Ultraskaņas lietojumprogrammas MonkeyPox vīrusā
Ultrasonication ir svarīga apstrādes metode pērtiķu baku vīrusa (MPXV) izdalīšanai no analītiskiem paraugiem, vīrusu DNS sadrumstalotībai, kā arī pērtiķu baku vakcīnas ražošanā. Paraugu sagatavošanai pirms diagnostikas un analīzes (PCR, ELISA uc) ultrasonication tiek izmantota, lai sārmotu šūnas, lai atbrīvotu pērtiķu baku vīrusu no šūnu iekšpuses un / vai sadalītu DNS. Vakcīnu ražošanā pielietojumi svārstās no vīrusa daļiņu / DNS preparāta, iekapsulēšanas zāļu nesējos un inokulāta formulēšanas.
Zemāk jūs varat atrast detalizētu informāciju par ultraskaņas pērtiķu baku vīrusa paraugu sagatavošanu, kā arī ultrasoniski atbalstītu MPXV vakcīnas ražošanu.
Ko jūs atradīsit šajā lapā:
- Ultraskaņas līze Pērtiķu baku vīrusa ekstrakcijai
- Monkeypox vīrusa DNS ultraskaņas sadrumstalotība
- Ultraskaņas lietojumi MPXV vakcīnu ražošanā
Šī 2x 1kW ultrasonikatoru sistēma nepārtrauktas plūsmas darbībai ir uzstādīta vakcīnu ražotnē.
Ultraskaņas līze un DNS fragmentācija pirms polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR)
Pērtiķu baku vīrusa infekcija tiek atklāta ar nukleīnskābes pastiprināšanas testēšanu (NAAT), izmantojot reāllaika vai parasto polimerāzes ķēdes reakciju (PCR), lai noteiktu unikālas vīrusu DNS sekvences. Paraugs (piemēram, no nazofaringeālas apmaiņas vai ādas biopsijām) satur vīrusu šūnās.
Analīzei vīruss ir jāatbrīvo no šūnām un vīrusa DNS jābūt sadrumstalotai PCR.
Ultraskaņas līze:
Ultraskaņas šūnu darbības traucējumi / līze ir uzticama un efektīva metode, lai izolētu vīrusus no šūnu paraugiem, un tādējādi tā ir labāka metode salīdzinājumā ar ķīmiskiem līdzekļiem, piemēram, lizocīmu, proteināzi K un dažādiem mazgāšanas līdzekļiem, kurus alternatīvi izmanto, lai panāktu šūnu līzi un DNS izdalīšanos.
Tomēr šādu ķīmisko reaģentu izmantošanai ir nepieciešama laikietilpīga parauga sagatavošana vairākos posmos pirms PCR analīzes, lai novērstu PCR reakcijas inhibīciju. Tā kā PCR inhibitori ietekmē amplifikācijas efektivitāti, nelielas inhibitoru daudzuma variācijas, kas netiek noņemtas, var izraisīt lielas izmaiņas PCR produkta pastiprināšanā (Diaco, 1995).
Līzes ultrasonication priekšrocība ir tā, ka ir vēlams pilnībā pārtraukt šūnu struktūras un atbrīvot DNS bez nepieciešamības pēc lizēšanas reaģentiem un laikietilpīgas paraugu sagatavošanas. (sal.: Fykse et al., 2003)
Ultraskaņas DNS sadrumstalotība:
Ultraskaņas DNS sadrumstalotība ir vienkārša un uzticama, jo tā ražo DNS fragmentus, kas pielāgojami garumā (basepairs, bp). Izmantojot ultraskaņu, DNS var efektīvi sadrumstalot līdz paredzētajam DNS garumam. Precīza ultraskaņas parametru kontrole un sarežģītas dzesēšanas iespējas novērš DNS degradāciju.
Lasiet vairāk par ultraskaņas DNS sadrumstalotību!
