Подготовка образца перед анализом может потребовать различных доаналичных процессов, таких как гомогенизация тканей, лиз, экстракция белков, ДНК, РНК, органелл и других внутриклеточных веществ, растворение и дегазации. VialTweeter является уникальным ультразвуковым устройством, которое готовит несколько проб труб одновременно в точно таких же условиях. Благодаря косвенной звуковой связи закрытых пробирок, перекрестного загрязнения и потери образцов избежать.

Ультразвуковая подготовка образцов

Ультразвук является распространенным методом обработки образцов для того, чтобы получить образец готов к анализу, таких как полимеры цепной реакции (ПЦР), Западные пятна, анализы, молекулярное секвенирование, хроматография и т.д. Ультразвук является методом, широко используемым в лабораториях для лечения образцов до аналитически. Основным преимуществом соника является то, что принцип работы ультразвука основан на чисто механических силах. Ультразвуковой лиза и нарушение клеток достигается сономеханическими силами снора, что дает ультразвуковой преимущества, что растворители, используемые для извлечения белка могут быть использованы также во времялиза. Ультразвуковые разрушители клеток, такие как VialTweeter сломать клеточные стенки / мембраны и способствовать массовой передачи между внутренней клетки и растворителя. Таким образом, анализ (например, ДНК, РНК, белки, органеллы и т.д.) эффективно передается из клеточной матрицы в растворитель. Это означает, что шаги утоления и экстракции перекрываются с ультразвуковым процессом нарушения клеток, что делает ультразвуковойлиз очень эффективным. Кроме того, ультразвуковой препарат образца не требует моющих средств и других реагентов лиза, которые могут изменять и разрушать структуру лизата и известен последующими проблемами с очисткой. Другой метод лиза, энзиматические нарушения требует длительного инкубации раз и обеспечивает часто не воспроизводимые результаты. Ультразвуковой препарат образца преодолевает общие проблемы в подготовке образца, такие как гомогенизация тканей, нарушение клеток, лиз, удаление белка и лизат solubilization. Поскольку интенсивность ультразвукового лечения можно точно контролировать и приспосабливать к биологическому образцу, деградации и потери образцов избежать. Автоматически отслеживаемая и контролируемая температура образца, режим пульса и продолжительность звукового действия обеспечивают оптимальные результаты.
 

VialTweeter особенно удобен для лабораторных работ, что требует одновременной подготовки нескольких образцов в одинаковых условиях. VialTweeter представляет собой ультразвуковой блок sonotrode, который может вставить до 10 флаконов (например, Eppendorf, centriguge, NUNC трубки, крио-флаконы) и sonicates их интенсивно в точно контролируемых условиях. Так как ультразвуковая энергия соединена через стенки флаконов в образец среды, флаконы поддерживать закрыты во время лечения. Таким образом, полностью избежать потери образцов и перекрестного загрязнения.

Флаконы и трубы, подходящие для VialTweeter

VialTweeter подходит для 10 общих конических или круглого дна труб, таких как Eppendorf, центрифуга, крио-флаконы и различные типы флаконов NUNC, но отверстия могут быть настроены на другие флаконы и трубки размеров по запросу. Пожалуйста, сообщите нам, какие пробирки вы хотите использовать, чтобы мы могли изменить ваш VialTweeter соответственно. Для больших пробирок, таких как трубки Falcon и другие испытательные контейнеры, стаканы и сосуды, VialPress является удобным решением.

VialTweeter с VialPress

В то время как VialTweeter себя с его 10 труб отверстия уже уникальный и высокофункциональный ультразвуковое устройство, VialPress надстройки делает VialTweeter еще более универсальным и гибким для работы. VialPress является аксессуаром для VialTweeter, состоящий в зажим-на бар, который позволяет фиксировать большие образцы труб, таких как Falcon труб или других малых и средних стаканов теста на vialTweeter фронта. На рисунке слева показан VialTweeter проведения 10 Eppendorf флаконы в блоке, в то время как VialPress фиксирует один большой пробирки на фронт для sonication. VialPress способен в состоянии ввести до 5 больших пробирок для интенсивной звуковой.

