Hücre Kazımayı UIP400MTP Yüksek Verimli Sonikatör ile Değiştirin
Çoklu omik analiz için çok kuyulu plakalardan yapışık hücre hatlarının ayrılması ve çıkarılması laboratuvarlarda günlük bir görevdir. Çok kuyulu plakalı sonikatör kullanılarak yüksek verimli hücre ayrılması UIP400MTP manuel hücre kazımanın yerini alarak daha yüksek RNA, toplam lipit ve toplam polar metabolit verimine yol açar. Yeni bir yöntem, Hielscher UIP400MTP sonikatörünü Beckman Coulter i7 sıvı işleme iş istasyonuyla entegre ederek, RNA, metabolit ve lipid ekstraksiyonu için hücrelerin yüksek verimli, tekrarlanabilir ve verimli bir şekilde işlenmesini sağlar. Sunulan yöntem, çeşitli hücre tiplerinde ve deneysel koşullarda üstün tekrarlanabilirlik ve verim elde ederek geleneksel manuel hücre kazıma yöntemlerini geride bırakır.
Mikroplaka Sonicator ile Hücre Ayrılmasını Kolaylaştırın UIP400MTP
Yapışık hücre kültürü sistemleri, toksikolojik ve biyomedikal araştırmalarda kritik bir rol oynamaktadır. Bu bağlamda, Cruchley-Fuge ve ark. (2024), kimyasal tehlike değerlendirmesi için omik teknolojilerden yararlanmaya odaklanan PrecisionTox projesinde önemli bir zorluğu ele aldı. Proje, çeşitli kimyasallarla muamele edilmiş binlerce numunenin yüksek verimli bir analizini amaçladı. Bu talebi karşılamak için araştırmacılar, UIP400MTP sonikatörünü sıvı kromatografi-kütle spektrometresi (LC-MS) analizi için yerleşik bifazik ekstraksiyon protokolleriyle birleştiren otomatik bir iş akışı geliştirdiler. Çalışmaları, UIP400MTP Çok Kuyulu Plaka Sonikatörünün, manuel kazıma ve diğer geleneksel yöntemlere kıyasla yapışkan hücrelerin ayrılmasındaki etkinliğini değerlendirmektedir.
Multi-Omics'in Kolaylaştırılması: UIP400MTP ile Otomatik Yapışık Hücre Ekstraksiyonu
Birmingham Üniversitesi'nden Laura Cruchley-Fuge'un araştırma ekibi üç insan hücre hattı kullandı: HepG2 (karaciğer kanseri hücreleri), HepaRG (farklılaşmış hepatosit benzeri hücreler) ve H295R (adrenal kanser hücreleri). Bu hücreler 24 oyuklu ve 96 oyuklu plakalarda kültürlendi ve aflatoksin B1 ve forskolin gibi test kimyasallarına maruz bırakıldı.
Deney Tasarımı:
- Aşama 1: UIP400MTP sonikatörünün güç ayarlarının optimizasyonu ve manuel hücre kazıma ve sonik su banyoları ile karşılaştırılması. RNA, metabolit ve lipid geri kazanımını değerlendirmek için HepG2 hücreleri kullanıldı.
- 2. Aşama: Beckman Coulter i7 sistemi kullanılarak UIP400MTP iki fazlı bir ekstraksiyon iş akışına entegrasyonu. Doğrulama, HepaRG ve H295R hücreleri kullanılarak gerçekleştirildi.
Ekstraksiyon İş Akışı: İş akışı, çok kuyulu plakalarda kimyasal maruziyetleri, UIP400MTP kullanılarak hücre ayrılmasını ve Bligh yoluyla bifazik ekstraksiyonu kapsıyordu & Boyacı (B&D) yöntemi. LC-MS analizi, lipofilik ve polar bileşikler için bir Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 kullanılarak gerçekleştirildi. The B&Lipid miktar tayini için altın bir standart olan D yöntemi, metanol, kloroform ve su ile iki aşamalı bir ekstraksiyonu ve ardından kloroform fazında lipit miktar tayinini içerir.

UIP400MTP mikroplaka sonikatörü, yapışık hücre hatlarının çok kuyulu plakalardan ve Petri kaplarından ayrılmasını kolaylaştırır
Sonuç -ları:
- Aşama 1: Optimal sonikasyon koşulları% 60 güçte tanımlandı.
UIP400MTP, manuel kazıma ve sonik banyolara kıyasla olağanüstü tekrarlanabilirlik ile en yüksek RNA geri kazanımını sağladı.
Polar metabolit geri kazanımı yöntemler arasında tutarlıydı, lipid geri kazanımı ise UIP400MTP ile önemli ölçüde üstündü. - 2. Aşama: HepaRG ve H295R hücreleri üzerinde doğrulama, sıkı bir şekilde kümelenmiş PCA skorları ile gösterildiği gibi lipidomik ve metabolomik verilerde yüksek tekrarlanabilirlik göstermiştir.
Aflatoksin B1 ve forskolin tedavileri, yöntemin duyarlılığını ve güvenilirliğini vurgulayarak kontrollerden etkili bir şekilde ayırt edildi.

