bỏ các cố định, monolayers đã được rửa sạch ba lần với phosphate-buffered saline (PBS) trước khi cạo các tế bào vào 1mL MEM/5% FBS và sonicated (3 × 10 giây trên, 10 giây tắt tại 100% sức mạnh và biên độ) bằng cách sử dụng bộ vi xử lý siêu âm Hielscher UP200St với VialTweeter Đính kèm. Supernatants đã được làm rõ bằng cách ly tâm ở 3000 × g trong 10 phút. 

Đọc giao thức đầy đủ ở đây cho việc ngừng hoạt động coronavirus SARS-CoV-2 bởi Welch et al. (2020) dưới đây:

Các tế bào và Virus

Tế bào Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) được nuôi cấy trong môi trường thiết yếu tối thiểu (MEM) của Eagle được bổ sung 10% (v/ v) huyết thanh bắp chân thai nhi (FCS). Virus được sử dụng là chủng SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, được PHE phân lập từ cụm bệnh nhân đầu tiên ở Anh vào ngày 29/01/2020. Virus này thu được ở đoạn 1 và được sử dụng cho các nghiên cứu bất hoạt ở đoạn 2 hoặc 3.
Đối với thuốc thử và hóa chất được sử dụng cho bất hoạt SARS-CoV-2 cũng như loại bỏ độc tính tế bào thuốc thử, vui lòng xem báo cáo khoa học của Welch et al. (2020).

Bộ chuẩn bị mẫu siêu âm VialTweeter được sử dụng để bất hoạt virus corona SARS-CoV-2

Virus bất hoạt bởi chất tẩy rửa – Giao thức ngừng hoạt động SARS-CoV-2 Coronavirus của Welch et al. 2020

Bất hoạt SARS-CoV-2

Đối với các sản phẩm thương mại, các chế phẩm virus (chất lỏng nuôi cấy mô, titers khác nhau, × 106 đến 1 × 108 PFU/ml) được điều trị bằng thuốc thử ba lần ở nồng độ và cho thời gian tiếp xúc được khuyến cáo trong hướng dẫn sử dụng của nhà sản xuất, nếu có, hoặc cho nồng độ và thời gian cụ thể theo yêu cầu của các phòng thí nghiệm thử nghiệm. Trong trường hợp một loạt các nồng độ đã được đưa ra bởi các nhà sản xuất, tỷ lệ thấp nhất của sản phẩm để mẫu đã được thử nghiệm (tức là nồng độ thấp nhất được đề nghị của sản phẩm thử nghiệm). Thuốc thử ống vận chuyển mẫu đã được thử nghiệm bằng cách sử dụng tỷ lệ một thể tích chất lỏng nuôi cấy mô với mười thể tích thuốc thử, trừ khi tỷ lệ thể tích của chất lỏng mẫu với thuốc thử được nhà sản xuất chỉ định. Chất tẩy rửa, chất cố định và dung môi đã được thử nghiệm ở nồng độ được chỉ định cho thời gian được chỉ định. Tất cả các bước bất hoạt được thực hiện ở nhiệt độ phòng xung quanh (18 – 25°C). Để thử nghiệm các loại mẫu thay thế, virus đã được spiked vào ma trận mẫu chỉ định ở một tỷ lệ 1:9, sau đó được điều trị bằng thuốc thử nghiệm như trên. Tất cả các thí nghiệm bao gồm các mẫu được xử lý giả điều khiển ba chiều với thể tích PBS tương đương thay cho thuốc thử thử nghiệm. Ngay sau thời gian tiếp xúc cần thiết, 1mL mẫu được xử lý đã được xử lý bằng ma trận lọc được lựa chọn phù hợp. Loại bỏ thuốc thử để thử nghiệm bất hoạt được thực hiện ở định dạng cột quay lớn hơn bằng cách sử dụng cột xoay chất tẩy rửa Pierce 4mL (Thermo Fisher), hoặc bằng cách đổ đầy các cột ly tâm công suất Pierce 10mL rỗng (Thermo Fisher) với SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR hoặc Sephadex LH-20 để cung cấp cho các hạt / nhựa đóng gói 4mL. Để thanh lọc bằng bộ lọc Amicon, 2 × 500μl đã được tinh chế bằng cách sử dụng hai bộ lọc ly tâm bằng phương pháp được mô tả trước đó, sau đó gộp lại với nhau. Đối với formaldehyde và formaldehyde với loại bỏ glutaraldehyde, một bộ lọc đã được sử dụng với khối lượng mẫu 1× 500μl, resuspended sau khi chế biến trong PBS 500μl, và thêm vào 400ul MEM / 5% FBS. Đối với bất hoạt của bị nhiễm bệnh VialTweeter tại bộ xử lý siêu âm UP200STlớp đơn, 12,5 cm2 bình tế bào Vero E6 (2,5 × 106 tế bào/bình chứa 2,5mL MEM/5% FBS) bị nhiễm MOI 0,001 và ủ ở 37°C/5% CO2 trong 24 giờ. Supernatant đã được loại bỏ, và các tế bào cố định bằng cách sử dụng 5mL formaldehyde, hoặc formaldehyde và glutaraldehyde ở nhiệt độ phòng trong 15 hoặc 60 phút. Các fixative đã được gỡ bỏ, và monolayers rửa ba lần với PBS trước khi cạo các tế bào vào 1mL MEM /5% FBS và sonicated (3 × 10 giây trên, 10 giây tắt tại 100% sức mạnh và biên độ) bằng cách sử dụng một UP200St với tập tin đính kèm VialTweeter (Hielscher Siêu âm Công nghệ). Supernatants đã được làm rõ bằng cách ly tâm ở 3000 × g trong 10 phút.

