პლაზმიდის მომზადება ულტრაბგერითი გამოყენებით
ულტრაბგერითი პლაზმური დნმ-ის ფრაგმენტაციის საიმედო ტექნიკაა. ზუსტად კონტროლირებადი ამპლიტუდა, პულსაციის რეჟიმი და ტემპერატურის კონტროლი არის ულტრაბგერითი აპარატის ყველაზე მნიშვნელოვანი მახასიათებელი პლაზმიდის ფრაგმენტაციის უვნებლობისთვის. გარდა ამისა, გარკვეული აგენტების გამოყენება ხელს უწყობს პლაზმიდის დეგრადაციისგან დაცვას. Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ სხვადასხვა გადაწყვეტილებებს ერთი ფლაკონებიდან კონტროლირებადი პლაზმიდის ფრაგმენტაციისთვის, მრავალი ნიმუშის და ასევე მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტების ერთდროულად გაჟღერებისთვის. შეიტყვეთ მეტი წარმატებული ულტრაბგერითი პლაზმიდის ფრაგმენტაციის შესახებ!
UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტების ზუსტად კონტროლირებადი ულტრაბგერითი გამომუშავების საშუალებას იძლევა. UIP400MTP-ის ერთ-ერთი გამოყენება არის პლაზმიდური დნმ-ის ფრაგმენტაცია სპეციალურად დამიზნებული სიგრძის ფრაგმენტების მისაღებად.
პლაზმიდის გახეხვა ულტრაბგერითი გამოყენებით
როდესაც დნმ-ის ნიმუშები ექვემდებარება ულტრაბგერითი ტალღებს, ულტრაბგერითი წარმოქმნილი ვიბრაციები ქმნიან აკუსტიკური კავიტაციას სითხეში, რომელიც ჭრის ან არღვევს მაღალი მოლეკულური წონის დნმ-ის მოლეკულებს მექანიკური ძალების მეშვეობით. Sonication არის ყველაზე ფართოდ გამოყენებული მეთოდი დნმ-ის ცვალებადობის ექსპერიმენტებისთვის, აპლიკაციების ჩათვლით, როგორიცაა Chromatin immunoprecipitation (ChIP), რომლისთვისაც მცირე ფრაგმენტების ზომები აბსოლუტურად მნიშვნელოვანია მაღალი გარჩევადობის მისაღებად. (შდრ. Tseng et al., 2012)
პლაზმიდური დნმ (pDNA) არის დნმ-ის სპეციფიკური ფორმა, რომელიც ხასიათდება მისი რგოლის ფორმით და გვხვდება ბაქტერიებსა და ზოგიერთ ევკარიოტში.
Supercoiled pDNA არის პლაზმიდური დნმ-ის სასურველი ფორმა, რადგან ის აჩვენებს საუკეთესო შედეგებს ქვედა ნაკადის პროცესებში, როგორიცაა ავტომატური თანმიმდევრობა და ტრანსფექცია. ულტრაბგერითი დამუშავება შესაფერისია დნმ-ის ფრაგმენტაციისთვის, მათ შორის სუპერკოილირებული pDNA-ს წარმატებით.
ტომპსონი და სხვ. (2008) აჩვენა, რომ პლაზმიდური ზონირება, რომელიც ცნობილია ზეგადახვეული დნმ-ის ფრაგმენტად, ეფექტური გზაა phred20 მიმდევრობის წაკითხვის სიგრძის გასაუმჯობესებლად იმ დონემდე, რომ ისინი მნიშვნელოვნად არ განსხვავდებიან Beckman Coulter-ის საკონტროლო შაბლონისგან ან ფერმენტულად ხაზოვანი პლაზმიდებისგან.
