96 kuyulu Plaka Sonikatörünü kullanan MBEC Test Protokolü UIP400MTP

MBEC testi, peg kapaklarında oluşan biyofilmleri ortadan kaldırmak için gereken antimikrobiyal ajanların konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. Biyofilm canlılığını değerlendirmek için, biyofilmler önce 96 oyuklu bir plakanın mandal kapaklarından ayrılmalıdır. Sonikasyon, bu ayrılma için en güvenilir ve verimli yöntemdir. Çok kuyulu plaka sonikatör UIP400MTP, tahlil plakalarını maksimum verimlilik ve rahatlıkla işlemek, yüksek verimli MBEC tahlillerini düzene sokmak ve hızlandırmak için özel olarak tasarlanmıştır.

Biyofilm Dekolmanı için Sonikasyon

Sonikasyon, Minimum Biyofilm Eradikasyon Konsantrasyonu (MBEC) tahlillerinde çok önemli bir adımdır ve biyofilm hücrelerinin yüzey bağlantılarından etkili bir şekilde çıkarılmasını sağlar. Biyofilmler, hücre dışı bir matris içinde yer alan, doğal olarak yapılandırılmış mikroorganizma topluluklarıdır ve bu da onları planktonik hücrelere kıyasla antimikrobiyal ajanlara karşı önemli ölçüde daha dirençli hale getirir. MBEC tahlilleri sırasında, sonikasyon, kontrollü kavitasyon oluşturmak, biyofilm matrisini bozmak ve gömülü hücreleri bir süspansiyona bırakmak için ultrasonik dalgaları kullanır. Bu adım, biyofilm hücrelerinin geri kazanım ortamında eşit şekilde dağılmasını sağlayarak kaplama, seyreltme veya spektrofotometrik yöntemler yoluyla doğru canlılık değerlendirmelerini kolaylaştırır. Uygun biyofilm ayrılması olmadan, artık matris bileşenleri hücreleri koruyabilir ve bu da antimikrobiyal etkinliğin hafife alınmasına yol açabilir. Bu nedenle, sonikasyon, test edilen ajanların gerçek eradikasyon potansiyelini yansıtan güvenilir ve tekrarlanabilir MBEC değerleri elde etmek için vazgeçilmezdir. Çok kuyulu plaka sonikatör UIP400MTP, tahlil plakalarında kolay yüksek verimli numune hazırlamaya izin verir.

Minimum Biyofilm Eradikasyon Konsantrasyonu (MBEC) Test Protokolü

Adım 1: Biyofilm Oluşumu

1. Bakteriyel süspansiyonu hazırlayın:
   Log faz büyümesi için uygun ortamda bakteri büyütün.
   Bakteri kültürünü tanımlanmış bir optik yoğunluğa seyreltin (örneğin, OD600 ~ 0.1).
2. 96 oyuklu plakayı aşılayın:
   Bakteriyel süspansiyonu (ör., 150-200 μL) standart 96 oyuklu bir mikrotitre plakasının her bir oyuğuna ekleyin.
3. Mandal kapağını takın:
   Çivi yüzeylerinde biyofilm oluşumuna izin vermek için çivi kapağını aşılanmış plakanın üzerine yerleştirin.
4. Plakayı inkübe edin:
   Biyofilm büyümesini teşvik etmek için kurulumu uygun bir sıcaklıkta (örn. 37°C) 24-48 saat sallamadan inkübe edin.

Adım 2: Antimikrobiyal Ajanlarla Tedavi

• Antimikrobiyal çözeltiler hazırlayın:
  Taze ortamda bir dizi antimikrobiyal konsantrasyon hazırlayın.
  Biyofilmleri antimikrobiyal ajanlara maruz bırakın:
  Peg kapağını bakteri kültüründen çıkarın ve planktonik hücreleri çıkarmak için steril salin veya PBS ile durulayın.
  Peg kapağını, antimikrobiyal solüsyonları içeren 96 oyuklu yeni bir plakaya yerleştirin.
• Plakayı inkübe edin:
  Antimikrobiyal maruziyete izin vermek için belirli bir süre (örneğin 24 saat) inkübe edin.

