Antivielu eluācija, izmantojot augstas caurlaidības ultraskaņas

Afinitātes hromatogrāfija ir spēcīga metode olbaltumvielu attīrīšanai, kas nepieciešama Ultrasoniski atbalstīta nespecifiska eluēšana ir uzticama paraugu sagatavošanas metode, lai iegūtu antivielas no afinitātes hromatogrāfijas. Efektīvo un reproducējamo mērķa antivielu eluēšanu, kas saistīta ar afinitātes matricām, ievērojami uzlabo ultraskaņas apstrāde. Augstas caurlaidspējas plates-ultraskaņas UIP400MTP ir optimāli piemērots, lai eluētu lielu paraugu skaitu 96 iedobju, mikrotitru un daudziedobju platēs, un atvieglo antivielu atjaunošanos afinitātes hromatogrāfijā.

Kā ultraskaņas apstrāde atvieglo eluēšanu?

Izmantojot ultrasoniski pastiprinātu nespecifisku eluēšanu, laboratorijas darbinieki un zinātnieki var efektīvi atgūt attīrītas antivielas no afinitātes hromatogrāfijas kolonnām. Šīs attīrītās antivielas tiek darbinātas, izmantojot pakārtotos lietojumus dažādās jomās, piemēram, imunoloģijā, biotehnoloģijā un medicīniskajā diagnostikā.

Eluēšana ir parauga sagatavošanas posms, ko parasti izmanto afinitātes hromatogrāfijai: Afinitātes hromatogrāfijā tiek izmantota ļoti specifiska mijiedarbība starp mērķa molekulu (piemēram, antivielu) un ligandu, kas imobilizēts hromatogrāfijas matricā. Tas ļauj selektīvi attīrīt mērķa molekulu no kompleksa maisījuma, izmantojot molekulu, piemēram, antivielu, specifisko saistošo afinitāti.
Antivielu specifiskā saistīšanās: Antivielas bieži attīra, izmantojot afinitātes hromatogrāfiju, kur tās selektīvi saistās ar ligandu, kas imobilizēts uz hromatogrāfijas sveķiem. Tas var būt antigēns, proteīns A/G vai jebkura cita molekula, kas specifiski mijiedarbojas ar interesējošo antivielu.
Eluēšanas: Pēc mērķa antivielas saistīšanas ar matricu nākamais solis ietver saistītās antivielas eluēšanu (vai izskalošanu) no sveķiem. Šis eluēšanas posms parasti ietver specifiskās saistīšanās pārtraukšanu starp antivielu un ligandu. Šo soli var veikt ar ultraskaņu.
Ultrasoniski atbalstīta nespecifiska eluēšana: Atšķirībā no specifiskām eluēšanas metodēm, kas traucē tikai antivielu un ligandu mijiedarbību, nespecifiskas eluēšanas metodes traucē visu mijiedarbību ar sveķiem, ieskaitot nespecifiskās. Tas var būt izdevīgi, strādājot ar stipri saistītiem piesārņotājiem, kas varētu traucēt attīrīšanas procesu. Šeit nāk ultraskaņas apstrāde! Ultraskaņas viļņi tiek izmantoti, lai radītu kavitācijas burbuļus eluēšanas buferī. Kad šie burbuļi sabrūk pie sveķu matricas, tie rada intensīvus lokalizētus bīdes spēkus un mikrostraumēšanu. Šis mehāniskais traucējums palīdz pārtraukt nespecifisko mijiedarbību starp antivielu un ligandu, veicinot saistītās antivielas eluēšanu no matricas.

Ultraskaņas eluēšanas priekšrocības, izmantojot ultraskaņu

Ultraskaņas eluēšana piedāvā vairākas priekšrocības, jo īpaši saistībā ar proteīnu attīrīšanas metodēm, piemēram, afinitātes hromatogrāfiju.
Piemēram, ultraskaņas apstrāde izceļas ar alternatīvām metodēm proteīnu integritātes, reģenerācijas, tīrības, daudzpusības un efektivitātes ziņā. Šīs priekšrocības padara ultraskaņas eluēšanu par vēlamo izvēli olbaltumvielu attīrīšanas procesos, jo īpaši lietojumos, kur olbaltumvielu struktūras un aktivitātes saglabāšana ir būtiska. Turklāt ultraskaņas eluēšana izceļas ar vienkāršību, efektivitāti, daudzpusību un saderību ar plašu proteīnu un afinitātes matricu klāstu. Izmantojot ultraskaņas viļņus, lai traucētu olbaltumvielu un matricas mijiedarbību, ultraskaņas eluēšana piedāvā maigu un ātru metodi olbaltumvielu attīrīšanai, nodrošinot augstu reģenerācijas ātrumu un saglabājot olbaltumvielu integritāti pakārtotajiem lietojumiem.

