Фрагментация альфа-синуклеина с помощью ультразвукового аппарата VialTweeter

В научных исследованиях фибриллы и ленты α-синуклеина фрагментируются для получения более мелких фрагментов фибрилл или даже отдельных белковых молекул, которые могут быть более легко проанализированы с помощью различных экспериментальных методов. Ультразвуковой аппарат VialTweeter является одним из наиболее часто используемых ультразвуковых аппаратов для эффективной и надежной фрагментации альфа-синуклеина.

α-синуклеин в научных исследованиях

Альфа-синуклеиновые фибриллы представляют собой белковые агрегаты, которые тесно связаны с нейродегенеративными расстройствами, такими как болезнь Паркинсона, и некоторыми формами деменции, включая деменцию с тельцами Леви. Исследования, посвященные альфа-синуклеиновым фибриллам, направлены на понимание их роли в прогрессировании заболевания и разработку потенциальных терапевтических вмешательств. Расщепляя фибриллы альфа-синуклеина на более мелкие фрагменты, исследователи могут исследовать их специфические структурные особенности. Например, фрагментация фибрилл альфа-синуклеина позволяет исследователям исследовать их взаимодействие с другими молекулами, такими как белки, липиды или малые молекулы. Производя более мелкие фрагменты, можно более эффективно исследовать сайты связывания и аффинитет к этим взаимодействующим партнерам. Фрибриллы и ленты меньшего размера α-Syn также могут проявлять измененную токсичность и биохимические эффекты. Поэтому решающее значение имеет надежный и эффективный метод фрагментации, который дает воспроизводимые результаты при быстрой и простой обработке образца.
Ультразвуковая фрагментация альфа-сина: Ультразвуковой аппарат VialTweeter представляет собой установленную ультразвуковую систему подготовки образцов, которая обрабатывает ультразвуком до 10 флаконов одновременно в одних и тех же условиях. Программируемые настройки позволяют легко и быстро проводить одни и те же эксперименты, что дает высоконадежные и воспроизводимые результаты по фрагментации альфа-синуклеиновой фибриллы.

Подготовка образцов α-синуклеина с помощью ультразвукового аппарата

Один из подходов к изучению фибрилл альфа-синуклеина включает их экстракцию и фрагментацию с помощью таких методов, как ультразвуковая обработка. Ультразвуковая обработка – это процесс, в котором используются высокоинтенсивные низкочастотные ультразвуковые волны для разрушения и разрушения белковых агрегатов, что приводит к высвобождению более мелких фибрилл или отдельных белковых молекул. Ультразвуковой аппарат VialTweeter является широко используемым устройством в исследованиях, связанных с α-синуклеином.

В многочисленных исследованиях описаны точные протоколы подготовки образцов для ультразвуковой обработки альфа-синуклеиновых фибрилл, в которых используется Hielscher VialTweeter для эффективной и надежной фрагментации α-синуклеиновых фибрил. Фрагментируя фибриллы ультразвуком, исследователи могут анализировать полученные продукты и изучать их структуру, токсичность и взаимодействие с другими молекулами. Это исследование дает важное представление о механизмах, лежащих в основе нейродегенерации, и потенциально выявляет новые терапевтические мишени. Хорошо зарекомендовавшие себя протоколы ультразвуковой обработки α-синуклеина с использованием ультразвукового аппарата VialTweeter позволяют получать надежные и воспроизводимые результаты.

Верхние изображения: нефрагментированные фибриллы альфа-синуклеинаИзображения внизу: Ультразвуковая фрагментация альфа-синуклеиновых фибрилл с помощью ультразвукового аппарата VialTweeter(исследование и изображения: ©Dieriks et al., 2022)

Ультразвуковая фрагментация фибрилл α-синуклеина – Протоколы

Поскольку многие исследователи используют ультразвуковой аппарат VialTweeter в качестве предпочтительного метода фрагментации для получения однородных α-синуклеиновых фибрилловых фрагментов, установленные протоколы легко доступны. Ниже вы можете найти несколько примерных протоколов фрагментации.
 

 
Подготовка семян ClearTau: Фибриллы ClearTau разбавляли до 10 мкМ в dH2O и обрабатывали ультразвуком с амплитудой 70 % в течение 50 с с включением 1 с циклом выключения в трубке с помощью ультразвукового аппарата UP200St с VialTweeter. Семена были охарактеризованы с помощью электронной микроскопии.
Измерение флуоресценции ThS: Фибриллы ClearTau разбавляли до 2,5 мкМ в dH2O и обрабатывали ультразвуком с амплитудой 70 % в течение 50 с с включением 1 с выключенным циклом в трубке с использованием UP200St с VialTweeter. В качестве контроля использовали полноразмерный мономер Tau 4R2N размером 2,5 мкМ. В реакцию объемом 100 мкл добавляли 100 мкл ThS (10 мкМ), что давало конечные концентрации белка 1,25 мкМ. Флуоресценцию ThS в одной точке измеряли с помощью 96 хорошо прозрачных нижних планшетов, установленных в микропланшетном ридоре FLUOstar Omega, с возбуждением на длине волны 445 нм и излучением на длине волны 485 нм.
(ср. Лиморенко и др., 2023)
 
