Lyse vun Hefezellen a Mikroplacke mat héichintensiver Sonikatioun
Mikrobiologen a Fuerscher an de Liewenswëssenschaften, déi mat Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii, an aneren Hefesystemer schaffen, kennen d’Erausfuerderung: Hefezelle si robust, eng reproduzéierbar Lyse ka schwiereg sinn, an de manuellen Opbroch vu Prouwe gëtt séier zu engem Enkpass, wa vill Stämm, Klonen, Kulturbedéngungen oder Expressiounskonstrukter musse gescreent ginn.
Hefelyse mat héijem Proufduerchsaz fir Mikrobiologie, Molekularbiologie a Proteinanalytik
Hielscher Mikroplacke-Sonikatore wéi den UIP400MTP (400 W) an den UIP550MTP (550 W) bidden eng Léisung mat héijem Proufduerchsaz fir d’mechanesch Lyse vun Hefezellen direkt a Mikroplacken. Amplaz d’Prouwe mat enger Sond eng no där anerer ze verschaffen, kënne ganz Mikroplacken ënner eenheetleche Bedéngunge sonikéiert ginn. Dat mécht d’Hefelyse mat Ultraschall méi séier, méi reproduzéierbar a méi einfach a modern Aarbechtsofleef an der Mikrobiologie, der Proteinexpressioun, dem Enzymscreening an der Omik z’integréieren.
Egal ob Dir rekombinant Proteinnen aus P. pastoris fräisetze musst, Hefelysater fir Enzymassaye preparéiere musst, S. cerevisiae fir eng Proteinanalyse opbrieche musst oder Dosende vun Hefeklonen parallel screene musst: Hielscher Mikroplacke-Sonikatore liwweren e leeschtungsstaarken, op Kavitatioun baséierten Zellopbroch mat preziser Prozesskontroll.
Braucht Dir eng reproduzéierbar Lyse vu S. cerevisiae, P. pastoris, oder aneren Hefestämm a Mikroplacken? Deelt eis Äert Plackeformat, Proufvolumen, Är Zelldicht an Ären Zilanalyt mat. Mir hëllefen Iech, gëeegent Sonikatiounsparameter fir Ären Aarbechtsoflaf mam UIP400MTP oder UIP550MTP festzeleeën.
Hielscher Sonikator fir Multiwell-Placke fir d’Hefelyse – Proufvirbereedung mat héijem Duerchsaz
Firwat Hefezellen eng effizient mechanesch Lyse brauchen
Hefezelle si méi schwéier ze lyséiere wéi vill Bakterien- oder Mamendéierenzellen, well si duerch eng steif Zellwand geschützt sinn, déi haaptsächlech aus Polysacchariden, Glukanen, Mannoproteinnen a Chitin besteet. Dës Zellwand suergt fir mechanesch Stabilitéit, mee si limitéiert och d’Fräisetzung vun intrazelluläre Proteinnen, Nukleinsaieren, Metabolitten an Enzymen.
Zu de konventionelle Methode fir d’Hefelyse gehéieren den Opbroch mat Kärecher, den enzymateschen Ofbau, Afréier- an Entdeezyklen, d’chemesch Lyse an d’Sonikatioun mat enger Sond. Dës Methode kënnen effektiv sinn, mee si hunn och Aschränkungen. Den Opbroch mat Kärecher kann zu Veronrengegunge mat Brochstécker an zu Erwiermung féieren, den enzymateschen Ofbau kann zousätzlech Käschten a Variabilitéit mat sech bréngen, an d’Sonikatioun vun eenzele Prouwe mat enger Sond ass zäitopwänneg, wa grouss Proufzuele verschafft musse ginn.
Héichintensiv, fokusséiert Ultraschallkavitatioun iwwerwënnt dës Aschränkungen, andeems si intensiv mechanesch Schéierkräften, Drockschwankungen a Mikrostréimungen op d’Hefesuspensioun awierke léisst. D’Resultat ass e séieren Opbroch vun Zellwänn a Membranen, eng verbessert Fräisetzung vun intrazelluläre Bestanddeeler an eng héich reproduzéierbar Proufvirbereedung am Plackeformat.
