BL21 բջիջների բջիջների վերլուծություն ՝ ուլտրաձայնային միջոցով BL21 բջիջները E. coli- ի շտամ են, որը լայնորեն օգտագործվում է հետազոտական լաբորատորիաներում, կենսատեխնոլոգիայում և արդյունաբերական արտադրությունում `սպիտակուցները շատ արդյունավետ արտահայտելու ունակության շնորհիվ: Ուլտրաձայնային բջիջների խափանումը, լիզիզացումը և սպիտակուցի արդյունահանումը BL21 բջիջների բջջային ներսից նպատակային սպիտակուցները մեկուսացնելու և հավաքելու ընդհանուր մեթոդն է: Ուլտրաձայնացումը խափանում է բջիջն ամբողջությամբ և ազատում է բոլոր թակարդված սպիտակուցները ՝ մատչելի դարձնելով սպիտակուցի 100% -ը: BL21 բջիջներ սպիտակուցների արտահայտման համար BL21 բջիջը քիմիապես որակյալ E. coli բակտերիալ շտամ է, որը հարմար է վերափոխման և բարձր մակարդակի սպիտակուցների արտահայտման համար `օգտագործելով T7 RNA պոլիմերազ- IPTG ինդուկցիոն համակարգ: BL21 բջիջները թույլ են տալիս բարձր արդյունավետության սպիտակուցային արտահայտություն ցանկացած գենի, որը գտնվում է T7 պրոմոուտերի վերահսկողության տակ: E. coli շտամը BL21 (DE3) - T7 RNA պոլիմերազի վրա հիմնված սպիտակուցի արտադրողական շտամ է, որը զուգորդվում է T7 պրոմոուտերի վրա հիմնված արտահայտիչ վեկտորների հետ և լայնորեն կիրառվում է լաբորատորիաներում և արդյունաբերությունում ՝ նորածին սպիտակուցներ արտադրելու համար: BL21- ում (DE3), վերամշակված սպիտակուցը կոդավորող գենի արտահայտությունը արտագրվում է քրոմոսոմային կերպով կոդավորված T7 RNA պոլիմերազով (T7 RNAP), որն արտագրում է ութ անգամ ավելի արագ, քան սովորական E. coli RNAP: Սա BL21 (DE3) շտամը բարձր արդյունավետություն է հաղորդում և վերածում այն սպիտակուցների արտահայտման բջիջների առավել նախընտրելի համակարգերից մեկի: Արձանագրություն ուլտրաձայնային լիզի և BL21 բջիջներից սպիտակուցի արդյունահանման համար BL21 բջիջների բջիջների լիզիզացումը հիմնականում իրականացվում է ուլտրաձայնային միջոցով `նատրիումի լաուրոյլ սարկոսինատի (հայտնի է նաև որպես սարկոզիլ) հետ միասին` որպես լիզի բուֆեր: Ուլտրաձայնային բջիջների խզման և սպիտակուցների արդյունահանման առավելությունները կայանում են ուլտրաձայնային սարքերի հուսալիության, վերարտադրելիության, ինչպես նաև պարզ, անվտանգ և արագ աշխատանքի մեջ: Ստորև բերված արձանագրությունը տալիս է քայլ առ քայլ ուղղություն ուլտրաձայնային BL21 բջիջների լիզացման համար. Չապերոնային սպիտակուցները հեռացնելու համար BL21 մանրեային հատիկները վերակոդավորվել են 50 մլ սառցե սառը նատրիումի Tris-EDTA (STE) բուֆերում (բաղկացած է 10 մմ Tris-HCL, pH 8.0, 1 մմ EDTA, 150 մմ NaCl լրացված 100 մմ PMSF): Ավելացվում է 500 լիտր լիզոցիմը (10 մգ / մլ) և բջիջները 15 րոպե սառեցվում են սառույցի վրա: Դրանից հետո ավելացվում են 500 ul DTT և 7 մլ sarkosyl (10% (վտ / վ), որոնք կազմում են STE բուֆեր): Անհրաժեշտ է մաքրման բոլոր բուֆերները սառույցով պահել և նմուշները մշտապես պահպանել սառույցի վրա: Մաքրման բոլոր քայլերը հնարավորության դեպքում պետք է իրականացվեն սառը սենյակում: Ուլտրաձայնային լիզի և սպիտակուցի արդյունահանման համար նմուշները մոնտաժվում են VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 վրկ-ի համար 100% ամպլիտուդայով `յուրաքանչյուր ձայնազերծման միջև 2 րոպե ընդմիջումով: Այլընտրանքորեն, զոնդային տիպի ուլտրաձայնային հոմոգենացուցիչ միկրո հուշումով, օրինակ, Uf200 ः տ կարող է օգտագործվել S26d2- ով (3 x 30 վրկ., 2 րոպե. դադար ուլտրաձայնային ցիկլերի միջև, 80% ամպլիտուդ): Մաքրման հետագա քայլերի համար նմուշները պետք է պահվեն սառույցի վրա կամ այլընտրանք պահվեն -80 ° C ջերմաստիճանում մինչև հետագա մշակումը: Ուլտրաձայնային բջիջների խանգարող UP200St միկրո հուշող S26d2- ով `լիզիզմի և սպիտակուցի արդյունահանման համար Տեղեկատվության պահանջ Անուն Էլ. Փոստի հասցեն (պահանջվում է) արտադրանքը կամ տարածք հետաքրքրություն Նշենք մեր Գաղտնիության քաղաքականություն, Տեղեկացնել տեղեկատվություն Ուլտրաձայնային քսուկը նախասահմանված ջերմաստիճանի վերահսկողության ներքո Կենսաբանական նմուշները մշակելիս կարևոր է ջերմաստիճանի ճշգրիտ և հուսալի կարգավորումը: Բարձր ջերմաստիճանը նմուշներում սկսում է ջերմորեն հարուցված սպիտակուցի քայքայումը: Նմուշի պատրաստման բոլոր մեխանիկական տեխնիկայում, մթնեցումը ջերմություն է ստեղծում: Այնուամենայնիվ, VialTweeter- ի օգտագործման ժամանակ նմուշների ջերմաստիճանը կարելի է լավ վերահսկել: Մենք ձեզ ներկայացնում ենք տարբեր ընտրանքներ ձեր նմուշների ջերմաստիճանը վերահսկելու և վերահսկելու համար, մինչդեռ դրանք պատրաստում ենք VialTweeter- ի և VialPress- ի հետ վերլուծության համար: Նմուշի ջերմաստիճանի մոնիտորինգ. Ուլտրաձայնային UP200St պրոցեսորը, որը վարում է VialTweeter- ը, հագեցած է խելացի ծրագրակազմով և խցանվող ջերմաստիճանի տվիչով: Միացրեք ջերմաստիճանի տվիչը UP200St- ի մեջ և տեղադրեք ջերմաստիճանի տվիչի ծայրը նմուշի խողովակներից մեկում: Թվային գունավոր սենսորային էկրանով UP200St- ի ընտրացանկում կարող եք տեղադրել ձեր նմուշի ձայնազերծման համար նախատեսված հատուկ ջերմաստիճանի տիրույթ: Ուլտրաձայնագրիչը ավտոմատ կերպով կդադարի, երբ առավելագույն ջերմաստիճանը հասնի և դադարի, մինչև նմուշի ջերմաստիճանը իջնի սահմանված ջերմաստիճանի temperature ցածր արժեքի: Ապա վերամշակումը կրկին ավտոմատ կերպով սկսվում է: Այս խելացի առանձնահատկությունը կանխում է ջերմության պատճառով դեգրադացիան: VialTweeter բլոկը կարող է նախապես հովացվել: Տեղադրեք VialTweeter բլոկը (միայն սոնոտրոդը առանց փոխարկիչի!) Սառնարանի կամ սառցարանի մեջ, որպեսզի տիտանի բլոկը նախապես հովացնի, օգնում է հետաձգել նմուշի ջերմաստիճանի բարձրացումը: Հնարավորության դեպքում նմուշը կարող է նաև նախապես հովացվել: Օգտագործեք չոր սառույց `հովացման ընթացքում սառչելու համար: Օգտագործեք չոր սառույցով լցված մակերեսային