Wysokoprzepustowe przygotowanie próbek FFPE: Ekstrakcja białek i cięcie kwasów nukleinowych

Dzięki wysokowydajnemu ultrasonografowi UIP400MTP, firma Hielscher Ultrasonics stawia czoła wyzwaniom związanym z utrwalaniem formaliny i przygotowaniem tkanek zatopionych w parafinie (FFPE). Dowiedz się, jak ultradźwięki przetwarzają próbki FFPE w dużych ilościach do deparafinizacji FFPE, lizy tkanek, homogenizacji, ekstrakcji białek i ścinania DNA/RNA! Skorzystaj z ultradźwiękowego przygotowania tkanek FFPE – Przetwarzanie dużej liczby próbek na płytkach wielodołkowych! Uzyskaj wysokiej jakości próbki i wysoką liczbę próbek, aby uzyskać wiarygodne wyniki badań! Oszczędzaj czas i pieniądze!

Przygotowanie próbek FFPE ułatwione dzięki sonikacji o wysokiej przepustowości

Utrwalanie w formalinie i zatapianie w parafinie (FFPE) jest najpopularniejszą metodą konserwacji i archiwizacji tkanek stałych. Ekstrakcja biomolekuł z próbek tkanek FFPE często stanowi poważne wyzwanie ze względu na jakość przechowywanych próbek. Próbki te, które są nieocenionym zasobem w biologii molekularnej i badaniach klinicznych, stanowią bogate źródło informacji biologicznych do badań retrospektywnych i walidacji biomarkerów diagnostycznych. Jednak proces utrwalania w formalinie i zatapiania w parafinie, przy jednoczesnym zachowaniu architektury i morfologii tkanek, komplikuje ekstrakcję wysokiej jakości kwasów nukleinowych i białek. Formalina indukuje sieciowanie kwasów nukleinowych i białek, prowadząc do fragmentacji molekularnej i modyfikacji chemicznych. Dowiedz się, jak wysokowydajny ultrasonograf UIP400MTP pokonuje wyzwania związane z przygotowaniem próbek FFPE!

Ultrasonicator do wydajnego przygotowywania próbek FFPE

  • Łatwy w użyciu przepływ pracy: Uproszczone procesy, które są przyjazne dla użytkownika.
  • Deparafinizacja, ekstrakcja białek, cięcie DNA / RNA
  • Szybkie przetwarzanie o wysokiej przepustowości: Wydajna obsługa płytek wielodołkowych.
  • Skuteczna deparafinizacja: Lepsza solubilizacja białek.
  • Nietoksyczne rozpuszczalniki: Unika stosowania szkodliwych rozpuszczalników organicznych, takich jak ksylen.

 

Ultradźwiękowy ultrasonograf UIP400MTP z płytkami wielodołkowymi może przetwarzać próbki FFPE z wysoką wydajnością w celu ekstrakcji białek oraz ścinania DNA i RNA.

Sonikator o wysokiej wydajności UIP400MTP do wysokowydajnego przetwarzania próbek FFPE na płytkach wielodołkowych

Zapytanie o informacje





 
Przygotowanie próbek FFPE za pomocą ultradźwięków - sonikator wielopłytkowy UIP400MTP firmy Hielscher
 

Postępy w technikach ekstrakcji białek z tkanek FFPE

Hielscher Ultrasonics odpowiada na wyzwania związane z wysokowydajnym przygotowywaniem próbek FFPE. Sonikacja wykorzystuje fale ultradźwiękowe do generowania drgań mechanicznych i skupionej kawitacji, skutecznie rozbijając struktury komórkowe i zwiększając rozpuszczalność biomolekuł. Technika ta zyskała popularność dzięki swojej zdolności do zwiększania wydajności i wydajności ekstrakcji kwasów nukleinowych i białek z tkanek FFPE, a także ścinania DNA i RNA w celu przygotowania biblioteki. Bardzo ważne jest, aby podkreślić, że ultradźwięki przy użyciu sonikatora wielodołkowego UIP400MTP utrzymują integralność tych biomolekuł do dalszych zastosowań.