- ზუსტად კონტროლირებადი
- რეპროდუცირებადი შედეგები
- რეგულირდება დნმ-ის ფრაგმენტების სიგრძეზე
- ტემპერატურის კონტროლი
- მასშტაბირებადი ნიმუშის ნებისმიერ ზომაზე
პლაზმიდური ვექტორების გამოყენება
პლაზმიდები ხშირად გამოიყენება როგორც გენების კლონირების, გადაცემის და მანიპულირების იარაღები. როდესაც პლაზმიდები ექსპერიმენტულად გამოიყენება ამ მიზნებისათვის, მათ უწოდებენ ვექტორებს. დნმ-ის ფრაგმენტები ან გენები შეიძლება შევიდეს პლაზმიდურ ვექტორში, რაც ქმნის ე.წ. რეკომბინანტულ პლაზმიდს. პლაზმიდური ვექტორები გამოიყენება როგორც სატრანსპორტო საშუალებები რეკომბინანტული დნმ-ის მასპინძელ უჯრედში გადასაყვანად და წარმოადგენს მოლეკულური კლონირების ძირითად კომპონენტს.
“არავირუსული ვექტორები ფართოდ არის შესწავლილი მათი პოტენციური გამოყენებისთვის გენურ თერაპიაში სხვადასხვა გართულებული დაავადებების სამკურნალოდ. არავირუსული ვექტორები იცავს პლაზმიდურ დნმ-ს ფიზიკური, ქიმიური და ფერმენტული დეგრადაციისგან და აწვდის დნმ-ის მოლეკულას სამიზნე ადგილზე. მაგალითად, კათიონური ლიპოსომები, ქიტოზანი და სხვა დადებითად დამუხტული ნანონაწილაკები ქმნიან კომპლექსებს პლაზმიდურ დნმ-თან ელექტროსტატიკური ურთიერთქმედების გზით. თუმცა, ადვილად წარმოქმნილი კათიონური ლიპოსომა/პლაზმიდური დნმ-ის კომპლექსები შედარებით დიდია (ანუ, 300-400 ნმ) და ბუნებით ჰეტეროგენულია, რაც ართულებს მათ გამოყენებას ფარმაცევტულ პროგრამებში. დიდი და ჰეტეროგენული პლაზმიდური დნმ/ლიპოსომები, პლაზმიდური დნმ/აეროზოლები და პლაზმიდური დნმ/პეპტიდების კომპლექსები შეიძლება შემცირდეს პატარა და ერთგვაროვან ნაწილაკებამდე ულტრაბგერითი გამოკვლევის გამოყენებით.” (სარკერი და სხვები, 2019)
პლაზმიდური ვექტორების გამოყენების თვალსაჩინო მაგალითია CRISPR–Cas9. CRISPR–Cas9 სისტემა, როგორც წესი, მიეწოდება უჯრედებს, როგორც ერთი დიდი პლაზმიდი ან მრავალი პატარა პლაზმიდი, რომელიც კოდირებს სამიზნე თანმიმდევრობას, CRISPR სახელმძღვანელოს და Cas9.
