Trombositten Zengin Serumun Ultrasonik Hazırlanması
- Trombositten zengin plazma (PRP), trombositlerle zenginleştirilmiş ve tıbbi ve estetik tedavilerde kullanılan kan plazmasıdır.
- Ultrasonik lizis ve koşullandırma, trombositten zengin plazma hazırlamak için çok etkili bir yöntemdir.
- Hielscher Ultrasonics, kan işleme gereksinimlerini karşılayan çeşitli ultrasonik sistemler sunar (ör. temiz oda içinde ve dışında hazırlama için).
Trombositten Zengin Serum
Sonikasyon, büyüme faktörlerini serbest bırakmak amacıyla otolog kan serumundaki trombositleri lizise uğratmak için güvenilir ve kolay bir yöntemdir. Trombosit kaynaklı fraksiyonlar – otolog koşullandırılmış serum (ACS) olarak da bilinir – doku onarımı veya estetik tedaviler için kullanılır. Optimum sonuçlar elde etmek için PRP, enjeksiyondan önce zenginleştirilir.
Hücre büyüme faktörleriyle zenginleştirilmiş plazma hazırlamak için sonikasyon, hücre zarlarını lizise uğratmak ve trombositlerdeki hücre büyüme faktörlerinin neredeyse tamamını serbest bırakmak açısından çok etkili ve verimli bir yöntemdir. Ultrasonik lizis ve koşullandırma sayesinde antikoagülan uygulanmış kan bile kullanılabilir.
PRP’nin sonikasyon yoluyla koşullandırılması, konsantre büyüme faktörleri elde etmek için pratik ve uygun maliyetli bir yoldur.
Trombositten zengin plazmanın (PRP) ultrasonik lizisi
Ultrasonik Lizisin Etkileri
Kan serumunun ultrasonik işlenmesi, içeride tutulan büyüme faktörlerini (büyüme faktörü AB (PDGF-AB), büyüme faktörü AA (PDGF-AA), büyüme faktörü BB (PDGF-BB), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), dönüştürücü büyüme faktörü β (TGF-β), epidermal büyüme faktörü (EGF), insülin benzeri büyüme faktörü (IGF), epitel hücresi büyüme faktörü ECGF ve fibroblastik büyüme faktörü (FGF)) serbest bırakmak amacıyla trombositlerin homojen lizisini sağlar. Trombositler ve alfa granülleri, sonikasyon sırasında akustik kavitasyon olgusundan yararlanılarak parçalanır. Trombosit lizisi için ultrasonik kavitasyon kullanılması, tekrarlanan dondurma–çözme yönteminin büyüme faktörü aktivitesi üzerindeki olası olumsuz etkisini azaltır.
Ultrasonik PRP Hazırlama Protokolü
Yeni alınmış otolog kan numunesinin yaklaşık 16mL’si, kan ve antikoagülanların iyice karışması için bir tüpte 8–10 kez nazikçe altüst edilir. Ardından numune, oda sıcaklığında 1800 g’de 20 dakika santrifüjlenir. Santrifüjlemeden sonra trombositler ve mononükleer hücreler, plazma tabakasının alt kısmında trombositten zengin plazma (PRP) olarak bilinen beyazımsı bir tabaka oluşturur. Üst tabaka, trombositten fakir plazma (PPP) olarak bilinir. Mononükleer hücreler uzaklaştırılabilir veya numunede bırakılabilir. Kontaminasyon riski taşıyan ek adımlardan kaçınmak için mononükleer hücreler genellikle PRP numunesinde bırakılır.
Not: Otolog PRP’nin ultrasonik işlenmesi steril koşullar altında gerçekleştirilmelidir.
PRP ve PPP ayrılır ve toplanır. PPP’ye 1,5mL %10 kalsiyum klorür çözeltisi, PRP’ye ise 0,5mL %5 etanol eklenir. Her iki süspansiyon nazikçe çalkalanır ve oda sıcaklığında 5 dakika bekletilir. Son olarak PRP süspansiyonuna 1mL PPP eklenir ve fibrin pıhtısı oluşana kadar bekletilir.
Ultrasonik işlem: Oluşan trombosit jeli, serbest bırakılan büyüme faktörleri için bir rezervuar görevi gördüğünden, mevcut büyüme faktörlerini serbest bırakmak için fibrin jelinin parçalanması gerekir. Ultrasonik lizis ve büyüme faktörlerinin serbest bırakılması için parametreler şöyledir: Tüpteki numuneyi sonike etmek için UP200Ht veya UP200St (200W, 26kHz) sonikatörünü S26d2 sonotroduyla kullanın. Kan numunesinin aşırı ısınmasını önlemek için sonikasyon darbeli döngülerle gerçekleştirilebilir (ör. 10 saniye açık, 30 saniye kapalı). Sıcaklığın optimum olarak 2 – 5°C arasında tutulması için numune, soğutma amacıyla buz üzerine yerleştirilmelidir. Sonikasyondan sonra numune, oda sıcaklığında 16.000 g’de 5 dakika santrifüjlenir. Süpernatant toplanır ve -70°C’de saklanabilir.
Sonikasyon uygulanan yöntemde PRP fraksiyonundaki trombosit konsantrasyonu, literatürdeki tam kanın ortalama trombosit sayısıyla karşılaştırıldığında 1,7 – 4,5 kat zenginleştirilmiştir.
PRP, yağ dokusu kaynaklı kök hücre tedavisiyle birleştirilmiştir (yağ dokusundan ultrasonik olarak serbest bırakılan otolog kök hücreler, PRP ile karıştırılır ve onarım amacıyla hastanın dokusuna yeniden enjekte edilir).