 

Film przedstawia ultradźwiękowy system przygotowania próbek UIP400MTP, który umożliwia niezawodne przygotowanie próbek z dowolnych standardowych płytek wielodołkowych za pomocą ultradźwięków o wysokiej intensywności. Typowe zastosowania UIP400MTP obejmują lizę komórek, DNA, RNA i ścinanie chromatyny, a także ekstrakcję białek.

Ultradźwięk UIP400MTP do sonikacji płytek wielodołkowych

Miniatura wideo

 

Ścinanie kwasu nukleinowego za pomocą ultradźwięków o wysokiej przepustowości

Płytki 96-dołkowe i inne płytki wielodołkowe są najlepiej przetwarzane przy użyciu sonikatora UIP400MTP. Ten system ultradźwiękowy jest idealny do lizy, fragmentacji DNA i solubilizacji komórek w próbkach przetwarzanych z dużą wydajnością.Wielodołkowy ultrasonograf UIP400MTP do stosowania w ustawieniach o wysokiej przepustowości przenosi przygotowanie próbek FFPE na nowy poziom. Ta wielodołkowa metoda sonikacji zapewnia wydajne i niezawodne rozwiązanie do jednoczesnego przetwarzania wielu próbek. Ułatwia szybką i powtarzalną ekstrakcję DNA, RNA i białek, które mają kluczowe znaczenie dla różnych technik analitycznych, w tym sekwencjonowania nowej generacji (NGS), ilościowego PCR i analiz proteomicznych. Optymalizacja parametrów sonikacji, takich jak amplituda, czas trwania i temperatura, dodatkowo poprawia jakość i ilość ekstrahowanych biomolekuł.

Sonikator UIP400MTP do płytek wielodołkowych oferuje znaczące korzyści w zakresie fragmentacji i ścinania DNA i RNA z tkanki FFPE. Jedną z wyróżniających się cech tego systemu jest jego zdolność do osiągania wąskich rozmiarów fragmentów DNA i RNA, zapewniając precyzyjne dostrajanie intensywności sonikacji w celu uzyskania krótkich fragmentów o długości 150-200 par zasad (bp) lub dłuższych fragmentów o długości 15-20 kilobazowych par (kbp). Ta wszechstronność sprawia, że UIP400MTP jest niezbędny zarówno do sekwencjonowania krótko-, jak i długo-odczytowego, zapewniając wysokiej jakości wyniki sekwencjonowania nowej generacji (NGS) i sekwencjonowania całego genomu (WGS). Precyzyjna kontrola wielkości fragmentów jest kluczowa dla badaczy we wszystkich dziedzinach genomiki, ponieważ pozwala na przygotowanie próbek zgodnie ze specyfikacją.

Skontaktuj się z nami, aby uzyskać zaawansowane rozwiązania w zakresie tkanek FFPE

Odkryj sonikator wielodołkowy UIP400MTP do wydajnego odzyskiwania biomolekuł z próbek FFPE, zachowując integralność ekstrahowanych kwasów nukleinowych i białek oraz zapewniając powtarzalność wyników. Technologia ta płynnie integruje się z innymi procesami przygotowawczymi i analitycznymi, usprawniając i ulepszając badania molekularne z wykorzystaniem archiwów tkanek FFPE.

Zapytanie o informacje





Utrwalacze i ich działanie

Utrwalanie jest kluczowym etapem przygotowania próbki, który zachowuje struktury komórkowe, zatrzymuje reakcje biochemiczne i zapobiega degradacji. W zależności od konkretnych wymagań eksperymentalnych stosowane są różne utrwalacze. Dwa najpopularniejsze utrwalacze to formaldehyd i paraformaldehyd, które sieciują białka i kwasy nukleinowe, zachowując morfologię i antygenowość komórek i tkanek. Inne utrwalacze, takie jak etanol, metanol i aldehyd glutarowy, są wykorzystywane do konkretnych zastosowań.

