Staphylococcus Biyofilm Yetiştirme ve Ayırma Protokolü
Güvenilir araştırma sonuçları için standartlaştırılmış yöntemler gereklidir. Burada stafilokok biyofilmleri için bir yetiştirme ve ayırma protokolü bulabilirsiniz. Bu protokol, 96 oyuklu plakalarda verimli, yüksek verimli biyofilm ayrılması için çok kuyulu UIP400MTP plaka sonikatörü kullanarak kolaylaştırılmış yüksek verimli numune hazırlamaya odaklanır. Protokol ayrıca, değişkenliği en aza indirmeye ve tekrarlanabilirliği sağlamaya odaklanarak biyofilm yetiştirme, yıkama ve görselleştirme için temel adımları içerir.
Staphylococcus Biyofilm ve Antibiyotik Araştırmaları
Stafilokok biyofilmleri, antibiyotiklere dirençleri ve immün yanıtları nedeniyle kalıcı enfeksiyonlarda kritik bir rol oynamaktadır. Biyofilm oluşumu bakteriler için koruyucu bir ortam sağlayarak enfeksiyonların tedavi edilmesini zorlaştırır. Biyofilmler üzerine yapılan araştırmalar genellikle deneysel iş akışlarını düzene sokmak için yüksek verimli yöntemlere vurgu yaparak, oluşumlarını, davranışlarını ve antimikrobiyallere karşı duyarlılıklarını anlamaya odaklanır.
UIP400MTP çok kuyulu plaka sonikatörü, biyofilmlerin 96 oyuklu plakalardan hızlı ve verimli bir şekilde ayrılmasını sağlayarak biyofilm araştırmalarında önemli bir avantaj sunar. Bu cihaz, değişkenliği en aza indirirken tutarlı sonuçlar sağlayarak tüm kuyulara tek tip ultrasonik enerji sağlar.
Staphylococcus Biyofilm Yetiştirme ve Ayırma Protokolü
Aşağıda, bir staphylococcus biyofilminin yetiştirilmesi ve ayrılması sürecinde adım adım bir talimatla size rehberlik ediyoruz. Örnek bir analitik adım olarak, ekili biyokütlenin kristal viyole boyama ile spektrofotometrik olarak nasıl ölçüleceğini gösteriyoruz.
Staphylococcus Biyofilm Yetiştiriciliği
Gerekli Malzemeler:
- Steril düz tabanlı 96 oyuklu polistiren doku kültürü ile muamele edilmiş kapaklı mikrotitre plakaları
- % 0.25 glikoz içeren Triptik Soya Suyu (TSB)
- Biyolojik güvenlik kabini
Adım -ları:
- Kontaminasyonu en aza indirmek için biyolojik güvenlik kabininde steril bir çalışma ortamı hazırlayın.
- Mikrotitre plaka kuyucuklarına% 0.25 glikoz içeren TSB ekleyin. Glikoz içermeyen TSB genellikle biyofilm oluşumunu desteklemez ve sadece gerekirse kontrol olarak kullanılmalıdır.
- Kuyucukları aşağıda tarif edildiği gibi hazırlanan bakteri suşları ile aşılayın:
- Bakteriyel süspansiyonları hazırlayın, sonikasyon kullanarak süspansiyonları homojenize ederek veya kümeleri 23 gauge iğne ve kısa girdap ile parçalayarak önceden var olan hücre kümelerinin olmamasını sağlayın.
- Plakayı kapağıyla kapatın ve biyofilm oluşumu için en uygun koşullar altında (örneğin, 24 saat boyunca 37 ° C) inkübe edin.
- Güvenilirliği sağlamak için deneyi her bakteri suşu için üç nükte halinde (suş başına üç kuyucuk) gerçekleştirin.
- Negatif kontroller için plaka başına altı kuyu ayırın. 96 oyuklu plaka başına 30'a kadar suş test edilebilir.
Biyofilm Görüntüleme ve Yıkama
- İnkübasyondan sonra, biyofilmi rahatsız etmemek için ortamı dikkatlice atın.
- Planktonik bakterileri uzaklaştırmak için her kuyuyu dört kez fizyolojik tuzlu su ile yıkayın.
- Kuyucukların dibinde biyofilm varlığını gösteren beyaz lekeler olup olmadığını kontrol edin.
