Ультразвуковая технология Хильшера

Протокол инактивации коронавируса ТОРС-КоВ-2 с помощью Sonication

Hielscher VialTweeter является уникальным ультразвуковым многопрофильным блоком подготовки, который используется для инактивации коронавируса SARS-COV-2. VialTweeter позволяет готовить до 10 проб флаконов одновременно и, таким образом, является идеальным устройством для массовой обработки образцов.

Инактивация коронавируса ТОРС-КоВ-2 с помощью vialTweeter

После удаления фиксатора, монослой промыли три раза фосфатно-буферизированным солевым раствором (PBS) перед соскобом клеток в 1mL MEM/5% FBS и sonicated (3 × 10 секунд, 10 секунд от 100% мощности и амплитуды) с помощью ультразвукового процессора Hielscher UP200St с VialTweeter Вложения. Супернатанты были уточнены путем центрифугирования на 3000 × г в течение 10 минут. 

Читайте полный протокол для инактивации коронавируса SARS-CoV-2 Уэлч и др. (2020) ниже:

Клетки и вирус

Клетки Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) были откоуцированы в модифицированной минимальной необходимой среде орла (MEM), дополненной сывороткой 10% (v/v) фетальной икры (FCS). Вирус используется был ТОРС-CoV-2 штамм hCOV-19/England/2/2020, изолированный PHE от первого кластера пациентов в Великобритании 29/01/2020. Этот вирус был получен при прохождении 1 и используется для инактивации исследований при прохождении 2 или 3.
Для реагентов и химических веществ, используемых для инактивации ТОРС-КоВ-2, а также для удаления цитотоксии реагентов, пожалуйста, см. научный отчет Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Инактивация вируса моющими средствами – Протокол инактивации коронавируса SARS-CoV-2 от Welch et al. 2020

Инактивация ТОРС-Ков-2

Для коммерческих продуктов, вирусных препаратов (жидкость культуры тканей, титеры от 1 × 106 до 1 × 108 ПФУ/мл) обработались в три раза реагентами в концентрациях и в контактное время, рекомендованное в инструкциях производителей для использования, где это имеется, или для концентраций и времени, специально запрошенных испытательными лабораториями. В тех случаях, когда производитель дал диапазон концентраций, было проверено наименьшее соотношение продукта к образцу (т.е. самая низкая рекомендуемая концентрация испытательного продукта). Реагенты реагентов для транспортировки образцов были протестированы с использованием соотношения одного объема жидкости культуры тканей к десяти томам реагента, если только производитель не указал соотношение объема образцовой жидкости к реагенту. Моющие средства, фиксаторы и растворители были протестированы на указанных концентрациях в указанное время. Все инактивации были выполнены при комнатной температуре окружающей среды (18 - 25 градусов по Цельсию). Для тестирования альтернативных типов образцов вирус попал в указанную матрицу образца в соотношении 1:9, а затем обработался испытательными реагентами, как указано выше. Все эксперименты включали в себя тройной контроль макет обработанных образцов с эквивалентным объемом PBS вместо испытательного реагента. Сразу же после требуемого времени контакта, 1mL обработанного образца был обработан с помощью надлежащим образом выбранной матрицы фильтрации. Удаление реагентов для инактивации тестирование было проведено в более широком формате спина колонки с использованием Пирс 4mL Detergent Удаление Spin колонки (Термо Фишер), или путем заполнения пустой Пирс 10mL потенциала центрифуги колонки (Термо Фишер) с SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR или Sephadex LH-20 дать 4mL упакованы бусы / смолы. Для очистки с помощью фильтров Amicon, 2 × 500 мл образцов были очищены с помощью двух центробежных фильтров методом, описанным ранее, а затем объединились вместе. Для формальдегида и формальдегида с удалением глутаралдегида один фильтр использовался с объемом выборки 1× 500 мл, перерасход после обработки в 500 мл PBS и добавлен в 400ul MEM/5% FBS. Для инактивации инфицированных VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STмонослойные, 12,5 см2 колбы клеток Vero E6 (2,5 × 106 клетки/колбы в 2,5 мЛ MEM/5% FBS) были инфицированы в МВД 0,001 и инкубированы при 37 градусов по Цельсию/5% CO2 в течение 24 часов. Супернатант был удален, и клетки фиксированной с помощью 5mL формальдегида, или формальдегида и глутаралдегида при комнатной температуре в течение 15 или 60 минут. Фиксатор был удален, и монослойные мыть три раза с PBS до соскабливания клеток в 1mL MEM/5% FBS и sonicated (3 × 10 секунд на, 10 секунд с на 100% мощности и амплитуды) с помощью UP200St с vialTweeter вложения (Hielscher ультразвуковой технологии). Супернатанты были уточнены путем центрифугирования на 3000 × г в течение 10 минут.