Протоколы подготовки образцов VialTweeter

VialTweeter широко используется для sonicate биологических образцов. Перед анализом необходимо подготовить образцы для биохимического или биофизического анализа и анализа, например, путем лиза, гомогенизации тканей, извлечения белка, стрижки ДНК/РНК, дегазации и т.д. VialTweeter надежно выполняет эти ультразвуковые процессы и обеспечивает воспроизводимые результаты. Распространенным применением VialTweeter является лиза / клеточного нарушения млекопитающих (человека и животных) тканей, а также бактерий клеток и вирусных частиц. Успешно обработанные vialTweeter биологические образцы включают эпителиальные клетки легких человека, гематопоитические стволовые клетки, клетки миелоидного лейкоза, Эшерихия колия, Сенная палочка, Бацилла антракис, Фрэнсиселла Туларенсис, Ерсиния пестис, Стрептококк пиогены, Каулобактер полумесяца, Микоплазма пневмония, микобактерии / Микобактерии туберкулеза комплекса (MTBC) и многие другие бактериальные, ботанические и микробные клетки.
Ниже вы можете найти несколько выбранных протоколов с изображением VialTweeter.

E.Coli Lysis с VialTweeter для определения In-Vivo Glutathione

Бактерии кишечной палочки штамма MG1655 были выращены в минимальной среде MOPS в общем объеме 200 мл, пока не был достигнут A600 из 0,5. Культура была разделена на 50-мл культур для лечения стресса. После 15 мин инкубации с 0,79 мМамиллицина, 1 мМ диамид, или диметилсуфсид (контроль), клетки были собраны при 4000г при 4 градусов по Цельсию в течение 10 мин. Клетки дважды промыли буфером KPE до повторного незаменимия гранул в 700 мкл буфера KPE. Для депротеинации, 300 мл 10% (w/v) сульфозалициловой кислоты были добавлены до нарушения клеток ультразвуковой (3 х 1 мин; Ультразвуковой виалТвитер). Супернатанты были собраны после центрифугации (30 мин, 13 000г, 4 градусов по Цельсию). Концентрации сульфосалициловой кислоты были снижены до 1% за счет добавления 3 томов буфера KPE. Измерения общего глутатиона и GSSG были выполнены, как описано выше. Концентрация клеточного глутатиона рассчитывалась на основе объема клеток кишечной палочки объемом 6,7×10-15 литров и плотности клеток A600 0,5 (эквивалент 1×108 клеток культуры мл-1). Концентрации ГСГ рассчитывались путем вычитания 2 ГГСГ из общего глутатиона. (Мюллер и др. 2016)

Фрагментация фибрилл альфа-синуклеина с помощью VialTweeter

Ультразвуковой аппарат VialTweeter широко используется для надежной и эффективной фрагментации фибрилл и лент альфа-синуклеина. Нажмите здесь, чтобы найти подробные описания, протоколы и ссылки на фрагментацию альфа-синуклеина с помощью VialTweeter!

Клеточныйлиз с VialTweeter перед графитовой печи атомной спектрометрии абсорбции

Bacillus subtilis 168 (trpC2) подверглись воздействию 15 мин антибиотиков, затем клетки собирали по 3320 х г, промыли пять раз при 100 мМ Трис/1 мМ ЭДТА, рН 7,5, повторном 10 мм Трис, рН 7,5 и нарушены ультразвуком в инструменте Hielscher VialTweeter. (Венцель и др. 2014)

Подготовка образцов VialTweeter перед масс-спектрометрией

Лиофилизированные клеточные гранулы человека CD34􏰀 гематопоэтические стволовые/прародительные клетки были повторно использованы в 10􏰇л (200 мл для навалом HEK293 препарат для пептидной серии разбавления) 8 М уrea в 100 мМ Аммония карбоната водорода и лизированных помогали sonication с Hielscher VialTweeter при амплитуде 60%, цикл 60% и продолжительность 20s в течение трех раз с промежуточным охлаждением на льду. (Амон и др. 2019)

Протоколы подготовки образцов с использованием VialPress

Свежий салат (Lactuca sativa) был гомогенизирован в буфере 0,5 М HEPES (pH 8, KOH скорректирован) в соотношении 1 г растения (свежий вес) до 200, 100, 50 или 20 мл буферного раствора. Соотношение массы растений к объему буферного раствора было разнообразным, чтобы сохранить общий объем гомогената между 3,5 и 12 мл. Соотношение массы растений к объему буферного раствора было разнообразным, чтобы сохранить общий объем гомогената между 3,5 и 12 мл, что позволило гомогенизации с зондом. Гомогенаты затем прошли косвенное ультразвуковое использование UP200St с VialTweeter оснащен 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Германия) в течение 3 мин (80% пульса и 100% мощности). Использование этого устройства позволило избежать загрязнения. (Laughton et al. 2019)

Надежный контроль температуры во время Sonication с VialTweeter

Температура является важнейшим фактором, влияющим на процесс, который особенно важен для обработки биологических образцов. Как и все механические методы подготовки образца, sonication создает тепло. Тем не менее, температура образцов может быть хорошо контролируется при использовании VialTweeter. Мы представляем вам различные варианты для мониторинга и контроля температуры ваших образцов при подготовке их с VialTweeter и VialPress для анализа.