Çok kuyulu plaka sonikatörünü kullanarak biyofilm ayırma UIP400MTP
Cihaz Kurulumu ve Parametreleri:
- UIP400MTP çok kuyulu plaka sonikatörü
- Çalışma ayarları: ` genlik, 60 saniye AÇIK / 30 saniye KAPALI ile döngü modu
Adım -ları:
- Yıkanmış mikrotitre plakasını UIP400MTP platformuna yerleştirin.
- Örnekleri önerilen ayarlarda sonikasyon yapın (% 60 genlik, 60 saniye AÇIK, 30 saniye KAPALI). Ayarları bakteri suşuna göre ayarlayın.
- Biyofilmi ayırmak için sonikasyon işlemini başlatın. Ultrasonik dalgalar biyofilm matrisini bozarak yapışan bakterileri serbest bırakır.
- UIP400MTP, tutarlı ayırma sonuçları için tüm kuyucuklarda eşit maruz kalma sağlar.
Staphylococcus bakterileri
Analitik Adım: Müstakil Staphylococcus Biyofilm Biyokütlesinin Kristal Viyole (CV) Kullanılarak Miktar Tayini
Gerekli Malzemeler:
- 0% .1 kristal viyole (CV) çözeltisi
- � etanol veya 0 asetik asit (çözündürme için)
- 570 nm'de okuma yapabilen mikroplaka okuyucu
- Boyama için steril mikrotitre plakaları
Adım -ları:
- Boyama Plakasının Hazırlanması: Sonikasyonlu plakanın her bir oyuğundan 100 μL ayrılmış biyofilm süspansiyonunu temiz, steril 96 oyuklu bir mikrotitre plakasının karşılık gelen kuyucuklarına aktarın. Bu, boyama için net ve homojen bir ortam sağlar.
- Ayrılmış Biyofilmin Boyanması: Ayrılmış biyofilm süspansiyonunu içeren her oyuğa 150 μL% 0.1 kristal viyole çözeltisi ekleyin. Biyofilm süspansiyonu ve kristal viyolenin eşit şekilde karışmasını sağlamak için hafifçe pipetleyin.
- Kuluçka: Kristal menekşenin biyokütleyi etkili bir şekilde lekelemesini sağlamak için plakanın oda sıcaklığında 15 dakika inkübe etmesine izin verin.
- Yıkama: İnkübasyondan sonra, biyokütleyi bozmadan kristal viyole çözeltisini kuyulardan dikkatlice atın. Bağlanmamış lekeyi çıkarmak için her kuyuyu üç kez steril fizyolojik tuzlu su ile yıkayın.
- Kurutma: Plakayı oda sıcaklığında veya steril bir hava akımı başlığı altında kurumaya bırakın. Sonuçları değiştirebileceğinden ısıtmaktan kaçının.
- Çözündürme: Bağlı kristal menekşeyi çözündürmek için her oyuğa 200 μL � etanol (veya standart laboratuvar uygulamalarına bağlı olarak 0 asetik asit) ekleyin. Plakayı oda sıcaklığında 10 dakika boyunca pipetleyerek veya sallayarak nazikçe karıştırın.
- Ölçüm: Bir mikroplaka okuyucu kullanarak 570 nm'de çözündürülmüş kristal viyole çözeltisinin optik yoğunluğunu (OD) ölçün.
- Veri Analizi: Arka plan boyamayı hesaba katmak için negatif kontrollerin (TSB'li ancak bakteri aşısı olmayan kuyular) ortalama OD570 değerini deneysel kuyulardan çıkarın. Verileri kaydedin ve analiz edin.
Not: Tekrarlanabilirliği sağlamak için deneyi her koşul için üç nüsha halinde gerçekleştirin. Güvenlik ve bertaraf protokollerine bağlı kalarak kristal viyole ve etanolün uygun şekilde kullanıldığından emin olun.
UIP400MTP ultrasonik bir banyo değildir. Odaklanmış sonikasyon için yüksek yoğunluklu bir fincan boynuzu. Bu güçlü temassız sonikatör, standart kuyu plakanızın tüm kuyucukları boyunca düzgün bir sonikasyon sağlar. Genlik, güç ve titreşim üzerinde hassas kontrole sahipsiniz. Yerleşik bir zamanlayıcı ve sıcaklık probu, tutarlı sonuçlar sağlar. UIP400MTP plakalı sonikatörü, numuneleri su banyosu ile soğutur (isteğe bağlı harici soğutucu).
Bir bakışta UIP400MTP'in temel faydaları:
- Yüksek Verimli İşleme: Çok kuyulu plakalar için özel olarak tasarlanmıştır ve aynı anda birden fazla numuneyi işlemenize olanak tanır.