Utrwalacze formaldehydowe i paraformaldehydowe tworzą mostki metylenowe między grupami aminowymi, powodując sieciowanie białek. Proces ten skutecznie unieruchamia składniki komórkowe, zachowując ich integralność podczas kolejnych etapów analizy. Na działanie tych utrwalaczy mogą mieć wpływ takie czynniki jak stężenie, pH i temperatura, a optymalizacja tych parametrów ma kluczowe znaczenie dla zapewnienia optymalnego zachowania struktur komórkowych.

 
Zalety ultradźwiękowego przygotowania FFPE
 

Ultradźwięki to potężna technika rozbijania utrwalonych komórek i tkanek, która przewyższa konwencjonalne techniki. Oferuje ona kilka znaczących zalet w porównaniu z tradycyjnymi metodami lizy:

  • Szybkość i wydajność: Liza ultradźwiękowa zapewnia szybkie rozerwanie komórek i tkanek, znacznie skracając czas przetwarzania w porównaniu do metod lizy mechanicznej lub chemicznej. Fale dźwiękowe o wysokiej częstotliwości generowane przez sondę ultradźwiękową wytwarzają mechaniczne siły ścinające, powodując rozerwanie utrwalonych struktur komórkowych. To szybkie i skuteczne rozerwanie umożliwia badaczom przetwarzanie dużych objętości próbek w krótkim czasie.
  • Delikatny i regulowany: Liza ultradźwiękowa oferuje delikatny mechanizm rozrywania, który minimalizuje uszkodzenia wrażliwych biomolekuł, takich jak białka, kwasy nukleinowe i enzymy. W przeciwieństwie do metod mechanicznych, które generują nadmierne ciepło lub siły ścinające, liza ultradźwiękowa wykorzystuje kontrolowaną kawitację do rozbijania komórek przy jednoczesnym zachowaniu integralności i funkcjonalności składników wewnątrzkomórkowych.
  • Versatility: Liza ultradźwiękowa może być stosowana do różnych utrwalaczy, umożliwiając badaczom pracę z szeroką gamą utrwalonych próbek. Niezależnie od tego, czy stosuje się formaldehyd, paraformaldehyd, czy alternatywne utrwalacze, liza ultradźwiękowa konsekwentnie zapewnia skuteczne rozerwanie, zapewniając optymalne odzyskiwanie składników komórkowych.
  • Wysoka wydajność i jakość: Liza ultradźwiękowa ułatwia uzyskanie wysokiej wydajności nienaruszonych składników komórkowych dzięki zdolności do równomiernego rozbijania utrwalonych komórek i tkanek. Umożliwia to dalsze zastosowania, takie jak analiza białek, ekstrakcja kwasów nukleinowych i testy enzymatyczne w celu uzyskania wiarygodnych i powtarzalnych wyników.
  • Kompatybilność z automatyką: Liza ultradźwiękowa może być łatwo zintegrowana ze zautomatyzowanymi systemami, umożliwiając wysokowydajne przetwarzanie próbek. Ta kompatybilność umożliwia badaczom usprawnienie przepływu pracy i zwiększenie wydajności, szczególnie w badaniach na dużą skalę.
96-dołkowy Sonicator UIP400MTP do lizy komórek, ekstrakcji DNA, fragmentacji DNA, solubilizacji komórek i oczyszczania białek.

96-well plate sonicator UIP400MTP do sonikacji płytek mikrotitracyjnych i wielodołkowych

Liza ultradźwiękowa zrewolucjonizowała rozrywanie utrwalonych komórek i tkanek, oferując liczne zalety w porównaniu z tradycyjnymi metodami lizy. Szybkość, wydajność, selektywność, wszechstronność, wysoka wydajność i kompatybilność z automatyzacją sprawiają, że jest to niezbędne narzędzie w biologii molekularnej i badaniach biotechnologicznych. Oferując sonikatory bezdotykowe, jak również sonikatory sondowe, firma Hielscher Ultrasonics oferuje najbardziej odpowiedni homogenizator ultradźwiękowy do zastosowań w naukach przyrodniczych. Niezależnie od tego, czy chcesz przetwarzać pojedyncze próbki, wiele próbek lub bardzo dużą liczbę próbek jednocześnie, zaoferujemy Ci najlepszy sonikator spełniający Twoje wymagania badawcze i diagnostyczne.
Przeczytaj więcej o bezkontaktowych sonikatorach Hielscher do przygotowywania wielu próbek i próbek o wysokiej przepustowości!

