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UIP400MTPソニケーターによるプリオンのハイスループット検出のためのPMCA

UIP400MTPマルチウェルプレートソニケーターは、プロテインミスフォールディングサイクリックアンプリフィケーション（PMCA）におけるハイスループットなサンプル前処理のための強力なソリューションを提供します。複数のウェルに均一なエネルギー分布を与え、正確な超音波処理パラメーターを維持することで、このシステムは多数のサンプルを卓越した再現性で同時に処理することを可能にします。これらの機能は、アッセイ阻害剤によって結果が不明瞭になる唾液のような困難な生物学的サンプル中の低濃度のプリオンを検出するためにPMCAを最適化するために不可欠です。

子牛の慢性消耗性疾患（CWD）やヒトのクロイツフェルト・ヤコブ病（CJD）などのプリオン病は、ミスフォールディングしたプリオンタンパク質（PrP）によって引き起こされる神経変性疾患である。Sc).これらの病気は、唾液、血液、尿などの体液中に低レベルの感染性プリオンを含むことが多く、診断や研究を複雑にしている。環境マトリックス中に排出されたプリオンを介したCWDの水平伝播は、野生動物の管理や生態系の健全性にとって特に重大な意味を持つ。同様に、クロイツフェルト・ヤコブ病のような病気では、ヒトのサンプルからミスフォールディング・プリオンタンパク質を確実に増幅することが、診断の進歩や病気の進行の理解に不可欠である。

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チューブラック内のマルチウェルプレートまたはバイアルを超音波処理するマルチサンプルソニケーターUIP400MTPは、プリオンのPMCA（タンパク質ミスフォールディングサイクリック増幅）を効率的にハイスループットで行うことができます。

高効率タンパク質ミスフォールディング増幅法 UIP400MTPハイスループットソニケーター付き

マイクロプレートソニケーター UIP400MTP を使用して、信頼性の高い迅速なバイオフィルム剥離により、MBEC アッセイを促進します。UIP400MTPは、あらゆる標準的なアッセイプレートに対応し、細胞やバイオフィルムを効率的に剥離します。修正されたPMCAプロトコルを適用することにより、一般的なアッセイ阻害剤（唾液中のムチンなど）を回避し、リアルタイムクエーキング誘導変換（RT-QuIC）などの技術を用いなければ検出できないかあいまいであったプリオンを高感度で検出することができる。これらの進歩により、様々な疾患に対するプリオン検出が強化され、PMCAはプリオン研究と診断に不可欠なツールとなっています。マルチウェルプレートソニケーターUIP400MTPは、チューブラック内のマイクロプレート（6、24、96ウェルプレートなど）またはバイアル内の多数のサンプルを超音波処理するハイスループットPMCAを容易にします。

高スループットタンパク質ミスフォールディング環状増幅（PMCA）プロトコール

以下のプロトコールにより、全く同じ条件下でサンプル数の多い試料を効率的に処理し、確実な研究結果を得ることができる。

試料調製

スターティング・マテリアル：
サンプルを準備する：

  • サルコシル抽出ペレットをPMCA基質に懸濁する。
  • 脳ホモジネートまたは血液サンプルにプリオンシードを直接スパイクする。

基質：

  • PrPを過剰発現させたトランスジェニックマウスから調製した10%(wt/vol)の脳ホモジネートを使用する。C (Tgマウスなど）。
  • 脳組織をホモジナイズする：
    – 1×PBS
    – 150 mM NaCl。
    – 1% Triton X-100.
  • 基質は使用するまで-80℃で保存する。

マイクロプレートまたはチューブでのサンプルセットアップ：
チューブ：

  • 90μLの脳ホモジネート基質を加え、10μLのサンプル（血液、脳ホモジネート、またはサルコシルペレットなど）で播種する。
  • 各0.2mLチューブにテフロンビーズ（直径1.59mmまたは2.38mm）3個を入れる。
  • UIP400MTPソニケーターと互換性のあるラックに真空管を取り付けます。

6ウェルマイクロプレート

  • 脳ホモジネート基質5 mLを加え、1ウェルあたり500 μLのサンプルで播種する。
  • 各ウェルに3個のテフロンビーズを加える。

PMCAの手続き

配置だ：
製造元の指示に従って、チューブラックまたは6ウェルマイクロプレートをUIP400MTPソニケーターにセットする。

サイクリング・プログラム：
以下のようにPMCAを144サイクル行う：

  • インキュベーション：37℃で29分30秒。
  • 超音波処理：60%の振幅で30秒。
  • 温度をモニターする：プラグイン式の温度センサーを使用してサンプルの温度をモニターし、UIP400MTPを最高温度48～50℃になるようにプログラムします。

その後のラウンド
144サイクルの最初のラウンドが終了したら、増幅された材料のアリコートを移す：

  • 新鮮なトランスジェニックマウス脳ホモジネート基質に10倍希釈する。
  • 同じ超音波処理パラメーターを維持したまま、96回のPMCAサイクルを行う。
  • 希望するラウンド数（通常5ラウンドまで）続ける。

PrPの検出Sc

  1. プロテイナーゼK消化：
    – サンプルをProteinase K（50 μg/mL）で37℃、1時間処理する。
    – SDS-サンプルバッファーを加え、10分間煮沸して消化を終了する。
  2. ウェスタンブロット分析：
    – 消化されたサンプルを用いて分析する：
    – 6H4またはPRC1抗PrP抗体。
    – SDS-PAGEを行い、検出のためにPVDF膜に移す。
標準的なマイクロプレートやPCRプレートをUIP400MTPで超音波処理します。

UIP400MTPは、信頼性の高いサンプル前処理と、既存のラボワークフローへの容易な統合を保証します。

 

