Такие анализы, как ELISA, широко используются для диагностики в пробирке, выявления белка, связанного с болезнями, и контроля качества (например, мониторинга пищевых аллергенов). Ультразвуковой препарат образца является быстрой, надежной и воспроизводимой техникой для облиза и изоляции внутриклеточных белков, ДНК, РНК и органелл. Hielscher Ultrasonics предлагает различные ультразвуковые решения для удобной подготовки отдельных образцов, нескольких флаконов, а также для микротитровых пластин и пластин 96-колодец.

Элиза – Фермент-связанный иммуносорбент анализа

ELISA означает связанный с ферментами иммуносорбент и является широко используемым методом биохимического анализа категории лиганд-связывающих анализов. В ELISA жидкий образец добавляется на стационарную твердую фазу со специальными связывающими свойствами. Как правило, стационарная твердая фаза наносится в качестве покрытия на плиту или пластину ELISA. Затем последовательно добавляются, инкубируется и промываются различные жидкие реагенты, так что, наконец, оптическое изменение (например, развитие цвета продуктом энзиматической реакции) происходит в конечной жидкости в колодеце. Оптическое изменение позволяет измерить количество аналита по так называемому количественному “чтение". Для количественного чтения используется спектрофотометр, флюорометр или люминометр для обнаружения и измерения интенсивности передаваемого света. На чувствительность обнаружения влияет усиление сигнала во время аналитических реакций. Так как ферментные реакции хорошо исследованы и надежные процессы усиления, ферменты используются для создания сигнала. Ферменты связаны с реагентами обнаружения в фиксированных пропорциях, чтобы обеспечить точную количественную оценку, что объясняет также название "фермент-связанных" иммуносорбент анализа.
По мере того как анализы ELISA выполнены в плитах microtiter / плитах 96-хорошо, оно известно как плит-основанная техника анализа и использовано например в клинической диагностике in-vitro, исследовании, развитии снадобья etc. для обнаруживать и количественно антитела, пептиды, протеины, и инкрети.
Техника ELISA часто используется в качестве диагностического инструмента в медицине, биотехнологии, патологии растений, а также является важным измерением контроля качества в нескольких отраслях промышленности.

Ультразвуковой образец Prep перед ELISA

Прежде чем анализ ELISA может быть выполнен, образцы требуют шагов подготовки таких клеток лиза и извлечения внутриклеточных белков, ДНК, РНК и т.д. Преимуществом ультразвукового клеточного лиза и белковой изоляции является его высокая эффективность, надежность и воспроизводимость. Все эти факторы важны для получения высококачественной диагностики и результатов исследований

Протокол для ультразвукового клеточного лиза Pre-ELISA

• Для клеточных культур: Перед ультразвуковым клеточным лизом центрифуга клетки в течение 5 минут по 270 х г в микроцентрифуге. Удалите супернатант путем аспирации и повторного перерасхода ячеек в 30 - 100 МКЛ буфера RIPA. Затем инкубировать клеточные гранулы на льду в течение 30 минут.
• Теперь образец клетки готов к ультразвуковому лизу:
  Используйте ультразвуковой систему типа зонда (например. Uf200 ः т с зондом S26d2) или ультразвуковым многопрофильным устройством (например, VialTweeter для одновременной звуковой связи до 10 флаконов или UIP400MPT для микротитровых пластин / 96-колодец пластин) в зависимости от количества образцов, которые необходимо подготовить.
  Для зондирования типа sonication одного образца, поместите клетки в 1,5 мл микроцентрифуг труб.
• Предварительно установите ультразвуковую продолжительность, общий ввод энергии, режим цикла и/или температурные ограничения в цифровом меню ультразвукового. Это обеспечивает высокую надежность звуковой связи и повторяемость.
• Вставь сонотрод и включить ультразвуковое устройство. Аккуратно переместите микро-наконечник ультразвукового зонда через образец, чтобы звуковой образец равномерно.
  Для большинства клеток ультразвуковойлиз будет завершен после 2 -4 циклов 10-секундной звуковой.
• После звуковой, удалить сонотрод из образца. Образцы должны быть инкубированы на льду в течение 5 минут. Затем центрифуга на 10000 х г в течение 20 минут, чтобы гранулировать мусор. Перенесите супернатанты в новую микроцентрифуговую трубку. Этикетка аналитов и хранить при -20 градусов по Цельсию.
• Ультразвуковой сонотрод можно очистить, вытирая его должным образом с алкоголем или sonicate в стакане заполнены алкоголем, например, 70% этанола. Все ультразвуковые зонды, сделанные из титана, автоклавируемы.

