Ультразвуковойлиз образцов дрозофилы меланогастера

Drosophila меланогастер широко используется в лабораториях в качестве модели организма. Поэтому необходимо часто проводить доаналитическую подготовку таких этапов, как лиз, нарушение работы клеток, извлечение белка и стрижка ДНК образцов дрозофилы меланогастер. Ультразвуковые dismembrators надежны и эффективны и могут использоваться для выполнения различных задач, таких как лиз, извлечение белка или фрагментации ДНК в покое только путем корректировки ультразвуковых параметров процесса. Ультразвуковые гомогенизаторы, таким образом, являются гибкими инструментами с широким спектром применений.

Ультразвуковой лиза и извлечения белка

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Лиз, клеточная solubilization, гомогенизация тканей и удаление белка являются типичными задачами для ультразвуковых dismembrators в биологических лабораториях. Ультразвуковые dismembrators и разрушители клеток хорошо подходят для гомогенизации тканей животных, насекомых (например, Drosophila melanogaster, C. elegans) или образцов растений. Последующим применением ультразвука является лиз клеточных суспензий и гранул, а также извлечения внутриклеточных белков.
Ультразвуковой лиз и экстракция белка являются высоко надежными и воспроизводимыми процессами, которые могут выполняться на основе установленных протоколов. Поскольку интенсивность ультразвукового процесса может быть точно скорректирована с помощью параметров звуковой связи, таких как амплитуда, цикл / импульсный режим, температура и объем образца, как только проверенные протоколы могут быть повторены с тем же результатом снова и снова.

Преимущества ультразвуковой подготовки образцов

  • высокоэффективный
  • Регулируемый к конкретному выборочных материалов
  • Подходит для любого объема
  • Не термическая обработка
  • воспроизводимые результаты
  • Простой и безопасный

Ультразвуковая ДНК и фрагментация РНК

После клеточного лиза и извлечения белка, распространенным необходимым шагом в подготовке образца является стрижка и фрагментация ДНК, РНК и хроматина, например, до иммунопреципиентации хроматина (ChIP). Фрагментация ДНК и РНК может быть надежно достигнута путем разрыва ковалентных связей, которые держат ДНК вместе физическими силами. Используя физические стрижки, такие как sonication, сначала нити ДНК сломаны, затем ДНК фрагментирована на более мелкие кусочки.
Ультразвуковая фрагментация ДНК является надежной и эффективной при стрижке ДНК до целевой длины, например, 500bp (базовые пары). Основными преимуществами ультразвуковой фрагментации ДНК являются точный контроль параметров и интенсивности ультразвукового процесса. Параметры ультразвукового процесса могут быть скорректированы путем настройки интенсивности звуковой обработки, циклов и времени точно. Это позволяет создавать желаемые размеры ДНК, а целевая длина ДНК может быть надежно произведена, а также воспроизведена. Ультразвуковое стрижка ДНК также идеально подходит для создания фрагментов ДНК высокого молекулярного веса.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ультразвуковой дезинтегратор Uf200 ः т с 2 мм микротип S26d2 для sonication образцов Drosophila

Запрос информации




Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


Протоколы для ультразвукового лиза Drosophila меланогастер

Ниже вы можете найти различные протоколы для ультрасонически-помощь лиза, извлечения белка, и ДНК или хроматина фрагментации образцов дрозофилы.

Ультразвуковой лиз для перекрестного связывания иммунопреципиентации (CLIP) Анализ