დნმ-ით დატვირთული PLGA ნანონაწილაკების ულტრაბგერითი მომზადება ნანოპრეციპიტაციით
ჯო და სხვ. (2020) გამოიყენა პოლი(ლაქტურ-კო-გლიკოლის მჟავა) (PLGA) ნანონაწილაკების მატარებლის შესაქმნელად მოდელის CRISPR-Cas9 პლაზმიდის მიწოდებისთვის ძვლის ტვინის პირველადი მაკროფაგებში. PLGA ნანონაწილაკების ნანონალექისთვის გამოიყენეს PLGA ორი განსხვავებული ბოლო ჯგუფით (ესტერი და ამინ ჯგუფები) იმ მიზნით, რომ დადებითად დამუხტული ამინის ბოლო ქუდები გაზარდონ კაფსულაციის ეფექტურობა და დატვირთვა მასსა და უარყოფითად დამუხტულ ხერხემალს შორის მუხტის ურთიერთქმედების გამო. დნმ. 50 მლ პოლიპროპილენის კონუსურ ცენტრიფუგა მილში, 100 მგ Pluronic F127 იხსნება 20 მლ ავტოკლავირებულ DI წყალში მორევის შერევით, რასაც მოჰყვა 30 წუთი ნაზი ხმოვანი გამოსხივება ულტრაბგერითი აბაზანის გამოყენებით (იხილეთ CupHorn). დაემატა ავტოკლავირებული მაგნიტური ამრევი ზოლი და ხსნარი შერეული იყო 600 RPM-ზე 30 წუთის განმავლობაში, სანამ სხვა ხსნარები მზადდებოდა. დნმ-ის არასპეციფიკური ადსორბციის შესამცირებლად მინის ნაწარმის ნაცვლად პლასტიკური ლაბორატორია გამოიყენებოდა. DMF-ში გახსნილი PLGA-ს (44,48 მგ/მლ) და THF-ში გახსნილი TIPS პენტაცენის (0,667 მგ/მლ) ხსნარები დამზადდა ცალკე. PLGA დარჩა მშვიდად, რათა დასველდეს DMF-ში 30 წუთის განმავლობაში, სანამ 30 წუთის განმავლობაში გაჟღერდა. (სრული პროტოკოლისთვის იხილეთ Jo et al., 2020)
- დნმ-ის ექსტრაქცია
- დნმ-ის კაფსულაცია
- ნანონაწილაკებით დაფარული დნმ-ის დისპერსია
- პლაზმური დნმ-ის მიწოდება უჯრედებში
UP200St CupHorn ნიმუშების არაპირდაპირი გაჟღერებისთვის, მაგ. დნმ-ის ექსტრაქციისა და ფრაგმენტაციისთვის.
პლაზმური დნმ-ის დაცვა სონიკაციის დროს
დნმ, მათ შორის პლაზმიდები და ზეგადახვეული პლაზმიდები, ძალიან მგრძნობიარე დეგრადაციაა. ფრაგმენტაციის ყველა ხელმისაწვდომი მეთოდი ცნობილია გარკვეული მინუსებით. ულტრაბგერითი დნმ-ის ფრაგმენტაცია ერთ-ერთი სასურველი მეთოდია, ვინაიდან კონტროლირებადი სონიკა დამცავ ზომებთან ერთად საშუალებას იძლევა შემცირდეს დნმ-ის ჯაჭვების თერმით გამოწვეული დაზიანება.
გარდა დაბალი ამპლიტუდის პარამეტრებისა, პულსაციის რეჟიმისა და ტემპერატურის კონტროლის დროს დნმ-ის ულტრაბგერითი შეწყვეტისას, გარკვეული აგენტების გამოყენებამ აჩვენა მნიშვნელოვანი დამცავი ეფექტი დნმ-ის დეგრადაციის წინააღმდეგ. მაგალითად, სხვადასხვა პოლიმერები, პეპტიდები და ლიპიდები იცავს პლაზმიდურ დნმ-ს ულტრაბგერითი გამოკვლევისას.
პლაზმური დნმ-ის და პლაზმიდური დნმ/IL ნანოკომპლექსების სტაბილურობა ულტრაბგერითი ათვლის სტრესის მიმართ გამოკვლეული იყო აგაროზის გელის ელექტროფორეზის ანალიზის გამოყენებით. ორივე პლაზმური დნმ და პლაზმიდური დნმ/IL ნანოკომპლექსები ექვემდებარებოდნენ ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს სხვადასხვა დროის განმავლობაში. პლაზმური დნმ ექვემდებარებოდა ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს 0, 10, 20, 30 და 40 წუთის განმავლობაში. თუმცა, პლაზმიდური დნმ/IL ნანოკომპლექსები ექვემდებარებოდა ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 და 120 წუთის განმავლობაში.