Mikroplacke-Sonikatioun fir d’parallel Virbereedung vun Hefeprouwen
Den Hielscher UIP400MTP an den UIP550MTP si fir déi eenheetlech Sonikatioun vu Mikroplacken, Multiwell-Placken, PCR-Placken a gëeegente Proufgesteller konzipéiert. Am Géigesaz zur Sonikatioun mat enger Sond mussen d’Prouwen net eenzel behandelt ginn. Déi ganz Plack gëtt kontrolléierter Ultraschallenergie ausgesat, wouduerch den Aarbechtsoflaf besonnesch gutt fir d’parallel Verschaffe vu Prouwe gëeegent ass.
Dat ass besonnesch nëtzlech fir:
- Screening vu S. cerevisiae Mutanten oder Expressiounsstämm
- Lyse vu P. pastoris / K. phaffii Klonen no der Expressioun vu rekombinante Proteinnen
- Virbereedung vun Hefelysater fir Enzymassayen
- Proteinextraktioun fir SDS-PAGE, Western Blot, ELISA, LC-MS/MS oder Aktivitéitstester
- Fräisetzung vun intrazelluläre Metabolitte fir d’Metabolomik
- Virbereedung vun DNA- an RNA-Prouwen no enger gëeegenter nogeschaltener Oprengegung
- Optiméierung vu Lysepufferen, Zousazstoffer an Extraktiounsbedéngunge mat héijem Proufduerchsaz
Wéi Ultraschallkavitatioun Hefezellen opbrécht
Wärend der Ultraschallbeschallung erzeugt fokusséierten Héichleeschtungsultraschall ofwiesselnd Kompressiouns- an Expansiounszyklen an der flësseger Prouf. Bei genuch héijer Intensitéit féieren dës Drockschwankungen zu akustescher Kavitatioun. Kavitatiounsblosen entstinn, schwéngen a kollabéieren, woubäi lokal Schéierkräften, Mikrostralen, Turbulenzen a staark Drockgradienten entstinn.
An Hiefsuspensioune schwächen dës mechanesch Effekter d’Zellwand an d’Zellmembran a briechen se op. Intrazellulär Proteinnen, Enzymer, Nukleinsaieren a Metabolitte ginn an de Lysepuffer fräigesat. Well de Prozess mechanesch ass, kann e mat ville verschiddene Puffersystemer agesat ginn a mat Proteaseinhibitoren, Reduktiounsmëttelen, Detergenzien, Salzer oder enger mëller enzymatescher Virbehandlung kombinéiert ginn.
Allgemengt Protokoll: Hiefzelllyse a Mikroplacken
De folgende Protokoll bitt e prakteschen Ausgangspunkt fir d’Hieflyse mam Hielscher UIP400MTP oder UIP550MTP Mikroplacken-Ultraschallapparat. D’Parametere sollten un den Hiefstamm, d’Zelldicht, d’Zilmoleküll, d’Pufferzesummesetzung, de Plackentyp an den uschléissenden Assay ugepasst an optiméiert ginn.
1. Hiefzelle gewannen a wäschen
Kultivéiert Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces oder en aneren Hiefstamm ënner de gewënschte Kulturbedéngungen. Gewannt d’Zellen duerch Zentrifugatioun an huelt d’Kulturmedium ewech. Wäscht de Pellet mat kalem destilléiertem Waasser, PBS oder dem gewielte Lysepuffer, fir Reschter vu Mediumbestanddeeler ze entfernen, déi déi uschléissend Analys stéiere kënnen.
Fir d’Proteinextraktioun haalt d’Prouwe kal a schafft séier. Wa Protease problematesch kënne sinn, killt all Puffer a Verbrauchsmaterial am Viraus of.
2. Den Zellpellet resuspendéieren
Resuspendéiert den Hiefpellet an engem gëeegente kale Lysepuffer. Fir eng effizient Proteinfräisetzung ass eng héich Zelldicht dacks vu Virdeel. Als Ausgangspunkt benotzt ongeféier 10–20% w/v naassen Zellpellet oder eng dicht Suspensioun, déi engem OD600 > 10 entsprécht, jee nom Assay.
