La metabolomica facilitata dalla sonicazione con elevata capacità di trattamento dei campioni

La metabolomica è il campo di ricerca che impiega tecniche con elevata capacità di trattamento dei campioni per caratterizzare e quantificare piccole molecole in vari fluidi biologici, come urina, siero, plasma, feci e saliva, rivelando firme metaboliche uniche. Il sonicatore UIP400MTP, progettato per piastre multipozzetto e dotato di un’elevata capacità di trattamento dei campioni, è uno strumento potente per la lisi delle cellule presenti in questi campioni, facilitando il rilascio dei metaboliti per le analisi successive. Questo approccio preciso e affidabile è essenziale per la metabolomica, nella quale un’accurata progettazione dello studio, una meticolosa preparazione dei campioni, una configurazione ottimizzata della piattaforma, un’analisi completa dei dati e un’interpretazione biologica significativa sono fondamentali. La metabolomica impiega sia approcci mirati, che si concentrano su specifiche classi di molecole come carboidrati, lipidi e amminoacidi, sia tecniche non mirate, che forniscono una panoramica ampia dei profili metabolici all’interno di un campione, rivelando l’intricata complessità della segnalazione metabolica.

Preparazione dei campioni con elevata capacità di trattamento mediante il sonicatore UIP400MTP per piastre a 96 pozzetti

L’impiego del sonicatore senza contatto UIP400MTP in combinazione con piastre a 96 pozzetti è un metodo efficiente per l’omogeneizzazione e l’estrazione dei metaboliti con elevata capacità di trattamento dei campioni. Questa configurazione evita il contatto diretto con il campione, riducendo il rischio di contaminazione incrociata durante il trattamento simultaneo di più campioni.

Protocollo passo dopo passo per l’omogeneizzazione con il sonicatore UIP400MTP per piastre a 96 pozzetti

1. Preparazione dei campioni metabolomici
   Distribuzione dei campioni: Distribuire ciascun campione (ad esempio feci, tessuto intestinale o contenuto luminale) nei singoli pozzetti di una piastra a 96 pozzetti o di una micropiastra.
   Solvente: I solventi organici, come metanolo, etanolo, acetonitrile, cloroformio e le loro miscele (acquose), sono essenziali per l’estrazione dei metaboliti, favorendo il rilascio dei metaboliti intracellulari dalla matrice cellulare. Utilizzare 100–300 µL di solvente per pozzetto, assicurando un volume sufficiente a immergere completamente il campione.
   Standard interni: Facoltativamente, aggiungere standard interni a ciascun pozzetto per la normalizzazione durante le successive analisi metabolomiche.
2. Preparazione del mezzo di accoppiamento
   Livello dell’acqua: Posizionare la piastra a 96 pozzetti sulla piattaforma di sonicazione riempita d’acqua (il mezzo di accoppiamento), come descritto nel manuale.
3. Configurazione dei parametri di UIP400MTP
   Impostazioni di potenza: Regolare l’ampiezza ultrasonica al 50–80% della potenza massima per un’omogeneizzazione efficiente.
   Modalità a impulsi: Impostare il ciclo di sonicazione alternando gli impulsi (ad esempio 30 secondi di attivazione, 30 secondi di pausa) per consentire il raffreddamento e prevenire il surriscaldamento dei campioni.
   Tempo totale: 4–10 minuti, a seconda della complessità e della resistenza del campione.
   Controllo della temperatura: Utilizzare un refrigeratore da laboratorio per mantenere l’acqua a 4–8°C durante la sonicazione e proteggere i metaboliti termosensibili.
4. Processo di sonicazione
   Avviare UIP400MTP per eseguire i cicli di sonicazione.
   Monitorare il processo tramite l’interfaccia di UIP400MTP.
   L’effetto della cavitazione omogeneizzerà i campioni e provocherà la lisi delle cellule nei pozzetti, rilasciando i metaboliti intracellulari nel solvente.
5. Dopo la sonicazione
   Centrifugazione: Dopo la sonicazione, trasferire il contenuto della piastra in provette di raccolta, se necessario. Centrifugare a 4.000–6.000 × g per 10 minuti per sedimentare i detriti insolubili e il materiale cellulare.
   Raccolta del surnatante: Trasferire con cautela il surnatante di ciascun pozzetto in nuove provette o piastre per l’analisi.
   Essiccazione facoltativa: Essiccare i surnatanti utilizzando un concentratore sotto vuoto (ad esempio SpeedVac) se è necessaria una concentrazione, quindi ricostituirli in un piccolo volume del solvente appropriato.

Sfruttate l’elevata capacità di trattamento dei campioni del sonicatore UIP400MTP per piastre multipozzetto e facilitate la vostra ricerca e le vostre analisi metabolomiche!

Principio della sonicazione senza contatto con UIP400MTP

UIP400MTP applica indirettamente onde ultrasoniche ai pozzetti di una piastra a 96 pozzetti tramite un mezzo di accoppiamento (ad esempio acqua). Queste onde generano cavitazione, che provoca la disgregazione cellulare e il rilascio dei metaboliti senza contatto fisico tra la sonda del sonicatore e il campione.

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