(შესწავლა და სურათი: ©Sarker et al., 2019)
სარკერი და სხვ. (2019) აჩვენა, რომ როდესაც პლაზმიდური დნმ/იონური სითხე (pDNA/IL) ნანოსტრუქტურები ექვემდებარებოდა ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 და 120 წუთის განმავლობაში და კომერციულად ხელმისაწვდომ კათიონურ გენთან კომპლექსი იყო. მიწოდების აგენტი lipofectamine, ფლუორესცენტური დადებითი უჯრედების პროცენტი იყო 80%, 98%, 97%, 85%, 78%, 65%, 65% და 50%, შესაბამისად (იხ. დიაგრამა ქვემოთ). ფლუორესცენტური დადებითი უჯრედების პროცენტული მაჩვენებელი გაიზარდა, როდესაც ნანოსტრუქტურები ექვემდებარებოდნენ ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს 10 და 20 წუთის განმავლობაში, შემდეგ კი ნელა შემცირდა.
იონური სითხის [Bmim][PF6] გავლენა პლაზმიდური დნმ-ის მიწოდებაზე COS7 უჯრედებისთვის. პლაზმიდური დნმ/IL (იონური თხევადი) ნანოკომპლექსები ექვემდებარებოდა ულტრაბგერითი ათვლის სტრესს 120 წუთამდე და კომპლექსური იყო LA-სთან COS7 უჯრედებში გადატანამდე. მონაცემები აჩვენებს GFP დადებითი HeLa უჯრედების საშუალო რაოდენობას (%), დათვლილი 10 სხვადასხვა მიკროსკოპულ ველში და ექსპერიმენტი ჩატარდა რამდენჯერმე სამ სხვადასხვა დღეს. (კვლევა და სქემა: ©Sarker et al., 2019)
პლაზმიდის დნმ შეიძლება იყოს დაცული აგენტის დამატებით ულტრაბგერითი ფრაგმენტაციამდე: შიშველი pDNA (A) და pDNA-ის ფორმულირება 1,5 მმ CaCl2 და 20% (ვ/ვ) ტ-ბუტანოლით (B) ხმით გამოწვეული დეგრადაცია.
ნიმუშები გაჟღერდა 20 ვტ-იანი ზონდით 120 წმ-მდე, როგორც მითითებულია თითოეული ზოლის ზედა ნაწილში. ხაზი H შეესაბამება Hyperladder I ™️ მარკერს. მითითებულია OC და SC პლაზმიდური ზოლები.
(შესწავლა და სურათები: ©Wu et al., 2009)
ულტრაბგერითი ლიზატის მომზადება
ულტრაბგერითი უჯრედის ლიზის პროტოკოლი
დაიწყეთ უჯრედების გამდიდრებული ნიმუშით, რომელიც მომზადდა უჯრედების განცალკევების მეთოდით (მაგ., უჯრედების იმუნომაგნიტური გამოყოფა, ფლუორესცენტით გააქტიურებული უჯრედების დახარისხება (FACS), სიმკვრივის გრადიენტური ცენტრიფუგაცია, იმუნოდენტურ უჯრედების იზოლაცია).
უჯრედის ნიმუშებმა უნდა აჩვენონ ლიზისის ბუფერის მოცულობა, რომელიც შეესაბამება ექსპერიმენტული მიზნისა და ზონდის ტიპის ულტრაბგერით.
უპირატესობა ენიჭება ჰიპოტონურ ბუფერებს, რადგან ისინი აძლიერებენ უჯრედების ულტრაბგერით ლიზას. მნიშვნელოვანია, რომ დანამატები და მარილის კონცენტრაცია სათანადოდ იქნას გამოყენებული.
აირჩიეთ თქვენი ულტრაბგერითი ლიზის მოწყობილობა: ფლაკონების არაპირდაპირი გაჟღერებისთვის რეკომენდებულია VialTweeter ან CupHorn. მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებისთვის, UIP400MTP იდეალური ულტრაბგერითია. და კლასიკური ზონდის ტიპის sonication, ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი, როგორც UP100H ან UP200Ht მიკრო წვერით ყველაზე შესაფერისია.