Saudzīgāks par olbaltumvielu struktūru: Eluēšana ar zemu pH līmeni ietver skābu buferšķīdumu izmantošanu, lai izjauktu saistīšanos starp mērķa proteīnu (piemēram, antivielām) un afinitātes matricu. Tomēr zema pH līmeņa iedarbība var denaturēt olbaltumvielas, potenciāli apdraudot to struktūru un bioloģisko aktivitāti. Turpretī ultraskaņas eluēšana galvenokārt balstās uz mehāniskiem traucējumiem, nevis ķīmisku denaturāciju, padarot to maigāku uz olbaltumvielu struktūru. Tas ir īpaši izdevīgi, attīrot delikātus proteīnus vai antivielas, kas ir jutīgas pret pH izmaiņām.

• Samazināts agregācijas risks: Eluēšana ar zemu pH līmeni var palielināt olbaltumvielu agregācijas risku, jo olbaltumvielas izvēršas un tiek pakļautas hidrofobu reģionu iedarbībai. Agregācija var izraisīt olbaltumvielu aktivitātes zudumu un grūtības pakārtotajā pārstrādē. Ultraskaņas eluēšana, salīdzinot, samazina agregācijas risku, izmantojot mehāniskus spēkus, lai traucētu mijiedarbību starp proteīnu un afinitātes matricu, būtiski nemainot proteīna dabisko konformāciju.
• Uzlabota atveseļošanās un tīrība: Ultraskaņas eluēšana var sasniegt augstāku reģenerācijas ātrumu un tīrības līmeni, salīdzinot ar alternatīvām eluēšanas metodēm. Mehāniskie traucējumi, ko nodrošina ultrasonication, efektīvi atbrīvo saistītos proteīnus no afinitātes matricas, vienlaikus samazinot nespecifiskas mijiedarbības. Tā rezultātā tiek uzlabota mērķa proteīna atjaunošanās ar samazinātu piesārņojumu no molekulām, kas nav specifiski saistītas, veicinot eluētās frakcijas augstāku tīrību.
• Augstas caurlaidspējas apstrāde: Hielscher Ultrasonics piedāvā dažādus sonikatorus ultraskaņas proteīnu attīrīšanai, eluēšanai un biopanningam. Mikrotitra plate-sonikators UIP400MTP ļauj masveidā apstrādāt paraugus 96 urbumu un citās daudzvietīgās plāksnēs. VialTweeter ir ideāli piemērots bez problēmām, vienlaicīgai ultraskaņas apstrādei līdz 10 caurulēm, piemēram, Eppendorf flakoniem tādos pašos apstākļos. CupHorn ir daudzpusīgs sonikators, kas ideāli piemērots vairākām caurulēm, mazām vārglāzēm un citiem kuģiem. Un, protams, klasiskie zondes tipa sonikatori ar mikrotipiem ir labi izveidots laboratorijas rīks paraugu sagatavošanai. Hielscher Ultrasonics produktu klāstam ir ideāls sonikators jūsu eksperimenta iestatīšanai un parauga lielumam.
• Daudzpusība un saderība: Ultraskaņas eluēšana ir saderīga ar plašu proteīnu un afinitātes matricu klāstu, piedāvājot daudzpusību attīrīšanas lietojumos. Turpretī eluēšana ar zemu pH līmeni var nebūt piemērota dažām olbaltumvielām, kas ir jutīgas pret skābu stāvokli, vai afinitātes matricām, kurām ir nosliece uz noārdīšanos vai izskalošanos pie zema pH līmeņa. Ultraskaņas eluēšana nodrošina maigu un universāli piemērojamu alternatīvu, ko var pielāgot īpašām attīrīšanas vajadzībām, neapdraudot olbaltumvielu integritāti vai matricas stabilitāti.
• Laiks un efektivitāte: Ultraskaņas eluēšanai parasti vajadzīgs īsāks eluēšanas laiks, salīdzinot ar citām eluēšanas metodēm. Ātra un efektīva saistīto proteīnu izdalīšanās, ko veicina ultrasonication, samazina apstrādes laiku un palielina vispārējo attīrīšanas efektivitāti, padarot to par pievilcīgu iespēju augstas caurlaidspējas lietojumiem vai tad, kad ir nepieciešami laika jutīgi rezultāti.

Ultrasoniski atbalstīta biopanninga

Biopanning ir kritiska metode antivielu attīrīšanā, jo īpaši, ja ir jāiegūst ļoti specifiskas antivielas pētniecībai vai medicīniskai diagnostikai. Biopanning ir process, kurā antivielas tiek izolētas no antivielu maisījuma, tā sauktās antivielu bibliotēkas.

Kā darbojas ultraskaņas biopanning?