Przygotowanie próbek FFPE za pomocą sonikatora wielodołkowego UIP400MTP

  • jednorazowa inwestycja
  • korzystanie z własnych materiałów eksploatacyjnych
  • brak stałych kosztów własnych akcesoriów i materiałów eksploatacyjnych
  • Wysoka przepustowość
  • precyzyjna kontrola
  • Najnowocześniejsza technologia
  • niezawodność & Solidność
  • regulowana, precyzyjna kontrola procesu
  • Klasa przemysłowa: możliwość ciągłej pracy 24/7
  • Łatwa i bezpieczna obsługa
  • Niskie koszty utrzymania

 
Przeczytaj więcej o zastosowaniach sonikatorów w naukach przyrodniczych!

Sonikator do wysokowydajnego przygotowywania próbek! Sonikator płytkowy UIP400MTP ułatwia lizę, ekstrakcję białek, fragmentację DNA i solubilizację komórek próbek biologicznych w 96-dołkowych płytkach.

Sonikator płytkowy UIP400MTP do dowolnych płytek 96-dołkowych, płytek mikrotitracyjnych i płytek wielodołkowych.

Projektowanie, produkcja i doradztwo – Jakość Made in Germany

Ultradźwięki Hielscher są dobrze znane z najwyższej jakości i standardów projektowych. Solidność i łatwa obsługa pozwalają na płynną integrację naszych ultradźwiękowców z obiektami przemysłowymi. Trudne warunki i wymagające środowiska są łatwo obsługiwane przez ultradźwięki Hielscher.

Hielscher Ultrasonics jest firmą posiadającą certyfikat ISO i kładzie szczególny nacisk na wysokowydajne ultradźwięki z najnowocześniejszą technologią i łatwością obsługi. Oczywiście ultradźwięki Hielscher są zgodne z CE i spełniają wymagania UL, CSA i RoHs.

Skontaktuj się z nami! / Zapytaj nas!

Poproś o więcej informacji

Skorzystaj z poniższego formularza, aby uzyskać dodatkowe informacje na temat ultrasonografu wielodołkowego UIP400MTP, jego zastosowań w przygotowaniu próbek FFPE i cen. Z przyjemnością omówimy z Tobą Twoje zastosowanie w genomice i proteomice!









Zwróć uwagę na nasze polityka prywatności.


Wysokoprzepustowe sekwencjonowanie RNA w płytkach wielodołkowych

Ultrasonicator UIP400MTP: Wysokowydajne przygotowanie próbek FFPE w Multi-Well-Plate



FAQ
Poniżej odpowiadamy na często zadawane pytania, które dotyczą przygotowania tkanek FFPE i ultrasonizacji próbek FFPE.

Jak przygotowuje się tkankę FFPE?

Kroki przygotowania tkanek FFPE: Skrupulatne obchodzenie się i przetwarzanie świeżych tkanek ma kluczowe znaczenie dla generowania wysokiej jakości próbek FFPE. Zapewnienie zachowania architektury komórkowej, kwasów nukleinowych i białek ma zasadnicze znaczenie dla dokładnej dalszej analizy. Każdy etap - od pobrania do osadzenia - wymaga precyzji, aby zachować integralność próbki do różnych analiz, w tym badania histologicznego, immunohistochemii i badań molekularnych. Prawidłowo przeprowadzony proces utrwalania i osadzania zapewnia, że zachowana tkanka dokładnie odzwierciedla stan in vivo, umożliwiając wiarygodne wyniki diagnostyczne i badawcze.
Przeprowadzimy Cię przez 6 głównych etapów procesu osadzania próbek tkanek FFPE.