սկուտեղ և տեղադրեք VialTweeter- ը սառույցի վրա, որպեսզի ջերմությունն արագորեն ցրվի: Աշխարհում հաճախորդները օգտագործում են VialTweeter- ը և VialPress- ը կենսաբանական, կենսաքիմիական, բժշկական և կլինիկական լաբորատորիաներում իրենց ամենօրյա նմուշ պատրաստելու աշխատանքների համար: UP200St պրոցեսորի խելացի ծրագրակազմը և ջերմաստիճանի հսկողությունը, ջերմաստիճանը հուսալիորեն վերահսկվում է և խուսափում ջերմության պատճառով նմուշի դեգրադացիայից: Ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստումը VialTweeter- ի և VialPress- ի միջոցով տալիս է բարձր հուսալի և վերարտադրելի արդյունքներ: Գտեք ուլտրաձայնային օպտիմալ խանգարիչը ձեր լիզի կիրառման համար Hielscher Ultrasonics- ը լաբորատորիաների, նստարանային և արդյունաբերական մասշտաբային համակարգերի բարձրորակ ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչների և միատարրացուցիչների երկար տարիների փորձառու արտադրող է: Ձեր մանրէային բջիջների մշակույթի չափը, ձեր հետազոտության կամ արտադրության նպատակը և բջիջի ծավալը, որը պետք է մշակվի մեկ ժամում կամ օրը, էական գործոններ են ՝ ձեր դիմումի համար ուլտրաձայնային բջիջների ճիշտ խանգարիչը գտնելու համար: Hielscher Ultrasonics- ն առաջարկում է բազմազան նմուշների միաժամանակյա ձայնազերծման տարբեր լուծումներ (մինչև 10 սրվակ VialTweeter- ով) և զանգվածային նմուշներ (այսինքն `միկրոտիտր ափսեներ / ELISA ափսեներ UIP400MTP- ով), ինչպես նաև դասական զոնդային տիպի լաբորատոր ուլտրաձայնիչ` տարբեր էլեկտրաէներգիայի մակարդակը 50-ից 400 վտ-ից մինչև ամբողջությամբ արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորներ `մեկ արտադրամասում մինչև 16,000 վտ հզորությամբ` խոշոր արտադրության բջիջների առևտրի խափանումների և սպիտակուցների արդյունահանման համար: Բոլոր Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը կառուցված են 24/7/365 գործողության համար ՝ լիարժեք բեռի տակ: Ուժեղությունն ու հուսալիությունը մեր ուլտրաձայնային սարքերի հիմնական հատկություններն են: Բոլոր թվային ուլտրաձայնային համասեռացուցիչները հագեցած են խելացի ծրագրակազմով, գունավոր սենսորային էկրանով և տվյալների ավտոմատ պրոտոկոլինգով, որոնք ուլտրաձայնային սարքը դարձնում են հարմար աշխատանքային գործիք լաբորատոր և արտադրական հաստատություններում: Տեղեկացրեք մեզ, թե ինչպիսի բջիջներ, ինչ ծավալ, ինչ հաճախականությամբ և ինչ թիրախով պետք է մշակեք ձեր կենսաբանական նմուշները: Մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ուլտրաձայնային բջիջների ամենահարմար խանգարիչը `ձեր գործընթացի պահանջների համար: Ստորև բերված աղյուսակը ցույց է տալիս մեր ուլտրաձայնային համակարգերի մոտավոր մշակման կարողության ցուցումը կոմպակտ ձեռքի հոմոգենիզատորներից և MultiSample ուլտրաձայնիչներից մինչև արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորներ առևտրային ծրագրերի համար. խմբաքանակի