Hielscher UIP400MTPは、マルチウェルプレート、PCRプレート、サンプルチューブに最適なソニケーターです。400ワットの連続超音波出力で、以下のような用途に適しています：細胞溶解、乳化、タンパク質抽出、DNA/RNA断片化、凝集除去、FFPE抽出、細胞およびバイオフィルムの剥離、乳化などの用途に適しています。
UIP400MTPは超音波バスではありません。集中超音波処理用の高強度カップホーンです。この強力な非接触式ソニケーターは、標準ウェルプレートのすべてのウェルに均一な超音波照射を行います。振幅、出力、パルスを正確に制御できます。タイマーと温度プローブが内蔵されているため、安定した結果が得られます。UIP400MTPプレートソニケーターは、ウォーターバスでサンプルを冷却します（外部冷却器はオプション）。

マルチウェルプレート用ソニケーター - Hielscher UIP400MTP - 400ワット

ビデオのサムネイル

 

より多くのサンプルを処理し、よりロバストな結果を得る

UIP400MTPは、プリオンのハイスループットPMCA（タンパク質ミスフォールディング環状増幅）を可能にします。 UIP400MTPマルチウェルプレートソニケーターは、タンパク質のミスフォールディングサイクリック増幅（PMCA）の効率とスケーラビリティを大幅に向上させ、従来時間がかかっていた手順に対応します。96ウェルプレートで最大96サンプルを同時に処理できるこのシステムは、すべてのウェルで正確かつ均一な超音波処理条件を維持しながら、PMCAのワークフローを合理化します。このハイスループット機能は、手作業を最小限に抑え、労働集約的なステップを減らし、再現性を保証するため、プリオン研究に不可欠なツールとなっています。慢性消耗性疾患やクロイツフェルト・ヤコブ病の研究にかかわらず、UIP400MTPは大規模な研究をより効率的に進め、研究者が最新の診断および科学的応用の要求に応えることを可能にします。

詳細はお問い合わせください。

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関連トピック

文献・参考文献

マルチウェルプレートソニケーターUIP400MTPを使用したタンパク質のミスフォールディングサイクリック増幅により、ハイスループットのサンプル調製が容易になる

マイクロプレートソニケーター UIP400MTP ハイスループットPMCAのために

よくある質問

プリオンとは何か？

プリオンのタンパク質ミスフォールディングサイクリック増幅（PMCA）は、マルチサンプルソニケーターUIP400MTPによって大幅に向上します。96ウェルプレートまたはチューブラックを超音波処理することにより、UIP400MTPはハイスループットのPMCAを可能にします。プリオンは、特に脳において、正常な細胞タンパク質の異常な折りたたみを誘導することができるミスフォールディングタンパク質である。細菌やウイルスとは異なり、プリオンは核酸を持たず、自己テンプレート機構によって増殖し、クロイツフェルト・ヤコブ病、牛海綿状脳症（狂牛病）、羊のスクレイピーなどの進行性神経変性疾患を引き起こす。標準的な滅菌プロセスに対する耐性は、その特異な病原性を際立たせ、医療や研究の場において重要な課題となっている。

PMCAテクニックとは？

Protein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA)は、試験管内でミスフォールディングしたプリオンタンパク質(PrP^Sc)を増幅するために用いられる実験技術である。これは、正常な細胞プリオンタンパク質(PrP^C)が、プリオン病の特徴であるミスフォールディングした感染型(PrP^Sc)に変化するのを模倣したものである。このプロセスでは、PrP^Scの凝集を促進するために、インキュベーションと超音波処理のサイクルが行われ、低レベルのプリオンを検出するための強力なツールとなる。

クロイツフェルト・ヤコブ病の原因となるタンパク質のミスフォールディングとは？

クロイツフェルト・ヤコブ病（CJD）は、プリオンタンパク質（PrP）のミスフォールディングによって引き起こされる。正常なアイソフォーム（PrPC)はβシートに富んだ異常なコンフォメーションをとる(PrPSc)に感染し、脳内でアミロイド凝集体を形成し、神経変性を引き起こす。

感染性プリオンのタンパク質ミスフォールディング環状増幅とは？

PMCA（Protein Misfolding Cyclic Amplification）とは、プリオン（PrP）の感染型を増幅する方法である。Scを繰り返しインキュベートした。C 少量のPrPSc.各サイクルの間、PrPSc はPrPのミスフォールディングを触媒する。Cそして、超音波処理によって凝集体を断片化し、より多くの播種部位を作り出す。これは生体内でのプリオンの複製を模倣するものであり、生体試料中のプリオンの高感度検出を可能にする。

何がPrPをミスフォールドさせるのか？

PrPがミスフォールディングして病原性PrPになるSc フォームをトリガーすることができる：

  • 散発性プリオン病における自発的ミスフォールディング。
  • PRNP遺伝子の遺伝子変異（家族性プリオン病など）。
  • 感染性PrPへの曝露Sc 汚染された食品、医療処置、その他の手段を介して。
  • PrPを不安定化させるpH、金属イオン、補因子などの環境要因や構造要因C.

RT-QUICテストとは？

Real-Time Quaking-Induced Conversion (RT-QuIC)は、プリオン病の高感度診断アッセイです。PrPSc 組換えPrPを変換する能力を増幅することによりC をミスフォールドした凝集体に変化させる。この検査は、アミロイド線維形成の蛍光ベースの検出を用いるため、脳脊髄液（CSF）や他の組織におけるCJDのような疾患の診断に有用である。

高性能超音波Hielscherの製品レンジは、コンパクトな実験用超音波発生器から卓上型超音波発生器、そして工業用超音波システムまで、あらゆる範囲をカバーしています。

Hielscher Ultrasonics社は、高性能の超音波ホモジナイザーを製造しています。 ラブ への 工業用サイズ。

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