Mikroplaka sonikatör UIP400MTP Yüksek verimli hücre ayırma için
“Hielscher UIP400MTP sonikasyon cihazı, manuel hücre kazıma "altın standardı" na yüksek kaliteli ve tekrarlanabilir bir alternatif yaklaşım sunar, bu da RNA, toplam lipitler ve toplam polar metabolitlerin daha yüksek verimine yol açar.” (Cruchley-Fuge ve diğerleri, 2024)
Cruchley-Fuge ve ark. yapışık hücre işleme için UIP400MTP sonikatörünün avantajlarını vurgulamaktadır. Bu yöntem, manuel kazımanın yerini alarak tekrarlanabilirliği, verimi ve verimi artırarak PrecisionTox gibi büyük ölçekli çalışmalar için paha biçilmez bir araç haline getirir. UIP400MTP'in otomatik iş akışlarına entegrasyonu yalnızca değişkenliği azaltmakla kalmaz, aynı zamanda emek yoğun süreçleri düzene sokarak yüksek kaliteli çoklu omik veri toplamayı mümkün kılar.
Cruchley-Fuge ve ark. (2024), multi-omik analiz için yapışık hücre kültürlerinin işlenmesini kolaylaştırır ve kolaylaştırır. UIP400MTP sonikatörünün otomatik iş akışlarıyla entegrasyonu, tutarlı ve verimli numune hazırlama sağlar, bu da onu yüksek verimli toksikolojik araştırmalar için ideal hale getirir.
Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite
Hielscher ultrasonicators en yüksek kalite ve tasarım standartları için iyi bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicators'ımızın endüstriyel tesislere sorunsuz bir şekilde entegre edilmesini sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar Hielscher ultrasonicators tarafından kolayca ele alınır.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve en son teknoloji ve kullanım dostu özelliklere sahip yüksek performanslı sonikatörlere özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher ultrasonicators CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHS gereksinimlerini karşılar.
Literatür / Referanslar
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Sıkça Sorulan Sorular
Hücre Ayrılması Nedir?
Araştırmada hücre ayrılması, yapışık hücreleri bir kültür kabının veya substratının yüzeyinden ayırma sürecini ifade eder. Bu tipik olarak analiz, alt kültürleme veya kriyoprezervasyon gibi aşağı akış uygulamaları için hücreleri hasat etmek için yapılır. Ayrılma, hücre tipine ve araştırma gereksinimlerine bağlı olarak enzimatik yöntemler (örneğin, tripsin), kimyasal ajanlar (örneğin, EDTA), mekanik yöntemler (örneğin, kazıma) veya sonikasyon gibi fiziksel teknikler kullanılarak elde edilebilir.
Yapışık Hücreleri Nasıl Ayırırsınız?
Sonikasyon kullanarak yapışan hücrelerin ayrılması, kontrollü bir ortamda hücre yüzeyi yapışmasını bozmak için odaklanmış ultrason dalgalarının uygulanmasını içerir. Spesifik olarak, UIP400MTP mikroplaka sonikatörü bunu, hücreler ve kültür yüzeyi arasındaki bağları kıran lokalize mekanik titreşimler üreterek başarır. Temel adımlar şunları içerir:
- Hazırlık: Hücreler çok kuyucuklu plakalarda büyütülür ve deneysel tasarımın bir parçası olarak belirli kimyasallara maruz bırakılabilir.
- Sonikasyon: Sonikatör UIP400MTP, hücrelere zarar vermeden veya biyomolekül bütünlüğünden ödün vermeden etkili bir şekilde ayrılmayı sağlamak için optimize edilmiş ayarlarla (örn. ` güç) programlanmıştır.
- Sıcaklık kontrolü: Cihaz, işlem sırasında ısının neden olduğu hücre veya moleküler bozulmayı önlemek için sıcaklık kararlılığını korur.
- Ayrılma Sonrası: Ayrılmış hücreler, Bligh gibi aşağı akış ekstraksiyon protokollerine tabi tutulur. & RNA, lipitler ve metabolitlerin geri kazanımı için boyacı bifazik yöntemi.
Bu yöntem, otomasyonu, tekrarlanabilirliği ve yüksek verimli numuneleri verimli bir şekilde işleme yeteneği nedeniyle manuel kazımadan üstündür.
Zarar Vermeyen Hücre Ayrılması Nedir?
Zarar vermeyen hücre ayrılması, hücre canlılığından, bütünlüğünden veya işlevselliğinden ödün vermeden yapışık hücreleri substratlarından ayırma sürecini ifade eder. Kontrollü sonikasyon veya enzim içermeyen çözeltiler gibi nazik yöntemler kullanılarak elde edilir.
Hücre yıkımını önlemek, hücreleri korumak için kritik öneme sahiptir’ multi-omik analiz, fonksiyonel tahliller veya terapötik kullanım gibi doğru aşağı akış uygulamaları için gerekli olan yapısal ve moleküler özellikler. Hasarlı hücreler hücre içi içerikleri serbest bırakabilir, potansiyel olarak deneysel sonuçları karıştırabilir veya numune kalitesinden ödün verebilir.
Enzimsiz Hücre Ayrılmasının Avantajı Nedir?
Enzim içermeyen hücre ayrılması, hücre yüzey proteinlerini ve reseptörlerini korumak, hücre canlılığını korumak ve biyomoleküllere olası enzimatik hasardan kaçınmak dahil olmak üzere çeşitli avantajlar sunar. Bu yaklaşım, enzimatik değişikliklerin veri kalitesini veya deneysel sonuçları tehlikeye atabileceği akış sitometrisi, proteomik veya fonksiyonel tahliller gibi hassas aşağı akış uygulamaları için özellikle faydalıdır. Ek olarak, enzim içermeyen yöntemler genellikle daha tekrarlanabilir ve yüksek verimli iş akışları için uyarlanabilir.

Hielscher Ultrasonics, yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretmektedir. laboratuvar Hedef endüstriyel boyut.