Siêu âm Lysis của Drosophila melanogaster mẫu

Drosophila melanogaster được sử dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm như là sinh vật mô hình. Do đó, các bước chuẩn bị trước khi phân tích như lysis, gián đoạn tế bào, chiết xuất protein và cắt DNA của các mẫu melanogaster Drosophila phải được thực hiện thường xuyên. Dismembrators siêu âm là đáng tin cậy và hiệu quả và có thể được sử dụng để thực hiện các nhiệm vụ khác nhau như lysis, khai thác protein hoặc phân mảnh DNA một cách dễ dàng bằng cách chỉ điều chỉnh các thông số quá trình siêu âm. Siêu âm homogenizers do đó các công cụ linh hoạt với một loạt các ứng dụng.

Siêu âm Lysis và chiết xuất protein

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lysis, hòa giải tế bào, đồng nhất mô và chiết xuất protein là nhiệm vụ điển hình cho dismembrators siêu âm trong phòng thí nghiệm sinh học. Siêu âm dismembrators và phá vỡ tế bào là rất thích hợp để đồng nhất các mô động vật, côn trùng (ví dụ, Drosophila melanogaster, C. elegans) hoặc mẫu thực vật. Các ứng dụng tiếp theo của ultrasonication là lysis của đình chỉ tế bào và viên cũng như khai thác các protein nội bào.
Siêu âm lysis và chiết xuất protein là quá trình có độ tin cậy cao và tái sản xuất, có thể thực hiện trên cơ sở các giao thức được thành lập. Kể từ khi cường độ quá trình siêu âm có thể được điều chỉnh chính xác thông qua các thông số sonication như biên độ, chế độ chu kỳ / xung, nhiệt độ và khối lượng mẫu, một khi đã được chứng minh giao thức có thể được lặp đi lặp lại với kết quả tương tự hơn và hơn.

Ưu điểm của chuẩn bị mẫu siêu âm

  • hiệu quả cao
  • Có thể điều chỉnh theo vật liệu mẫu cụ thể
  • Thích hợp cho bất kỳ âm lượng nào
  • Điều trị không nhiệt
  • Kết quả tái sanh
  • Đơn giản và an toàn

Siêu âm DNA và phân mảnh RNA

Sau khi lysis tế bào và chiết xuất protein, một bước cần thiết phổ biến trong việc chuẩn bị mẫu là cắt và phân mảnh DNA, RNA và chromatin, ví dụ như trước khi kết tủa miễn dịch nhiễm sắc thể (ChIP). Sự phân mảnh DNA và RNA có thể đạt được một cách đáng tin cậy bằng cách phá vỡ các liên kết cộng hóa trị giữ DNA lại với nhau bằng các lực vật lý. Sử dụng cắt vật lý như sonication, lúc đầu các sợi DNA bị phá vỡ, sau đó DNA được phân mảnh thành các mảnh nhỏ hơn.
Phân mảnh DNA siêu âm là đáng tin cậy và hiệu quả trong việc cắt DNA đến một chiều dài nhắm mục tiêu, ví dụ như 500bp (cặp cơ sở). Những lợi thế chính của phân mảnh DNA siêu âm bao gồm sự kiểm soát chính xác của các thông số quá trình siêu âm và cường độ. Các thông số quá trình siêu âm có thể được điều chỉnh bằng cách điều chỉnh cường độ sonication, chu kỳ và thời gian chính xác. Điều này làm cho nó có thể tạo ra kích thước DNA mong muốn và chiều dài DNA mục tiêu có thể được sản xuất đáng tin cậy cũng như sao chép. Siêu âm DNA cắt cũng là lý tưởng để tạo ra các mảnh DNA trọng lượng phân tử cao.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

Máy siêu âm UP200Ht với 2mm microtip S26d2 cho sonication của mẫu Drosophila

Yêu cầu thông tin




Lưu ý của chúng tôi Chính sách bảo mật.


