Ультразвуковая технология Хильшера

Ультразвуковая подготовка образцов для анализов ELISA

Такие анализы, как ELISA, широко используются для диагностики в пробирке, выявления белка, связанного с болезнями, и контроля качества (например, мониторинга пищевых аллергенов). Ультразвуковой препарат образца является быстрой, надежной и воспроизводимой техникой для облиза и изоляции внутриклеточных белков, ДНК, РНК и органелл. Hielscher Ultrasonics предлагает различные ультразвуковые решения для удобной подготовки отдельных образцов, нескольких флаконов, а также для микротитровых пластин и пластин 96-колодец.

Элиза – Фермент-связанный иммуносорбент анализа

ELISA означает связанный с ферментами иммуносорбент и является широко используемым методом биохимического анализа категории лиганд-связывающих анализов. В ELISA жидкий образец добавляется на стационарную твердую фазу со специальными связывающими свойствами. Как правило, стационарная твердая фаза наносится в качестве покрытия на плиту или пластину ELISA. Затем последовательно добавляются, инкубируется и промываются различные жидкие реагенты, так что, наконец, оптическое изменение (например, развитие цвета продуктом энзиматической реакции) происходит в конечной жидкости в колодеце. Оптическое изменение позволяет измерить количество аналита по так называемому количественному “чтение". Для количественного чтения используется спектрофотометр, флюорометр или люминометр для обнаружения и измерения интенсивности передаваемого света. На чувствительность обнаружения влияет усиление сигнала во время аналитических реакций. Так как ферментные реакции хорошо исследованы и надежные процессы усиления, ферменты используются для создания сигнала. Ферменты связаны с реагентами обнаружения в фиксированных пропорциях, чтобы обеспечить точную количественную оценку, что объясняет также название "фермент-связанных" иммуносорбент анализа.
По мере того как анализы ELISA выполнены в плитах microtiter / плитах 96-хорошо, оно известно как плит-основанная техника анализа и использовано например в клинической диагностике in-vitro, исследовании, развитии снадобья etc. для обнаруживать и количественно антитела, пептиды, протеины, и инкрети.
Техника ELISA часто используется в качестве диагностического инструмента в медицине, биотехнологии, патологии растений, а также является важным измерением контроля качества в нескольких отраслях промышленности.

Полная установка VialTweeter: VialTweeter волновод при ультразвуковом процессоре UP200St

Ультразвуковой образец подготовительный блок VialTweeter используется для клеточного лиза и извлечения белка до анализа ELISA

Запрос информации




Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


Ультразвуковой образец Prep перед ELISA

Прежде чем анализ ELISA может быть выполнен, образцы требуют шагов подготовки таких клеток лиза и извлечения внутриклеточных белков, ДНК, РНК и т.д. Преимуществом ультразвукового клеточного лиза и белковой изоляции является его высокая эффективность, надежность и воспроизводимость. Все эти факторы важны для получения высококачественной диагностики и результатов исследований

Преимущества ультразвукового лиза перед ELISA

  • Однородное лечение образца
  • Полныйлиз
  • Полная экстракция белка (например, антитела, ДНК)
  • Оптимальная адаптация к типу клеток
  • Для любого размера выборки
  • воспроизводимый
  • Температура контролируется
  • Автоматическое протокола данных на SD-карте