პროტოკოლი ზონდის ტიპის სონიკაციისთვის: მოათავსეთ ულტრაბგერითი ზონდი ნიმუშის მოცულობაში მიკროცენტრიფუგის მილში და დაახლ. 10 წამი. დნმ-ის ნიმუშიდან გამომდინარე, სონიკა შეიძლება განმეორდეს კიდევ ერთხელ ან ორჯერ. საჭირო ულტრაბგერითი ენერგიის შეყვანა (Ws/mL) დამოკიდებულია ნიმუშის სიბლანტეზე და დნმ-ის ტიპზე. გაგრილება ყინულის აბაზანით და ულტრაბგერითი პულსაციის რეჟიმით ხელს უშლის ნიმუშის თერმულად დეგრადაციას.
ულტრაბგერითი ლიზისის შემდეგ, ნიმუში ცენტრიფუგირდება მარცვლების ნარჩენების გამოსაყოფად (შეიცავს არალიზირებულ უჯრედებს, ბირთვებს და გაუანალიზებელ ორგანელებს)
თუ ნიმუში დაუყოვნებლივ არ იქნა დამუშავებული, მისი შენახვა შესაძლებელია შესაბამის ტემპერატურაზე მისი სიცოცხლისუნარიანობის შესანარჩუნებლად.
ულტრაბგერითი დნმ-ის ფრაგმენტაციისთვის
Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ სხვადასხვა ულტრაბგერითი პლატფორმას დნმ-ის, რნმ-ისა და ქრომატინის ფრაგმენტაციისათვის. ეს განსხვავებული პლატფორმები მოიცავს ულტრაბგერითი ზონდებს (სონოტროდებს), არაპირდაპირი ხახვის ხსნარებს მრავალჯერადი მილის ან მრავალ ჭაბურღიანი ფირფიტის ნიმუშის ერთდროულად მოსამზადებლად (მაგ., 96-ჭაბურღიანი ფირფიტები, მიკროტიტრული ფირფიტები), სონორეაქტორებსა და ულტრაბგერითი კაფრენებს. დნმ-ის შეჭრის ყველა პლატფორმა იკვებება სიხშირით მორგებული, მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი პროცესორებით, რომლებიც ზუსტად კონტროლირებადია და იძლევა რეპროდუქციულ შედეგებს.
ულტრაბგერითი პროცესორები ნებისმიერი ნიმუშის ნომრისა და ზომისათვის
Hielscher-ის მრავალნიმუშიანი ულტრაბგერითი VialTweeter (10-მდე ტესტი მილისთვის) და UIP400MTP (მიკროპლატების/მულტიბგერითი ფირფიტებისთვის) ადვილად შესაძლებელი ხდება ნიმუშის დამუშავების დროის შემცირება ინტენსიური და ზუსტად კონტროლირებადი ულტრაბგერითი გამოკვლევის შედეგად, დნმ-ის ფრაგმენტების სასურველი ზომის განაწილებისა და გამოსავლიანობის მიღებისას. . ულტრაბგერითი დნმ-ის ფრაგმენტაცია პლაზმიდის მომზადების ნაბიჯებს ხდის ეფექტურ, საიმედო და მასშტაბურს. პროტოკოლების წრფივი მასშტაბირება შესაძლებელია ერთიდან მრავალ ნიმუშამდე, მუდმივი ულტრაბგერითი პარამეტრების გამოყენებით.
ულტრაბგერითი ზონდი ერთიდან ხუთამდე თითით იდეალურია მცირე რაოდენობის ნიმუშების მოსამზადებლად. Hielscher-ის ლაბორატორიული ულტრაბგერითები ხელმისაწვდომია სხვადასხვა სიმძლავრის დონით, ასე რომ თქვენ შეგიძლიათ აირჩიოთ იდეალური ულტრაბგერითი დამრღვევი თქვენი დნმ-თან დაკავშირებული აპლიკაციისთვის.