Các giao thức cho siêu âm Lysis của Drosophila melanogaster

Dưới đây bạn có thể tìm thấy các giao thức khác nhau cho các ultrasonically hỗ trợ lysis, chiết xuất protein, và DNA hoặc chromatin phân mảnh của các mẫu Drosophila.

Siêu âm Lysis cho Cross-linking Immunoprecipitation (CLIP) Khảo nghiệm

Xét nghiệm CLIP được thực hiện như đã báo cáo trước đó với một số sửa đổi. Khoảng 20 mg buồng trứng từ 0 đến 1 ngày tuổi là uv liên kết chéo (3 × 2000 μJ / cm2), đồng nhất trên băng trong dung dịch đệm RCB 1 mL (50 mM HEPES pH 7,4, 200 mM NaCl, 2,5 mM MgCl2, 0,1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× Chất ức chế Protease hoàn chỉnh không có EDTA, 1 mM PMSF) được bổ sung 300 U RNAseOUT và đặt trên đá trong 30 phút. Các đồng nhất đã được sonicated trên băng, tại 80% quyền lực, năm lần trong 20 s bursts với một 60 s nghỉ ngơi ở giữa bằng cách sử dụng bộ xử lý siêu âm Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) và ly tâm (16000 × g trong 5 phút ở 4 °C). Chiết xuất hòa tan được precleared với 20 μl Protein-G dynabeads cho 20 phút ở 4 ° C. Sau khi loại bỏ các mẫu để tiêm chủng và định lượng đầu vào RNA (1%), HP1 được kết tủa miễn dịch với kháng thể chống HP1 9A9 từ chiết xuất 450 μl precleared bằng cách ủ trong 4 giờ với 50 μl Protein-G dynabeads. Immunoprecipitates đã được rửa sạch 4 lần với RCB. Để loại bỏ các RNA được kết tủa miễn dịch, các hạt viên được đun sôi trong 100 μL nước được xử lý UltraPure DEPC trong 5 phút. 900 μL Qiazol Reagent đã được thêm vào siêu nhiên phục hồi để chuẩn bị RNA. RNA tinh khiết được sử dụng như một mẫu để tổng hợp cDNA bằng cách sử dụng oligo dT, hexamers ngẫu nhiên và phiên mã ngược SuperScript III theo giao thức của nhà sản xuất.
(Cassale và cộng sự 2019)