Протокол для ультразвукового клеточного лиза Pre-ELISA

Зонд типа insonifier UP200St для лизиса

  • Для клеточных культур: Перед ультразвуковым клеточным лизом центрифуга клетки в течение 5 минут по 270 х г в микроцентрифуге. Удалите супернатант путем аспирации и повторного перерасхода ячеек в 30 - 100 МКЛ буфера RIPA. Затем инкубировать клеточные гранулы на льду в течение 30 минут.
  • Теперь образец клетки готов к ультразвуковому лизу:
    Используйте ультразвуковой систему типа зонда (например. Uf200 ः т с зондом S26d2) или ультразвуковым многопрофильным устройством (например, VialTweeter для одновременной звуковой связи до 10 флаконов или UIP400MPT для микротитровых пластин / 96-колодец пластин) в зависимости от количества образцов, которые необходимо подготовить.
    Для зондирования типа sonication одного образца, поместите клетки в 1,5 мл микроцентрифуг труб.
  • Предварительно установите ультразвуковую продолжительность, общий ввод энергии, режим цикла и/или температурные ограничения в цифровом меню ультразвукового. Это обеспечивает высокую надежность звуковой связи и повторяемость.
  • Вставь сонотрод и включить ультразвуковое устройство. Аккуратно переместите микро-наконечник ультразвукового зонда через образец, чтобы звуковой образец равномерно.
    Для большинства клеток ультразвуковойлиз будет завершен после 2 -4 циклов 10-секундной звуковой.
  • После звуковой, удалить сонотрод из образца. Образцы должны быть инкубированы на льду в течение 5 минут. Затем центрифуга на 10000 х г в течение 20 минут, чтобы гранулировать мусор. Перенесите супернатанты в новую микроцентрифуговую трубку. Этикетка аналитов и хранить при -20 градусов по Цельсию.
  • Ультразвуковой сонотрод можно очистить, вытирая его должным образом с алкоголем или sonicate в стакане заполнены алкоголем, например, 70% этанола. Все ультразвуковые зонды, сделанные из титана, автоклавируемы.

Для тканевых гомогенатов:

  • Промыть ткани с ледяной PBS (0.01M, рН 7,4), чтобы удалить избыток крови гемолизиса тщательно.
  • Взвесить ткани (почки, сердце, легкие, селезенка и т.д.) и macerate его на мелкие кусочки, которые гомогенизированы в PBS. Объем требуемого PBS связан с весом ткани. Как правило, 1 г ткани требует около 9 мл PBS. Рекомендуется добавить некоторые ингибитор протеазы в PBS. (RIPA или гипотонический буфер лиза, содержащий протеазу и ингибитор фосфатазы коктейль может быть использован в качестве альтернативы.)
  • В зависимости от размера ткани, краткое лечение вихрем (приблизительно 1-2 мин. в 15 сек. импульсов) может быть полезно для предварительного лечения ткани.
  • Намонтировать микро-наконечник, например S26d2, к вашему ультразвуковому. Поместите образец трубки с тканью в ледяную ванну.
  • Sonicate образец с помощью ультразвукового, например, UP200St (80% амплитуды) в течение 1 мин. в импульсном режиме (15 сек, 15сек паузы). Храните образец в ледяной ванне.
  • Гомогенаты затем центрифугированы для получения конкретных бассейнов (цитозольных, ядерных, митохондриальных или лизосомальных), с тем чтобы обогатить белок для анализа. Путем центрифугировать образец на 5 минут на 5000×g, supernatant retrieved.
Сонотрод MTP-24-8-96 имеет восемь ультразвуковых зондов для зондирования скважин микротитровых пластин.

Сонотрод MTP-24-8-96 имеет восемь ультразвуковых зондов для зондирования скважин микротитровых пластин.

Надежный контроль температуры во время Sonication

Температура является важнейшим фактором, влияющим на процесс, который особенно важен для обработки биологических образцов, например, для предотвращения тепловой деградации белков. Как и все механические методы подготовки образца, sonication создает тепло. Тем не менее, температура образцов может быть хорошо контролируется при использовании устройств Hielscher Ultrasonics. Мы представляем вам различные варианты для мониторинга и контроля температуры ваших образцов при подготовке их с зондом типа ультразвукового или VialTweeter до аналитически.