Равномерная длина α-синуклеина с помощью ультразвуковой обработки: Длину гетерогенности фибрилл и лент α-syn уменьшали путем ультразвуковой обработки в течение 20 мин на льду в 2-мл пробирках Эппендорфа в VialTweeter с амплитудой 75% импульсов 0,5 с.
(см. Bousset et al., 2013)
 
Проводился контроль качества человеческого рекомбинантного мономера WT или S129A a-Syn и генерируемых ими фибриллярных полиморфов, а также a-Syn 1–110. Впоследствии фибриллярные полиморфы фрагментировали с помощью ультразвука в течение 20 мин в 2-мл пробирках Эппендорфа в ультразвуковом аппарате VialTweeter для получения фибриллярных частиц со средним размером 42–52 нм, пригодных для эндоцитоза.
(ср. Шривастава и др., 2020)
 

Характеристика пяти фибриллярных полиморфов α-Syn. (A) Показаны просвечивающие электронные микрофотографии отрицательно окрашенных α-Syn фибриллярных полиморфов фибрилл, лент, фибрилл-91, фибрилл-65 и фибрилл-110 до (верхняя полоса) и после фрагментации с помощью VialTweeter (нижняя полоса). (B) Показано распределение по длине фрагментированных фибриллярных полиморфов. Указано количество (n) фибриллярных сборок, из которых были получены гистограммы.(исследование и изображения: Shrivastava et al., 2020)

 
Фибриллы α-Syn фрагментировали ультразвуком в течение 20 мин в пробирках Эппендорфа объемом 2 мл в VialTweeter для получения фибриллярных частиц со средним размером 42–52 нм, оцененным с помощью ПЭМ-анализа.
(ср. Негрини и др., 2022)
 
Ресуспендированные фибриллы91 (в PBS) фрагментировали перед добавлением в клеточные культуры методом ультразвука в течение 20 мин в пробирках Eppendorf объемом 2 мл с использованием ультразвукового аппарата Vial Tweeter, аликвотировали, мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили до использования при -80 °C.
(ср. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter и лабораторные ультразвуковики для фрагментации α-syn

Компания Hielscher Ultrasonics признана во всем мире как ведущий производитель ультразвукаторов. Наши ультразвуковые аппараты, которым доверяют и которые хорошо зарекомендовали себя в крупных исследовательских лабораториях по всему миру, обеспечивают непревзойденное качество и производительность для критически важных экспериментов.
С Hielscher VialTweeter и любым другим ультразвуковым аппаратом Hielscher вы ощутите непревзойденный комфорт пользователя, поскольку они тщательно спроектированы для воспроизводимых результатов, простоты использования и бесперебойной работы. Благодаря функциям автоматической записи данных вы можете сосредоточиться на своих исследованиях, в то время как наши ультразвуковые аппараты тщательно записывают важные данные для воспроизводимости и точности.
Достигайте стабильных и воспроизводимых результатов с уверенностью!
Наши ультразвуковые аппараты спроектированы и изготовлены в Германии. Немецкая точность и высочайшее инженерное качество обеспечивают надежную и точную подготовку образцов, таких как фрагментация альфа-синуклеиновых фибрилл каждый раз. Больше не нужно беспокоиться о противоречивых результатах – наша ультразвуковая технология гарантирует, что ваши исследования останутся на переднем крае научного прогресса.
Но это не всё! Наше стремление к совершенству выходит за рамки нашей продукции. Мы гордимся нашим исключительным обслуживанием клиентов, предоставляя экспертную поддержку для решения любых ваших вопросов или проблем. Наша преданная своему делу команда готова помочь вам на каждом этапе вашего исследовательского пути, гарантируя, что вы получите максимальную отдачу от наших ультразвуковых аппаратов.
Выбирайте инновации, надежность и исключительный пользовательский опыт – выбирайте наши лабораторные ультразвуковые аппараты, такие как VialTweeter для фрагментации альфа-синуклеинового фибрилла. Воспользуйтесь уже разработанными протоколами и присоединяйтесь к рядам ведущих исследователей, которые доверяют нашей технологии в своих критически важных исследованиях. Поднимите свои исследования на новый уровень и откройте для себя новые горизонты в исследованиях деменции и нейродегенеративных заболеваний с помощью наших современных ультразвуковых аппаратов.

Проектирование, производство и консалтинг – Качество «Сделано в Германии»

Ультразвуковые аппараты Hielscher хорошо известны своими высочайшими стандартами качества и дизайна. Надежность и простота в эксплуатации позволяют без проблем интегрировать наши ультразвуковые аппараты в промышленные объекты. Ультразвуковые аппараты Hielscher легко справляются с суровыми условиями и требовательными условиями окружающей среды.

Hielscher Ultrasonics является компанией, сертифицированной по стандарту ISO, и уделяет особое внимание высокопроизводительным ультразвуковым аппаратам, отличающимся самыми современными технологиями и удобством в использовании. Конечно, ультразвуковые аппараты Hielscher соответствуют требованиям CE и соответствуют требованиям UL, CSA и RoHs.
 
В таблице ниже приведена приблизительная производительность обработки наших лабораторных ультразвуковых аппаратов: