Aplikasi Ultrasonik dalam MonkeyPox Virus
Ultrasonication adalah metode pemrosesan penting untuk isolasi virus monkeypox (MPXV) dari sampel analitik, untuk fragmentasi DNA virus serta dalam pembuatan vaksin monkeypox. Untuk persiapan sampel sebelum diagnostik dan analisis (PCR, ELISA dll) ultrasonikasi digunakan untuk lise sel untuk melepaskan virus monkeypox dari interior sel dan / atau untuk fragmen DNA. Dalam produksi vaksin, aplikasinya berkisar dari partikel virus / persiapan DNA, enkapsulasi pada pembawa obat dan merumuskan inokula.
Di bawah ini Anda dapat menemukan informasi terperinci tentang persiapan sampel virus monkeypox ultrasonik serta produksi vaksin MPXV ultrasonically dibantu.
Apa yang akan Anda temukan di halaman ini:
- Ultrasonic Lisis untuk Monkeypox Virus Ekstraksi
- Fragmentasi Ultrasonik DNA Virus Monkeypox
- Aplikasi Ultrasonik dalam Produksi Vaksin MPXV
Sistem ultrasonikator 2x 1kW ini untuk operasi aliran kontinu dipasang di fasilitas produksi vaksin.
Ultrasonic Lisis dan Fragmentasi DNA sebelum Polymerase Chain Reaction (PCR)
Infeksi virus monkeypox terdeteksi oleh pengujian amplifikasi asam nukleat (NAAT), menggunakan reaksi berantai polimerase (PCR) waktu nyata atau konvensional, untuk mendeteksi urutan unik DNA virus. Sampel (misalnya dari swap nasofaring atau biopsi kulit) mengandung virus dalam sel.
Untuk analisis, virus harus dilepaskan dari sel-sel dan DNA virus harus terfragmentasi untuk PCR.
Ultrasonik Lisis:
Gangguan / lisis sel ultrasonik adalah metode yang andal dan efisien untuk mengisolasi virus dari sampel sel dan dengan demikian teknik yang lebih disukai daripada agen kimia, seperti lisozim, proteinase K dan deterjen yang berbeda yang secara alternatif digunakan untuk mencapai lisis sel dan pelepasan DNA.
Namun penggunaan reagen kimia tersebut membutuhkan persiapan sampel yang memakan waktu dalam beberapa langkah sebelum analisis PCR untuk mencegah penghambatan reaksi PCR. Karena inhibitor PCR mempengaruhi efisiensi amplifikasi, variasi kecil dari jumlah inhibitor yang tidak dihilangkan dapat menyebabkan variasi besar dalam amplifikasi produk PCR (Diaco, 1995).
Keuntungan dari ultrasonikasi untuk lisis adalah bahwa gangguan total struktur seluler dan pelepasan DNA tanpa perlu reagen lisis dan persiapan sampel yang memakan waktu diinginkan. (lihat Fykse et al., 2003)
Fragmentasi DNA Ultrasonik:
Fragmentasi DNA ultrasonik sederhana dan dapat diandalkan karena menghasilkan fragmen DNA yang panjangnya dapat disetel (basepairs, bp). Dengan menggunakan ultrasonografi, DNA dapat secara efektif difragmentasi ke panjang DNA yang ditargetkan. Kontrol yang tepat atas parameter ultrasonik dan opsi pendinginan canggih mencegah degradasi DNA.
Baca lebih lanjut tentang fragmentasi DNA ultrasonik!
Aplikasi Ultrasonik dalam Vaksin Virus Monkeypox
Vaksin yang digunakan untuk melawan virus monkeypox saat ini adalah vaksin virus hidup. Vaksin yang baru dikembangkan mungkin menggunakan platform lain seperti berbasis DNA Saat ini berisi viurs Vaccinia Ankara yang dimodifikasi, orthopoxvirus yang dilemahkan dan tidak direplikasi. Ini juga mengandung Tris (tris-aminomethane) dan natrium klorida. Vaksin ini juga dapat mengandung sejumlah kecil DNA dan protein dari sel Fibroblast Embrio Ayam, yang digunakan untuk menumbuhkan virus vaksin, benzonase, dan senyawa antibiotik seperti gentamisin dan ciprofloxacin.
Homogenisasi ultrasonik digunakan dalam produksi vaksin virus yang dilemahkan hidup, vaksin DNA, koktail DNA multi-valent, vaksin mRNA, vaksin protein rekombinan, vaksin partikel seperti virus, dll.
- dispersi partikel dan agen virus
- emulsi
- inaktivasi virus
- formulasi pembawa obat (NLC, SLN)
- enkapsulasi
- pembubaran agen
- persiapan ajuvan
- Degassing / De-Aeration
Protokol untuk Isolasi Ultrasonik Virus Monkeypox
Tim peneliti Stittelaar (2005) menggunakan lisis ultrasonik untuk melepaskan virus monkeypox dari kultur sel inang pertumbuhan serta dari sel-sel yang diperoleh melalui pertukaran tenggorokan dari primata yang terinfeksi.
Persiapan Vaksin Monkeypox:
Virus Monkeypox ditanam pada sel fibroblast embrio ayam bebas patogen spesifik. Setelah inkubasi selama 1 hingga 2 hari, suspensi sel virus dipanen oleh satu putaran pencairan beku dan kemudian dikonsentrasikan dengan sentrifugasi. Pelet itu diresuspasi kembali dan mengalami beberapa putaran homogenisasi ultrasonik.
Isolasi Virus Monkeypox dari Kera yang Divaksinasi:
Sampel dibekukan-dicairkan tiga kali dan disonikasi dalam CupHorn ultrasonik. Dua pengenceran (1:10 dan 1:100) dalam media transportasi yang dilengkapi dengan serum sapi janin 1% digunakan untuk menginokulasi monolayer sel Vero dalam pelat enam sumur. Setelah 1 jam inkubasi pada suhu 37 °C, inokula dihilangkan dan diganti dengan media kultur yang dilengkapi dengan serum sapi janin 1%. Monolayer dikultur selama 5 hari pada suhu 37 °C dan diwarnai dengan larutan kristal violet.
(lihat Stittelaar et al., 2005)
Ultrasonicators untuk Analisis Virus dan Produksi Vaksin
Hielscher Ultrasonics portofolio produk yang luas menawarkan ultrasonicator yang ideal untuk penelitian dan laboratorium analitis serta untuk pembuatan vaksin industri.
Hielscher Ultrasonics mengkhususkan diri dalam desain, manufaktur dan distribusi ultrasonicators berkinerja tinggi dan sono-bioreactors untuk digunakan dalam penelitian dan laboratorium analitis serta untuk implementasi dalam produksi vaksin industri (misalnya vaksin, Api).
Sonikasi dapat diterapkan pada pembuluh terbuka, reaktor tertutup yang diaduk terus menerus dan reaktor aliran terus menerus. Semua bagian dari sistem ultrasonik, yang bersentuhan dengan media cair, terbuat dari stainless steel, titanium, atau kaca. Suku cadang yang dapat diautoklaf dan perlengkapan sanitasi memastikan produksi di bawah kondisi tingkat farmasi.
Perekaman Data Otomatis: Perangkat lunak cerdas mencatat parameter proses sonikasi secara otomatis pada kartu memori SD terintegrasi. Kontrol yang tepat dari semua parameter proses memastikan reproduktibilitas, Standarisasi produksi, dan memfasilitasi pemenuhan standar keamanan produk farmasi.
Hielscher Ultrasonics’ prosesor ultrasonik sangat dapat diandalkan dan dapat dikontrol dengan tepat. Semua ultrasonicators industri dapat disesuaikan untuk memberikan jangkauan penuh dari amplitudo yang lebih rendah ke sangat tinggi. Kekokohan sistem ultrasonik Hielscher memungkinkan untuk operasi 24/7 di bawah tugas berat dan di lingkungan yang menuntut.
Tabel di bawah ini memberi Anda indikasi perkiraan kapasitas pemrosesan ultrasonikator kami:
| Batch Volume | Flow Rate | Direkomendasikan perangkat |
|---|---|---|
| pelat multi-sumur / mikrotiter | N/a | UIP400MTP |
| 1 hingga 500mL | 10-200mL/min | UP100H |
| 10-2000mL | 20 hingga 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 hingga 20L | 0.2 sampai 4L/min | UIP2000hdT |
| 10 sampai 100L | 2-10L/min | UIP4000hdT |
| N/a | 10 sampai 100L/menit | UIP16000 |
| N/a | kristal yang lebbig | cluster UIP16000 |
Hubungi Kami! / Tanya Kami!
Ultrasonic DNA Shearing
Diadaptasi dari Jkwchui di bawah CC-BY-SA.03
Literatur/referensi
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Fakta-fakta yang Patut Diketahui
Monkeypox Virus
Monkeypox (MPV, MPXV, atau hMPXV) adalah spesies virus DNA beruntai ganda, yang menyebabkan penyakit zoonosis virus. Penyakit ini dikenal sebagai infeksi monkeypox dan dapat terjadi pada manusia dan hewan. Itu milik genus Orthopoxvirus dalam keluarga Poxviridae. Virus Monkeypox adalah salah satu orthopoxvirus manusia bersama dengan virus variola (VARV), cowpox (CPX), dan vaccinia (VACV). Orthopoxvirus dicirikan oleh partikel virus berbentuk batu bata besar, yang mengandung genom DNA beruntai ganda sekitar 200.000 bp.
Uji ELISA
ELISA adalah singkatan dari Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay dan merupakan immunoassay berlabel yang dianggap sebagai standar emas immunoassays. ELISA adalah tes imunologis, dihargai karena sensitivitas diagnostiknya yang tinggi, digunakan untuk mendeteksi dan mengukur molekul, termasuk antibodi, antigen, protein, glikoprotein, dan hormon. Prinsip ELISA didasarkan pada interaksi antigen-antibodi. Dengan interaksi antigen-antibodi ini, antibodi spesifik berikatan dengan antigen targetnya. Hanya ketika interaksi terjadi, substrat dapat mengikat enzim dan konversi substrat berikutnya dapat diamati, yang berarti hasil positif diperoleh.
Hielscher Ultrasonics memproduksi homogenizers ultrasonik kinerja tinggi dari laboratorium hingga ukuran industri.