Volume Ծախսի Rate Առաջարկվող սարքեր 96 հորատանցք / միկրոտիտր ափսեներ na UIP400MTP 10 սրվակ 0,5-ից 1,5 մլ-ով na VialTweeter ժամը UP200St 0.01-ից 250 մլ 5-ից 100 մլ / րոպե UP50H- ը 0.01-ից 500 մլ 10-ից մինչեւ 200 մլ / վրկ UP100H 10-ից մինչեւ 2000 մլ 20-ից 400 մլ / վրկ Uf200 ः տ,, UP400St 01-ից մինչեւ 20 լ 02-ից 4 լ / րոպե UIP2000hdT 10-ից 100 լ 2-ից 10 լ / րոպե UIP4000hdT na 10-ից 100 լ / րոպե UIP16000 na ավելի մեծ Կլաստերի UIP16000 Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ! Հարցրեք ավելին Խնդրում ենք օգտագործել ստորև բերված ձևը `ուլտրաձայնային պրոցեսորների, ծրագրերի և գնի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մենք ուրախ կլինենք ձեզ հետ քննարկել ձեր գործընթացը և առաջարկել ձեզ ուլտրաձայնային համակարգ, որը բավարարում է ձեր պահանջները: Անուն ընկերություն Էլ. Փոստի հասցեն (պահանջվում է) Հեռախոսահամար հասցե Քաղաք, պետություն, փոստային կոդ երկիր հետաքրքրություն Խնդրում ենք նկատի ունենալ մեր Գաղտնիության քաղաքականություն, Տեղեկացնել տեղեկատվություն ultrasonicator Uf200 ः տ 2 մմ մանրադիտակի S26d2 փոքր նմուշների ձայնազերծման համար Գրականություն / Հղումներ Cheraghi S.; Akbarzade A.; Farhangi A.; Chiani M.; Saffari Z.; Ghassemi S.; Rastegari H.; Mehrabi M.R. (2010): Improved Production of L-lysine by Over-expression of Meso-diaminopimelate Decarboxylase Enzyme of Corynebacterium glutamicum in Escherichia coli. Pak J Biol Sci. 2010 May 15; 13(10), 2010. 504-508. LeThanh, H.; Neubauer, P.; Hoffmann, F. (2005): The small heat-shock proteins IbpA and IbpB reduce the stress load of recombinant Escherichia coli and delay degradation of inclusion bodies. Microb Cell Fact 4, 6; 2005. Martínez-Gómez A.I.; Martínez-Rodríguez S.; Clemente-Jiménez J.M.; Pozo-Dengra J.; Rodríguez-Vico F.; Las Heras-Vázquez F.J. (2007): Recombinant polycistronic structure of hydantoinase process genes in Escherichia coli for the production of optically pure D-amino acids. Appl Environ Microbiol. 73(5); 2007. 1525-1531. Kotowska M.; Pawlik K.; Smulczyk-Krawczyszyn A.; Bartosz-Bechowski H.; Kuczek K. (2009): Type II Thioesterase ScoT, Associated with Streptomyces coelicolor A3(2) Modular Polyketide Synthase Cpk, Hydrolyzes Acyl Residues and Has a Preference for Propionate. Appl Environ Microbiol. 75(4); 2009. 