Ultraskaņas lietojumi Monkeypox vīrusa vakcīnā
Vakcīnas, ko lieto pret pērtiķu baku vīrusu, pašlaik ir dzīvu vīrusu vakcīnas. Jaunizveidotās vakcīnas varētu izmantot citas platformas, piemēram, uz DNS balstītas Pašlaik satur modificētu Vaccinia Ankara viurs, novājinātu, neatkārtojamu ortopoksvīrusu. Tas satur arī Tris (tris-aminometānu) un nātrija hlorīdu. Vakcīna var saturēt arī nelielu daudzumu DNS un olbaltumvielu no vistas embriju fibroblastu šūnām, ko izmanto, lai audzētu vakcīnas vīrusu, benzonāzi un antibiotiku savienojumus, piemēram, gentamicīnu un ciprofloksacīnu.
Ultraskaņas homogenizācija tiek izmantota dzīvu novājinātu vīrusu vakcīnu, DNS vakcīnu, daudzvērtīgu DNS kokteiļu, mRNS vakcīnu, rekombinanto proteīnu vakcīnu, vīrusu līdzīgu daļiņu vakcīnu uc ražošanā.
- vīrusu daļiņu un līdzekļu dispersija
- emulgācija
- vīrusu inaktivācija
- zāļu nesēja sastāvs (NLC, SLN),
- Iekapsulēšana
- aģentu izšķīdināšana
- palīgvielu sagatavošana
- Degazēšana / De-Aerācija
Jūs varat atrast padziļinātu informāciju par ultraskaņas lietojumiem uzlabotai vakcīnu ražošanai!
Protokols pērtiķu baku vīrusa ultraskaņas izolācijai
Stittelaar (2005) pētnieku komanda izmantoja ultraskaņas līzi, lai atbrīvotu pērtiķu baku vīrusu no augšanas saimniekšūnu kultūras, kā arī no šūnām, kas iegūtas, izmantojot rīkles maiņas no inficētiem primātiem.
Monkeypox vakcīnas sagatavošana:
Pērtiķu baku vīrusi tika audzēti uz konkrētiem patogēniem nesaturošām vistas embriju fibroblastu šūnām. Pēc 1 līdz 2 dienu inkubācijas vīrusa šūnu suspensiju novāca ar vienu sasalšanas-atkausēšanas kārtu un pēc tam koncentrēja centrifugējot. Granulas tika atkārtoti suspendētas un pakļautas vairākām ultraskaņas homogenizācijas kārtām.
Pērtiķu baku vīrusa izolācija no vakcinētiem makakiem:
Paraugi tika sasaldēti trīs reizes un apstrādāti ar ultraskaņu ultraskaņas CupHorn. Vero šūnu monoslāņu inokulācijai sešu iedobju platēs tika izmantoti divi atšķaidījumi (1:10 un 1:100) transporta vidē, kas papildināta ar 1% augļa liellopu serumu. Pēc 1 h inkubācijas 37°C temperatūrā inokulātu aizvāca un aizstāja ar barotni, kas papildināta ar 1% augļa liellopu serumu. Monoslāņi tika kultivēti 5 dienas 37 ° C temperatūrā un iekrāsoti ar kristālvioletu šķīdumu.
(sal.: Stittelaar et al., 2005)
Ultrasonikatori vīrusu analīzei un vakcīnu ražošanai
Hielscher Ultrasonics plašs produktu portfelis piedāvā ideālu ultrasonicator pētniecības un analītiskajām laboratorijām, kā arī rūpniecisko vakcīnu ražošanai.
Hielscher Ultrasonics ir specializējies augstas veiktspējas ultrasonikatoru un sono-bioreaktoru projektēšanā, ražošanā un izplatīšanā, lai tos izmantotu pētniecības un analītiskajās laboratorijās, kā arī lai tos īstenotu rūpniecisko vakcīnu ražošanā (piemēram. Vakcīnas, Api)
Ultraskaņu var pielietot atvērtiem traukiem, slēgtiem nepārtraukti maisāmiem reaktoriem un nepārtrauktas caurplūdes reaktoriem. Visas ultraskaņas sistēmu daļas, kas nonāk saskarē ar šķidro vidi, ir izgatavotas no nerūsējošā tērauda, titāna vai stikla. Autoklāvējamas detaļas un sanitārie piederumi nodrošina ražošanu saskaņā ar farmaceitiskās kvalitātes apstākļi.