En typesche Lysepuffer fir Hiefproteinne ka Folgendes enthalen:
- e Puffersystem wéi Tris-HCl, Phosphatpuffer oder HEPES
- e Salz wéi NaCl oder KCl
- eng Mëschung vu Proteaseinhibitoren
- optional e Reduktiounsmëttel wéi DTT oder β-Mercaptoethanol
- optional en Detergens wéi Triton X-100, NP-40, SDS oder CHAPS, jee no der Kompatibilitéit mat den uschléissende Verfa ren
- optional Phosphataseinhibitore fir Phosphoryléierungsstudien
Bei schwéier ze lyséierenden Hiefstämm oder fir eng ganz schounend Proteinextraktioun kann eng kuerz Virbehandlung mat Zymolyase, Lyticase oder engem aneren Enzym, dat d’Zellwand ofbaut, virun der Ultraschallbeschallung agesat ginn. Dës enzymatesch Virbehandlung ass optional, kann awer d’Lyseeffizienz verbesseren oder déi néideg Ultraschallintensitéit reduzéieren.
3. D’Prouwen an eng gëeegent Mikroplack iwwerdroen
Verdeelt d’Hiefsuspensioun an eng Mikroplack, déi fir Ultraschallbeschallung gëeegent ass. Placke mat ronnem Buedem ginn dacks bevorzugt, well se d’Sammele vun de Prouwe verbesseren an dout Zonen reduzéieren. Benotzt an alle Kavitéiten déiselwecht Prouwevolumen, fir d’Reproduzéierbarkeet ze verbesseren.
Versigelt d’Plack mat enger gëeegenter Versigelungsmatt oder -folie, fir Verdampfung, Aerosolbildung a Kräizkontaminatioun ze verhënneren. Vergewëssert Iech, datt d’Versigelung mat der gewielter Temperatur an de Beschallungsbedéngunge kompatibel ass.
Typesch Aarbechtsvolumen hänke vum Plackeformat a vun der Uwendung of. Gängeg Formater ëmfaasse Placke mat 96 Kavitéiten, Deep-Well-Placken, PCR-Placken oder gëeegent Stänner fir Prouweréiercher.
4. D’Killung ariichten
Hieflyse erfuerdert eng héich Ultraschallintensitéit, an de mechaneschen Zellopbroch erzeugt Hëtzt. D’Temperaturkontroll ass dofir entscheedend, besonnesch bei Protein-, Enzym-, RNA- oder Phosphoryléierungsanalysen.
Benotzt eng passend Killstrategie, zum Beispill:
- am Viraus ofgekillte Lysepuffer
- am Viraus ofgekillte Mikroplacken
- Killpausen tëscht de Beschallungsintervaller
- extern Killung vun der Beschallungsplattform, wa méiglech
D’Zil ass, d’Prouf kal genuch ze halen, fir Proteindenaturéierung, Enzyminaktivéierung, RNA-Ofbau an duerch Hëtzt verursaacht Variabilitéit vun de Prouwen ze verhënneren.
5. D’Hiefsuspensioun mat Ultraschall beschallen
Setzt déi versigelt Plack an den Hielscher UIP400MTP oder UIP550MTP Ultraschallapparat fir Mikroplacken a wielt e gepulsten Ultraschallprogramm. De Pulsbetrib gëtt recommandéiert, well en de mechaneschen Zellopschloss wärend den ON-Phasen an d’Wäermtofleedung wärend den OFF-Phasen erméiglecht.
Als Ausgangspunkt fir d’Lyse vun Hefzellen:
| Parameter | Recommandéierten Ausgangsberäich | Zweck |
|---|---|---|
| Amplitud | 60–100% | Héich Kavitatiounsintensitéit fir robust Hefzellen |
| Pulsmodus | 10–30 sec ON / 30–60 sec OFF | Effizient Lyse mat kontrolléierter Wäermtentwécklung |
| Kumuléiert ON-Zäit | 5–15 min | Jee no Stamm, Dicht an Zilmoleküll upassen |
| Temperatur | Prouwe kal halen | Proteinnen, Enzymer, RNA a Metabolitte schützen |
| Versigelung vun der Plack | Recommandéiert | Verhënnert Verdampfung, Aerosolbildung a Kräizkontaminatioun |
Bei héich resistente Hefsuspensiounen, dichter P. pastoris-Biomass oder schwéierer Extraktioun vu rekombinante Proteinnen erhéicht d’kumuléiert ON-Zäit schrëttweis. Fir hëtztempfindlech Proteinnen oder Enzymassaye benotzt méi kuerz Pulser, méi laang Killpausen an eng méi niddreg Ufanksamplitud.
