Công nghệ siêu âm Hielscher

Siêu âm Lysis của Drosophila melanogaster mẫu

Drosophila melanogaster is widely used in laboratories as model organism. Therefore, pre-analytical preparation steps such as lysis, cell disruption, protein extraction and DNA shearing of Drosophila melanogaster samples must be frequently carried out. Ultrasonic dismembrators are reliable and efficient and can used to perform various tasks such as lysis, protein extraction or DNA fragmentation at ease by only adjusting ultrasonic process parameters. Ultrasonic homogenizers are thereby flexible tools with a broad range of applications.

Siêu âm Lysis và chiết xuất protein

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lysis, hòa giải tế bào, đồng nhất mô và chiết xuất protein là nhiệm vụ điển hình cho dismembrators siêu âm trong phòng thí nghiệm sinh học. Siêu âm dismembrators và phá vỡ tế bào là rất thích hợp để đồng nhất các mô động vật, côn trùng (ví dụ, Drosophila melanogaster, C. elegans) hoặc mẫu thực vật. Các ứng dụng tiếp theo của ultrasonication là lysis của đình chỉ tế bào và viên cũng như khai thác các protein nội bào.
Siêu âm lysis và chiết xuất protein là quá trình có độ tin cậy cao và tái sản xuất, có thể thực hiện trên cơ sở các giao thức được thành lập. Kể từ khi cường độ quá trình siêu âm có thể được điều chỉnh chính xác thông qua các thông số sonication như biên độ, chế độ chu kỳ / xung, nhiệt độ và khối lượng mẫu, một khi đã được chứng minh giao thức có thể được lặp đi lặp lại với kết quả tương tự hơn và hơn.

Ưu điểm của chuẩn bị mẫu siêu âm

  • hiệu quả cao
  • Có thể điều chỉnh theo vật liệu mẫu cụ thể
  • Thích hợp cho bất kỳ âm lượng nào
  • Điều trị không nhiệt
  • Kết quả tái sanh
  • Đơn giản và an toàn

Siêu âm DNA và phân mảnh RNA

After cell lysis and protein extraction, a common required step in sample preparation is the shearing and fragmentation of DNA, RNA, and chromatin, e.g. before chromatin immunoprecipitation (ChIP). DNA and RNA fragmentation can be reliably achieved by breaking the covalent bonds that hold the DNA together by physical forces. Using physical shearing such as sonication, at first the DNA strands are broken, then the DNA is fragmented into smaller pieces.
Phân mảnh DNA siêu âm là đáng tin cậy và hiệu quả trong việc cắt DNA đến một chiều dài nhắm mục tiêu, ví dụ như 500bp (cặp cơ sở). Những lợi thế chính của phân mảnh DNA siêu âm bao gồm sự kiểm soát chính xác của các thông số quá trình siêu âm và cường độ. Các thông số quá trình siêu âm có thể được điều chỉnh bằng cách điều chỉnh cường độ sonication, chu kỳ và thời gian chính xác. Điều này làm cho nó có thể tạo ra kích thước DNA mong muốn và chiều dài DNA mục tiêu có thể được sản xuất đáng tin cậy cũng như sao chép. Siêu âm DNA cắt cũng là lý tưởng để tạo ra các mảnh DNA trọng lượng phân tử cao.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

Máy siêu âm UP200Ht with 2mm microtip S26d2 for the sonication of Drosophila samples

Yêu cầu thông tin




Lưu ý của chúng tôi Chính sách bảo mật.


Các giao thức cho siêu âm Lysis của Drosophila melanogaster

Dưới đây bạn có thể tìm thấy các giao thức khác nhau cho các ultrasonically hỗ trợ lysis, chiết xuất protein, và DNA hoặc chromatin phân mảnh của các mẫu Drosophila.