Automātiska datu ierakstīšana: Inteliģentā programmatūra ieraksta parametrus ultraskaņas apstrādes procesu automātiski integrēto SD atmiņas karti. Precīza visu procesa parametru kontrole nodrošina Reproducējamība, ražošanas standartizācija, un veicina farmaceitisko produktu drošuma standartu izpildi.
Hielscher Ultraskaņas’ ultraskaņas procesori ir ļoti uzticami, un tos var precīzi kontrolēt. Visus rūpnieciskos ultrasonikatorus var pielāgot, lai nodrošinātu pilnu diapazonu no zemākām līdz ļoti augstām amplitūdām. Hielscher ultraskaņas sistēmu izturība ļauj 24/7 darboties lieljaudas apstākļos un prasīgā vidē.
Zemāk redzamā tabula sniedz norādes par mūsu ultraskaņas aparātu aptuveno apstrādes jaudu:
| partijas apjoms | Plūsmas ātrums | Ieteicamie ierīces |
|---|---|---|
| vairāku urbumu / mikrotitru plāksnes | Nav | UIP400MTP UIP400MTP |
| 1 līdz 500mL | 10 līdz 200 ml / min | UP100H |
| 10 līdz 2000mL | 20 līdz 400 ml / min | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 līdz 20L | 0.2 līdz 4 l / min | UIP2000hdT |
| 10 līdz 100 l | 2 līdz 10 l / min | UIP4000hdT |
| Nav | 10 līdz 100 l / min | UIP16000 |
| Nav | lielāks | klasteris UIP16000 |
Sazinies ar mums! / Uzdot mums!
Ultraskaņas DNA Nobīdes
Pielāgots no Jkwchui cc-BY-SA.03
Literatūra/atsauces
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Fakti ir vērts zināt
Pērtiķu baku vīruss
Monkeypox (MPV, MPXV vai hMPXV) ir divvirzienu DNS vīrusa suga, kas izraisa vīrusu zoonozes slimību. Šī slimība ir pazīstama kā pērtiķu baku infekcija, un tā var rasties cilvēkiem un dzīvniekiem. Tas pieder pie Orthopoxvirus ģints Poxviridae ģimenē. Pērtiķu baku vīruss ir viens no cilvēka ortopoksvīrusiem kopā ar variolas (VARV), govju baku (CPX) un vakcinijas (VACV) vīrusiem. Ortopoksvīrusiem ir raksturīgas lielas ķieģeļu formas vīrusa daļiņas, kas satur divvirzienu DNS genomu aptuveni 200 000 bp.
ELISA tests
ELISA apzīmē ar fermentiem saistītu imūnsorbcijas testu un ir marķēta imūnanalīze, kas tiek uzskatīta par imūnanalīzes zelta standartu. ELISA tests ir imunoloģiskais tests, kas novērtēts, ņemot vērā tā augsto diagnostisko jutību, ko izmanto, lai noteiktu un kvantificētu molekulas, tostarp antivielas, antigēnus, proteīnus, glikoproteīnus un hormonus. ELISA principa pamatā ir antigēna un antivielu mijiedarbība. Ar šo antigēna un antivielu mijiedarbību specifiskās antivielas saistās ar mērķa antigēnu. Tikai tad, kad notiek mijiedarbība, substrāts var saistīties ar fermentu un var novērot turpmāku substrāta pārveidošanu, kas nozīmē, ka tiek iegūts pozitīvs rezultāts.
Hielscher Ultrasonics ražo augstas veiktspējas ultraskaņas homogenizatorus no Laboratorija lai rūpnieciskais izmērs.