Ультразвуковая технология Хильшера

Клеточныйлиз клеток BL21 с помощью ультразвука

Клетки BL21 являются штаммом кишечной палочки, который широко используется в исследовательских лабораториях, биотехнологии и промышленном производстве из-за их способности выражать белки высокоэффективными. Ультразвуковое нарушение клеток, лиза и извлечения белка является распространенным методом для изоляции и сбора целевых белков из клеточного интерьера клеток BL21. Ультразвуковое нарушение клетки полностью и высвобождает все поглощенные белки, что делает 100% белка доступным.

BL21 Клетки для экспрессии белка

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsКлетка BL21 является химически компетентным бактериальным штаммом E. coli, пригодным для трансформации и экспрессии белка высокого уровня с использованием индукционной системы T7 RNA-IPTG. Клетки BL21 позволяют высокой эффективности экспрессии белка любого гена, который находится под контролем промоутера T7. Штамм кишечной палочки BL21(DE3) является штаммом производства белка на основе РНК T7 на основе полимеразы в сочетании с векторами экспрессии на основе T7 и широко применяется в лабораториях и промышленности для производства рекомбинантных белков. В BL21(DE3) экспрессия гена, кодируемого рекомбинантным белком, транскрибируется хромосомно закодированной РНК-полимеразой T7 (T7 RNAP), которая транскрибируется в восемь раз быстрее обычной РНКП E. coli. Это делает штамм BL21(DE3) высокоэффективным и превращает его в одну из наиболее предпочтительных систем экспрессии белка.

Протокол для ультразвукового лиза и извлечения белка из клеток BL21

Клеточныйлиз клеток BL21 в основном выполняется с использованием ультразвука в сочетании с саркозинатом лауройла натрия (также известным как саркозил) в качестве буфера лиза. Преимущества ультразвукового нарушения работы клеток и экстракции белка лежат в надежности, воспроизводимости, а также простой, безопасной и быстрой работе ультразвуковых систем. Протокол ниже дает пошаговое направление для ультразвукового лиза клеток BL21:

Зонд типа insonifier UP200St для лизиса

Ультразвуковой разрушитель клеток UP200St с микро-наконечником S26d2 для лиза и извлечения белка

Запрос информации




Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


  • Для удаления белков сопровождающего, BL21 бактериальные гранулы были повторно использованы в 50 мл ледяного натрия Tris-EDTA (STE) буфер (состоящий в 10 мМ Трис-HCL, рН 8,0, 1 мМ EDTA, 150 мМм NaCl дополнен 100 мМ PMSF).
  • Добавляется 500 уль лизозима (10 мг/мл), а клетки инкубируется на льду в течение 15 мин.
  • Затем добавляются 500 уль МТТ и 7 мл саркозила (10% (ж/в), сделанных в буфере STE.
  • Важно, чтобы все буферы очистки ледяной и поддерживать образцы на льду все время. Все шаги очистки должны быть проведены в холодной комнате, если это возможно.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Для ультразвукового лиза и извлечения белка образцы VialTweeter MultiSample ультразвуковой в течение 4 х 30 сек при 100% амплитуде с интервалом 2 мин между каждой звуковой. Кроме того, ультразвуковой гомогенизатор типа зонда с микро-наконечником, например, Uf200 ः т с S26d2 (3 х 30 сек, 2 мин. пауза между ультразвуковыми циклами, 80% амплитуда) могут быть использованы.
  • Для дальнейших шагов по очистке образцы должны храниться на льду или храниться в качестве альтернативы при -80 градусов по Цельсию до дальнейшей обработки.

Ультразвуковойлиз под контролем температуры prescise

Точный и надежный контроль температуры имеет решающее значение при обработке биологических образцов. Высокие температуры инициируют термическую деградацию белка в образцах.
Как и все механические методы подготовки образца, sonication создает тепло. Тем не менее, температура образцов может быть хорошо контролируется при использовании VialTweeter. Мы представляем вам различные варианты для мониторинга и контроля температуры ваших образцов при подготовке их с VialTweeter и VialPress для анализа.