Heflyse mat héijem Prouwenduerchsaz a Multiwell-Placke mam UIP400MTP
6. Kläert d’Lysat
No der Ultraschallbehandlung zentrifugéiert d’Mikroplack oder transferéiert d’Prouwen a Réier fir d’Zentrifugatioun. Ewechhuelt Zellreschter duerch Zentrifugatioun bei enger gëeegenter Dréizuel an Temperatur. Sammelt den Iwwerstand fir déi uschléissend Analys.
Jee no Uwendung kann d’Lysat fir Folgendes benotzt ginn:
- Proteinqu antifizéierung
- Enzymaktivitéitsassayen
- SDS-PAGE a Western-Blotting
- ELISA an Immunoassayen
- LC-MS/MS-Proteomik
- Metabolittenanalys
- DNA- oder RNA-Rengegung
7. Optiméiert an dokumentéiert d’Method
Fir eng reproduzéierbar Heflyse dokumentéiert all relevant Parameteren, dorënner de Stamm, d’Kulturbedéngung, OD600, d’naass Zellmass, d’Pufferzesummesetzung, de Plackentyp, de Prouwevolumen, d’Amplitud, de Pulszyklus, d’kumuléiert ON-Zäit, d’Killmethod an d’Endtemperatur vun der Prouf.
Wann den Hielscher Ultraschallapparat mat enger automatescher Datenopzeechnung equipéiert ass, kënnen d’Prozessdate fir d’Dokumentatioun, d’Methodentwécklung, d’Moossstabsvergréisserung an d’Qualitéitskontroll benotzt ginn.
Optiméierungstipps fir d’Heflyse
Fir eng maximal Proteinfräisetzung benotzt dicht Hefsuspensiounen, eng héich Ultraschallintensitéit an eng genuch laang kumuléiert ON-Zäit. Fir empfindlech Proteinnen reduzéiert d’Amplitud, verlängert d’Killpausen an haalt d’Plack wärend dem ganze Laf kal.
Wann d’Lyse onvollstänneg ass, erhéicht d’Ultraschallbehandlungszäit schrëttweis, test eng enzymatesch Virbehandlung, reduzéiert d’Viskositéit vun de Prouwen oder optiméiert de Puffer. Wa Proteinnen ofgebaut ginn oder hir Aktivitéit verléieren, verbessert d’Killung, verkierzt d’ON-Intervaller, setzt Inhibitoren derbäi an iwwerpréift, ob den Detergenssystem mam Zilprotein kompatibel ass.
Well Hefstämm sech däitlech an hirer Zellwandstruktur, Wuesstemsphas, hirem Expressiounssystem an hirer Biomassendicht ënnerscheeden, gëtt eng kuerz Optiméierungsmatrix recommandéiert. Test zum Beispill dräi Amplituden, zwee Pulszyklen an zwou Gesamt-ON-Zäiten a bewäert duerno d’Lyseeffizienz an d’Proteinintegritéit.
Egal ob Dir e puer Assayplacke verschafft oder en Hefscreening mat héijem Prouwenduerchsaz duerchféiert, Hielscher kann Iech hëllefen, de richtegen Ultraschallapparat fir Mikroplacken auszewielen an e robust Lyseprotokoll z’entwéckelen. Kontaktéiert eis mat Informatiounen iwwer Ären Hefstamm, Ären Aarbechtsoflaf an Är Ufuerderungen un de Prouwenduerchsaz!
Virdeeler vun den Hielscher Ultraschallapparater fir Mikroplacke fir d’Heflyse
Hielscher Ultraschallapparater fir Mikroplacke sinn ideal fir Laboratoiren, déi eng reproduzéierbar Lyse iwwer vill Prouwen ewech brauchen. Si eliminéieren déi lues Handhabung vun enger eenzeler Prouf no där anerer bei der Ultraschallbehandlung mat enger Sond a reduzéieren d’Variabilitéit, déi duerch d’manuell Positionéierung vun der Sond, d’Antauchdéift an d’Ënnerscheeder an der Handhabung tëscht de Prouwe verursaacht gëtt.
Zu de wichtegste Virdeeler gehéieren:
- Veraarbechtung mat héijem Prouwenduerchsaz: Behandelt vill Hefprouwe parallel a Mikroplacken oder kompatibele Prouwegesteller mat Ultraschall.