1. Мониторинг температуры выборки: ультразвуковой процессор UP200St, который управляет VialTweeter, оснащен интеллектуальным программным обеспечением и подключенным датчиком температуры. Подключите датчик температуры к UP200St и вставьте кончик датчика температуры в одну из пробных трубок. Через цифровой цветной сенсорный дисплей, вы можете установить в меню UP200St определенный диапазон температур для вашего образца sonication. Ультразвуковой автоматически остановится, когда максимальная температура будет достигнута, и остановится до тех пор, пока температура образца не опустится до более низкого значения установленного температурного ∆. Затем sonication начинается автоматически снова. Эта интеллектуальная функция предотвращает деградацию, вызванную теплом.
2. Блок VialTweeter можно предварительно охладить. Положите блок VialTweeter (только sonotrode без преминдатора!) в холодильник или морозильную камеру, чтобы предварительно охладить титановый блок помогает отложить повышение температуры в образце. Если это возможно, сам образец также может быть предварительно охлажден.
3. Используйте сухой лед для охлаждения во время звуковой. Используйте неглубокий лоток, наполненный сухим льдом, и поместите VialTweeter на сухой лед, чтобы тепло быстро рассеялось.

Клиенты по всему миру используют VialTweeter и VialPress для своей ежедневной работы по подготовке образцов в биологических, биохимических, медицинских и клинических лабораториях. Интеллектуальное программное обеспечение и контроль температуры процессора UP200St, температура надежно контролируется и тепловой деградации образца избежать. Ультразвуковой препарат образца с VialTweeter и VialPress обеспечивает очень надежные и воспроизводимые результаты!

Технические подробности VialTweeter

VialTweeter является блок sonotrode из титана, который может ввести до 10 флаконов в отверстиях в блоке. Кроме того, до 5 больших пробирок могут быть зажаты на фронте VialTweeter с помощью VialPress. VialTweeter разработан таким образом, что ультразвуковая энергия распределяется равномерно в каждый вставленный флакон для обеспечения надежных и однородных результатов sonication. Небольшой поворот регулирует sonotrode VialTweeter до неровной земли и выравнивает пробирки вертикально.

Преимущества VialTweeter с одного взгляда

• Интенсивный ультразвук до 10 флаконов одновременно
• Непрямая звукочувствительность при высокой ультразвуковой интенсивности через стенку сосуда в образец
• Косвенное Озвучивание избегает перекрестного загрязнения и потери образца
• Воспроизводимые результаты благодаря регулируемой и управляемой звуковой апролитации
• VialPress позволяет снотировать большие трубки
• Регулируемая амплитуда от 20 до 100%
• Режим Регулируемый импульс от 0 до 100%
• автоклавируемый

VialTweeter питается от UP200St, 200 Вт мощный ультразвуковой процессор. UP200St оснащен интеллектуальным программным обеспечением, которое позволяет точно контролировать все важные параметры ультразвукового процесса, такие как амплитуда, время звуковой связи, пульсация и температура. Это делает VialTweeter надежным инструментом для успешного воспроизведения результатов процесса в биологических и биохимических лабораториях.
Амплитуда может быть скорректирована между 20 и 100% и позволяет таким образом адаптировать ультразвуковую интенсивность к вашему образцу. Например, стрижка и фрагментация ДНК и РНК требует более мягкой амплитуды, чтобы предотвратить выработку слишком мелких фрагментов ДНК, гомогенизация тканей мозга мыши нуждается в высокой интенсивности звуковой. Выберите идеальную амплитуду, интенсивность и продолжительность звука с помощью интеллектуального и интуитивно понятного меню процессора UP200St. Меню и настройки можно легко получить доступ и работать с помощью цветного сенсорного дисплея. В настройках можно заранее установить параметры звуковой сигнализации, такие как амплитуда, пульсация / режим цикла, продолжительность звуковой передачи, общий ввод энергии и пределы температуры. В исследованиях и производстве, повторяемость испытаний и результатов испытаний имеет решающее значение. Это означает, что точная запись условий процесса и протоколов звуковой обработки чрезвычайно важна. Автоматическая протоколизация данных записывает все звуковые данные в файл CSV на интегрированной SD-карте, так что вы можете легко проверить и сравнить различные звуковые работает. Все ультразвуковые данные процесса могут быть легко доступны и совместно, как CSV файл.
Hielscher Ultrasonics стремится предоставить вам передовые технологии для облегчения и улучшения вашей исследовательской работы!