Анализ CLIP был выполнен, как сообщалось ранее с некоторыми изменениями. Приблизительно 20 мг яичников от 0 до 1-дневного дикого типа самок были УФ-перекрестными (3 × 2000 г./см2), гомогенизированными на льду в буфере 1 мл RCB (50 мМ HEPES pH 7.4, 200 мМм NaCl, 2,5 мм MgCl2, 0,1% Triton X-100, 250 мм сахароза, 1 мМ ДТТ, 1× EDTA-бесплатные полные ингибиторы протеазы, 1 мМ ПМСФ) дополнены 300 U RNAseOUT и помещены на лед в течение 30 мин. Гомогенат был sonicated на льду, на 80% мощности, пять раз в 20 с очередей с 60 с отдыха между использованием Hielscher ультразвуковой процессор UP100H (100 Вт, 30 кГц) и центрифугированные (16000 × в течение 5 мин при 4 градусах Цельсия). Растворимый экстракт был предварительно заклеен 20 йл протеин-G dynabeads в течение 20 мин при 4 градусов по Цельсию. После удаления образцов для иммуноблоттинга и количественной оценки ввода РНК (1%), HP1 был иммунопреципиентирован анти-HP1 9A9 антитела из 450 мкл предварительной очистки экстракта инкубации в течение 4 ч с 50 йл белка-G dynabeads. Иммунопрецилитаты промыли 4 раза с помощью RCB. Чтобы elute иммунопрофилированных РНК, гранулированные бусы были вареные в 100 зл UltraPure DEPC-обработанной воды в течение 5 мин. 900 ЗЛ Зиязол реагент был добавлен в супернатант, восстановленный для подготовки РНК. Очищенная РНК использовалась в качестве шаблона для синтеза cDNA с использованием олиго ДТ, случайных шестиугольников и обратной транскриптазы SuperScript III в соответствии с протоколом производителя.
(Кассале и др. 2019)

Ультразвуковойлиз для анализа иммунопреципиента хроматина

Хроматин иммунопреципиентация была выполнена в соответствии с методом, описанным Menet с незначительными изменениями. Приблизительно 20 мг яичников от 0 до 1-дневного дикого типа самок были гомогенизированы в 1 мл буфера НЭБ (10 мМ HEPES-Na при рН 8,0, 10 мМ НаКл, 0,1 мМ ЕГТА-На при рН 8, 0,5 мм ЭДТА-На при рН 8, 1 мМ ДТТ, 0,5% НП-40, 0,5 мм спермидин, 0,15 мм спермин, 1× ЭДТА- бесплатные полные ингибиторы протеазы) с гомогенизатором/ погружением рассеяется 1 мин (при 3000 об/мин). Гомогенат был перенесен в предварительно охлажденный стеклянный дунс и 15 полных штрихов были применены с жесткой пестик. Свободные ядра затем центрифугированы при 6000xg в течение 10 мин при 4 градусах Цельсия. Ядра,содержащие гранулы были повторно использованы в 1 мл НЭБ и центрифугированы в 20000 году × г в течение 20 мин на градиент сахарозы (0,65 мл 1,6 М сахарозы в НЭБ, 0,35 мл 0,8 м сахарозы в НЭБ). Гранулы были повторно использованы в 1 мл НЭБ и формальдегида до конечной концентрации 1%. Ядра были взаимосвязаны в течение 10 минут при комнатной температуре и затухали, добавив 1/10 vol 1.375 M глицина. Ядра были собраны центрифугации на 6000 × в течение 5 мин. Ядра промыли дважды в 1 мл НЭБ и повторно засыпыли в 1 мл лиза буфера (15 мМ HEPES-Na при рН 7,6, 140 мМ. NaCl, 0,5 мМ ЕГТА, 1 мМ ЭДТА при рН 8, 1% Тритон X-100, 0,5 мМТ, 0,1% Na Deoxycholate, 0,1% SDS, 0,5% N-lauroylsarcosine и 1× EDTA-бесплатные полные proteases). Ядра были sonicated с помощью ультразвукового процессора Hielscher UP100H (100 Вт, 30 кГц) шесть раз по 20 с и 1 мин на льду. Соникированные ядра центрифугировали при 13000 × в течение 4 мин при 4 градусах Цельсия. Большинство sonicated хроматина было от 500 до 1000 базовых пар (bp) в длину. Для каждой иммунопреципиентации, 15 мкг хроматина инкубируется в присутствии 10 мкг моноклональных антител HP1 9A9 (3 ч при 4 градусов по Цельсию в вращающемся колесе). Затем было добавлено 50 мкл белка динабейдс G, и инкубация продолжалась всю ночь при 4 градусах Цельсия. Супернатанты были отброшены и образцы были вымыты дважды в Lysis Buffer (каждая стирка 15 мин при 4 градусов по Цельсию) и дважды в TE Buffer (1 мМ EDTA, 10 мМ3 TrisHCl при рН 8). Хроматин был eluted из бисера в два шага; первый в 100 мкл Eluition Buffer 1 (10 мМ EDTA, 1% SDS, 50 мМ TrisHCl при рН 8) при 65 градусов по Цельсию в течение 15 минут, а затем центрифугации и восстановления супернатанта. Бисерный материал был повторно извлечен в 100 мкл TE и 0,67% SDS. Комбинированный элуат (200 мкл) инкубировался на ночь при 65 градусов по Цельсию, чтобы обратить вспять перекрестные связи и обработан 50 мкг/мл RNaseA в течение 15 мин при 65 градусов по Цельсию и 500 мкг/мл протеиназы K в течение 3 ч при 65 градусов по Цельсию. Образцы были фенол-хлороформ извлечены и этанола осаждается. ДНК была повторно использована в 25 мкл воды. Для максимизации молекулярного анализа с иммунопрофилированных ДНК, гены-кандидаты были усилены парами через оптимизированный протокол дуплекс-ПЦР с помощью двух различных наборов грунтовок, имеющих аналогичные температуры плавления в одной реакции.
(Casale et al. 2019)