• Промыть ткани с ледяной PBS (0.01M, рН 7,4), чтобы удалить избыток крови гемолизиса тщательно.
• Взвесить ткани (почки, сердце, легкие, селезенка и т.д.) и macerate его на мелкие кусочки, которые гомогенизированы в PBS. Объем требуемого PBS связан с весом ткани. Как правило, 1 г ткани требует около 9 мл PBS. Рекомендуется добавить некоторые ингибитор протеазы в PBS. (RIPA или гипотонический буфер лиза, содержащий протеазу и ингибитор фосфатазы коктейль может быть использован в качестве альтернативы.)
• В зависимости от размера ткани, краткое лечение вихрем (приблизительно 1-2 мин. в 15 сек. импульсов) может быть полезно для предварительного лечения ткани.
• Намонтировать микро-наконечник, например S26d2, к вашему ультразвуковому. Поместите образец трубки с тканью в ледяную ванну.
• Sonicate образец с помощью ультразвукового, например, UP200St (80% амплитуды) в течение 1 мин. в импульсном режиме (15 сек, 15сек паузы). Храните образец в ледяной ванне.
• Гомогенаты затем центрифугированы для получения конкретных бассейнов (цитозольных, ядерных, митохондриальных или лизосомальных), с тем чтобы обогатить белок для анализа. Путем центрифугировать образец на 5 минут на 5000×g, supernatant retrieved.

Надежный контроль температуры во время Sonication

Температура является важнейшим фактором, влияющим на процесс, который особенно важен для обработки биологических образцов, например, для предотвращения тепловой деградации белков. Как и все механические методы подготовки образца, sonication создает тепло. Тем не менее, температура образцов может быть хорошо контролируется при использовании устройств Hielscher Ultrasonics. Мы представляем вам различные варианты для мониторинга и контроля температуры ваших образцов при подготовке их с зондом типа ультразвукового или VialTweeter до аналитически.

1. Мониторинг температуры образца: Все цифровые ультразвуковые процессоры Hielscher оснащены интеллектуальным программным обеспечением и подключенным датчиком температуры. Подключите датчик температуры к ультразвуковому устройству (например, Uf200 ः т, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) и вставьте кончик датчика температуры в одной из пробных трубок. С помощью цифрового цветного сенсорного дисплея, вы можете установить в меню ультразвукового процессора определенный диапазон температур для вашего образца sonication. Ультразвуковой автоматически остановится, когда максимальная температура будет достигнута, и остановится до тех пор, пока температура образца не опустится до более низкого значения установленного температурного ∆. Затем sonication начинается автоматически снова. Эта интеллектуальная функция предотвращает деградацию, вызванную теплом.
2. Что касается ультразвукового многопрофильного блока VialTweeter, то титановый блок, в котором держатся пробные трубки, может быть предварительно охлажден. Положите блок VialTweeter (только sonotrode без преминдатора!) в холодильник или морозильную камеру, чтобы предварительно охладить титановый блок помогает отложить повышение температуры в образце. Если это возможно, сам образец также может быть предварительно охлажден.
3. Используйте ледяную ванну или сухой лед для охлаждения во время sonication. Поместите образец трубки (ы) во время sonication в ледяную ванну. Для VialTweeter используйте неглубокий лоток, наполненный сухим льдом, и поместите VialTweeter на сухой лед, чтобы тепло можно было быстро рассеивать.

Клиенты по всему миру используют зонд-ультразвуковые установки Hielscher, а также многопрофильные звуковые установки VialTweeter и UIP400MTP для своей ежедневной работы по подготовке образцов в биологических, биохимических, медицинских и клинических лабораториях. Интеллектуальное программное обеспечение и контроль температуры процессоров Hielscher, температура надежно контролируется и тепловой деградации образца избежать. Ультразвуковая подготовка образца с ультразвуковыми решениями Hielscher обеспечивает очень надежные и воспроизводимые результаты!