  • Kolekcja tkanek
    Zarówno biopsje od żywych ssaków, jak i hodowle tkankowe są opłacalnymi źródłami pozyskiwania świeżych tkanek do przygotowania próbek FFPE.
    Ważne jest, aby stosować technikę aseptyczną: Należy używać sterylnych narzędzi i rękawiczek, aby uniknąć zanieczyszczenia. Najlepiej pobierać tkanki w sterylnym środowisku, takim jak sala chirurgiczna lub okap laminarny.
    Ponieważ próbka jest bardzo delikatna, niezbędne jest delikatne obchodzenie się z nią: Zminimalizuj opóźnienia w przetwarzaniu i natychmiast rozpocznij dalsze przetwarzanie tkanki po wycięciu. Ma to kluczowe znaczenie dla zapobiegania autolizie i degradacji. Przechowuj tkankę w temperaturze pokojowej; unikaj zamrażania, ponieważ może to spowodować tworzenie się kryształków lodu i uszkodzenie tkanki.
  • Mocowanie tkanek
    Najpierw tkanka jest poddawana działaniu roztworu utrwalającego: Należy użyć 10% neutralnie zbuforowanej formaliny (NBF), która jest odpowiednikiem 4% formaldehydu w wodzie, zbuforowanej do neutralnego pH.
    Całkowicie zanurzyć tkankę w formalinie. Stosunek objętości utrwalacza do tkanki powinien wynosić co najmniej 10:1. Czas utrwalania wynosi zazwyczaj od 6 do 24 godzin, w zależności od rodzaju i wielkości tkanki. Ważne jest, aby utrwalacz mógł dokładnie wniknąć w tkankę. Jednak nadmierne utrwalenie może prowadzić do sieciowania, które komplikuje pobieranie antygenu, podczas gdy niedostateczne utrwalenie może skutkować słabym zachowaniem tkanki.
  • Przycinanie tkanek
    Po drugie, przyciąć tkankę do grubości około 3-5 mm, aby umożliwić odpowiednią penetrację utrwalacza. Zapewnij odpowiednią orientację tkanki, aby uchwycić odpowiednie struktury histologiczne. Ułatwia to proces ekstrakcji, gdy tkanka jest później wykorzystywana do analizy.
  • Przetwarzanie utrwalonej próbki
    Teraz utrwalona tkanka musi zostać odwodniona: Po utrwaleniu tkanka musi zostać odwodniona, aby zapewnić dokładną penetrację przez wosk parafinowy. Przepuść tkankę przez stopniowaną serię etanolu (70%, 80%, 90% i 100%), aby usunąć wodę.
    Czyszczenie ksylenem: Parafina jest nierozpuszczalna w wodzie, ale rozpuszczalna w ksylenie. Dlatego woda w tkance musi zostać zastąpiona ksylenem. Jednak sam ksylen jest nierozpuszczalny w wodzie, ale rozpuszczalny w alkoholu, co wymaga etapu pośredniego, w którym woda jest najpierw zastępowana alkoholem. Zanurz tkankę w ksylenie lub substytucie ksylenu, aby usunąć etanol i przygotować tkankę do infiltracji parafiną.
    Infiltracja przy użyciu parafiny: Osadzić tkankę w stopionej parafinie, zapewniając całkowitą infiltrację. Ten etap zazwyczaj obejmuje kilka zmian parafiny w celu zapewnienia dokładnej impregnacji.
  • Osadzanie tkanki
    Na tym etapie tkanka jest formowana w blok tkankowy: Umieścić tkankę w formie o pożądanej orientacji i zalać ją stopioną parafiną. Pozostawić parafinę do zestalenia poprzez schłodzenie w temperaturze pokojowej lub na zimnej płycie.
  • Sekcjonowanie i montaż
    Mikrotomia: Aby pokroić osadzoną tkankę, należy użyć mikrotomu do wycięcia cienkich skrawków (zwykle 4-5 mikrometrów) z bloku parafinowego. Następnie próbka jest montowana, umieszczając sekcje na szklanych szkiełkach w celu późniejszego barwienia i analizy mikroskopowej.
    Na koniec sprawdź jakość histologii: Oceń pierwsze sekcje pod mikroskopem, aby zapewnić prawidłowe utrwalenie i przetwarzanie. W razie potrzeby dostosuj protokoły w oparciu o typ tkanki i obserwowaną jakość.