  1. Мониторинг температуры образца: Все цифровые ультразвуковые процессоры Hielscher оснащены интеллектуальным программным обеспечением и подключенным датчиком температуры. Подключите датчик температуры к ультразвуковому устройству (например, Uf200 ः т, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) и вставьте кончик датчика температуры в одной из пробных трубок. С помощью цифрового цветного сенсорного дисплея, вы можете установить в меню ультразвукового процессора определенный диапазон температур для вашего образца sonication. Ультразвуковой автоматически остановится, когда максимальная температура будет достигнута, и остановится до тех пор, пока температура образца не опустится до более низкого значения установленного температурного ∆. Затем sonication начинается автоматически снова. Эта интеллектуальная функция предотвращает деградацию, вызванную теплом.
  2. Что касается ультразвукового многопрофильного блока VialTweeter, то титановый блок, в котором держатся пробные трубки, может быть предварительно охлажден. Положите блок VialTweeter (только sonotrode без преминдатора!) в холодильник или морозильную камеру, чтобы предварительно охладить титановый блок помогает отложить повышение температуры в образце. Если это возможно, сам образец также может быть предварительно охлажден.
  3. Используйте ледяную ванну или сухой лед для охлаждения во время sonication. Поместите образец трубки (ы) во время sonication в ледяную ванну. Для VialTweeter используйте неглубокий лоток, наполненный сухим льдом, и поместите VialTweeter на сухой лед, чтобы тепло можно было быстро рассеивать.

Клиенты по всему миру используют зонд-ультразвуковые установки Hielscher, а также многопрофильные звуковые установки VialTweeter и UIP400MTP для своей ежедневной работы по подготовке образцов в биологических, биохимических, медицинских и клинических лабораториях. Интеллектуальное программное обеспечение и контроль температуры процессоров Hielscher, температура надежно контролируется и тепловой деградации образца избежать. Ультразвуковая подготовка образца с ультразвуковыми решениями Hielscher обеспечивает очень надежные и воспроизводимые результаты!

Свяжитесь с нами! / Спросите нас!

Запросить дополнительную информацию

Пожалуйста, используйте форму ниже, чтобы запросить дополнительную информацию об ультразвуковых процессорах, приложениях и цене. Мы будем рады обсудить ваш процесс с Вами и предложить вам ультразвуковую систему, отвечая вашим требованиям!









Пожалуйста, обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics производит высокую производительность ультразвуковых гомогенизаторов для смешивания приложений, дисперсии, эмульгации и экстракции в лабораторных, пилотных и промышленных масштабах.

Литература / Ссылки



Полезные сведения

Типы ELISA

Существует несколько типов ELISA, которые отличаются своим принципом функционирования. Они известны как прямой ELISA, косвенные ELISA, сэндвич ELISA, конкурентоспособной ELISA, и обратное ELISA. Ниже мы представляем вам обзор различных типов ELISA и их основных характеристик и различий.
ELISA может работать в качественном или количественном формате. Качественные результаты дают простой положительный или отрицательный результат, в то время как в количественном ELISA оптическая плотность (OD) образца сравнивается со стандартной кривой, которая, как правило, является серийным разбавлением известного концентрационного раствора молекулы-мишени.

Прямая ELISA

Прямая ELISA является самой простой формой анализа Элизы, где используется только первичное антитело с маркировкой фермента и вторичные антитела не требуются. Первичное антитело, помеченное ферментом, связывается непосредственно с целью, т.е. с антигеном. Буферный антигенный раствор добавляется в каждую колодец пластины микротитр (обычно 96-колодец пластин, ELISA-пластины), где придерживается пластиковой поверхности через взаимодействие заряда. Когда фермент, связанный с первичным антителом, реагирует со своим субстратом, он производит видимый сигнал, который может быть измерен с помощью спектрофотометра, флюорометра или люминометра.