ულტრაბგერითი მრავალ ნიმუშის მოსამზადებელი განყოფილება VialTweeter საშუალებას იძლევა 10 ფლაკონის ერთდროულად sonication. დამჭერი მოწყობილობის VialPress საშუალებით, 4 დამატებითი მილის დაპრესვა შესაძლებელია წინა მხარეს ინტენსიური გამჟღავნების მიზნით.
ზუსტი პროცესი კონტროლი
ზუსტად კონტროლირებადი ხმის პარამეტრებს გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს, ვინაიდან ამომწურავმა სონიფიკაციამ შეიძლება გაანადგუროს დნმ, რნმ და ქრომატინი, მაგრამ არაადეკვატური ულტრაბგერითი მოჭრის შედეგად ხდება ძალიან გრძელი დნმ და ქრომატინის ფრაგმენტები. Hielscher– ის ციფრული ულტრაბგერითი მოწყობილობები ადვილად შეიძლება დაყენდეს ზუსტი ხმის პარამეტრზე. ხმის კონკრეტული პარამეტრები ასევე შეიძლება შენახული იყოს როგორც დაპროგრამებული პარამეტრი იმავე პროცედურის სწრაფი გამეორებისთვის.
ყველა ბგერა ავტომატურად პროტოკოლდება და ინახება როგორც CSV ფაილი ჩაშენებულ SD ბარათზე. ეს იძლევა ზუსტი დოკუმენტაციის ჩატარებული კვლევების და შესაძლებელს ხდის გადახედოს sonication გაშვებული ადვილად.
ბრაუზერის დისტანციური მართვის საშუალებით, ყველა ციფრული ულტრაბგერითი ოპერატორის მართვა შესაძლებელია ნებისმიერი სტანდარტული ბრაუზერის საშუალებით. დამატებითი პროგრამული უზრუნველყოფის დაყენება არ არის საჭირო, რადგან LAN კავშირი არის ძალიან მარტივი plug-n-play დაყენება.
ულტრაბგერითი დნმ-ის მომზადების დროს ყველაზე მაღალი მომხმარებლის მეგობრობა
ყველა Hielscher ულტრაბგერითი მოწყობილობა შექმნილია მაღალი ხარისხის ულტრაბგერის გასაკეთებლად, ამავე დროს ყოველთვის მოსახერხებელი და მოსახერხებელი. ყველა პარამეტრი კარგად არის სტრუქტურირებული მკაფიო მენიუში, რომლის წვდომა შესაძლებელია ფერადი სენსორული ეკრანის ან ბრაუზერის დისტანციური მართვის საშუალებით. ჭკვიანი პროგრამული უზრუნველყოფა პროგრამირებადი პარამეტრებით და მონაცემების ავტომატური ჩაწერით უზრუნველყოფს ხმის ოპტიმალურ პარამეტრებს საიმედო და განმეორებადი შედეგებისთვის. სუფთა და ადვილად გამოსაყენებელი მენიუს ინტერფეისი აქცევს Hielscher ექოსკოპიას მოსახერხებელ და ეფექტურ მოწყობილობებად.
ქვემოთ მოყვანილი ცხრილი გაძლევთ მითითებას ჩვენი ლაბორატორიის ულტრაბგერითი აპარატების სავარაუდო დამუშავების შესაძლებლობის შესახებ უჯრედების ლიზისისა და დნმ-ის ფრაგმენტაციისთვის:
| Batch მოცულობა | დინების სიჩქარე | რეკომენდირებული მოწყობილობები |
|---|---|---|
| მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტები | ნ/ა | UIP400MTP |
| ფლაკონები, პატარა ჭიქა | ნ/ა | ულტრაბგერითი cuphorn |
| 10 ფლაკონამდე | ნ/ა | VialTweeter |
| 1-დან 500 მლ-მდე | 10 დან 200 მლ / წთ | UP100H |
| 10 დან 2000 მლ | 20 დან 400 მლ / წთ | Uf200 ः t, UP400St |
დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!