 
Tkanki FFPE mogą być wykorzystywane do odzyskiwania RNA, DNA i białek, a także do wykrywania oznak raka lub innych chorób. Mogą być przechowywane przez lata i stanowią istotną część sposobu, w jaki naukowcy i lekarze wykorzystują próbki tkanek do diagnostyki i badań.

Jakie są typowe problemy i wyzwania związane z tkankami FFPE?

Próbki tkanek utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie (FFPE) są szeroko stosowane w badaniach i diagnostyce, ale wiążą się z kilkoma wyzwaniami i powszechnymi problemami:

  • Degradacja biomolekuł: Długotrwałe utrwalanie może prowadzić do degradacji DNA, RNA i białek, utrudniając ekstrakcję wysokiej jakości kwasów nukleinowych lub białek do dalszych zastosowań. Prawidłowe utrwalanie (unikanie niedostatecznego i nadmiernego utrwalania) ma zasadnicze znaczenie dla zachowania tkanek.
  • Sieciowanie: Utrwalanie formaliną powoduje sieciowanie białek i kwasów nukleinowych, co może utrudniać analizę molekularną i wpływać na dokładność immunohistochemii i innych testów.

  • Maskowanie antygenu: Proces utrwalania może maskować miejsca antygenowe, zmniejszając skuteczność wiązania przeciwciał w immunohistochemii i innych testach immunologicznych. Często wymaga to odzyskania antygenu, procedury polegającej na odwróceniu maskowania epitopu i przywróceniu wiązania epitop-przeciwciało. Nie zawsze jednak udaje się przywrócić pełną antygenowość.
  • Zmienna jakość utrwalania: Różnice w czasie i warunkach utrwalania mogą prowadzić do niespójnej jakości próbek, wpływając na odtwarzalność i porównywalność wyników. Należy stosować niezawodne protokoły utrwalania i unikać niedostatecznego lub nadmiernego utrwalania.
  • Uszkodzenia i fragmentacja DNA: Utrwalanie próbek FFPE formaliną może powodować różnego rodzaju uszkodzenia DNA, w tym deaminację cytozyny (mutacje C do T), uszkodzenia oksydacyjne (np. 8-okso-guanina prowadząca do mutacji G do T), a także fizyczne uszkodzenia, takie jak nacięcia, luki i miejsca abazy, które utrudniają aktywność polimerazy DNA. Proces utrwalania w formalinie może powodować fragmentację DNA, komplikując analizy genetyczne i genomowe, takie jak PCR i sekwencjonowanie.
  • Jakość RNA: RNA wyekstrahowane z tkanek FFPE jest często pofragmentowane i zmodyfikowane chemicznie, co utrudnia przeprowadzenie wysokiej jakości analiz transkryptomicznych.
  • Modyfikacje białek: Formalina może indukować chemiczne modyfikacje białek, wpływając na ich strukturę i funkcję, co może zakłócać analizy proteomiczne.
  • Artefakty przetwarzania próbek: Podczas procesu osadzania i sekcjonowania, naprężenia mechaniczne i ciepło mogą wprowadzać artefakty i powodować dalsze uszkodzenia tkanki.
  • Zmienność między partiami: Różnice w protokołach utrwalania i osadzania między różnymi partiami mogą prowadzić do znacznej zmienności wyników, komplikując porównania między badaniami.
  • Problemy z przechowywaniem: Długotrwałe przechowywanie bloków FFPE może z czasem prowadzić do dodatkowej degradacji i utraty integralności kwasów nukleinowych, wpływając na żywotność próbek archiwalnych do badań retrospektywnych.