VialTweeter cho Sonication dữ dội của lọ đóng

VialTweeter cho Sonication dữ dội của lọ kín

Yêu cầu thông tin




Lưu ý của chúng tôi Chính sách bảo mật.


Các thuốc thử khác nhau đã được thử nghiệm về sự bất hoạt của virus corona SARS-CoV-2 bằng cách sử dụng đơn vị chuẩn bị mẫu siêu âm VialTweeter.

Chi tiết về thuốc thử được sử dụng cho bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 với VialTweeter siêu âm theo giao thức của Welch et al. 2020

Giao thức đầy đủ bao gồm việc sử dụng Hielscher VialTweeter có thể được tìm thấy ở đây:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Máy siêu âm đa mẫu VialTweeter cho phép chuẩn bị mẫu đồng thời lên đến 10 lọ trong cùng điều kiện quy trình. VialTweeter là một thiết bị siêu âm được thiết lập được sử dụng để bất hoạt virus corona SARS-CoV-2 (Nhấn để phóng to ảnh!)

VialTweeter cho bất hoạt virus siêu âm

Lợi thế của VialTweeter trong nháy mắt

  • Sonication lên đến 10 lọ cùng một lúc
  • Không ô nhiễm chéo
  • Không mất mẫu
  • Ghi dữ liệu tự động
  • Dễ dàng và an toàn để vận hành
VialTweeter cũng được sử dụng cho

  • Tế bào lysis
  • Sự gián đoạn hạt virus
  • Chiết xuất axit nucleic: Cách ly DNA/RNA
  • Phân mảnh DNA/RNA
  • Hòa giải Lysate

    • Dismembrators siêu âm tinh vi và phá vỡ tế bào

    Đa mẫu ultrasonicator VialTweeter chỉ là một trong nhiều giải pháp siêu âm để chuẩn bị mẫu trong các phòng thí nghiệm sinh học, sinh hóa và lâm sàng. Hielscher Ultrasonics cung cấp các dismembrator siêu âm lý tưởng cho ứng dụng của bạn, ví dụ như tế bào lysis, khai thác tế bào, mô homogenization, lysate hòa tan, hòa tan, mẫu degassing vv
    Hãy cho chúng tôi biết có bao nhiêu mẫu bạn phải xử lý mỗi giờ và ngày, nếu bạn thích sonication trực tiếp hoặc gián tiếp và mục tiêu của việc điều trị mẫu siêu âm là gì. Chúng tôi sẽ giới thiệu cho bạn các đơn vị siêu âm phù hợp nhất cho thói quen làm việc hàng ngày của bạn!
    Bộ vi xử lý siêu âm kỹ thuật số Hielscher Ultrasonics được trang bị phần mềm thông minh, ghi dữ liệu tự động, tùy chọn cài đặt trước dễ dàng để kiểm soát nhiệt độ, thời gian sonication, chế độ chu kỳ / xung cũng như chiếu sáng mẫu và điều khiển từ xa của trình duyệt. Chúng tôi cố gắng làm cho các thiết bị siêu âm của chúng tôi càng thông minh càng tốt để thói quen nghiên cứu và làm việc của bạn trở nên thuận tiện và thành công nhất có thể.
    Click vào đây, để tìm thêm các ứng dụng bao gồm các giao thức chuẩn bị mẫu siêu âm với VialTweeter!