Siêu âm Lysis cho Cross-linking Immunoprecipitation (CLIP) Khảo nghiệm

CLIP assay was performed as previously reported with some modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were UV crosslinked (3 × 2000 μJ/cm2), homogenized on ice in 1 mL RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors, 1 mM PMSF) supplemented with 300 U RNAseOUT and placed on ice for 30 min. The homogenate was sonicated on ice, at 80% power, five times in 20 s bursts with a 60 s rest in between using the Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) và ly tâm (16000 × g trong 5 phút ở 4 °C). Chiết xuất hòa tan được precleared với 20 μl Protein-G dynabeads cho 20 phút ở 4 ° C. Sau khi loại bỏ các mẫu để tiêm chủng và định lượng đầu vào RNA (1%), HP1 được kết tủa miễn dịch với kháng thể chống HP1 9A9 từ chiết xuất 450 μl precleared bằng cách ủ trong 4 giờ với 50 μl Protein-G dynabeads. Immunoprecipitates đã được rửa sạch 4 lần với RCB. Để loại bỏ các RNA được kết tủa miễn dịch, các hạt viên được đun sôi trong 100 μL nước được xử lý UltraPure DEPC trong 5 phút. 900 μL Qiazol Reagent đã được thêm vào siêu nhiên phục hồi để chuẩn bị RNA. RNA tinh khiết được sử dụng như một mẫu để tổng hợp cDNA bằng cách sử dụng oligo dT, hexamers ngẫu nhiên và phiên mã ngược SuperScript III theo giao thức của nhà sản xuất.
(Cassale và cộng sự 2019)

Siêu âm Lysis cho Chromatin Immunoprecipitation Khảo nghiệm

Chromatin immunoprecipitation was performed according to the method described by Menet with minor modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were homogenized in 1 mL of NEB buffer (10 mM HEPES-Na at pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na at pH 8, 0.5 mM EDTA-Na at pH 8, 1 mM DTT, 0.5% NP-40, 0.5 mM Spermidine, 0.15 mM Spermine, 1× EDTA- free Complete Protease Inhibitors) with a homogenizer / immersion disperser 1 min (at 3000 rpm). The homogenate was transferred to a pre-chilled glass dounce and 15 full strokes were applied with a tight pestle. Free nuclei were then centrifuged at 6000xg for 10 min at 4°C. The nuclei-containing pellets were resuspended in 1 mL of NEB and centrifuged at 20000 × g for 20 min on sucrose gradient (0.65 mL of 1.6 M sucrose in NEB, 0.35 mL of 0.8 M sucrose in NEB). The pellet was resuspended in 1 mL of NEB and formaldehyde to a final concentration of 1%. Nuclei were cross-linked for 10 min at room temperature and quenched by adding 1/10 vol of 1.375 M glycine. The nuclei were collected by centrifugation at 6000 × g for 5 min. Nuclei were washed twice in 1 mL of NEB and resuspended in 1 mL of Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na at pH 7.6, 140 mM NaCl, 0.5 mM EGTA, 1 mM EDTA at pH 8, 1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 0.1% Na Deoxycholate, 0.1% SDS, 0.5% N-lauroylsarcosine and 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors). Nuclei were sonicated using a Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) sáu lần cho 20 s trên và 1 phút trên băng. Hạt nhân sonicated được ly tâm ở 13000 × g trong 4 phút ở 4 ° C. Phần lớn chromatin sonicated có chiều dài từ 500 đến 1000 cặp cơ sở (bp). Đối với mỗi lần kết tủa miễn dịch, 15 μg chromatin được ủ trong sự hiện diện của 10 μg kháng thể đơn dòng HP1 9A9 (3 h ở 4 ° C trong bánh xe quay). Sau đó, 50 μl dynabeads protein G đã được thêm vào và ủ bệnh được tiếp tục qua đêm ở 4 ° C. Các chất siêu nhiên đã được loại bỏ và các mẫu được rửa hai lần trong Lysis Buffer (mỗi lần rửa 15 phút ở 4 ° C) và hai lần trong TE Buffer (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl ở pH 8). Chromatin đã được eluted từ hạt trong hai bước; đầu tiên trong 100 μl của Eluition Buffer 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl ở pH 8) ở 65 ° C trong 15 phút, tiếp theo là ly tâm và phục hồi siêu nhiên. Vật liệu hạt được chiết xuất lại trong 100 μl TE + 0,67% SDS. Eluate kết hợp (200 μl) được ủ qua đêm ở 65°C để đảo ngược liên kết chéo và được điều trị bằng RNaseA 50 μg/ml trong 15 phút ở 65°C và 500 μg/ml Proteinase K trong 3 giờ ở 65°C. Các mẫu được chiết xuất phenol-chloroform và ethanol kết tủa. DNA đã được resuspended trong 25 μl nước. Để tối đa hóa các phân tích phân tử với DNA được kết tủa miễn dịch, các gen ứng cử viên được khuếch đại theo cặp thông qua giao thức duplex-PCR được tối ưu hóa bằng cách sử dụng hai bộ mồi khác nhau có nhiệt độ nóng chảy tương tự trong một phản ứng duy nhất.
(Casale et al. 2019)