Ultrasonik Ekipman
Hielscher Ultrasonics, gelişmiş ve güvenilir ultrasonik teknoloji alanında uzmandır. Ultrasonik cihazlarımız, dünya çapında doğrudan ve dolaylı lizis, ekstraksiyon ve numune hazırlama için kullanılır. Otoklavlanabilir ve tek kullanımlık aksesuarlar, otolog kan numunelerinin kontaminasyonsuz işlenmesini sağlar. Sistemlerimizin çoğu, kök hücrelerin ve PRP’nin ultrasonik lizisi için kullanılabilir; bu da ultrasonik cihazlarımızı ekonomik açıdan daha da verimli kılar.
Aşağıdaki tablo, trombositten zengin plazma hazırlamak için uygun ultrasonik cihazlarımızı ve her biri için önerilen numune hacmini listeler. Daha büyük ultrasonikatörler ve özelleştirilmiş sistemler de mevcuttur.
| Cihaz | Güç [W] | Frek. [kHz] | Tip | Hacim [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | bağımsız | 0,5 | – | 1,5 |
| UP50H | 50 | 30 | elde kullanılan veya standa monte | 0,01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | elde kullanılan veya standa monte | 0,01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | elde kullanılan veya standa monte | 0,1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | standa monte | 0,1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | standa monte | 5,0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | bağımsız | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | kontaminasyonsuz akış hücresi | |||
Bugün bizimle iletişime geçin! Optimum ultrasonik cihazı bulmanıza yardımcı olmaktan memnuniyet duyarız!
Bizimle İletişime Geçin! / Bize Sorun!
UP200St-TD transdüserine (200 watt) bağlı GDmini2
Literatür/Kaynaklar
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Trombosit lizatı jeli ve endotelyal progenitörler, in vitro mikrovasküler ağ oluşumunu uyarır: doku mühendisliği açısından çıkarımlar. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Akut Kas Yaralanmasında Trombositten Zengin Plazma (PRP): Sistematik Bir Derleme. PLOS ONE Cilt 9, Sayı 2, 2014.
Bilinmesi Gerekenler
Trombositten Zengin Plazma
Trombositten zengin plazma; hücre büyümesi ve yenilenmesi için önemli uyarıcılar olan büyüme faktörü AB (PDGF-AB), trombosit kaynaklı büyüme faktörü AA (PDGF-AA), trombosit kaynaklı büyüme faktörü BB (PDGF-BB), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), dönüştürücü büyüme faktörü β (TGF-β), epidermal büyüme faktörü (EGF), insülin benzeri büyüme faktörü (IGF), epitel hücresi büyüme faktörü ECGF ve fibroblastik büyüme faktörü (FGF) içerir.
Otolog Koşullandırılmış Serum (ACS)
Otolog Koşullandırılmış Plazma (ACP), otolog kandan elde edilen ve çeşitli ortopedik rahatsızlıklarda ve cerrahi işlemlerde rejenerasyonu desteklemek için kullanılan trombositten zengin bir plazmadır. Koşullandırılmış serum, plazmanın diğer kan bileşenlerinden (eritrositler gibi) ayrılması ve konsantre edilmesiyle hazırlanır. ACP, trombositten zengin bir plazmadır (PRP). PRP, tam kanla karşılaştırıldığında belirgin ölçüde daha yüksek trombosit konsantrasyonu içeren bir plazma türü için kullanılan genel bir terimdir. Tam kandan elde edilir. ACP’nin ana bileşenleri arasında trombositler (kan pulcukları) ve iyileşme süreçlerinde kilit rol oynayan çeşitli büyüme faktörleri bulunur. Diğer trombositten zengin plazma formülasyonlarından farklı olarak ACP, yüksek konsantrasyonlarda bulunduklarında iyileşme sürecine zarar verebilen nötrofil granülositler gibi beyaz kan hücrelerinin düşük konsantrasyonuyla ayırt edilir.
Trombositten Zengin Plazma Enjeksiyonları
Trombositten zengin plazma, rejeneratif tıpta ve kozmetik işlemlerde enjeksiyon olarak kullanılır. PRP uygulaması, kas iyileşmesini ve kasların toparlanmasını önemli ölçüde hızlandırmayı vadeder. Ayrıca enflamasyon, artrit, ağrı, yaralar, yavaş iyileşen açık yaralar ve ciddi cilt yanıklarının tedavisinde başarıyla kullanılır. PRP, iyileşmeyi sağlayan hücreleri uyarıp koruyarak hasarlı dokunun onarılmasını sağlayan yüksek düzeyde büyüme faktörü içerir.
Kozmetik tedavilerde PRP’nin, saç büyümesini ve cilt yenilenmesini (vampir tedavisi olarak da bilinir) uyarmada etkili olduğu gösterilmiştir.
Trombosit Kaynaklı Büyüme Faktörleri (PDGF)
Trombosit kaynaklı büyüme faktörü (PDGF) terimi, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ve PDGF-D faktörlerini ifade eder. Dört ligand (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C ve PDGF-D) ve iki reseptörden, PDGFR-alpha ve PDGFR-beta, oluşan bir sinyal ağıdır.
Büyüme faktörleri, yani proteinler, hücre büyümesini ve bölünmesini düzenler. Memeli serumunda bulunan ve pıhtı oluşumu sırasında trombositlerden salınan başlıca mitojen olarak, kan damarı oluşumunda (anjiyogenez), yani mevcut kan damarı dokusundan kan damarlarının büyümesinde önemli bir rol oynar.