Siêu âm Lysis cho Chromatin Immunoprecipitation Khảo nghiệm

Kết tủa miễn dịch chromatin được thực hiện theo phương pháp được mô tả bởi Menet với những sửa đổi nhỏ. Khoảng 20 mg buồng trứng từ 0 đến 1 ngày tuổi hoang dã con cái đã được đồng nhất trong 1 mL dung dịch đệm NEB (10 mM HEPES-Na ở pH 8,0, 10 mM NaCl, 0,1 mM EGTA-Na ở pH 8, 0,5 mM EDTA-Na ở pH 8, 1 mM DTT, 0,5% NP-40, 0,5 mM Spermidine, 0,15 mM Spermine, 1× EDTA- chất ức chế Protease hoàn chỉnh hoàn toàn miễn phí) với bộ phân tán homogenizer / ngâm 1 phút (tại 3000 vòng / phút). Đồng nhất đã được chuyển sang dounce thủy tinh trước khi ướp lạnh và 15 nét đầy đủ đã được áp dụng với một cái chày chặt chẽ. Hạt nhân tự do sau đó được ly tâm ở 6000xg trong 10 phút ở 4 °C. Các viên chứa hạt nhân được tái sử dụng trong 1 mL NEB và được ly tâm ở 20000 × g trong 20 phút trên gradient sucrose (0,65 mL 1,6 M sucrose trong NEB, 0,35 mL 0,8 M sucrose trong NEB). Viên được tái sử dụng trong 1 mL NEB và formaldehyd đến nồng độ cuối cùng là 1%. Nuclei được liên kết chéo trong 10 phút ở nhiệt độ phòng và dập tắt bằng cách thêm 1/10 vol 1.375 M glycine. Hạt nhân được thu thập bằng cách ly tâm ở 6000 × g trong 5 phút. Hạt nhân được rửa hai lần trong 1 mL NEB và tái sử dụng trong 1 mL dung dịch Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na ở pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,5 mM EGTA, 1 mM EDTA ở pH 8, 1% Triton X-100, 0,5 mM DTT, 0,1% Na Deoxycholate, 0,1% SDS, 0,5% N-lauroylsarcosine và 1× Thuốc ức chế Protease hoàn toàn không chứa EDTA). Nuclei đã được sonicated bằng cách sử dụng một bộ xử lý siêu âm Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) sáu lần cho 20 s trên và 1 phút trên băng. Hạt nhân sonicated được ly tâm ở 13000 × g trong 4 phút ở 4 ° C. Phần lớn chromatin sonicated có chiều dài từ 500 đến 1000 cặp cơ sở (bp). Đối với mỗi lần kết tủa miễn dịch, 15 μg chromatin được ủ trong sự hiện diện của 10 μg kháng thể đơn dòng HP1 9A9 (3 h ở 4 ° C trong bánh xe quay). Sau đó, 50 μl dynabeads protein G đã được thêm vào và ủ bệnh được tiếp tục qua đêm ở 4 ° C. Các chất siêu nhiên đã được loại bỏ và các mẫu được rửa hai lần trong Lysis Buffer (mỗi lần rửa 15 phút ở 4 ° C) và hai lần trong TE Buffer (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl ở pH 8). Chromatin đã được eluted từ hạt trong hai bước; đầu tiên trong 100 μl của Eluition Buffer 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl ở pH 8) ở 65 ° C trong 15 phút, tiếp theo là ly tâm và phục hồi siêu nhiên. Vật liệu hạt được chiết xuất lại trong 100 μl TE + 0,67% SDS. Eluate kết hợp (200 μl) được ủ qua đêm ở 65°C để đảo ngược liên kết chéo và được điều trị bằng RNaseA 50 μg/ml trong 15 phút ở 65°C và 500 μg/ml Proteinase K trong 3 giờ ở 65°C. Các mẫu được chiết xuất phenol-chloroform và ethanol kết tủa. DNA đã được resuspended trong 25 μl nước. Để tối đa hóa các phân tích phân tử với DNA được kết tủa miễn dịch, các gen ứng cử viên được khuếch đại theo cặp thông qua giao thức duplex-PCR được tối ưu hóa bằng cách sử dụng hai bộ mồi khác nhau có nhiệt độ nóng chảy tương tự trong một phản ứng duy nhất.
(Casale et al. 2019)