UP200St TD_CupHorn cho sonication gián tiếp của mẫu

UP200St TD_CupHorn cho sonication gián tiếp của các mẫu như DNA và chromatin cắt

Hiệu suất cao siêu âm tế bào disruptors cho các mẫu sinh học

Hielscher Ultrasonics là đối tác lâu năm của bạn có kinh nghiệm khi nói đến ultrasonicators hiệu suất cao cho sự gián đoạn tế bào, lysis, chiết xuất protein, DNA, RNA, và phân mảnh nhiễm sắc thể cũng như các bước chuẩn bị mẫu tiền phân tích khác. Cung cấp một danh mục đầu tư toàn diện của homogenizers phòng thí nghiệm siêu âm và các đơn vị chuẩn bị mẫu, Hielscher có thiết bị siêu âm lý tưởng cho các ứng dụng sinh học và yêu cầu của bạn.
Probe-loại insonifier UP200St cho lysisUltrasonicator loại đầu dò cổ điển với đầu siêu nhỏ như UP200ST (200W; xem hình bên trái) hoặc một trong các đơn vị chuẩn bị mẫu siêu âm VialTweeter hoặc là UP200ST_TD_CupHorn với VialHolder là các mô hình yêu thích trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu và phân tích. Đầu dò siêu âm cổ điển là lý tưởng, khi chuẩn bị ít mẫu hơn phải được lysed, chiết xuất hoặc phân mảnh. Các đơn vị chuẩn bị mẫu VialTweeter UP200St_TD_CupHorn cho phép sonication đồng thời lên đến 10 hoặc 5 lọ, tương ứng.
Nếu số mẫu cao (ví dụ: tấm 96 giếng, tấm microtiter, v.v.) phải được xử lý, UIP400MTP (UIP400MTP) là thiết lập sonication lý tưởng. UIP400MTP hoạt động như một cuphorn lớn hơn, được làm đầy với nước và có đủ không gian để giữ tấm vi giếng. Được hỗ trợ bởi một bộ xử lý siêu âm mạnh mẽ 400 watt, UIP400MTP cung cấp một sonication rất thống nhất và mãnh liệt của các tấm đa giếng để phá vỡ các tế bào, mẫu lyse, viên chiết xuất, chiết xuất protein hoặc DNA cắt.

Điều khiển chính xác thông qua phần mềm thông minh

Bộ vi xử lý công nghiệp của Hielscher trong dòng sản phẩm hdT có thể thoải mái và thân thiện với người sử dụng thông qua điều khiển từ xa của trình duyệt.Tất cả các giải pháp hielscher sonication từ 200 watt trở lên được trang bị một màn hình cảm ứng màu sắc kỹ thuật số và một phần mềm thông minh. Thông qua giao thức dữ liệu thông minh tất cả các thông số quá trình siêu âm được tự động lưu dưới dạng tệp CSV trên thẻ SD tích hợp ngay sau khi ultrasonicator được bắt đầu. Điều này làm cho nghiên cứu và giao thức thuận tiện hơn rất nhiều. Sau khi thử nghiệm sonication hoặc chuẩn bị mẫu, bạn chỉ có thể xem xét các thông số sonication của mỗi chạy sonication và so sánh chúng.
Via the intuitive menu, numerous parameter can be preset before sonication: For instance, to control the temperature in the sample and to prevent its thermal degradation, an upper limit of sample temperature can be set. A pluggable temperature sensor, which comes with the ultrasonic unit, gives the ultrasonic processor feedback on the actual sonication temperature. When the upper temperature limit is reached, the ultrasonic device pauses until the lower limit of the set ∆T is reached and starts then automatically sonicating again.
Nếu sonication với một đầu vào năng lượng cụ thể là cần thiết, bạn có thể cài sẵn năng lượng siêu âm cuối cùng của chạy sonication. Tất nhiên, siêu âm xung và chế độ chu kỳ có thể được thiết lập riêng lẻ, quá.
Để tái sử dụng các thông số sonication thành công nhất của bạn, bạn có thể lưu các chế độ sonication khác nhau (ví dụ như thời gian sonication, cường độ, chế độ chu kỳ vv) như chế độ cài đặt sẵn, để họ có thể dễ dàng và nhanh chóng bắt đầu lại.
Để thuận tiện hơn cho hoạt động, tất cả các đơn vị siêu âm kỹ thuật số có thể được vận hành thông qua điều khiển từ xa của trình duyệt trong bất kỳ trình duyệt phổ biến nào (ví dụ: InternetExplorer, Safari, Chrome, v.v.). Kết nối mạng LAN là một thiết lập plug-n-play đơn giản và không yêu cầu cài đặt phần mềm bổ sung.
Chúng tôi tại Hielscher biết rằng sonication thành công của các mẫu sinh học đòi hỏi độ chính xác và khả năng lặp lại. Vì vậy, chúng tôi thiết kế ultrasonicators của chúng tôi như các thiết bị thông minh với tất cả các tính năng cho phép chuẩn bị mẫu hiệu quả, đáng tin cậy, có thể tái sản xuất và thuận tiện.