  1. Мониторинг температуры выборки: ультразвуковой процессор UP200St, который управляет VialTweeter, оснащен интеллектуальным программным обеспечением и подключенным датчиком температуры. Подключите датчик температуры к UP200St и вставьте кончик датчика температуры в одну из пробных трубок. Через цифровой цветной сенсорный дисплей, вы можете установить в меню UP200St определенный диапазон температур для вашего образца sonication. Ультразвуковой автоматически остановится, когда максимальная температура будет достигнута, и остановится до тех пор, пока температура образца не опустится до более низкого значения установленного температурного ∆. Затем sonication начинается автоматически снова. Эта интеллектуальная функция предотвращает деградацию, вызванную теплом.
  2. Блок VialTweeter можно предварительно охладить. Положите блок VialTweeter (только sonotrode без преминдатора!) в холодильник или морозильную камеру, чтобы предварительно охладить титановый блок помогает отложить повышение температуры в образце. Если это возможно, сам образец также может быть предварительно охлажден.
  3. Используйте сухой лед для охлаждения во время звуковой. Используйте неглубокий лоток, наполненный сухим льдом, и поместите VialTweeter на лед, чтобы тепло может быстро рассеиваться.

Клиенты по всему миру используют VialTweeter и VialPress для своей ежедневной работы по подготовке образцов в биологических, биохимических, медицинских и клинических лабораториях. Интеллектуальное программное обеспечение и контроль температуры процессора UP200St, температура надежно контролируется и тепловой деградации образца избежать. Ультразвуковой препарат образца с VialTweeter и VialPress обеспечивает очень надежные и воспроизводимые результаты!

Найдите оптимальный ультразвуковой разрушитель для приложения Lysis

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics является давний опытный производитель высокую производительность ультразвуковых клеточных разрушителей и гомогенизаторов для лабораторий, скамейки верхней и промышленного масштаба систем. Ваш размер культуры бактериальных клеток, ваши исследования или цели производства и объем клеток для обработки в час или день являются важными факторами, чтобы найти правильный ультразвуковой разрушитель клеток для вашего приложения.
Hielscher Ultrasonics предлагает различные решения для одновременной звуковой мульти-образцов (до 10 флаконов с VialTweeter) и массовых образцов (т.е., микротитровые пластины / пластины ELISA с UIP400MTP), а также классический ультразвуковой зонд типа лаборатории с различными уровнями мощности от 50 до 400 Вт до полностью промышленных ультразвуковых процессоров с до 16000ватт на единицу для коммерческого нарушения клеток и извлечения белка в крупном производстве. Все ультразвуковые системы Hielscher построены для работы 24/7/365 под полной нагрузкой. Надежность и надежность являются основными особенностями наших ультразвуковых устройств.
Все цифровые ультразвуковые гомогенизаторы оснащены интеллектуальным программным обеспечением, цветным сенсорным дисплеем и автоматическим протоколом передачи данных, которые делают ультразвуковое устройство удобным инструментом работы в лабораторных и производственных помещениях.
Дайте нам знать, какие клетки, какой объем, с какой частотой и с какой целью вы должны обрабатывать ваши биологические образцы. Мы рекомендуем Вам наиболее подходящий ультразвуковой разрушитель клеток для ваших требований к процессу.

Приведенная ниже таблица дает вам представление о приблизительной вычислительной мощности наших ультразвуковых систем от компактных ручных гомогенизаторов и многослойных ультразвуковых систем до промышленных ультразвуковых процессоров для коммерческого применения:

Объем партии Скорость потока Рекомендуемые устройства
96-хорошо / микротитр пластин не доступно UIP400MTP
10 флаконов от 0,5 до 1,5 мЛ не доступно VialTweeter на UP200St
0от 0,01 до 250 мл От 5 до 100 мл/мин UP50H
0от 0,01 до 500 мл От 10 до 200 мл / мин UP100H
От 10 до 2000 мл От 20 до 400 мл / мин Uf200 ः т, UP400St
0.1 до 20L 0.2 до 4L / мин UIP2000hdT
От 10 до 100 литров От 2 до 10 л / мин UIP4000hdT
не доступно От 10 до 100 л / мин UIP16000
не доступно больше кластер UIP16000

Свяжитесь с нами! / Спросите нас!