Tas sākas ar antivielu bibliotēku, dažādu antivielu maisījumu. Katrai antivielai ir raksturīga sava unikāla forma un specifika. Analīzei un terapijai ir jāizolē specifiskas antivielas, kas atpazīst konkrētu mērķi, piemēram, vīrusu vai vēža šūnu. Izmantojot biopanningu, šīs specifiskās antivielas var izolēt. Ultrasonication palīdz atvieglot biopanēšanas procesu, padarot antivielu attīrīšanu efektīvāku.

Sākot ar antivielu bibliotēku, antivielas parasti tiek parādītas uz bakteriofāga, rauga šūnas vai citas displeja sistēmas virsmas. Šī bibliotēka pārstāv daudzveidīgu antivielu klāstu.
Pirmajā solī šī bibliotēka ir pakļauta jūsu mērķa molekulai. Antivielas, kas saistās ar mērķi, paliks, bet pārējās nomazgāsies. Lai noņemtu nesaistītās antivielas, paraugus vairākas reizes mazgā ar buferšķīdumu.

Tagad mums ir paraugi, kas satur tikai saistītās antivielas. Tomēr tas nozīmē, ka antivielas joprojām ir pievienotas to displeja sistēmai. Lai tos atbrīvotu, antivielu un ligandu mijiedarbība ir jāpārtrauc. Šo soli sauc par eluēšanu. Paraugus var eluēt, izmantojot šķīdumu, kas traucē saistīšanos, piemēram, izmantojot īpašu eluēšanas buferšķīdumu, haotropu, pazeminot pH vērtību, pielietojot karstumu utt. Šīs eluēšanas metodes iznīcina antivielu-ligandu saistīšanos, bet var arī pasliktināt pašas antivielas. Tāpēc ultraskaņas apstrāde tiek izmantota kā alternatīva metode, lai maigi noņemtu antivielas no mērķa.

Pēc eluēšanas posma pabeigšanas mēs iegūstam attīrītas antivielas, kas ir gatavas izmantošanai pētniecībā, diagnostikā vai terapijā.

Biopanning ir spēcīgs antivielu attīrīšanas paņēmiens, un ultraskaņas eluēšana atvieglo un pastiprina efektivitāti – kā rezultātā rodas ļoti attīrītas, nebojātas antivielas. Ultraskaņas biopanning ļauj zinātniekiem izolēt ļoti specifiskas antivielas no sarežģītiem paraugiem, atverot durvis plašam lietojumu klāstam.

Ultraskaņas antivielu attīrīšanai

Hielscher ultraskaņas apstrādātāji ir vispāratzīti rīki, ko izmanto labākajās pētniecības iestādēs visā pasaulē. Hielscher ultraskaņas aparāti, kas novērtēti ar vismodernāko dizainu un izcilo veiktspēju, tiek uzskatīti par neaizstājamiem laboratorijas instrumentiem biotehnoloģijas un molekulārās bioloģijas jomā. Hielscher Ultrasonics piedāvā ultraskaņas aparātus vienam paraugam, kā arī augstas caurlaidspējas paraugu sagatavošanu, kas atvieglo efektīvu antivielu attīrīšanu un mērķa saistīto molekulu eluēšanu, kā arī ļauj efektīvai biopanēšanai precīzi un ātri izolēt specifiskas antivielas.
Antivielu attīrīšanas kontekstā Hielscher ultraskaņas apstrādātāji izceļas ar mazgāšanas un eluēšanas soļu atvieglošanu, efektīvi noņemot nesaistītās antivielas, vienlaikus saglabājot mērķa saistīto kompleksu integritāti. To precīza kontrole un mērogojamība nodrošina pielāgotus apstrādes apstākļus, nodrošinot optimālus attīrīšanas rezultātus plašā paraugu apjomu un sarežģītības diapazonā.
Hielscher sonikatori pārstāv tehnoloģisko inovāciju ultraskaņas apstrādē, piedāvājot nepārspējamas iespējas antivielu attīrīšanai, eluēšanai un biopanningam. Ar savu precizitāti, uzticamību un vieglumu, dažādas ultraskaņas sistēmas piedāvā optimālu efektivitāti un daudzpusību biofarmācijas pētījumiem, diagnostikai un terapijai.
Sazinieties ar mums tagad, lai uzzinātu vairāk par Hielscher ultraskaņas aparātiem antivielu attīrīšanai, eluēšanai un biopanningam! Mūsu pieredzējušais tehniskais personāls ar prieku apspriedīs jūsu ar antivielām saistīto pieteikumu!

Projektēšana, ražošana un konsultācijas – Kvalitāte ražots Vācijā

Hielscher ultrasonikatori ir labi pazīstami ar saviem augstākajiem kvalitātes un dizaina standartiem. Robustums un viegla darbība ļauj vienmērīgi integrēt mūsu ultrasonikatorus rūpnieciskajās iekārtās. Hielscher ultrasonikatori viegli apstrādā neapstrādātus apstākļus un prasīgu vidi.

