Quy trình bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 bằng siêu âm

Hielscher VialTweeter là thiết bị chuẩn bị nhiều mẫu bằng siêu âm độc đáo, được sử dụng để bất hoạt coronavirus SARS-COV-2. VialTweeter cho phép chuẩn bị đồng thời tối đa 10 lọ mẫu và do đó là thiết bị lý tưởng để xử lý mẫu hàng loạt.

Bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 bằng VialTweeter

Sau khi loại bỏ chất cố định, các lớp tế bào đơn được rửa ba lần bằng dung dịch muối đệm phosphat (PBS), sau đó cạo thu tế bào vào 1mL MEM/5% FBS và xử lý bằng siêu âm (3 × bật 10 giây, tắt 10 giây ở công suất và biên độ 100%) bằng thiết bị xử lý siêu âm Hielscher UP200St với VialTweeter đi kèm. Dịch nổi được làm trong bằng cách ly tâm ở 3000 × g trong 10 phút. Đọc toàn bộ quy trình bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 của Welch và cộng sự (2020) dưới đây:

Tế bào và virus

Đã lược bỏ các chi tiết thao tác nuôi cấy. Virus được sử dụng là chủng SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, được PHE phân lập từ cụm bệnh nhân đầu tiên tại Vương quốc Anh vào 29/01/2020. Đã lược bỏ các chi tiết về lần cấy chuyển.
Về các thuốc thử và hóa chất được sử dụng để bất hoạt SARS-CoV-2 cũng như việc loại bỏ độc tính của thuốc thử đối với tế bào, vui lòng xem báo cáo khoa học của Welch và cộng sự (2020).

Bất hoạt virus bằng chất tẩy rửa – Quy trình bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 của Welch và cộng sự 2020

Bất hoạt SARS-CoV-2


Đối với các sản phẩm thương mại, các chế phẩm virus (dịch nuôi cấy mô, hiệu giá từ 1 × 10⁶ đến 1 × 10⁸ PFU/ml) được xử lý với thuốc thử theo ba lần lặp, ở nồng độ và trong thời gian tiếp xúc được khuyến nghị trong hướng dẫn sử dụng của nhà sản xuất, nếu có, hoặc ở nồng độ và trong thời gian do các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm yêu cầu cụ thể. Khi nhà sản xuất đưa ra một khoảng nồng độ, tỷ lệ sản phẩm so với mẫu thấp nhất được thử nghiệm (tức là nồng độ thấp nhất được khuyến nghị của sản phẩm thử nghiệm). Thuốc thử trong ống vận chuyển bệnh phẩm được thử nghiệm với tỷ lệ một thể tích dịch nuôi cấy mô trên mười thể tích thuốc thử, trừ khi nhà sản xuất quy định tỷ lệ thể tích dịch mẫu so với thuốc thử. Các chất tẩy rửa, chất cố định và dung môi được thử nghiệm ở nồng độ và trong thời gian đã chỉ định. Tất cả các bước bất hoạt được thực hiện ở nhiệt độ phòng (18 – 25°C). Để thử nghiệm các loại mẫu khác, virus được bổ sung vào nền mẫu đã chỉ định theo tỷ lệ 1:9, sau đó được xử lý bằng thuốc thử thử nghiệm như trên. Tất cả các thí nghiệm đều bao gồm các mẫu đối chứng được xử lý giả theo ba lần lặp, sử dụng một thể tích PBS tương đương thay cho thuốc thử thử nghiệm. Ngay sau thời gian tiếp xúc yêu cầu, 1mL mẫu đã xử lý được xử lý qua vật liệu lọc đã được lựa chọn phù hợp. Việc loại bỏ thuốc thử để thử nghiệm bất hoạt được thực hiện bằng cột ly tâm cỡ lớn hơn, sử dụng Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), hoặc bằng cách nạp SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR hoặc Sephadex LH-20 vào các cột ly tâm Pierce rỗng có dung tích 10mL (Thermo Fisher) để tạo thành 4mL hạt/nhựa đã nhồi. Để tinh sạch bằng bộ lọc Amicon, các mẫu 2 × 500μl được tinh sạch bằng hai bộ lọc ly tâm theo phương pháp đã mô tả trước đó, sau đó gộp lại. Để loại bỏ formaldehyde và hỗn hợp formaldehyde với glutaraldehyde, một bộ lọc được sử dụng với thể tích mẫu 1× 500μl; sau khi xử lý, mẫu được tái huyền phù trong 500μl PBS rồi được thêm vào 400ul MEM/5% FBS. Để bất hoạt các lớp tế bào đơn đã nhiễm, các bình nuôi cấy có diện tích 12,5 cm² chứa tế bào Vero E6 (2,5 × 10⁶ Đã lược bỏ các thông số thao tác gây nhiễm và nuôi cấy SARS-CoV-2.₂ Đã lược bỏ thời gian ủ nuôi cấy. Dịch nổi được loại bỏ, và tế bào được cố định bằng 5mL formaldehyde hoặc hỗn hợp formaldehyde và glutaraldehyde ở nhiệt độ phòng trong 15 hoặc 60 phút. Chất cố định được loại bỏ, và các lớp tế bào đơn được rửa ba lần bằng PBS, sau đó cạo thu tế bào vào 1mL MEM/5% FBS và xử lý bằng siêu âm (3 × bật 10 giây, tắt 10 giây ở công suất và biên độ 100%) bằng UP200St với bộ phận VialTweeter đi kèm (Hielscher Ultrasound Technology). Dịch nổi được làm trong bằng cách ly tâm ở 3000 × g trong 10 phút.


