Ультразвуковой лизис E. Coli

  • Бактерии E. coli являются наиболее часто используемыми бактериями в микробиологии и биотехнологии.
  • Ультразвуковые клеточные разрушители обеспечивают надежные и воспроизводимые результаты для лизиса E. coli.
  • Интенсивные, но точно контролируемые кавитационные и сдвиговые силы приводят к полному разрушению и высоким выходам экстракции (например, белкам, ДНК).

Почему ультразвуковое разрушение клеток кишечной палочки является предпочтительным методом?

Ультразвуковые гомогенизаторы или ультразвуковые аппараты зондового типа предлагают несколько преимуществ для лизиса кишечной палочки, поскольку интенсивный ультразвук эффективно разрушает клеточные стенки и мембраны. Ультразвуковые аппараты зондового типа широко используются для лизиса кишечной палочки по следующим причинам:

  • Эффективное разрушение клеточных стенок: Кишечная палочка имеет полужесткую клеточную стенку, состоящую из пептидогликана, которую может быть трудно разрушить с помощью традиционных методов лизиса. Ультразвуковой аппарат зондового типа генерирует интенсивные ультразвуковые волны, которые создают кавитационные пузырьки в жидкости, окружающей клетки. Когда эти пузырьки разрушаются, они генерируют высокоскоростные струи жидкости и ударные волны, которые приводят к механическому разрушению клеточных стенок, эффективно высвобождая клеточное содержимое, такое как биомолекулы.
  • Повышенная проникающая способность: Ультразвуковые волны, генерируемые зондом / сонотродом, могут проникать глубоко в образец, достигая большего количества клеток E. coli и обрабатывая их равномерно. Это помогает обеспечить более равномерный лизис по всему образцу, что приводит к более высокой эффективности разрушения клеток.
  • Сокращение времени обработки: Энергия, доставляемая ультразвуковым аппаратом зондового типа, является высококонцентрированной и локализованной, что приводит к быстрому и эффективному лизису клеток. По сравнению с другими методами, такими как взбивание шариков или ферментативный лизис, обработка ультразвуком может достичь лизиса кишечной палочки в течение нескольких минут или даже секунд. В то время как многие альтернативные методы, такие как замораживание-оттаивание, требуют нескольких раундов обработки, ультразвуковой лизис открывает клетки на одном этапе процесса.
  • Контроль температуры: Современные ультразвуковые аппараты оснащены датчиками температуры и интеллектуальным программным обеспечением, которое позволяет установить максимальную температуру процесса. Ультразвуковой аппарат автоматически приостанавливается при достижении предельной температуры и запускает процесс ультразвуковой обработки при достижении заданной температуры. Охлаждение образцов в ледяной бане является простым методом поддержания низкой температуры образца и предотвращения деградации, вызванной нагревом.
  • Масштабируемость: Ультразвуковые аппараты зондового типа доступны в различных размерах, от портативных устройств до крупномасштабных промышленных моделей. Это делает их пригодными для обработки небольших объемов в лаборатории или расширения для более крупных применений биообработки, например, производства вакцин или биосинтеза молекул.
  • Многосторонность: Ультразвуковые аппараты могут использоваться для различных применений, помимо лизиса клеток, таких как сдвиг ДНК, экстракция белка, гомогенизация тканей, дисперсия наночастиц и эмульгирование. Таким образом, инвестирование в ультразвуковой аппарат зондового типа обеспечивает универсальность в исследовательских или промышленных условиях.
  • Ультразвуковые аппараты зондового типа, такие как UP200St, являются надежными тканевыми гомогенизаторами и дробилками клеток, поэтому широко используются для подготовки образцов в генетике, например, для лизиса E.coli

    Экстракция белка из клеток E.coli эффективно выполняется с помощью ультразвуковой зонд UP200St

    Ультразвуковой аппарат зондового типа предлагает много преимуществ для лизиса кишечной палочки. Надежный и точный контроль параметров ультразвукового процесса позволяет оптимизировать рабочие параметры, такие как мощность, продолжительность и обработка образцов, для достижения желаемых результатов.
     