UP200St TD_CupHorn для косвенной sonication образцов

UP200St TD_CupHorn для косвенного звукового анализа образцов, таких как ДНК и стрижка хроматина

Высокая производительность ультразвуковых клеточных разрушителей для биологических образцов

Hielscher Ultrasonics является вашим опытным партнером, когда дело доходит до высоков производительности ультразвуковых для нарушения клеток, лиза, извлечения белка, ДНК, РНК и хроматина фрагментации, а также другие доаналитические шаги подготовки образца. Предлагая полный портфель ультразвуковых лабораторных гомогенизаторов и единиц подготовки образцов, Hielscher имеет идеальное ультразвуковое устройство для вашего биологического применения и требований.
Зонд типа insonifier UP200St для лизисаКлассический ультразвуковой зонд типа с микро-наконечником, таких как UP200St (200W; см. изображение слева) или один из ультразвуковых единиц подготовки образца VialTweeter или UP200ST_TD_CupHorn с VialHolder являются любимыми моделями в научно-исследовательских и аналитических лабораториях. Классический ультразвуковой зонд идеально подходит, когда подготовить меньше образцов должны быть лисированы, извлечены или фрагментированы. Единицы подготовки образца VialTweeter и UP200St_TD_CupHorn позволяют одновременное звуковое до 10 или 5 флаконов, соответственно.
Если необходимо обрабатывать высокие выборочных номера (например, пластины 96-колодец, пластины микротитров и т.д.), UIP400MTP является идеальной настройкой sonication. UIP400MTP функционирует как большой стакан, который наполнен водой и имеет достаточно места для хранения микро-хорошо пластин. Работает на 400 Вт мощный ультразвуковой процессор, UIP400MTP обеспечивает очень равномерной и интенсивной sonication из нескольких хорошо пластин для того, чтобы нарушить клетки, листы лиза, solubilize гранулы, экстракт белков или ДНК стрижки.

