Hücre Kazımanın Yerine Yüksek Numune İşleme Kapasiteli UIP400MTP Sonikatörünü Kullanın

Multi-omik analiz için yapışık hücre hatlarının çok kuyucuklu plakalardan ayrılması ve ekstraksiyonu, laboratuvarlarda günlük bir işlemdir. Çok kuyucuklu plaka sonikatörü UIP400MTP ile yüksek numune işleme kapasitesinde hücre ayırma, manuel hücre kazımanın yerini alarak daha yüksek RNA, toplam lipit ve toplam polar metabolit verimleri elde edilmesini sağlar. Yeni bir yöntem, Hielscher UIP400MTP sonikatörünü Beckman Coulter i7 sıvı işleme iş istasyonuyla entegre ederek RNA, metabolit ve lipit ekstraksiyonu için hücrelerin yüksek numune işleme kapasitesiyle, tekrarlanabilir ve verimli biçimde işlenmesini mümkün kılar. Sunulan yöntem, çeşitli hücre tiplerinde ve deney koşullarında üstün tekrarlanabilirlik ve verim elde ederek geleneksel manuel hücre kazıma yöntemlerini geride bırakır.

UIP400MTP Mikroplaka Sonikatörüyle Hücre Ayırmayı Kolaylaştırın

Yapışık hücre kültürü sistemleri, toksikolojik ve biyomedikal araştırmalarda kritik bir rol oynar. Bu bağlamda Cruchley-Fuge ve ark. (2024), kimyasal tehlikelerin değerlendirilmesinde omik teknolojilerinden yararlanmaya odaklanan PrecisionTox projesindeki önemli bir zorluğu ele almıştır. Proje, çeşitli kimyasallarla muamele edilen binlerce numunenin yüksek numune işleme kapasitesiyle analiz edilmesini amaçlamıştır. Bu gereksinimi karşılamak için araştırmacılar, sıvı kromatografisi-kütle spektrometrisi (LC-MS) analizi için UIP400MTP sonikatörünü yerleşik iki fazlı ekstraksiyon protokolleriyle birleştiren otomatik bir iş akışı geliştirmiştir. Çalışmaları, UIP400MTP çok kuyucuklu plaka sonikatörünün yapışık hücreleri ayırmadaki etkinliğini manuel kazıma ve diğer geleneksel yöntemlerle karşılaştırarak değerlendirmektedir.

Multi-Omik İşlemleri Kolaylaştırma: UIP400MTP ile Otomatik Yapışık Hücre Ekstraksiyonu

Birmingham Üniversitesinden Laura Cruchley-Fuge’un araştırma ekibi üç insan hücre hattı kullanmıştır: HepG2 (karaciğer kanseri hücreleri), HepaRG (farklılaşmış hepatosit benzeri hücreler) ve H295R (adrenal kanser hücreleri). Bu hücreler 24 kuyucuklu ve 96 kuyucuklu plakalarda kültüre alınmış ve aflatoksin B1 ve forskolin gibi test kimyasallarına maruz bırakılmıştır.

Deney Tasarımı:

• Aşama 1: UIP400MTP sonikatörünün güç ayarlarının optimizasyonu ve manuel hücre kazıma ve ultrasonik su banyolarıyla karşılaştırılması. RNA, metabolit ve lipit geri kazanımını değerlendirmek için HepG2 hücreleri kullanılmıştır.
• Aşama 2: Beckman Coulter i7 sistemi kullanılarak UIP400MTP cihazının iki fazlı bir ekstraksiyon iş akışına entegrasyonu. Doğrulama, HepaRG ve H295R hücreleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

Ekstraksiyon İş Akışı: İş akışı, çok kuyucuklu plakalarda kimyasal maruziyetleri, UIP400MTP kullanılarak hücrelerin ayrılmasını ve Bligh & Dyer (B&D) yöntemiyle iki fazlı ekstraksiyonu kapsamıştır. Lipofilik ve polar bileşikler için LC-MS analizi, Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Lipit miktar tayininde altın standart olan B&D yöntemi, metanol, kloroform ve suyla iki aşamalı bir ekstraksiyonu ve ardından kloroform fazında lipit miktar tayinini içerir.

UIP400MTP mikroplaka sonikatörü, yapışık hücre hatlarının çok kuyucuklu plakalardan ve Petri kaplarından ayrılmasını kolaylaştırır

Sonuçlar:

• Aşama 1: Optimum sonikasyon koşulları %60 güçte belirlenmiştir.
  UIP400MTP, manuel kazıma ve ultrasonik banyolara kıyasla olağanüstü tekrarlanabilirlikle en yüksek RNA geri kazanımını sağlamıştır.
  Polar metabolit geri kazanımı yöntemler arasında tutarlı bulunurken lipit geri kazanımı UIP400MTP ile belirgin biçimde üstün olmuştur.
• Aşama 2: HepaRG ve H295R hücreleriyle yapılan doğrulama, sıkı biçimde kümelenmiş PCA skorlarının gösterdiği üzere, lipidomik ve metabolomik verilerde yüksek tekrarlanabilirlik ortaya koymuştur.
  Aflatoksin B1 ve forskolin uygulamaları kontrollerden etkili biçimde ayırt edilerek yöntemin duyarlılığı ve güvenilirliği vurgulanmıştır.

“Hielscher UIP400MTP sonikasyon cihazı, manuel hücre kazımanın “altın standardına” yüksek kaliteli ve tekrarlanabilir bir alternatif yaklaşım sunarak daha yüksek RNA, toplam lipit ve toplam polar metabolit verimleri elde edilmesini sağlar.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge ve ark., UIP400MTP sonikatörünün yapışık hücrelerin işlenmesindeki avantajlarını vurgulamaktadır. Manuel kazımanın yerini alan bu yöntem, tekrarlanabilirliği, numune işleme kapasitesini ve verimi artırarak PrecisionTox gibi büyük ölçekli çalışmalar için paha biçilmez bir araç hâline gelir. UIP400MTP cihazının otomatik iş akışlarına entegrasyonu, değişkenliği azaltmanın yanı sıra yoğun emek gerektiren süreçleri de kolaylaştırarak yüksek kaliteli multi-omik verilerin elde edilmesini mümkün kılar.

Cruchley-Fuge ve ark. (2024) tarafından yapılan çalışma, multi-omik analiz için yapışık hücre kültürlerinin işlenmesini kolaylaştırır ve daha verimli hâle getirir. UIP400MTP sonikatörünün otomatik iş akışlarıyla entegrasyonu, tutarlı ve verimli numune hazırlamayı sağlayarak cihazı yüksek numune işleme kapasiteli toksikolojik araştırmalar için ideal hâle getirir.
 

Tasarım, Üretim ve Danışmanlık – Almanya’da Üretilen Kalite

Hielscher ultrasonik cihazları, en yüksek kalite ve tasarım standartlarıyla tanınır. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonik cihazlarımızın endüstriyel tesislere sorunsuz entegrasyonunu mümkün kılar. Hielscher ultrasonik cihazları, zorlu koşulların ve yüksek gereksinimler içeren ortamların üstesinden kolaylıkla gelir.

Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve en son teknolojiye ve kullanıcı dostu özelliklere sahip yüksek performanslı sonikatörlere özel önem verir. Elbette Hielscher ultrasonik cihazları CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHs gerekliliklerini karşılar.