VialTweeter для интенсивного sonication закрытых vials

VialTweeter для интенсивной sonication закрытых флаконов

Запрос информации




Обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Подробная информация о реагенте, используемом для инактивации коронавируса SARS-CoV-2 с помощью ультразвукового VialTweeter в соответствии с протоколом Welch et al. 2020

Полный протокол, включающий использование Hielscher VialTweeter можно найти здесь:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter для ультразвуковой инактивации вируса

Преимущества VialTweeter с одного взгляда

  • Соникация до 10 флаконов одновременно
  • Нет перекрестного загрязнения
  • Отсутствие потери выборки
  • Автоматическая запись данных
  • Легко и безопасно работать
VialTweeter также используется для

  • Лиза клетки
  • Нарушение вирусных частиц
  • Извлечение нуклеиновой кислоты: изоляция ДНК/РНК
  • Фрагментация ДНК/РНК
  • Лисейт solubilization
  • Сложные ультразвуковые dismembrators и сотовые разрушители

    Многопрофильный ультразвуковой vialTweeter является лишь одним из многих ультразвуковых решений для подготовки образцов в биологических, биохимических и клинических лабораториях. Hielscher Ultrasonics предлагает идеальный ультразвуковой dismembrator для вашего применения, например, клеточный лиз, экстракция клеток, гомогенизация тканей, лизатейная растворение, растворение, дегазации образцов и т.д.
    Дайте нам знать, сколько образцов вы должны обрабатывать в час и день, если вы предпочитаете прямой или косвенный sonication и то, что цель ультразвуковой обработки образца. Мы рекомендуем Вам наиболее подходящий ультразвуковой блок для вашей повседневной работы!
    Цифровые ультразвуковые процессоры Hielscher Ultrasonics оснащены интеллектуальным программным обеспечением, автоматической записью данных, простыми предустановленными опциями для контроля температуры, продолжительностью звуковой связи, режимом цикла/пульса, а также примером освещения и пультом дистанционного управления браузера. Мы стремимся сделать наши ультразвуковые устройства максимально интеллектуальными, чтобы ваши исследования и рутина работы были максимально удобными и успешными.
    Нажмите здесь, чтобы найти больше приложений, включая протоколы ультразвуковой подготовки образца с VialTweeter!

    Свяжитесь с нами! / Спросите нас!

    Запросить дополнительную информацию

    Пожалуйста, используйте форму ниже, чтобы запросить дополнительную информацию об ультразвуковых процессорах, приложениях и цене. Мы будем рады обсудить ваш процесс с Вами и предложить вам ультразвуковую систему, отвечая вашим требованиям!









    Пожалуйста, обратите внимание на наши политика конфиденциальности,


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics производит высокую производительность ультразвуковых гомогенизаторов для смешивания приложений, дисперсии, эмульгации и экстракции в лабораторных, пилотных и промышленных масштабах.

    Литература / Ссылки



    Полезные сведения

    Что такое Веро Клетки?

    Vero E6, также известный как Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586) — линия клеток-клонов vero 76, используемая в исследованиях коронавирусов SARS-CoV и SARS-CoV-2. Веро-клетки являются линией клеток, используемых в клеточных культурах. "Веро’ линия была выделена из эпителиальных клеток почек, извлеченных из африканской зеленой обезьяны (Chlorocebus sp.).
    Клетки Vero E6 показывают некоторое ингибирование контакта, поэтому подходят для распространения вирусов, которые размножаются медленно. Линии клеток Vero E6 обычно используются для исследования цитопатологии коронавирусов SARS-CoV и SARS-CoV-2, так как клетки Веро (клетки африканской зеленой обезьяны) демонстрируют обильное выражение рецепторов ангиотензин-преобразования фермента 2 (ACE2). Рецепторы ACE2 являются основным местом стыковки коронавируса SARS-CoV-2.
    Например, Ogando et al. (2020) обнаружили, что SARS-CoV-2 – по сравнению с SARS-CoV – генерируется более высокие уровни внутриклеточной вирусной РНК, но поразительно около 50 раз меньше инфекционных вирусных потомства был извлечен из культуры среды. Кроме того, они определили, что чувствительность двух вирусов к трем установленным ингибиторам репликации коронавируса (Ремдесивир, Алиспоривир и хлорохин) очень похожа, но что инфекция ТОРС-КоВ-2 была значительно более чувствительна к предварительному лечению клеток с пегилированным интерфероном альфа. Важным отличием этих двух вирусов является тот факт, что – при проходе в ячейках Vero E6 – ТОРС-КоВ-2, по-видимому, находится под сильным давлением отбора, чтобы приобрести адаптивные мутации в гене белка шипа. Эти мутации изменить или удалить если можно понять "фурин-как расщепление сайта" в регионе подключения доменов S1 и S2 и привести к очень заметным фенотипических изменений в налет анализов.