- Reproduzéierbar Bedéngungen: Déiselwecht Ultraschallbehandlungsbedéngungen an alle Vertiefunge fir eenheetlech, vergläichbar Lyseresultater.
- Keng Kräizkontaminatioun duerch d’Sond: D’Prouwe bleiwe wärend der Ultraschallbehandlung versigelt, wat d’Iwwerdroe vu Prouwematerial an d’Zuel vun de Botzschrëtt reduzéiert.
- Gëeegent fir robust Zellen: Ultraschall mat héijer Intensitéit ënnerstëtzt den Opschloss vun den Zellwänn vun Hefzellen.
- Effizienten Aarbechtsoflaf: Ideal fir de Screening vu Stämm, Klonen, Expressiounsbedéngungen a Lysepufferen.
- Effizienten Aarbechtsoflaf: Programméierbar Astellungen, automatiséiert Dateprotokolléierung a gëeegent fir d’Laborautomatiséierung.
Uwendungen an der Hiefbiotechnologie an an der Fuerschung an de Liewenswëssenschaften
D’Ultraschalllys vun Hiefzellen a Mikroplacken ënnerstëtzt vill Fuerschungs- a Screeningofleef. Bei der Expressioun vu rekombinante Proteinne kënne P. pastoris- a S. cerevisiae-Klone parallel lyséiert ginn, fir d’Expressiounsniveauen oder d’Enzymaktivitéit ze vergläichen. An der Systembiologie an an den Omikberäicher verbessert eng standardiséiert Lys d’Vergläichbarkeet tëscht de Bedéngungen. An der Mikrobiologie ënnerstëtzt d’Ultraschallbehandlung déi séier Preparatioun vu Lysater aus verschiddene Stämm, ënner verschiddene Kulturmediumsbedéngungen oder no verschiddene Stressbehandlungen.
Typesch Uwendungsberäicher sinn:
- Extraktioun vu Proteinnen aus Hief
- Screening vu rekombinante Proteinnen
- Screening vun der Enzymaktivitéit
- Klonselektioun no der Transformatioun
- Optimiséierung vun der Fermentatioun
- Proufepreparatioun fir d’Proteomik
- Proufepreparatioun fir d’Metabolomik
- Studien iwwer den Opbroch vun der Zellwand
- mikrobiologesch Assaye mat héijem Proufenduerchsaz
Zouverlässeg Hieflys fänkt mat kontrolléierter Ultraschallbehandlung un
D’Lys vun Hiefzelle ka schwéier sinn, wann d’Zuel vun de Prouwen zouhëlt, mee d’Mikroplacken-Ultraschallapparater vun Hielscher maachen de Prozess méi séier, méi propper a méi reproduzéierbar. Den UIP400MTP an den UIP550MTP erlaben et de Fuerscher, komplett Placken ënner definéierten Ultraschallbedéngungen ze verschaffen, wat de Proufenduerchsaz erhéicht an dobäi déi manuell Handhabung reduzéiert.
Fir Mikrobiologen, Molekularbiologen, Proteinnfuerscher a Biotechlaboratoiren ass d’Ultraschallbehandlung a Mikroplacken e leeschtungsstaarkt Instrument, fir intrazellulär Bestanddeeler vun Hiefzellen effizient a reproduzéierbar fräizesetzen.
Heefeg gestallte Froen iwwer d’Lys vun Hiefzellen duerch Ultraschallbehandlung a Mikroplacken
Kënnen Hiefzellen duerch Ultraschallbehandlung lyséiert ginn?
Jo. Hiefzelle wéi Saccharomyces cerevisiae a Pichia pastoris kënnen duerch Ultraschallbehandlung mat héijer Intensitéit lyséiert ginn. D’Ultraschallkavitatioun erzeugt staark mechanesch Schéierkräften, déi d’Zellwand an d’Zellmembran vun den Hiefzellen opbriechen an dobäi Proteinnen, Enzymer, Nukleinsaieren a Metabolitte fräisetzen.
Firwat si Hiefzelle méi schwéier ze lyséiere wéi Bakterienzellen?