887-896. Առնչվող հաղորդագրություններ Ուլտրաձայնային նմուշի նախապատրաստում ELISA անալիզների համար Ուլտրաձայնային լիզինգ E. Coli- ի կողմից Drosophila melanogaster նմուշների ուլտրաձայնային լիզիզմ Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի կտրում Արձանագրություն SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի անջատման համար `Sonication- ով Microtiter ափսեի զանգվածային նմուշի պատրաստում ՝ ուլտրաձայնային միջոցով Փաստեր Worth Իմանալով Էշերիխիա Կոլի մանրէներ Escherichia coli- ն մանրեների տեսակ է, որը ոչ սպորային, գրամ-բացասական է և բնութագրվում է ուղիղ ձողի տեսքով: E.coli բակտերիաները առկա են մարդու և կենդանիների միջավայրում, սննդում և աղիքներում: E. coli- ն սովորաբար շարժուն է `օգտագործելով ծայրամասային դրոշներ, բայց կան նաև ոչ շարժիչ տեսակներ: E.coli- ն այսպես կոչված ֆակուլտատիվ անաէրոբ քիմիորգանոտրոֆ օրգանիզմներ են, ինչը նշանակում է, որ նրանք ընդունակ են ինչպես շնչառական, այնպես էլ ֆերմենտատիվ նյութափոխանակության: E.coli տեսակների մեծամասնությունը բարորակ է և օգտակար գործառույթներ է կատարում մարմնում, օրինակ ՝ ճնշելով վնասակար մանրէների տեսակների աճը, սինթեզող վիտամիններ և այլն: Այսպես կոչված B տիպի Escherichia coli բակտերիաների բջիջը E.coli շտամների հատուկ կատեգորիա է, որոնք լայնորեն օգտագործվում են հետազոտություններում `մանրեոֆագի զգայունության կամ սահմանափակման-փոփոխման համակարգերի մեխանիզմների ուսումնասիրության համար: Ավելին, E.coli բակտերիաները գնահատվում են որպես կենսատեխնոլոգիայի և կենսագիտության լաբորատորիաներում սպիտակուցների արտահայտման հուսալի աշխատանքային ձի: Օրինակ, E.coli- ն օգտագործվում է արդյունաբերական մասշտաբով միացություններ, ինչպիսիք են սպիտակուցները և օլիգոսախարիդները սինթեզելու համար: Հատուկ առանձնահատկությունների պատճառով, ինչպիսիք են պրոտեազի անբավարարությունը, ացետատի ցածր արտադրությունը գլյուկոզի բարձր մակարդակում և ուժեղ թափանցելիությունը, E. coli B բջիջները նա առավել հաճախ օգտագործվող ընդունող բջիջներն են գենետիկորեն մշակված սպիտակուցների արտադրության համար: Recombinant Protein Վերամշակվող սպիտակուցները (rProt) զգալի նշանակություն են ստանում բազմազան ճյուղերում, այդ թվում ՝ քիմիական արտադրության, դեղագործական, կոսմետիկ, մարդու և կենդանիների բժշկության, գյուղատնտեսության, սննդի, ինչպես նաև թափոնների մաքրման արդյունաբերության մեջ: Recombinant սպիտակուցի արտադրությունը պահանջում է արտահայտման համակարգի օգտագործում: Որպես արտահայտող բջջային համակարգեր `վերամշակված ԴՆԹ-ի արտադրության համար, կարող են օգտագործվել ինչպես պրոկարիոտ, այնպես էլ էուկարիոտ բջիջներ: Մինչ բակտերիալ բջիջներն առավել լայնորեն օգտագործվում են սպիտակուցների արտահայտման համար `ելնելով այնպիսի գործոններից, ինչպիսիք են ցածր գինը, հեշտ ընդլայնումը և պարզ միջավայրը, կաթնասունների, խմորիչների, ջրիմուռների, միջատների և բջիջներից զերծ համակարգերը ստեղծվում են որպես այլընտրանքներ: Սպիտակուցի տեսակը, ֆունկցիոնալ ակտիվությունը, ինչպես նաև արտահայտված սպիտակուցի պահանջվող բերքը ազդում են սպիտակուցների արտահայտման համար օգտագործվող բջջային համակարգի ընտրության վրա: Վերամշակված սպիտակուցը արտահայտելու համար անհրաժեշտ է, որ որոշակի բջիջ փոխներարկվի վերամշակվող ԴՆԹ-ի