Косвенные ELISA

Для косвенного теста ELISA требуется как первичное антитело, так и вторичное антитело. Однако, в отличие от прямого ELISA, не первичное антитело, но вторичное антитело помечено ферментом. Антиген обездвижен к пластине хорошо и связан первичными антителами. Впоследствии вторичное антитело, помеченное ферментом, связывается с первичным антителом. Наконец, фермент, связанный со вторичным антителом, реагирует со своим субстратом, чтобы произвести видимый сигнал, который может быть обнаружен.

Сэндвич ЭЛИЗА

В то время как в прямых и косвенных тестах ELISA, антиген обездвижен и покрыт на поверхность пластины хорошо, в сэндвиче ELISA антитела обездвижены к пластиковой поверхности ELISA-пластины. Обездвижено антитела в сэндвич ELISA известны как захват антител. Дополнительно к антителам захвата, в сэндвиче ELISA также so-called антитела обнаружения необходимы. Антитела обнаружения включают неоцеливые антитела первичного обнаружения и фермент-маркированное вторичное антитело обнаружения.
Шаг за шагом, антиген интереса связывается с захватом антитела обездвижены к пластине. Затем первичное обнаружение антитела связывается с антигеном. После этого вторичное антитело обнаружения связывается с первичным антителом обнаружения. На заключительном этапе реакции фермент реагирует своим субстратом, чтобы произвести видимый сигнал, который может быть обнаружен оптически.

Конкурентная ELISA

Конкурентная ELISA, также известная как ингибирование ELISA, является наиболее сложным типом ELISA, поскольку она включает в себя использование ингибитора антигена. Каждый из трех форматов, прямой, косвенный и сэндвич ELISA, может быть адаптирован к конкурентоспособному формату ELISA. В конкурентной ELISA, ингибитор антигена и антиген интереса конкурировать за связывание с первичным антителом.
Для конкурентной ELISA, неоцелиированные антитела инкубируется в присутствии его антигена, т.е. образца. Эти связанные антитела / антигенные комплексы затем добавляются в антиген покрытием хорошо.
Пластина промывается таким образом, чтобы неохваченные антитела были удалены. Конкурентная ELISA имеет свое название из-за того, что чем больше антигена в образце, тем больше антигенно-антителных комплексов образуется. Это означает, Что есть менее неограниченные антитела, доступные для связывания с антигеном в хорошо и антигены должны конкурировать за доступные антитела. Добавлено вторичное антитело, соответствующее первичной антителе. Это второе антитело связано с ферментом. Когда субстрат добавляется, остальные ферменты производят хромогенный или флуоресцентный сигнал.
В этот момент реакция останавливается, чтобы избежать возможного насыщения сигнала.
Некоторые конкурентоспособные комплекты ELISA включают связанный с ферментом антиген вместо антитела, связанного с ферментом. Помеченный антиген конкурирует за первичные участки связывания антител с образцовым антигеном (не помеченным). Чем меньше антигена в образце, тем больше помеченного антигена сохраняется в колодец и тем сильнее сигнал.

Обратный ELISA

Обратный ELISA не использует хорошо пластин, но оставляет антигены приостановлено в тестовой жидкости. Обратный тест ELISA измеряет количество связанных антител с помощью антигена. Он был разработан специально для обнаружения и исследования белка оболочки вируса Западного Нила и как он способен найти вирус-специфические антитела.

Энзиматический маркер, используемый для ELISA

В приведенном ниже перечне приведены наиболее распространенные энзиматические маркеры, используемые в анализах ELISA, которые позволяют измерять результаты анализа по завершении.

  • OPD (o-фенилендиамин дигидрохлорид) превращает янтарь для обнаружения HRP (Horseradish Peroxidase), который часто используется в качестве конъюгированный белок.
  • TMB (3,3′,5,5′-тетраметилбензидин) синеет при обнаружении HRP и желтеет после добавления серной или фосфорной кислоты.
  • АБТС (2,2′-Azinobis (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)-диаммонийная соль) становится зеленой при обнаружении HRP.
  • PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Disodium Salt) желтеет при обнаружении щелочной фосфатазы.