Stosowanie zoptymalizowanych protokołów, ostrożne obchodzenie się z próbkami i stosowanie zaawansowanych technik pomaga poprawić jakość i wiarygodność danych uzyskanych z tkanek FFPE.

Jaka jest różnica między FFPE a tkanką mrożoną?

Tkanka FFPE (Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded) jest utrwalana przy użyciu formaliny, a następnie zatapiana w parafinie, co pozwala na długotrwałe przechowywanie w temperaturze pokojowej przy jednoczesnym zachowaniu morfologii tkanki. W przeciwieństwie do tego, zamrożona tkanka jest szybko konserwowana przez zamrażanie, co lepiej zachowuje integralność kwasów nukleinowych i białek, ale wymaga przechowywania w bardzo niskich temperaturach.

Jakie chemikalia są używane do osadzania FFPE?

Chemikalia stosowane do zatapiania FFPE zwykle obejmują formalinę do utrwalania i parafinę do zatapiania. W przypadku osadzania FFPE tkanki są zazwyczaj utrwalane przy użyciu 10% (v/v) neutralnie zbuforowanej formaliny (FA) lub świeżo przygotowanego 4% (w/v) roztworu formaldehydu (PFA) wykonanego z proszku paraformaldehydu. Formalina, która jest roztworem formaldehydu w wodzie, jest buforowana do neutralnego pH, aby zachować morfologię tkanki i zapobiec nadmiernemu sieciowaniu. Roztwór na bazie paraformaldehydu zapewnia również skuteczne utrwalenie poprzez sieciowanie białek, stabilizując w ten sposób strukturę tkanki do późniejszego zatopienia w parafinie. Te substancje chemiczne są niezbędne do utrzymania integralności i morfologii tkanki podczas procesu utrwalania i osadzania.

Jak usuwa się parafinę z próbek FFPE?

Aby usunąć parafinę z próbek FFPE, skrawki tkanek są zwykle poddawane serii płukania ksylenem, a następnie nawadnianiu za pomocą stopniowanej serii alkoholi i wreszcie wody. Ponieważ ksylen jest wysoce toksyczny, stwarzając zagrożenia dla zdrowia, takie jak problemy z oddychaniem, podrażnienia skóry i potencjalne długotrwałe skutki przy wielokrotnym narażeniu, ultradźwiękowe usuwanie parafiny staje się obiecującą alternatywą w wielu laboratoriach. Metoda ta wykorzystuje intensywne fale ultradźwiękowe do skutecznego i bezpiecznego usuwania parafiny bez konieczności stosowania toksycznych rozpuszczalników, takich jak ksylen, zmniejszając w ten sposób ryzyko dla personelu laboratoryjnego i tworząc bezpieczniejsze środowisko pracy.

Jak długo należy utrwalać tkanki, aby uzyskać dobrą jakość próbek FFPE?

Ogólne zalecenia dotyczące czasu utrwalania zazwyczaj sugerują utrwalanie próbek tkanek w formalinie przez 24 do 48 godzin. Czas ten jest generalnie wystarczający do zachowania morfologii tkanki i struktur komórkowych przy jednoczesnym zminimalizowaniu nadmiernego utrwalenia, które może prowadzić do nadmiernego usieciowania i degradacji kwasów nukleinowych i białek. Optymalny czas utrwalania może się jednak różnić w zależności od wielkości i rodzaju tkanki, przy czym mniejsze lub bardziej delikatne próbki wymagają krótszego czasu utrwalania. Kluczowe znaczenie ma zrównoważenie odpowiedniego utrwalania, aby zapobiec autolizie i degradacji tkanek, unikając jednocześnie przedłużonego utrwalania, które mogłoby skomplikować dalsze analizy molekularne.

Z przyjemnością omówimy Twój proces.

Let's get in contact.