UP200St TD_CupHorn cho sonication gián tiếp của mẫu

UP200St TD_CupHorn cho sonication gián tiếp của các mẫu như DNA và chromatin cắt

Hiệu suất cao siêu âm tế bào disruptors cho các mẫu sinh học

Hielscher Ultrasonics là đối tác lâu năm của bạn có kinh nghiệm khi nói đến ultrasonicators hiệu suất cao cho sự gián đoạn tế bào, lysis, chiết xuất protein, DNA, RNA, và phân mảnh nhiễm sắc thể cũng như các bước chuẩn bị mẫu tiền phân tích khác. Cung cấp một danh mục đầu tư toàn diện của homogenizers phòng thí nghiệm siêu âm và các đơn vị chuẩn bị mẫu, Hielscher có thiết bị siêu âm lý tưởng cho các ứng dụng sinh học và yêu cầu của bạn.
Probe-loại insonifier UP200St cho lysisUltrasonicator loại đầu dò cổ điển với đầu siêu nhỏ như UP200ST (200W; xem hình bên trái) hoặc một trong các đơn vị chuẩn bị mẫu siêu âm VialTweeter hoặc là UP200ST_TD_CupHorn với VialHolder là các mô hình yêu thích trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích. Đầu dò siêu âm cổ điển là lý tưởng, khi chuẩn bị ít mẫu hơn phải được lysed, chiết xuất hoặc phân mảnh. Các đơn vị chuẩn bị mẫu VialTweeter UP200St_TD_CupHorn cho phép sonication đồng thời lên đến 10 hoặc 5 lọ, tương ứng.
Nếu số mẫu cao (ví dụ: tấm 96 giếng, tấm microtiter, v.v.) phải được xử lý, UIP400MTP (UIP400MTP) là thiết lập sonication lý tưởng. UIP400MTP hoạt động như một cuphorn lớn hơn, được làm đầy với nước và có đủ không gian để giữ tấm vi giếng. Được hỗ trợ bởi một bộ xử lý siêu âm mạnh mẽ 400 watt, UIP400MTP cung cấp một sonication rất thống nhất và mãnh liệt của các tấm đa giếng để phá vỡ các tế bào, mẫu lyse, viên chiết xuất, chiết xuất protein hoặc DNA cắt.

Điều khiển chính xác thông qua phần mềm thông minh

Bộ vi xử lý công nghiệp của Hielscher trong dòng sản phẩm hdT có thể thoải mái và thân thiện với người sử dụng thông qua điều khiển từ xa của trình duyệt.Tất cả các giải pháp hielscher sonication từ 200 watt trở lên được trang bị một màn hình cảm ứng màu sắc kỹ thuật số và một phần mềm thông minh. Thông qua giao thức dữ liệu thông minh tất cả các thông số quá trình siêu âm được tự động lưu dưới dạng tệp CSV trên thẻ SD tích hợp ngay sau khi ultrasonicator được bắt đầu. Điều này làm cho nghiên cứu và giao thức thuận tiện hơn rất nhiều. Sau khi thử nghiệm sonication hoặc chuẩn bị mẫu, bạn chỉ có thể xem xét các thông số sonication của mỗi chạy sonication và so sánh chúng.
Thông qua menu trực quan, nhiều tham số có thể được đặt trước sonication: Ví dụ, để kiểm soát nhiệt độ trong mẫu và để ngăn chặn sự suy thoái nhiệt của nó, giới hạn trên của nhiệt độ mẫu có thể được đặt. Một cảm biến nhiệt độ có thể cắm, đi kèm với đơn vị siêu âm, cung cấp cho phản hồi bộ xử lý siêu âm về nhiệt độ sonication thực tế. Khi đạt đến giới hạn nhiệt độ trên, thiết bị siêu âm tạm dừng cho đến khi đạt đến giới hạn thấp hơn của thiết lập ∆T đạt được và bắt đầu sau đó tự động sonicating một lần nữa.
Nếu sonication với một đầu vào năng lượng cụ thể là cần thiết, bạn có thể cài sẵn năng lượng siêu âm cuối cùng của chạy sonication. Tất nhiên, siêu âm xung và chế độ chu kỳ có thể được thiết lập riêng lẻ, quá.
Để tái sử dụng các thông số sonication thành công nhất của bạn, bạn có thể lưu các chế độ sonication khác nhau (ví dụ như thời gian sonication, cường độ, chế độ chu kỳ vv) như chế độ cài đặt sẵn, để họ có thể dễ dàng và nhanh chóng bắt đầu lại.
Để thuận tiện hơn cho hoạt động, tất cả các đơn vị siêu âm kỹ thuật số có thể được vận hành thông qua điều khiển từ xa của trình duyệt trong bất kỳ trình duyệt phổ biến nào (ví dụ: InternetExplorer, Safari, Chrome, v.v.). Kết nối mạng LAN là một thiết lập plug-n-play đơn giản và không yêu cầu cài đặt phần mềm bổ sung.
Chúng tôi tại Hielscher biết rằng sonication thành công của các mẫu sinh học đòi hỏi độ chính xác và khả năng lặp lại. Vì vậy, chúng tôi thiết kế ultrasonicators của chúng tôi như các thiết bị thông minh với tất cả các tính năng cho phép chuẩn bị mẫu hiệu quả, đáng tin cậy, có thể tái sản xuất và thuận tiện.