    Liên hệ chúng tôi! / Hỏi chúng tôi!

    Yêu cầu thêm thông tin

    Vui lòng sử dụng mẫu dưới đây để yêu cầu thêm thông tin về bộ vi xử lý siêu âm, ứng dụng và giá cả. Chúng tôi sẽ vui mừng để thảo luận về quá trình của bạn với bạn và để cung cấp cho bạn một hệ thống siêu âm đáp ứng yêu cầu của bạn!









    Xin lưu ý Chính sách bảo mật.


    Homogenizers siêu âm cao cắt được sử dụng trong phòng thí nghiệm, bench-top, thí điểm và chế biến công nghiệp.

    Hielscher Ultrasonics sản xuất hiệu suất cao siêu âm homogenizers cho các ứng dụng trộn, phân tán, nhũ tương và khai thác trên phòng thí nghiệm, thí điểm và quy mô công nghiệp.

    Văn học/tài liệu tham khảo

    Bài viết có liên quan

    Sự kiện đáng biết

    Tế bào Vero là gì?

    Vero E6, còn được gọi là Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586) là dòng tế bào nhân bản từ Vero 76 và được sử dụng trong nghiên cứu các coronavirus SARS-CoV và SARS-CoV-2. Các tế bào Vero là một dòng dõi các tế bào được sử dụng trong nuôi cấy tế bào. Các 'Vero’ dòng dõi được phân lập từ các tế bào biểu mô thận được chiết xuất từ một con khỉ xanh châu Phi (Chlorocebus sp.).
    Các tế bào Vero E6 cho thấy một số ức chế tiếp xúc, vì vậy phù hợp để truyền virus tái tạo từ từ. Các dòng tế bào Vero E6 thường được sử dụng để điều tra tế bào học của coronavirus SARS-CoV và SARS-CoV-2 như các tế bào Vero (tế bào thận khỉ xanh châu Phi) thể hiện sự biểu hiện phong phú của các thụ thể enzyme chuyển đổi angiotensin 2 (ACE2). Thụ thể ACE2 là một vị trí chính cho coronavirus SARS-CoV-2.
    Ví dụ, Ogando et al. (2020) phát hiện ra rằng SARS-CoV-2 – so với SARS-CoV – tạo ra nồng độ RNA vi-rút nội bào cao hơn, nhưng nổi bật là con cháu virus ít lây nhiễm gấp 50 lần đã được phục hồi từ môi trường nuôi cấy. Hơn nữa, họ xác định rằng độ nhạy của hai loại virus với ba chất ức chế được thiết lập để sao chép coronavirus (Remdesivir, Alisporivir và chloroquine) rất giống nhau, nhưng nhiễm SARS-CoV-2 nhạy cảm hơn đáng kể với việc điều trị trước các tế bào bằng pegylated interferon alpha. Một sự khác biệt quan trọng giữa hai virus là một thực tế là – khi thụ động trong các tế bào Vero E6 – SARS-CoV-2 dường như đang chịu áp lực lựa chọn mạnh mẽ để có được đột biến thích nghi trong gen protein đột biến của nó. Những đột biến này thay đổi hoặc xóa một 'trang web phân tách giống như furin' giả định trong khu vực kết nối các tên miền S1 và S2 và dẫn đến một sự thay đổi kiểu hình rất nổi bật trong các xét nghiệm mảng bám.