Hielscher Ultrasonics ir ISO sertificēts uzņēmums un īpašu uzsvaru liek uz augstas veiktspējas ultrasonikatoriem, kas piedāvā vismodernākās tehnoloģijas un lietotājdraudzīgumu. Protams, Hielscher ultrasonikatori atbilst CE prasībām un atbilst UL, CSA un RoHs prasībām.

Ultraskaņas eluēšanas salīdzinājums ar tradicionālajām eluēšanas metodēm

1. Gradienta eluēšana: Gradienta eluēšanā saistīšanās stiprību starp mērķa proteīnu un afinitātes matricu pakāpeniski samazina, mainot eluēšanas buferšķīduma sastāvu. Tas var ietvert tādu faktoru maiņu kā pH, sāls koncentrācija vai konkurējošo ligandu koncentrācija. Gradienta eluēšana ļauj precīzi noregulēt eluēšanas apstākļus, lai selektīvi atbrīvotu mērķa proteīnu, līdz minimumam samazinot nespecifisko saistīšanos.
   Ultraskaņas eluēšanas priekšrocības: Ultraskaņas eluēšana piedāvā ātrāku un vienmērīgāku saistīto proteīnu izdalīšanos, salīdzinot ar gradienta eluēšanu. Lai gan gradienta eluēšana prasa rūpīgu eluēšanas apstākļu optimizāciju un uzraudzību, ultraskaņas eluēšana nodrošina vienkāršāku un efektīvāku olbaltumvielu atgūšanas metodi.
2. Konkurētspējīga eluēšana: Konkurējošā eluē eluēšanas buferšķīdumā ievada augstu konkurējoša liganda koncentrāciju, lai izjauktu saistīšanos starp mērķa proteīnu un afinitātes matricu. Konkurējošais ligands konkurē ar mērķa proteīnu par saistīšanās vietām matricā, tādējādi pārvietojot proteīnu un atbrīvojot to eluātā.
   Ultraskaņas eluēšanas priekšrocības: Ultraskaņas eluēšana piedāvā maigāku un daudzpusīgāku alternatīvu konkurētspējīgai eluācijai. Konkurētspējīgai eluēšanai var būt nepieciešams izmantot augstas koncentrācijas haotropus aģentus (t.i., košķīdību, kas izjauc ūdeņraža saistīšanas tīklu starp ūdens molekulām un samazina olbaltumvielu dabiskā stāvokļa stabilitāti, vājinot hidrofobo iedarbību) vai skarbas ķīmiskas vielas, kas var ietekmēt olbaltumvielu stabilitāti un aktivitāti. Turpretī ultraskaņas eluēšana nodrošina mehāniskus traucējumus bez papildu ķīmiskiem līdzekļiem, saglabājot olbaltumvielu integritāti un nodrošinot augstu reģenerācijas ātrumu.
3. Temperatūras izraisīta eluēšana: Temperatūras izraisīta eluēšana ietver eluēšanas buferšķīduma temperatūras maiņu, lai izjauktu saistīšanos starp mērķa proteīnu un afinitātes matricu. To var panākt, palielinot vai samazinot temperatūru atkarībā no specifiskās olbaltumvielu un matricas mijiedarbības.
   Ultraskaņas eluēšanas priekšrocības: Ultraskaņas eluēšana piedāvā ātrāku un kontrolētāku olbaltumvielu eluēšanas metodi, salīdzinot ar temperatūras izraisītām metodēm. Lai gan temperatūras izraisītai eluēšanai var būt nepieciešama precīza temperatūras gradientu kontrole un ilgāks līdzsvarošanas laiks, ultraskaņas eluēšana nodrošina tūlītējus mehāniskus traucējumus, kā rezultātā eluēšanas laiks ir īsāks un uzlabota efektivitāte.
4. Fermentu eluēšana: Fermentatīvā eluēšana izmanto specifiskus fermentus, kas sadala saites starp mērķa proteīnu un afinitātes matricu, atbrīvojot proteīnu eluātā. Šī metode ir īpaši noderīga proteīniem, kas ir cieši saistīti ar matricu, vai lietojumiem, kam nepieciešama precīza eluēšanas apstākļu kontrole.
   Ultraskaņas eluēšanas priekšrocības: Ultraskaņas eluēšana piedāvā ne-fermentatīvu un ķīmisku alternatīvu fermentatīvai eluācijai. Lai gan fermentatīvai eluēšanai var būt nepieciešama fermentu koncentrācijas, inkubācijas laika un pH apstākļu optimizācija, ultraskaņas eluēšana nodrošina vienkāršu un vispārēji piemērojamu olbaltumvielu atgūšanas metodi bez nepieciešamības pēc papildu reaģentiem vai specializētas iekārtas.