    Запрос информации




    Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


     

    В этом учебном пособии объясняется, какой тип ультразвукового аппарата лучше всего подходит для ваших задач пробоподготовки, таких как лизис, разрушение клеток, выделение белка, фрагментация ДНК и РНК в лабораториях, анализ и исследования. Выберите идеальный тип ультразвукового аппарата для вашего применения, объем образца, количество образцов и пропускную способность. У Hielscher Ultrasonics есть идеальный ультразвуковой гомогенизатор для вас!

    Как найти идеальный ультразвуковой аппарат для разрушения клеток и экстракции белка в науке и анализе

    Миниатюра видео

    Ультразвуковая фрагментация ДНК часто используется в качестве этапа подготовки образцов в секвенировании следующего поколения (NGS)

    Электрофоретические анализы геномной ДНК E. coli EDL933, подвергнутые ультразвуку от 0 до 15 минут. L обозначает лестницу ДНК.
    (исследование и изображение: ©Basselet et al. 2008)

    Разрушение клеток с использованием ультразвуковой кавитации

    Ультразвуковые гомогенизаторы зондового типа работают с частотой около 20 000 циклов в секунду (при частоте 20 кГц) и вызывают кавитацию в жидкостях или суспензиях. Акустическая кавитация: микроскопические области вакуумного давления и высоких температур, которые разрывают клетки на части. Хотя температура может достигать нескольких тысяч градусов по Цельсию, объемы кавитации настолько малы, что не нагревают процесс значительно. Ультразвук, создаваемый акустической кавитацией и сдвиговыми силами, перфорирует или разрушает клеточную мембрану бактериальных клеток, таких как кишечная палочка. Ультразвуковые аппараты Hielscher позволяют точно контролировать параметры процесса, такие как интенсивность ультразвука, амплитуда, потребляемая энергия и температура. Таким образом, процесс ультразвукового лизиса может быть оптимально настроен в соответствии с типом клеток, клеточной культурой и целью процесса.
     

    Преимущества ультразвукового лизиса

    • точный контроль лизиса (интенсивность, амплитуда, температура)
    • Надежные, воспроизводимые результаты
    • оптимальная адаптация к конкретным образцам
    • контроль температуры
    • для очень маленьких и очень больших образцов (мкл до литров)
    • Чисто механическая обработка
    • Удобная и безопасная эксплуатация
    • линейное масштабирование от лаборатории к производству
    Ультразвуковое устройство VialTweeter допускает одновременную подготовку проб до 10 флаконов в тех же условиях. (Нажмите, чтобы увеличить!)

    VialTweeter для ультразвукового лизиса

    Запрос информации




    Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


    Ультразвуковой гомогенизатор по сравнению с другими методами лизиса

    В то время как химический и ферментативный лизис может быть проблематичным – поскольку химический лизис может изменять структуры белка и вводить проблемы очистки, а ферментативный лизис требует длительных инкубационных периодов и не воспроизводится – Ультразвуковое разрушение является сложным быстрым методом разрушения клеток.
    Ультразвуковой лизис основан только на механических силах. Никакие химические вещества не добавляются, обработка ультразвуком разрушает клеточную стенку силами сдвига. Химический лизис может изменить структуру белка и создать проблемы с очисткой. Ферментативное нарушение требует длительного времени инкубации и не воспроизводимо. Ультразвуковое разрушение клеток бактерий E.coli является быстрым, простым, надежным и воспроизводимым. Вот почему ультразвуковые аппараты Hielscher используются в биологических и биохимических лабораториях по всему миру для подготовки образцов, преаналлитиков, диагонистики in vitro и многообразных анализов.

    Общие рекомендации по ультразвуковому лизису

    Ультразвук является наиболее популярным методом лизирования очень малых, средних и больших количеств клеточных суспензий – от пико-литров до 100 л / ч (с использованием ультразвуковой проточной ячейки). Клетки лизируются жидкостным сдвигом и кавитацией. ДНК также подвергается стрижке во время обработки ультразвуком, поэтому нет необходимости добавлять ДНКазу в клеточную суспензию.
     