ლიტერატურა / ცნობები
- Mark D. Thompson, Kelly G. Aukema, Dana M. O’Bryan, Stephen D. Rader, Brent W. Murray (2008): Plasmid sonication improves sequencing efficiency and quality in the Beckman Coulter CEQ system. BioTechniques 2008, 45:3, 327-329
- Fykse, Else; Olsen, Jaran; Skogan, Gunnar (2003): Application of sonication to release DNA from Bacillus cereus for quantitative detection by real-time PCR. Journal of microbiological methods 55, 2003. 1-10.
- Ming L. Wu; Sindélia S. Freitas; Gabriel A. Monteiro; Duarte M. F. Prazeres; José A. L. Santos (2009). Stabilization of naked and condensed plasmid DNA against degradation induced by ultrasounds and high-shear vortices. Biotechnology Applied Biochemistry 53(4), 2009.
- Sarker, Satya Ranjan; Ball, Andrew S.; Bhargava, Suresh Kumar; Soni., Sarvesh K. (2019): Evaluation of plasmid DNA stability against ultrasonic shear stress and its in vitro delivery efficiency using ionic liquid [Bmim][PF6]. RSC Advances 9, 2019. 29225-29231.
- Miguel Larguinho, Hugo M. Santos, Gonçalo Doria, H. Scholz, Pedro V. Baptista, José L. Capelo (2010): Development of a fast and efficient ultrasonic-based strategy for DNA fragmentation. Talanta, Volume 81, Issue 3, 2010. 881-886.
- Julie Ann Wyber; Julie Andrews; Antony D’Emanuele (1997): The Use of Sonication for the Efficient Delivery of Plasmid DNA into Cells. Pharmaceutical Research 14(6), 1997. 750–756.
ფაქტები Worth Knowing
რა არის პლაზმიდები?
პლაზმიდი არის პატარა წრიული დნმ-ის მოლეკულა, რომელიც ფიზიკურად განცალკევებულია ქრომოსომული დნმ-ისგან და დამოუკიდებლად მრავლდება. პლაზმიდები ხშირად ასოცირდება გენებთან, რომლებიც ხელს უწყობენ ორგანიზმის გადარჩენას და ანიჭებენ სპეციფიკურ უპირატესობებს, მაგალითად, ანტიბიოტიკების წინააღმდეგობას. პლაზმიდები ყველაზე ხშირად გვხვდება როგორც პატარა წრიული, ორჯაჭვიანი დნმ-ის მოლეკულები ბაქტერიებში; თუმცა, პლაზმიდები ზოგჯერ გვხვდება არქეებსა და ევკარიოტულ ორგანიზმებში. პლაზმიდები მნიშვნელოვანი ინსტრუმენტებია მოლეკულურ ბიოლოგიაში, გენეტიკაში, ბიოქიმიასა და სიცოცხლის მეცნიერებაში. გენური ინჟინერიაში ცნობილი როგორც ვექტორები, პლაზმიდები გამოიყენება გარკვეული გენების გასამრავლებლად ან გამოხატვისთვის. ვექტორის მიზანმიმართულ ცვლილებას ვექტორული დიზაინი ეწოდება.
GFP ანალიზი უჯრედულ კვლევაში
მწვანე ფლუორესცენტური პროტეინი (GFP) არის მრავალმხრივი ბიოლოგიური მარკერი ფიზიოლოგიური პროცესების მონიტორინგისთვის, ცილის ლოკალიზაციის ვიზუალიზაციისთვის და ტრანსგენური ექსპრესიის გამოსავლენად in vivo. GFP შეიძლება აღფრთოვანებული იყოს 488 ნმ ლაზერული ხაზით და ოპტიმალურად გამოვლენილია 510 ნმ.
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორებისგან ლაბორატორია to სამრეწველო ზომა.