ASTM E2799-22 Antimikrobiyal Değerlendirme Protokolü

Hielscher UIP400MTP, ASTM E2799-22 protokolündeki sonikasyon adımını kolaylaştırmak için tasarlanmış güçlü ve verimli bir çok kuyulu plaka sonikatörüdür. Tüm mikrotitre plakası boyunca tek tip ultrasonik enerji sağlayarak, UIP400MTP, hücrelere zarar vermeden veya numune bütünlüğünden ödün vermeden biyofilmlerin peg kapaklarından tutarlı ve güvenilir bir şekilde ayrılmasını sağlar. Yüksek verim kapasitesi ve kullanıcı dostu çalışması, tekrarlanabilirliği artırırken işlem süresini önemli ölçüde azaltır, bu da onu biyofilm canlılık testleri ve antimikrobiyal etkinlik testleri yapan laboratuvarlar için ideal bir çözüm haline getirir.

ASTM E2799

ASTM E2799, özellikle Pseudomonas aeruginosa'ya odaklanan, antimikrobiyal ajanların biyofilmlere karşı etkinliğini değerlendirmek için tasarlanmış standartlaştırılmış bir test yöntemidir. Biyofilmler, yüzeylere yapışan ve antimikrobiyal tedavilere karşı yüksek direnç sergileyen karmaşık mikrobiyal topluluklardır ve bu da onları sağlık, endüstriyel ve çevresel bağlamlarda önemli bir zorluk haline getirir. Bu yöntem, dezenfektanların gerçekçi biyofilm koşulları altında test edilmesi için güvenilir ve tekrarlanabilir bir çerçeve sağlamak için Minimum Biyofilm Eradikasyon Konsantrasyonu (MBEC) testini kullanır.

Sonikasyon ASTM E2799'a nasıl katkıda bulunur?

Sonikasyon, biyofilmlerin test yüzeylerinden ayrılmasını kolaylaştırarak, tedaviden sonra mikrobiyal canlılığın doğru bir şekilde değerlendirilmesini sağlayarak ASTM E2799 protokolünde kritik bir rol oynar. Protokol, kontrollü ultrasonik enerji kullanarak, hücrelere zarar vermeden verimli ve tutarlı biyofilm bozulması sağlayarak kesin ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar. Bu, ASTM E2799'u biyofilm araştırmalarını ilerletmek ve etkili antimikrobiyal stratejiler geliştirmek için önemli bir araç haline getirir.

MBEC Testi ASTM E2799-22'ye Göre Nasıl Çalıştırılır

ASTM E2799-22 protokolü, antimikrobiyal ajanların biyofilmlere karşı etkinliğini değerlendirme adımlarını ana hatlarıyla belirtir. Hielscher UIP400MTP mikrotitre plaka sonikatörünü kullanırken, protokol biyofilm ayrılması için bu gelişmiş sonikasyon yöntemini içerecek şekilde uyarlanabilir. Aşağıda, mikroplaka sonikatör UIP400MTP kullanmak için uyarlanmış adımların bir açıklaması bulunmaktadır:

1. Biyofilmlerin Hazırlanması
   Çıkarılabilir mandal kapakları olan steril bir 96 oyuklu mikrotitre plakası hazırlayın.
   Kuyucukları uygun bir büyüme ortamında standartlaştırılmış bir bakteri süspansiyonu ile aşılayın.
   Mandal kapağını plakanın üzerine yerleştirin ve mandalların bakteri süspansiyonuna tamamen daldırıldığından emin olun.
   Mandallar üzerinde biyofilm oluşumuna izin vermek için plakayı kontrollü koşullar altında (örn. sıcaklık ve zaman) inkübe edin.
2. Antimikrobiyal Ajanlarla Tedavi
   Biyofilm oluşumundan sonra, ortamı farklı konsantrasyonlarda test antimikrobiyal ajanları içeren taze ortamla değiştirin.
   Mandal kapağını yeniden takın ve test tasarımında belirtilen koşullar altında inkübe edin.
3. Biyofilm Ayrılması için Hazırlık
   İşlemden sonra, artık antimikrobiyal ajanları ve gevşek bir şekilde yapışmış planktonik hücreleri çıkarmak için peg kapağını steril bir durulama solüsyonuna batırarak durulayın.
4. UIP400MTP Sonikatörü Kullanarak Biyofilm Ayrılması
   Bir geri kazanım ortamı (örneğin, nötralize edici et suyu) içeren 96 oyuklu taze bir mikrotitre plakası hazırlayın.
   Peg kapağını geri kazanım ortamı plakasının kuyularına yerleştirerek biyofilmleri ayırın.
   Plakayı UIP400MTP sonikatörüne yerleştirin, kapağın ve plakanın doğru şekilde hizalandığından emin olun.
   Sonikatörü% 70 -% 80 genliğe ayarlayın ve hücre lizisi olmadan tutarlı biyofilm ayrılmasını sağlamak için döngü modunda 3-4 dakika boyunca sonikasyon yapın.
5. Biyofilm Canlılığının Değerlendirilmesi
   Sonikasyondan sonra, aşağıdaki gibi standart mikrobiyolojik veya analitik teknikler kullanarak ayrılmış biyofilm hücreleri içeren geri kazanım ortamını işleyin:
   • Koloni oluşturan birim (CFU) sayımları: Canlı hücre sayımı için agar üzerinde seri seyreltmeler ve plaka gerçekleştirin.
   • Optik yoğunluk (OD) ölçümleri: Hücre yoğunluğunu değerlendirmek için spektrofotometrik analiz kullanın.
   • Floresan bazlı canlılık testleri: Floresan boyalar kullanarak canlı ve ölü hücreleri ölçün.
6. Veri analizi
   Antimikrobiyal ajanların etkinliğini belirlemek için işlenmiş ve işlenmemiş biyofilmlerin canlılık verilerini karşılaştırın.
   Canlı biyofilm hücrelerini ortadan kaldırmak için gereken konsantrasyona dayalı olarak minimum biyofilm eradikasyon konsantrasyonunu (MBEC) hesaplayın.
7. Kalite kontrol
   UIP400MTP düzenli olarak kalibre ederek ve biyofilm ayırma işleminin önemli hücre lizisi veya yıkımı ile sonuçlanmadığını doğrulayarak tutarlı sonikasyon koşulları sağlayın.
   Sonuçları doğrulamak için işlenmemiş biyofilmler ve yalnızca orta boşluklar gibi uygun kontrolleri dahil edin.

Pimler üzerinde oluşan biyofilm hücreleri, hücrelerin geri kazanılması için taze kültür ortamı içeren 96 oyuklu plakalarda 5 dakika boyunca sonikasyon (Hielscher Ultrason Teknolojisi, Teltow, Almanya, UIP250MTP) ile yerinden çıkarıldı.
(Resim ve çalışma: ©de Oliveira ve ark., 2016)

UIP400MTP ASTM E2799-22 iş akışına entegre edilerek, biyofilm ayırma işlemi tutarlılık, verimlilik ve yüksek verimli uygulamalar için optimize edilmiştir.