    Контроль температуры во время ультразвукового лизиса E.coli
    Ультразвуковой разрушитель клеток UP100H (100 Вт) для разрушения клеток и экстракции растительных соединений.Предварительным охлаждением образца и хранением образца во время обработки ультразвуком на льду можно легко предотвратить термическое разложение образца образца.
    В идеале образцы должны оставаться ледяными во время лизиса, но для большинства образцов достаточно, если температура не поднимается выше температуры культуры или источника ткани. Поэтому рекомендуется держать суспензию на льду и обрабатывать ультразвуком несколькими короткими ультразвуковыми импульсами по 5-10 сек и паузами 10-30 сек. Во время пауз тепло может рассеяться, чтобы снова установить низкую температуру. Для более крупных образцов ячеек доступны различные проточные реакторы с охлаждающими рубашками.
    Читайте здесь подробные советы и рекомендации для успешного ультразвукового лизиса!

    Протоколы ультразвукового получения лизатов кишечной палочки

    Исследователи используют ультразвуковые гомогенизаторы Hielscher для разрушения клеток E.coli. Ниже вы можете найти различные проверенные и проверенные протоколы лизиса E.coli с использованием ультразвуковых гомогенизаторов Hielscher для различных применений, связанных с кишечной палочкой.
     

    В этом видеоклипе показан ультразвуковой гомогенизатор Hielscher UP100H, ультразвуковой аппарат, широко используемый для подготовки образцов в лабораториях.

    Ультразвуковой гомогенизатор UP100H

    Миниатюра видео

    Рост клеток, сшивание и получение экстрактов клеток E. coli с помощью ультразвука

    Для SeqA и РНК-полимеразы ChIP-Chip E. coli MG1655 или MG1655 ΔseqA выращивали при 37 ° C до OD600 около 0,15 в 50 мл LB (+ 0,2% глюкозы) до добавления 27 мкл формальдегида (37%) на мл среды (конечная концентрация 1%). Сшивание проводили при медленном встряхивании (100 об / мин) при комнатной температуре в течение 20 мин с последующим гашением 10 мл 2,5 М глицина (конечная концентрация 0,5 М). Для экспериментов с тепловым шоком E. coli MG1655 выращивали в 65 мл среды LB при 30 ° C до OD600 около 0,3. Затем 30 мл культуры переносили в предварительно подогретую колбу при 43°С, а оставшуюся часть выдерживали при 30°С. Сшивание и закалка происходили так, как описано выше, за исключением того, что ячейки выдерживали при 30 или 43 ° C в течение 5 мин перед дальнейшим медленным встряхиванием при комнатной температуре. Клетки собирали центрифугированием и дважды промывали холодным ТБС (рН 7,5). После ресуспендирования в 1 мл буфера для лизиса (10 мМ Tris (рН 8,0), 20% сахарозы, 50 мМ NaCl, 10 мМ ЭДТА, 10 мг / мл лизоцима) и инкубации при 37 ° C в течение 30 минут с последующим добавлением 4 мл IP-буфера клетки обрабатывали ультразвуком на льду с 12-кратными 30-секундными и 30-секундными перерывами с использованием ультразвукового процессора Hielscher UP400St при 100% настройке мощности. После центрифугирования в течение 10 мин при 9000 г 800 мкл аликвот надосадочной жидкости хранили при -20°С. (Вальдмингхаус 2010)
     