- Üniforma Ultrasonik Dağıtım: Kuyucuklar arasında eşit ultrasonik yoğunluk sağlayarak tüm numunelerde tutarlı sonuçlar sağlar.
- Herhangi bir standart plaka kullanın: UIP400MTP, herhangi bir standart çok kuyulu plakayı, Petri kaplarını ve tüp raflarını kullanabilir. Pahalı tescilli plakalara gerek yok!
- Kullanıcı dostu arayüz: Kurulumu ve kontrolü kolaydır, bu da onu laboratuvar üretkenliğini artırmak için mükemmel bir araç haline getirir. Programlanabilir ayarlar ve otomasyon, proses standardizasyonunu kolaylaştırır!
Yüksek verimli biyofilm ayırma 96 oyuklu plakalı sonikatör ile UIP400MTP
Literatür / Referanslar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
Sıkça Sorulan Sorular
Hücre Dışı Polimerik Maddeler (EPS) Nedir?
Hücre Dışı Polimerik Maddeler (EPS), biyofilmlerdeki mikroorganizmalar tarafından salgılanan, esas olarak polisakkaritler, proteinler, nükleik asitler ve lipitlerden oluşan karmaşık bir biyopolimer karışımıdır. EPS, mikrobiyal topluluğu kaplayan, yapısal bütünlük sağlayan, yüzeylere yapışmaya aracılık eden ve hücreleri antibiyotikler ve bağışıklık tepkileri dahil olmak üzere çevresel streslerden koruyan koruyucu bir matris oluşturur.
Planktonik Bakteri ile ne kastedilmektedir?
Planktonik bakteriler, yüzeylere bağlanmak veya biyofilmler gibi yapılandırılmış topluluklar oluşturmak yerine, sıvı kültür veya vücut sıvıları gibi süspansiyon halinde bulunan serbest yüzen, tek hücreli mikroorganizmalardır.
Biyofilm ve Planktonik Bakteriler Arasındaki Fark Nedir?
Biyofilm ve planktonik bakteriler arasındaki temel fark, organizasyonlarında yatmaktadır. Biyofilmler, hücre dışı polimerik madde (EPS) matrisine gömülü yapılandırılmış, yüzeye bağlı bakteri topluluklarıdır, planktonik bakteriler ise serbest yüzer ve bu tür yapısal organizasyondan yoksundur.
Biyofilmlerdeki Bakterilerin Antibiyotiklerle Tedavi Edilmesi Planktonik Bakterilere Göre Daha mı Zor?
Biyofilmlerdeki bakterilerin antibiyotiklerle tedavi edilmesi, planktonik bakterilere kıyasla önemli ölçüde daha zordur. Biyofilm matrisi fiziksel bir bariyer görevi görür ve içindeki bakteriler değişmiş metabolik durumlar ve gelişmiş stres direnci sergileyerek antibiyotik etkinliğinin azalmasına katkıda bulunur.
Biyofilmler Antibiyotiklerle Öldürülebilir mi?
Biyofilmler bazen antibiyotiklerle yok edilebilir, ancak bu zordur. Etkili tedavi genellikle yüksek antibiyotik konsantrasyonları, spesifik kombinasyonlar veya yardımcı tedaviler gerektirir, çünkü EPS matrisi ve bakteriyel direnç mekanizmaları biyofilmi korur.
Staphylococcus Bakterilere Yapışır mı?
Staphylococcus bakterileri yapışma yetenekleri ile bilinir. Yüzeylere kolayca yapışırlar, özellikle tıbbi cihazlarda veya konakçı dokularda biyofilmler oluştururlar ve bu da onları kalıcı enfeksiyonlara önemli bir katkıda bulunur.
Ne Tür Staphylococcus Bakterileri Vardır?
Staphylococcus bakterileri, en dikkate değer olanları Staphylococcus aureus ve Staphylococcus epidermidis olmak üzere çeşitli türleri içerir. S. aureus patojeniktir ve ciddi enfeksiyonlara neden olabilirken, S. epidermidis genellikle biyofilm ile ilişkili cihaz enfeksiyonları ile ilişkilidir.
Kristal Menekşe Nedir?
Kristal menekşe, biyolojik materyalleri boyamak için yaygın olarak kullanılan temel bir boyadır. Mikrobiyolojide, biyokütleyi boyayarak biyofilm oluşumunu değerlendirmek için kullanılır, bu daha sonra spektrofotometrik olarak ölçülebilir.
Hielscher Ultrasonics, yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretmektedir. laboratuvar Hedef endüstriyel boyut.