Точный контроль с помощью интеллектуального программного обеспечения

промышленные процессоры Хилшера в серии HDT могут быть удобными и удобно управлять с помощью пульта дистанционного управления браузера.Все звуковые решения Hielscher от 200 Вт вверх оснащены цифровым цветным сенсорным экраном и интеллектуальным программным обеспечением. С помощью интеллектуального протокола данных все ультразвуковые параметры процесса автоматически сохраняются в качестве файла CSV на встроенной SD-карте, как только ультразвуковой датчик запущен. Это делает исследования и протоколы гораздо более удобными. После звуковых испытаний или подготовки образца, вы можете просто просмотреть параметры sonication каждого звукового запуска и сравнить их.
Через интуитивно понятное меню, многочисленные параметры могут быть заданы до sonication: Например, для контроля температуры в образце и для предотвращения его тепловой деградации, верхний предел температуры образца может быть установлен. Подключенный датчик температуры, который поставляется с ультразвуковым устройством, дает ультразвуковой процессор обратной связи о фактической температуре звуковой связи. Когда верхний предел температуры достигнут, ультразвуковое устройство останавливается до тех пор, пока нижний предел набора ∆T не будет достигнут и автоматически начнет звуковой снова.
Если требуется sonication с определенным входом энергии, вы можете предустановить окончательную ультразвуковую энергию звукового запуска. Конечно, ультразвуковая пульсация и цикл режим может быть индивидуально установлен, тоже.
Чтобы повторно использовать наиболее успешные параметры звуковой передачи, вы можете сохранить различные режимы sonication (например, время звуковой передачи, интенсивность, режим цикла и т.д.) в качестве заранее установленных режимов, так что они могут быть легкими и быстро запущен снова.
Для большего удобства работы все цифровые ультразвуковые устройства могут управляться с помощью пульта дистанционного управления браузера в любом обычном браузере (например, InternetExplorer, Safari, Chrome и т.д.). LAN-соединение является простой настройкой plug-n-play и не требует дополнительной установки программного обеспечения.
Мы в Hielscher знаем, что успешная соника биологических образцов требует точности и повторяемости. Поэтому мы разработали наши ультразвуковые устройства как интеллектуальные устройства со всеми функциями, которые обеспечивают эффективную, надежную, воспроизводимую и удобную подготовку образцов.

Свяжитесь с нами сейчас и расскажите нам о ваших биологических образцах и необходимых подготовительных шагах. Мы предложим Вам наиболее подходящее ультразвуковое устройство подготовки образцов и помогут Вам с дополнительной информацией, такой как протоколы и рекомендации.

Приведенная ниже таблица дает вам представление о приблизительной вычислительной мощности наших ультразвуковых систем от ультразвуковых микро-подсказок и классических ультразвуковых гомогенизаторов до ультразвуковых систем MultiSample для удобной и надежной подготовки многочисленных образцов:

Объем партии Скорость потока Рекомендуемые устройства
96-хорошо / микротитр пластин не доступно UIP400MTP
10 флаконов от 0,5 до 1,5 мЛ не доступно VialTweeter на UP200St
CupHorn для косвенной звуковой связи, например, до 5 флаконов не доступно UP200ST_TD_CupHorn
0от 0,01 до 250 мл От 5 до 100 мл/мин UP50H
0от 0,01 до 500 мл От 10 до 200 мл / мин UP100H
0от 0,02 до 1L От 20 до 400 мл / мин Uf200 ः т / UP200St
От 10 до 2000 мл От 20 до 400 мл / мин Uf200 ः т, UP400St
0От 0,25 до 5L 0От 0,05 до 1л/мин UIP500hdT

Свяжитесь с нами! / Спросите нас!

Запросить дополнительную информацию

Пожалуйста, используйте форму ниже, чтобы запросить дополнительную информацию об ультразвуковых процессорах, приложениях и цене. Мы будем рады обсудить ваш процесс с Вами и предложить вам ультразвуковую систему, отвечая вашим требованиям!









Пожалуйста, обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Ультразвуковой многопрофийный подготовительный блок VialTweeter позволяет одновременное звуковое околение до 10 флаконов. С зажимом на устройстве VialPress, до 4 дополнительных трубок могут быть прижаты к передней для интенсивного sonication.

Литература / Ссылки



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Высокая производительность ультразвуковой! Ассортимент продукции Hielscher охватывает весь спектр от компактного лабораторного ультразвукового устройства над скамейками до полностью промышленных ультразвуковых систем.


Полезные сведения

Метаболомика

Метаболомика является изучение малых молекул, известных как метаболиты, присутствующие в клетках, биофлюидов, тканей или организмов. Эти небольшие молекулы и их взаимодействия в биологической системе суммируются под зонтичным термином "метаболом", а область исследований называется метаболомикой. Метаболомные исследования тесно связаны с быстро развивающейся областью точной медицины. Понимание метаболомы и ее связи с различными заболеваниями помогает разрабатывать стратегии профилактики заболеваний и клинической помощи в то время как индивидуальная изменчивость окружающей среды, образа жизни, генетики и молекулярного фенотипа. Для высвобождения метаболитных молекул из клеток ультразвук часто используется в биологических лабораториях для предварительно аналитического подготовки образца, такого как нарушение работы клеток, лиз и извлечение белков, липидов и других молекул.