    Перепроизводство и очистка ферментов с помощью ультразвукового зонда

    Ультразвуковой аппарат UP100H является лабораторным гомогенизатором, часто используемым для пробоподготовки пластин клеточных культур.Для перепроизводства белков, меченных декагистидином (His10), E. coli BL21 (DE3) трансформировали с помощью конструкций pET19b. Ночную предкультуру собирали центрифугированием, а 1% использовали для инокуляции культуры экспрессии. Клетки, несущие pET19mgtB, выращивали при 22 ° C до оптической плотности при 600 нм (OD600) 0,7. Культуру переносили до 17°С и индуцировали 100 мкМ IPTG. Через 16 ч культуру собирали центрифугированием при 7 500 × г при 4°С. Клетки были ресуспендированы в 50 мМ фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) с 0,3 М NaCl при pH 7,4 и разрушены ультразвуком с помощью сонотрода S2 с микронаконечником на ультразвуковом аппарате Hielscher UP200St с циклом 0,5 и амплитудой 75%.
    Перепроизводство декастистидинового меченного GtfC индуцировали при 37 ° С при OD600 0,6 при 100 мкМ IPTG. Затем клетки инкубировали в течение 4 ч, собирали и лизировали, как указано выше для MgtB.
    Сырые клеточные экстракты центрифугировали при 15 000 × г и 4 ° C для осаждения клеточного мусора. Осветленные экстракты загружали на колонки HisTrap FF Crude объемом 1 мл с использованием системы ÄKTAprime Plus. Ферменты были очищены в соответствии с протоколом производителя для градиентного элюирования белков, меченных His. Элюированные белковые растворы дважды диализировали против 1000 объемов 50 мМ PBS, рН 7,4, с 0,3 М NaCl при 4 ° C. Очистка была проанализирована с помощью 12% SDS-PAGE. Концентрацию белка определяли по методу Брэдфорда с использованием Roti-Quant. (Rabausch et al. 2013)
     

    Ультразвуковая экстракция белка из бактерий E. coli
    Интересный белок-приманка (в данном случае MTV1 Arabidopsis thaliana) слит с тегом GST и экспрессируется в клетках BL21 Escherichia coli (E. coli).

    1. Возьмите по одной грануле GST-MTV1 и GST (что соответствует 50 мл бактериальной культуры) и ресуспендируйте каждую в 2,5 мл буфера для холодной экстракции.
    2. Используйте ультразвуковой аппарат UP100H (оснащенный микронаконечником-сонотродом MS3 для небольших объемов ок. 2-5 мл), чтобы разрушить бактериальные клетки до тех пор, пока они не лизируются, на что указывает снижение непрозрачности и повышенная вязкость. Это должно выполняться на льду, и рекомендуется обрабатывать ультразвуком через определенные промежутки времени (например, 10-секундная обработка ультразвуком с последующей 10-секундной паузой на льду и так далее). Следует соблюдать осторожность, чтобы не использовать ультразвук со слишком высокой интенсивностью. При обнаружении пенообразования или образования белого осадка интенсивность нужно снизить.
    3. Раствор лизированных бактерий переносят в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл и центрифугу при 4°С, 16 000 г в течение 20 мин.

     

    Ультразвуковые зонды используют силы акустической кавитации для разрушения клетки и извлечения молекул и ДНК из кишечной палочки.

    Ультразвуковые аппараты зондового типа, такие как UP400St использовать принцип работы акустической кавитации для эффективного лизиса кишечной палочки.

    Анализ экспрессии и очистка рекомбинантного белка с использованием ультразвука

    Гранула кишечной палочки была обработана ультразвуком с помощью ультразвукового аппарата Hielscher UP100H. Для этого клеточную гранулу ресуспендировали в охлажденном лизисном буфере (50 мМ Tris-HCl pH=7,5, 100 мМ NaCl, 5 мМ DTT, 1 мМ PMSF) и охлаждали на льду в течение 10 мин. Затем клеточную суспензию обрабатывали ультразвуком с 10 короткими всплесками по 10 с с последующим интервалом 30 с для охлаждения. Наконец, клеточный мусор удаляли ультрацентрифугированием при 4 ° C в течение 15 мин при 14000 об/мин. Для подтверждения экспрессии rPR надосадочную жидкость проводили на 12% полиакриламидном геле и анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Очистка rPR проводилась с использованием смолы Ni2+-NTA (Invitrogen, США) в соответствии с инструкцией производителя. На этом этапе использовался нативный метод очистки. Чистоту очищенного белка оценивали с помощью электрофореза на 12% полиакриламидном геле и последующего окрашивания синим цветом Кумасси. Концентрацию очищенного белка измеряли с помощью набора для анализа белка Micro BCA (PIERCE, США). (Азарнежад и др., 2016 г.)
     

    В этом видео показан ультразвуковой купрог мощностью 200 Вт для диспергирования, гомогенизации, извлечения или дегазации лабораторных образцов.