Thông tin chi tiết về thuốc thử được sử dụng để bất hoạt coronavirus SARS-CoV-2 bằng VialTweeter siêu âm theo quy trình của Welch và cộng sự 2020

Có thể tìm thấy toàn bộ quy trình, bao gồm việc sử dụng Hielscher VialTweeter, tại đây:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Thiết bị phân rã và phá vỡ tế bào bằng siêu âm tiên tiến

Thiết bị siêu âm xử lý nhiều mẫu VialTweeter chỉ là một trong nhiều giải pháp siêu âm để chuẩn bị mẫu trong các phòng thí nghiệm sinh học, hóa sinh và lâm sàng. Hielscher Ultrasonics cung cấp thiết bị phân rã bằng siêu âm lý tưởng cho ứng dụng của bạn, ví dụ như ly giải tế bào, chiết xuất tế bào, đồng nhất hóa mô, hòa tan dịch ly giải, hòa tan, khử khí mẫu, v.v.
Hãy cho chúng tôi biết số lượng mẫu bạn cần xử lý mỗi giờ và mỗi ngày, bạn muốn xử lý siêu âm trực tiếp hay gián tiếp, và mục tiêu của việc xử lý mẫu bằng siêu âm là gì. Chúng tôi sẽ đề xuất thiết bị siêu âm phù hợp nhất cho công việc hằng ngày của bạn!
Các thiết bị xử lý siêu âm kỹ thuật số của Hielscher Ultrasonics được trang bị phần mềm thông minh, chức năng ghi dữ liệu tự động, các tùy chọn cài đặt trước dễ sử dụng để kiểm soát nhiệt độ, thời gian xử lý siêu âm, chế độ chu kỳ/xung, cũng như chức năng chiếu sáng mẫu và điều khiển từ xa qua trình duyệt. Chúng tôi nỗ lực làm cho các thiết bị siêu âm của mình thông minh nhất có thể để hoạt động nghiên cứu và công việc hằng ngày của bạn trở nên thuận tiện và thành công nhất có thể.
Nhấp vào đây để tìm thêm các ứng dụng, bao gồm các quy trình chuẩn bị mẫu bằng siêu âm với VialTweeter!