Запросить дополнительную информацию

Пожалуйста, используйте форму ниже, чтобы запросить дополнительную информацию об ультразвуковых процессорах, приложениях и цене. Мы будем рады обсудить ваш процесс с Вами и предложить вам ультразвуковую систему, отвечая вашим требованиям!









Пожалуйста, обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ультразвуковой дезинтегратор Uf200 ः т с 2 мм microtip S26d2 для sonication небольших образцов

Литература / Ссылки



Полезные сведения

Бактерии Escherichia Coli

Escherichia coli является бактерией типа, который не спорообразующих, Грам-отрицательный и характеризуется своей формой прямой стержень. Бактерии E.coli присутствуют в окружающей среде, продуктах питания и кишечнике людей и животных. E. coli обычно motile путем использование peritrichous flagella, но будут nonmotile типы, слишком. E.coli являются так называемыми анаэробными химиоорганотрофными организмами, что означает, что они способны как к дыхательному, так и к ферментативного метаболизма. Большинство типов E.coli являются доброкачественными и выполняют полезные функции в организме, например, подавление роста вредных бактериальных видов, синтез витаминов и т.д.
Бактерии Escherichia coli так называемого типа B являются особой категорией штаммов E.coli, которые широко используются в исследованиях для исследования таких механизмов, как чувствительность бактериофага или системы ограничения модификации. Кроме того, бактерии E.coli ценятся как надежная рабочая лошадка для экспрессии белка в биотехнологических лабораториях и лабораториях по науке о жизни. Например, E.coli используются для синтеза соединений, таких как белки и олигосахариды в промышленных масштабах. Из-за специфических особенностей, таких как дефицит протеазы, низкое производство ацетата на высоком уровне глюкозы, и повышенная проницаемость, E. coli B клетки он чаще всего используется принимающих клеток для производства генетически модифицированных белков.

Рекомбинантный белок

Рекомбинантные белки (rProt) приобретают большое значение во многих отраслях, в том числе в химическом производстве, фармацевтической, косметической, человеческой и животноводной медицине, сельском хозяйстве, пищевой промышленности, а также в промышленности по переработке отходов.
Производство рекомбинантного белка требует использования системы выражения. В качестве экспресс-клеточных систем для выработки рекомбинантной ДНК можно использовать как прокариотические, так и эукариотические клетки. В то время как бактериальные клетки наиболее широко используются для экспрессии белка из-за таких факторов, как низкая стоимость, легкая масштабируемость и простые условия мультимедиа, млекопитающие, дрожжи, водоросли, насекомые и безклеточные системы созданы альтернативы. Тип белка, функциональная активность, а также необходимый выход выраженного белка влияют на выбор клеточной системы, используемой для экспрессии белка.
Для того, чтобы выразить рекомбинантный белок, определенная клетка должна быть трансфицирована вектором ДНК, содержащим шаблон рекомбинантной ДНК. Клетки, трансфицированные с шаблоном, затем культурированы. Как следствие клеточного механизма, клетки транскрибируют и переводят белок интереса, тем самым производя целевой белок.
По мере того как выраженные протеины entrapped в клеточной матрице, клетка должна быть lysed (нарушена и сломлена) для того чтобы выпустить протеины. В последующем этапе очищения белок отделяется и очищается.
Первым рекомбинантным белком, используемым в лечении, был рекомбинантный человеческий инсулин в 1982 году. Сегодня в мире производится более 170 видов рекомбинантного белка для лечения. Обычно используемые рекомбинантные белки, используемые в медицине, например рекомбинантные гормоны, интерфероны, интерлейкины, факторы роста, факторы некроза опухоли, факторы свертывания крови, тромболитические препараты и ферменты для лечения основных заболеваний, таких как диабет, карликовость, инфаркт миокарда, застойная сердечная недостаточность, апоплексия головного мозга, рассеянный склероз, нейтропения, тромбоцитопения, анемия, гепатит, ревматоидный артрит, астма, болезнь Крона. (cf. Phuc V. Pham, в Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Высокая производительность ультразвуковой! Ассортимент продукции Hielscher охватывает весь спектр от компактного лабораторного ультразвукового устройства над скамейками до полностью промышленных ультразвуковых систем.