    Ультразвуковой купорн (200 Вт)

    Миниатюра видео

    Ультразвуковые гомогенизаторы для лизиса кишечной палочки

    Hielscher Ultrasonics разрабатывает, производит и поставляет высокопроизводительные ультразвуковые гомогенизаторы для надежного и эффективного лизиса бактерий E. coli и других типов клеток, тканей и клеточных культур.
    Широкий портфель ультразвуковых зондов, а также систем косвенной обработки ультразвуком позволяет нам предложить вам идеальный ультразвуковой гомогенизатор тканей для разрушения и экстракции клеток.

    Проектирование, производство и консалтинг – Качество Сделано в Германии

    Ультразвуковыми аппаратами Hielscher можно дистанционно управлять через браузер. Параметры обработки ультразвуком можно контролировать и корректировать точно в соответствии с требованиями процесса.Ультразвуковые аппараты Hielscher хорошо известны своими высочайшими стандартами качества и дизайна. Интеллектуальное программное обеспечение, интуитивно понятное меню, программируемые настройки и автоматическое протоколирование данных - это лишь некоторые особенности ультразвуковых аппаратов Hielscher. Надежность и простота эксплуатации обеспечивают плавную интеграцию наших ультразвуковых аппаратов в исследовательские и биотехнологические объекты. Даже суровые условия и сложные условия легко обрабатываются ультразвуковыми аппаратами Hielscher.

    Hielscher Ultrasonics является компанией, сертифицированной ISO, и уделяет особое внимание высокопроизводительным ультразвуковым аппаратам, оснащенным самыми современными технологиями и удобством для пользователя. Конечно, ультразвуковые аппараты Hielscher соответствуют требованиям CE и соответствуют требованиям UL, CSA и RoHs.

    В приведенной ниже таблице приведена приблизительная производительность наших ультразвуковых аппаратов:

    Объем партии Скорость потока Рекомендуемые устройства
    многолуночные / микротитрные пластины не доступно UIP400MTP
    CupHorn для флаконов или стакана не доступно Ультразвуковой CupHorn
    Ультразвуковой микропроточный реактор не доступно GDmini2
    до 10 флаконов объемом от 0,5 до 1,5 мл не доступно VialTweeter
    0.5 до 1,5 мл не доступно VialTweeter
    От 1 до 500 мл От 10 до 200 мл / мин UP100H
    От 10 до 2000 мл От 20 до 400 мл / мин Uf200 ः т, UP400St
    0.1 до 20L 0.2 до 4L / мин UIP2000hdT
    От 10 до 100 литров От 2 до 10 л / мин UIP4000
    не доступно От 10 до 100 л / мин UIP16000
    не доступно больше кластер UIP16000

    Свяжитесь с нами! / Спросите нас!

    Запросить дополнительную информацию

    Пожалуйста, используйте форму ниже, чтобы запросить дополнительную информацию об ультразвуковых гомогенизаторах тканей и клеточных дробилках, приложениях для лизиса и ценах. Мы будем рады обсудить с вами ваш процесс и предложить вам ультразвуковой гомогенизатор, отвечающий вашим требованиям!









    Пожалуйста, обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


    На видео показана ультразвуковая система пробоподготовки UIP400MTP, которая позволяет осуществлять надежную пробоподготовку любых стандартных многоскважинных пластин с использованием высокоинтенсивного ультразвука. Типичные применения UIP400MTP включают лизис клеток, сдвиг ДНК, РНК и хроматина, а также экстракцию белка.

    Ультразвуковой UIP400MTP для мульти-хорошо звуковой пластины

    Миниатюра видео

    Дополнительные протоколы ультразвукового лизиса кишечной палочки

    Модифицированные аллицином белки в кишечной палочке с использованием ультразвукового VialTweeter