Liên hệ với chúng tôi ngay bây giờ và cho chúng tôi biết về các mẫu sinh học của bạn và các bước chuẩn bị cần thiết. Chúng tôi sẽ đề xuất cho bạn thiết bị chuẩn bị mẫu siêu âm phù hợp nhất và hỗ trợ bạn với các thông tin bổ sung như giao thức và khuyến nghị.

The table below gives you an indication of the approximate processing capacity of our ultrasonic systems from ultrasonic micro-tips and classic ultrasonic homogenizers to MultiSample ultrasonicators for the convenient, reliable preparation of numerous samples:

batch Khối lượng Tốc độ dòng Thiết bị khuyến nghị
Tấm 96 giếng / microtiter N.A. UIP400MTP (UIP400MTP)
10 lọ à 0,5 đến 1,5mL N.A. VialTweeter tại UP200St
CupHorn cho sonication gián tiếp, ví dụ như lên đến 5 lọ N.A. UP200ST_TD_CupHorn
00,01 đến 250mL 5 đến 100mL/phút UP50H
00,01 đến 500mL 10 đến 200mL / phút UP100H
00,02 đến 1L 20 đến 400mL / phút UP200Ht / UP200ST
10 đến 2000mL 20 đến 400mL / phút UP200Ht, UP400St
0.25 đến 5L 00,05 đến 1L/phút UIP500hdT

Liên hệ chúng tôi! / Hỏi chúng tôi!

Yêu cầu thêm thông tin

Vui lòng sử dụng mẫu dưới đây để yêu cầu thêm thông tin về bộ vi xử lý siêu âm, ứng dụng và giá cả. Chúng tôi sẽ vui mừng để thảo luận về quá trình của bạn với bạn và để cung cấp cho bạn một hệ thống siêu âm đáp ứng yêu cầu của bạn!










The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Đơn vị chuẩn bị đa mẫu siêu âm VialTweeter cho phép sonication đồng thời lên đến 10 lọ. Với thiết bị kẹp vialPress, lên đến 4 ống bổ sung có thể được ép lên phía trước cho sonication dữ dội.

Văn học/tài liệu tham khảo



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonics hiệu suất cao! Phạm vi sản phẩm của Hielscher bao gồm toàn bộ quang phổ từ ultrasonicator phòng thí nghiệm nhỏ gọn trên các đơn vị băng ghế dự bị hàng đầu đến các hệ thống siêu âm công nghiệp đầy đủ.


Sự kiện đáng biết

Chuyển hóa

Metabolomics is the study of small molecules, known as metabolites, present within cells, biofluids, tissues or organisms. These small molecules and their interactions within a biological system are summarized under the umbrella term “metabolome” and the research field is called metabolomics. The metabolome research is closely connected with the rapidly emerging field of precision medicine. The understanding of the metabolome and its relation to various diseases helps to develop disease prevention and clinical care strategies whilst individual variability in environment, lifestyle, genetics, and molecular phenotype. In order to release metabolite molecules from cells, ultrasonication is frequently used in biological laboratories for pre-analytical sample preparation such as cell disruption, lysis and the extraction of proteins, lipids and other molecules.