Liên hệ với chúng tôi ngay bây giờ và cho chúng tôi biết về các mẫu sinh học của bạn và các bước chuẩn bị cần thiết. Chúng tôi sẽ đề xuất cho bạn thiết bị chuẩn bị mẫu siêu âm phù hợp nhất và hỗ trợ bạn với các thông tin bổ sung như giao thức và khuyến nghị.

Bảng dưới đây cung cấp cho bạn một dấu hiệu về khả năng xử lý gần đúng của hệ thống siêu âm của chúng tôi từ siêu âm micro-tips và cổ điển siêu âm homogenizers để MultiSample ultrasonicators cho việc chuẩn bị thuận tiện, đáng tin cậy của nhiều mẫu:

batch Khối lượng Tốc độ dòng Thiết bị khuyến nghị
Tấm 96 giếng / microtiter N.A. UIP400MTP (UIP400MTP)
10 lọ à 0,5 đến 1,5mL N.A. VialTweeter tại UP200St
CupHorn cho sonication gián tiếp, ví dụ như lên đến 5 lọ N.A. UP200ST_TD_CupHorn
00,01 đến 250mL 5 đến 100mL/phút UP50H
00,01 đến 500mL 10 đến 200mL / phút UP100H
00,02 đến 1L 20 đến 400mL / phút UP200Ht / UP200ST
10 đến 2000mL 20 đến 400mL / phút UP200Ht, UP400St
0.25 đến 5L 00,05 đến 1L/phút UIP500hdT

Liên hệ chúng tôi! / Hỏi chúng tôi!

Yêu cầu thêm thông tin

Vui lòng sử dụng mẫu dưới đây để yêu cầu thêm thông tin về bộ vi xử lý siêu âm, ứng dụng và giá cả. Chúng tôi sẽ vui mừng để thảo luận về quá trình của bạn với bạn và để cung cấp cho bạn một hệ thống siêu âm đáp ứng yêu cầu của bạn!










The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Đơn vị chuẩn bị đa mẫu siêu âm VialTweeter cho phép sonication đồng thời lên đến 10 lọ. Với thiết bị kẹp vialPress, lên đến 4 ống bổ sung có thể được ép lên phía trước cho sonication dữ dội.

Văn học/tài liệu tham khảo



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonics hiệu suất cao! Phạm vi sản phẩm của Hielscher bao gồm toàn bộ quang phổ từ ultrasonicator phòng thí nghiệm nhỏ gọn trên các đơn vị băng ghế dự bị hàng đầu đến các hệ thống siêu âm công nghiệp đầy đủ.


Sự kiện đáng biết

Chuyển hóa

Chất chuyển hóa là nghiên cứu về các phân tử nhỏ, được gọi là chất chuyển hóa, có mặt trong tế bào, sinh vật, mô hoặc sinh vật. Những phân tử nhỏ này và tương tác của chúng trong một hệ thống sinh học được tóm tắt dưới thuật ngữ ô "chất chuyển hóa" và lĩnh vực nghiên cứu được gọi là chất chuyển hóa. Nghiên cứu chuyển hóa được kết nối chặt chẽ với lĩnh vực y học chính xác đang nổi lên nhanh chóng. Sự hiểu biết về chất chuyển hóa và mối quan hệ của nó với các bệnh khác nhau giúp phát triển các chiến lược phòng ngừa bệnh và chăm sóc lâm sàng trong khi sự thay đổi cá nhân trong môi trường, lối sống, di truyền học và kiểu hình phân tử. Để giải phóng các phân tử chuyển hóa từ các tế bào, ultrasonication thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm sinh học để chuẩn bị mẫu trước khi phân tích như gián đoạn tế bào, lysis và khai thác protein, lipid và các phân tử khác.