    VialTweeter на ультразвуковом процессоре UP200STОпределение содержания сульфгидрила с помощью анализа 5,5'-дитиобиса (2-нитробензойной кислоты) (DTNB)
    Ночная культура E. coli MG1655 была использована для инокуляции минимальной среды MOPS (1:100). Культура выращивалась аэробно до тех пор, пока не был достигнут A600 0,4. Культуру разделили на три культуры по 15 мл для лечения стресса. Необработанная культура служила негативным контролем. 0,79 мМ аллицина (128 мкг мл-1) или 1 мМ диамида добавляли к одной из оставшихся двух культур каждая. Культуры инкубировали в течение 15 мин. Центрифугированием собирали по 5 мл каждой культуры (8 525 × г, 4°С, 10 мин). Клетки дважды промывали 1 мл PBS (137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10 мМ Na2HPO4, 2 мМ KH2PO4, pH 7,4, хранили анаэробно перед использованием) и центрифугировали (13 000 × г, 4 ° C, 10 мин). Клетки были ресуспендированы в буфере лизиса (PBS с 6 мМ гуанидиния HCl, pH 7,4) до разрушения при 4 ° C ультразвуком (VialTweeter ультразвуковой аппарат, Hielscher GmbH, Германия) (3 × 1 мин). Клеточный мусор гранулировали центрифугированием (13 000 × г, 4 °C, 15 мин). Надосадочную жидкость переносили в кювету QS-macro объемом 3,5 мл (10 мм) с магнитной мешалкой и смешивали с 1 мл лизисного буфера. Вымирание образцов контролировалось на длине волны 412 нм с помощью спектрофотометра Jasco V-650, оснащенного держателем ячейки PSC-718 с регулируемой температурой при комнатной температуре. Добавляли 100 мкл 3 мМ раствора дитиобиса (2-нитробензойной кислоты). За вымиранием следили до тех пор, пока оно не достигло насыщения. Расчет концентрации тиола проводили с использованием коэффициента экстинкции ε412 Г. = 13 700 М-1 см-1 для тио-2-нитробензойной кислоты (TNB). Концентрации клеточного тиола рассчитывали на основе объема клеток E. coli 6,7 × 10-15 литр и плотность ячеек А600 = 0,5 (эквивалентно 1 × 108 клетки мл-1 культура). (Müller et al., 2016)
     

    Определение глутатиона in vivo с использованием ультразвуковой клеточной дробилки

    E.coli MG1655 выращивали в минимальной среде MOPS в общем объеме 200 мл до тех пор, пока не был достигнут A600 0,5. Культуру расщепляли на культуры по 50 мл для лечения стресса. После 15 минут инкубации с 0,79 мМ аллицина, 1 мМ диамида или диметилсульфоксида (контроль) клетки собирали в 4000 г при 4 ° C в течение 10 минут. Клетки дважды промывали буфером KPE перед ресуспендированием гранул в 700 мкл буфера KPE. Для депротеинизации 300 л 10% (мас. / об.) сульфосалициловой кислоты были добавлены до разрушения клеток ультразвуком (3 x 1 мин; VialTweeter ультразвуковой дезинтегратор). Супернатанты собирали после центрифугирования (30 мин, 13000 г, 4 ° С). Концентрации сульфосалициловой кислоты снижали до 1% путем добавления 3 объемов буфера KPE. Измерения общего глутатиона и GSSG проводили, как описано выше. Концентрации клеточного глутатиона рассчитывали на основе объема клеток E. coli 6,7×10 Лет-15 литр и плотность ячеек А600 0,5 (эквивалентно 1×10 Лет8 клетки мл-1 культура). Концентрации GSH рассчитывали путем вычитания 2 [GSSG] из общего количества глутатиона. (Müller et al., 2016)

    Экспрессия человеческого mAspAT в E. coli с использованием ультразвукового гомогенизатора