Hiefzellen hunn eng déck a mechanesch resistent Zellwand, déi haaptsächlech aus Glukanen, Mannoproteinnen a Chitin besteet. Dës steif Struktur mécht Hiefzelle méi schwéier opzebrieche wéi vill Bakterien- oder Mamendéierenzellen. Dofir erfuerdert d’Hieflys normalerweis eng méi héich Intensitéit, eng méi laang Veraarbechtung oder eng optional enzymatesch Virbehandlung.
Wéi eng Ultraschallapparater vun Hielscher si fir d’Hieflys a Mikroplacke gëeegent?
Den Hielscher UIP400MTP an den UIP550MTP si fir d’Hieflys mat héijem Proufenduerchsaz a Mikroplacke gëeegent. Den UIP400MTP ass ideal fir déi routineméisseg parallel Proufepreparatioun, wärend den UIP550MTP eng méi héich Ultraschallleeschtung fir usprochsvoll Lysaufgaben, dicht Suspensiounen a robust Hiefstämm bitt.
Kann Pichia pastoris an engem Mikroplacken-Ultraschallapparat lyséiert ginn?
Jo. Pichia pastoris, och als Komagataella phaffii bekannt, kann duerch Ultraschallbehandlung mat héijer Intensitéit a Mikroplacke lyséiert ginn. Well P. pastoris eng dicht Biomass bilde kann an eng robust Zellwand huet, gëtt eng Optimiséierung vun der Amplitüd, dem Impulszyklus, der Killung an der gesamter Ultraschallbehandlungszäit recommandéiert.
Wat sinn typesch Ultraschallbehandlungsparameter fir d’Hieflys?
E sënnvolle Startberäich ass eng Amplitüd vu 50–80%, e gepulste Betrib mat zum Beispill 10–30 Sekonnen ON an 30–60 Sekonnen OFF, an eng kumulativ ON-Zäit vu 5–15 Minutten. Déi genee Parameter hänke vum Hiefstamm, der Zelldicht, dem Prouwevolumen, dem Plackentyp, dem Puffer an dem Zilmoleküll of.
Firwat soll d’Hieflys am Impulsmodus duerchgefouert ginn?
Den Impulsmodus reduzéiert d’Hëtztakkumulatioun wärend der Ultraschallbehandlung. Wärend der ON-Phas brécht d’Ultraschallkavitatioun d’Zellen op. Wärend der OFF-Phas kann d’Prouf ofkillen. Dat ass wichteg, well ze vill Hëtzt Proteinnen denaturéieren, d’Enzymaktivitéit reduzéieren, RNA ofbauen an d’Reproduzéierbarkeet beanträchtege kann.
Ass eng enzymatesch Virbehandlung erfuerderlech, ier Hiefzelle mat Ultraschall behandelt ginn?
Eng enzymatesch Virbehandlung ass net ëmmer néideg, mee si kann d’Effizienz vun der Lyse verbesseren. Enzyme wéi Zymolyase oder Lyticase bauen d’Zellwand vun der Hief deelweis of a kënnen d’Ultraschallintensitéit oder d’Zäit reduzéieren, déi fir eng komplett Lyse néideg ass. Dëst ka fir empfindlech Proteinnen oder schwéier ze lyséierend Stämm nëtzlech sinn.
Wéi kann eng Iwwerhëtzung bei der Ultraschallbehandlung vun Hief verhënnert ginn?
Benotzt virgekillte Pufferen, de Pulsmodus, Killpausen an eng gekillte Plackenopstellung. Halt d’Mikroplack versigelt an iwwerwaacht d’Temperatur, wa méiglech. Benotzt fir empfindlech Proteinne méi kuerz ON-Intervaller a méi laang OFF-Intervaller a verschafft d’Prouwen ënner kale Bedéngungen.
Kann d’Ultraschallbehandlung a Mikroplacken de mechaneschen Opschloss mat Kugelen fir d’Lyse vun Hief ersetzen?
A ville Workflows, jo. D’Ultraschallbehandlung a Mikroplacke kann de mechaneschen Opschloss mat Kugelen ersetzen, wann eng propper, reproduzéierbar a parallel Lyse néideg ass. Si vermeit d’Handhabung vu Kugelen, reduzéiert d’Komplexitéit vum Verbrauchsmaterial a vereinfacht d’Automatiséierung. All Uwendung sollt awer validéiert ginn, andeems d’Lyseausbeut, d’Integritéit vun de Proteinnen an d’Leeschtung vum Assay verglach ginn.