ձևանմուշ պարունակող ԴՆԹ վեկտորի հետ: Կաղապարով փոխափոխված բջիջները հետո մշակվում են: Բջջային մեխանիզմի արդյունքում բջիջները արտագրում և թարգմանում են հետաքրքրության սպիտակուցը ՝ դրանով իսկ արտադրելով նպատակային սպիտակուց: Քանի որ արտահայտված սպիտակուցները փակվում են բջջային մատրիցում, բջիջները պետք է լիզացվեն (խանգարեն և կոտրվեն) ՝ սպիտակուցներն ազատելու համար: Մաքրման հետագա փուլում սպիտակուցը տարանջատվում և մաքրվում է: Բուժման մեջ օգտագործված առաջին ռեկոմբինանտ սպիտակուցը վերամշակված մարդկային ինսուլինն էր 1982 թ.-ին: Այսօր ամբողջ աշխարհում արտադրվում է ավելի քան 170 տեսակի ռեկոմբինանտ սպիտակուց `բժշկական բուժման համար: Բժշկության մեջ սովորաբար օգտագործվող վերամշակվող սպիտակուցներն են, օրինակ, վերամիացվող հորմոնները, ինտերֆերոնները, ինտերլեյկինները, աճի գործոնները, ուռուցքի նեկրոզային գործոնները, արյան մակարդման գործոնները, թրոմբոլիտիկ դեղամիջոցները և ֆերմենտները ՝ հիմնական հիվանդությունների բուժման համար, ինչպիսիք են շաքարախտը, գաճաճությունը, սրտամկանի ինֆարկտը, սրտի գերբնակվածությունը, ուղեղային ապոպլեքսիա, բազմակի սկլերոզ, նեյտրոֆենիա, թրոմբոցիտոպենիա, անեմիա, հեպատիտ, ռևմատոիդ արթրիտ, ասթմա, Քրոնի հիվանդություն և քաղցկեղի բուժում: (տես ՝ Phuc V. Pham, Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018) Բարձր կատարողական ուլտրաձայնային: Hielscher- ի արտադրանքի տեսականին ընդգրկում է կոմպակտ լաբորատոր ուլտրաձայնային համակարգիչից մինչև նստարանային ստորաբաժանումների ամբողջ արդյունաբերական ուլտրաձայնային համակարգերը:
Գրականություն / Հղումներ Cheraghi S.; Akbarzade A.; Farhangi A.; Chiani M.; Saffari Z.; Ghassemi S.; Rastegari H.; Mehrabi M.R. (2010): Improved Production of L-lysine by Over-expression of Meso-diaminopimelate Decarboxylase Enzyme of Corynebacterium glutamicum in Escherichia coli. Pak J Biol Sci. 2010 May 15; 13(10), 2010. 504-508. LeThanh, H.; Neubauer, P.; Hoffmann, F. (2005): The small heat-shock proteins IbpA and IbpB reduce the stress load of recombinant Escherichia coli and delay degradation of inclusion bodies. Microb Cell Fact 4, 6; 2005. Martínez-Gómez A.I.; Martínez-Rodríguez S.; Clemente-Jiménez J.M.; Pozo-Dengra J.; Rodríguez-Vico F.; Las Heras-Vázquez F.J. (2007): Recombinant polycistronic structure of hydantoinase process genes in Escherichia coli for the production of optically pure D-amino acids. Appl Environ Microbiol. 73(5); 2007. 1525-1531. Kotowska M.; Pawlik K.; Smulczyk-Krawczyszyn A.; Bartosz-Bechowski H.; Kuczek K. (2009): Type II Thioesterase ScoT, Associated with Streptomyces coelicolor A3(2) Modular Polyketide Synthase Cpk, Hydrolyzes Acyl Residues and Has a Preference for Propionate. Appl Environ Microbiol. 75(4); 2009. 887-896.