    Ультразвуковой клеточный разрушитель UP400St (400 Вт) для экстракции внутриклеточного вещества (например, белки, органеллы, ДНК, РНК и т. Д.),Единственная колония E. coli BL21 (DE3), содержащая вектор экспрессии в 30 мл среды Luria-Bertani (LB), содержащей 100 мкг / мл ампициллина, и затем культивируется при 37ºC до оптической плотности (OD600) достигла 0,6. Клетки собирали центрифугированием при 4000 × g в течение 10 мин и ресуспендировали в 3L свежей среде LB, содержащей 100 мкг / мл ампициллина.
    Впоследствии экспрессию белка индуцировали изопропилом β-ᴅ-1-тиогалактопиранозидом (IPTG) 1 мМ в течение 20 ч при 16ºC. Клетки собирали центрифугированием при 8000 × г в течение 15 мин и промывали буфером А (20 мМ NaH2PO4, 0,5 М NaCl, рН 7,4). Приблизительно 45 г (сырой вес) клетки были получены из 3-литровой культуры. После центрифугирования клеточные гранулы ресуспендировали в 40 мл (для 1 л культуры) ледяного экстракционного буфера A и лизировали ультразвуком при ледяной температуре с использованием ультразвуковой клеточной дробилки Hielscher UP400St. Лизис клеток центрифугировали при 12 000 об/мин в течение 15 мин для разделения растворимых (надосадочная жидкость) и осажденных (гранулы) фракций. (Цзян и др., 2015 г.)
     



    Полезные сведения

    Е. coli

    Escherichia coli (E. coli) представляет собой грамотрицательную, факультативно анаэробную, стержнеобразную бактерию кишечной палочки рода Escherichia, которая обычно встречается в нижнем отделе теплокровных организмов (эндотермы). Существует большое количество штаммов E. coli (или подтипов) с различными характеристиками. Большинство штаммов E. coli безвредны для людей, например штаммы B и K-12, которые обычно используются для исследовательских применений в лабораториях. Однако некоторые штаммы вредны и могут вызвать серьезную болезнь.
    E. coli играет важную роль в современной биологической инженерии и промышленной микробиологии, так как бактерии легко манипулировать. Общие лабораторные приложения, которые часто используют E. coli, например, для создания рекомбинантной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) или для работы в качестве модельного организма.
    E. coli является очень универсальным хозяином для производства гетерологичных белков, и существуют многоклеточные системы экспрессии белка для получения рекомбинантных белков в E. coli. Используя плазмиды, которые позволяют экспрессию белка высокого уровня, гены могут быть введены в бактерии, что позволяет производить такие белки в больших количествах в промышленных ферментационных процессах.
    Кишечная палочка используется в качестве клеточных фабрик для производства инсулина. Другие области применения включают использование модифицированных клеток E. coli для разработки и производства вакцин и иммобилизованных ферментов, для производства биотоплива, а также для биоремедиации.
    Штамм K-12 представляет собой мутантную форму E. coli, которая чрезмерно экспрессирует фермент щелочной фосфатазы (ALP). Эта мутация происходит из-за дефекта гена, который постоянно кодирует фермент. Если ген продуцирует продукт без какого-либо ингибирования, он известен как конститутивная активность. Эта специфическая мутантная форма используется для выделения и очистки фермента ALP.
    Бактерии E. coli также широко используются в качестве клеточных фабрик. Инженерные микробы (например, бактерии) и растительные клетки могут быть использованы в качестве так называемых клеточных фабрик. Эти генетически модифицированные клетки производят молекулы, химические вещества, полимеры, белки и другие вещества, которые используются, например, в фармацевтической, пищевой и химической промышленности. Чтобы освободить молекулы, образующиеся внутри таких биоинженерных клеток, ультразвуковой лизис является распространенным методом разрушения клеточных стенок и переноса целевых веществ в окружающую жидкость. Узнайте больше о лизисе биоинженерных клеток!

    Ультразвуковая резка ДНК

    Ультразвуковые силы сдвига являются широко используемым методом высвобождения молекул, органелл и белков из недр клетки, а также для разрыва нитей ДНК на части. Акустическая кавитация разрушает клеточные стенки и мембраны, извлекая ДНК из клеток и генерируя фрагменты примерно из 600 штук – 800 bp в длину, что идеально подходит для анализа.
    Нажмите здесь, чтобы узнать больше об ультразвуковых гомогенизаторах для фрагментации ДНК!

    Литература / Ссылки


    Высокоэффективный ультразвук! Ассортимент продукции Hielscher охватывает весь спектр от компактного лабораторного ультразвукового аппарата до полностью промышленных ультразвуковых систем.

    Hielscher Ultrasonics производит высокую производительность ультразвуковых гомогенизаторов из лаборатория в промышленного размера.


    Мы будем рады обсудить ваш процесс.

    Давайте свяжемся.