Adım 3: 96 Kuyulu Plaka Sonikatörü ile Sonikasyon UIP400MTP

Sonikasyon adımı, canlılığı değerlendirmek için biyofilmleri peg kapaklarından ayırmak için kritik öneme sahiptir. UIP400MTP sonikatörü için şu adımları izleyin:

1. Kurulumu hazırlayın:
   Her bir oyukta 96 oyuklu taze bir plakayı geri kazanım ortamı (örneğin, nötralize edici et suyu veya taze büyüme ortamı) ile doldurun.
2. Mandal kapağını aktarın:
   Peg kapağını antimikrobiyal tedavi plakasından çıkarın.
   Artık antimikrobiyal ajanları çıkarmak için peg kapağını steril tuzlu su veya PBS ile durulayın.
3. Plakayı ve sonikatörü yerleştirin:
   Mandal kapağını kurtarma ortamı plakasına takın.
   Kurtarma ortamı plakasını UIP400MTP sonikatör platformuna yerleştirin, plakanın ortalandığından ve sabit olduğundan emin olun.
4. Sonikasyon parametrelerini ayarlayın:
   Sonikasyon parametrelerini UIP400MTP ayarlayın (Ayarlar biyofilme göre ayarlanabilir):
   Genlik:% 70–100.
   Sonikasyon süresi: Döngü modunda 1-3 dakika (biyofilm sağlamlığına göre ayarlayın).
5. Sonikat:
   Sonikasyon işlemini başlatın. Ultrasonik titreşim, biyofilmleri peg yüzeylerinden geri kazanım ortamına çıkaracaktır.
6. Süreci izleyin:
   Kuyucuklardaki numune sıcaklığını izlemek için tak-çıkar sıcaklık sensörünü kullanın. UIP400MTP, soğutma için bir laboratuvar soğutucusuna bağlanabilir.
7. Sonikasyon Sonrası İşleme:
   Geri kazanım ortamını (şimdi ayrılmış biyofilmler içeren) aşağı akış analizi için hemen yeni bir steril plakaya aktarın.

(A) Biyofilm oluşumu, hücre geri kazanımı için kullanılan% 2 glikozlu TSB içeren plaka ve
MIC ve MBCB'nin belirlenmesi; (B) Stafilokok biyofilmlerinin oluşumu için pimli kapak. MIC ve MBCB'nin belirlenmesi; (B) Stafilokok biyofilmlerinin oluşumu için pimli kapak.
Pimler üzerinde oluşan biyofilm hücreleri, hücrelerin geri kazanılması için taze kültür ortamı içeren 96 oyuklu plakalarda 5 dakika boyunca sonikasyon (Hielscher Ultrason Teknolojisi) ile yerinden çıkarıldı.
(Resim ve çalışma: ©de Oliveira ve ark., 2016)

Adım 4: Uygulanabilirlik Değerlendirmesi

Plaka ve kültür müstakil biyofilmler:

1. Koloni oluşturan birimleri (CFU) numaralandırmak için geri kazanım ortamının ve plakanın agar üzerine seri seyreltmelerini gerçekleştirin.
   Alternatif olarak, kolorimetrik veya floresan bazlı bir canlılık testi kullanın.
2. Sonuçları kaydedin:
   MBEC'i, tespit edilebilir biyofilm canlılığını ortadan kaldıran en düşük antimikrobiyal konsantrasyonu olarak belirleyin.

Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite

Hielscher ultrasonicators en yüksek kalite ve tasarım standartları için iyi bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicators'ımızın endüstriyel tesislere sorunsuz bir şekilde entegre edilmesini sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar Hielscher sonicators tarafından kolayca ele alınır.

Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve en son teknoloji ve kullanıcı dostu özelliklere sahip yüksek performanslı ultrasonicators'a özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher ultrasonicators CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılar.

MBEC tahlili kullanılarak Pseudomonas aeruginosa biyofilmine karşı dezenfektan etkinliğini test etmek için ASTM E2799 protokolü sırasında numune hazırlama adımı olarak UIP400MTP biyofilm ayrılması için nasıl kullanıldığını buradan okuyun.