Ass d’Ultraschallbehandlung a Mikroplacke fir d’Extraktioun vu Proteinnen aus Hief gëeegent?
Jo. D’Ultraschallbehandlung a Mikroplacken ass gutt fir d’Extraktioun vu Proteinnen aus Hief gëeegent, besonnesch wa vill Klonen oder Kulturbedéngunge verglach musse ginn. Proteaseinhibitoren, kal Pufferen a kontrolléiert Pulsastellungen hëllefen, d’Qualitéit vun de Proteinnen ze erhalen.
Kann déi selwecht Method fir d’Extraktioun vun DNA, RNA a Proteinne benotzt ginn?
Dat selwecht Grondprinzip vun der Ultraschallbehandlung ka benotzt ginn, mee de Puffer an d’Prozessbedéngunge sollten un d’Zilmoleküll ugepasst ginn. Workflows fir Proteinnen erfuerderen eng Hemmung vun de Proteasen an eng Temperaturkontroll. Workflows fir RNA erfuerderen eng RNase-fräi Handhabung an eng staark Killung. Workflows fir DNA kënnen ënnerschiddlech Lyse- a Rengegungsbedéngungen erfuerderen, jee nodeem, ob intakt genomesch DNA oder fragmentéiert DNA gewënscht ass.
Wéi ee Plackentyp sollt fir d’Lyse vun Hief benotzt ginn?
Benotzt eng Mikroplack oder eng Deep-Well-Plack, déi mat der Ultraschallbehandlung kompatibel ass, mat enger gëeegenter Versigelung. Placke mat ronnem Buedem sinn dacks nëtzlech fir d’Handhabung vu Suspensiounen. D’Plack sollt de gewielten Ultraschallbedéngungen, der Prouftemperatur an den Zentrifugatiounsschrëtt standhalen.
Wéi weess ech, ob d’Lyse vun der Hief komplett ass?
D’Effizienz vun der Lyse kann duerch Mikroskopie, d’Proteinausbeut, d’Enzymaktivitéit, d’Reduktioun vun der Viskositéit, eng SDS-PAGE-Analys, d’DNA/RNA-Ausbeut oder e Verglach mat enger bekannter Lysemethod iwwerpréift ginn. Bewäert fir d’Methodentwécklung souwuel d’Ausbeut wéi och d’Qualitéit vum fräigesaten Zilmoleküll.
UIP400MTP oder UIP550MTP: Wéi ee Mikroplacken-Ultraschallapparat sollt Dir wielen?
Den UIP400MTP ass e leeschtungsstaarke Mikroplacken-Ultraschallapparat fir d’routineméisseg Proufvirbereedung mat héijem Proufduerchsaz, dorënner d’Lyse vun Hief, d’Proteinextraktioun, d’Scherung vun DNA, d’Ofleise vu Biofilmer an d’Virbereedung vun Assayen. Hien ass fir Laboratoirë gëeegent, déi eng reproduzéierbar Ultraschallbehandlung a Standardplackeformater brauchen.
Den UIP550MTP bitt eng méi héich Ultraschallleeschtung a gëtt recommandéiert, wa méi usprochsvoll Uwendungen eng méi staark akustesch Intensitéit, méi kuerz Veraarbechtungszäiten, méi héich Proufbelaaschtungen oder méi robust Opschlossbedéngungen erfuerderen. Fir d’Lyse vun Hief ass den UIP550MTP besonnesch nëtzlech bei dichter Biomass, schwéier ze lyséierende Stämm, méi groussen Aarbechtsvolumenen an dem Screening vun der Expressioun mat héijem Proufduerchsaz.
Kann d’Lyse vun Hief duerch Ultraschallbehandlung a Mikroplacken automatiséiert ginn?
Jo. D’Ultraschallbehandlung a Mikroplacken ass gutt fir automatiséiert Laborworkflows gëeegent, well d’Prouwen am Plackeformat bleiwen. Dëst ënnerstëtzt d’Integratioun mat Pipettéiersystemer, der Plackenhandhabung, der Zentrifugatioun, der Virbereedung vun Assayen a Screening-Workflows mat héijem Proufduerchsaz.
Literatur / Referenzen
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics 2024.
