Նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստում ELISA անալիզների համար
ELISA անալիզի նման անալիզները լայնորեն կիրառվում են արտամարմնային ախտորոշման, հիվանդությունների հետ կապված սպիտակուցների հայտնաբերման և որակի վերահսկման համար (օրինակ՝ սննդային ալերգենների մոնիթորինգի նպատակով)։ Նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստումը բջիջների լիզիսի և ներբջջային սպիտակուցների, DNA, RNA և օրգանոիդների առանձնացման արագ, հուսալի և վերարտադրելի մեթոդ է։ Hielscher Ultrasonics ընկերությունն առաջարկում է ուլտրաձայնային տարբեր լուծումներ՝ առանձին նմուշների, բազմաթիվ սրվակների, ինչպես նաև միկրոտիտրային թիթեղների և 96 հորիկով թիթեղների հարմարավետ պատրաստման համար։
ELISA – ֆերմենտի հետ կապված իմունասորբենտային անալիզ
ELISA հապավումը նշանակում է ֆերմենտի հետ կապված իմունասորբենտային անալիզ և լիգանդների կապման անալիզների դասին պատկանող կենսաքիմիական վերլուծության լայնորեն կիրառվող մեթոդ է։ ELISA անալիզի ժամանակ հեղուկ նմուշն ավելացվում է կապման հատուկ հատկություններ ունեցող անշարժ պինդ ֆազի վրա։ Սովորաբար անշարժ պինդ ֆազը որպես ծածկույթ կիրառվում է հորիկավոր թիթեղի կամ ELISA թիթեղի վրա։ Այնուհետև տարբեր հեղուկ ռեագենտներ հաջորդաբար ավելացվում, ինկուբացվում և լվացվում են, այնպես որ վերջում հորիկում մնացած հեղուկում տեղի է ունենում օպտիկական փոփոխություն (օրինակ՝ ֆերմենտային ռեակցիայի արգասիքի առաջացրած գունավորում)։ Օպտիկական փոփոխությունը հնարավորություն է տալիս չափել անալիտի քանակը՝ այսպես կոչված քանակական «ընթերցման» միջոցով։ Քանակական ընթերցման համար օգտագործվում է սպեկտրալուսաչափ, ֆլուորոմետր կամ լյումինոմետր՝ անցած լույսի ինտենսիվությունը հայտնաբերելու և չափելու նպատակով։ Հայտնաբերման զգայունության վրա ազդում է վերլուծական ռեակցիաների ընթացքում ազդանշանի ուժեղացումը։ Քանի որ ֆերմենտային ռեակցիաները լավ ուսումնասիրված և հուսալի ուժեղացման գործընթացներ են, ազդանշանի ստեղծման համար օգտագործվում են ֆերմենտներ։ Ֆերմենտները հայտնաբերման ռեագենտների հետ կապվում են հաստատուն հարաբերակցություններով՝ ճշգրիտ քանակական որոշում ապահովելու համար, ինչով բացատրվում է նաև «ֆերմենտի հետ կապված» իմունասորբենտային անալիզ անվանումը։
Քանի որ ELISA անալիզները կատարվում են միկրոտիտրային թիթեղներում / 96 հորիկով թիթեղներում, այս մեթոդը հայտնի է որպես թիթեղային անալիզի մեթոդ և կիրառվում է, օրինակ, կլինիկական արտամարմնային ախտորոշման, հետազոտությունների, դեղերի մշակման և այլ ոլորտներում՝ հակամարմինների, պեպտիդների, սպիտակուցների և հորմոնների հայտնաբերման ու քանակական որոշման համար։
ELISA մեթոդը հաճախ օգտագործվում է որպես ախտորոշիչ գործիք բժշկության, կենսատեխնոլոգիայի և բույսերի ախտաբանության մեջ, ինչպես նաև որակի վերահսկման կարևոր չափում է արդյունաբերության բազմաթիվ ճյուղերում։
Նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստման VialTweeter սարքը օգտագործվում է բջիջների լիզիսի և սպիտակուցների էքստրակցիայի համար՝ ELISA անալիզներից առաջ
Նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստում ELISA անալիզից առաջ
Նախքան ELISA անալիզի կատարումը նմուշները պահանջում են պատրաստման այնպիսի փուլեր, ինչպիսիք են բջիջների լիզիսը և ներբջջային սպիտակուցների, DNA, RNA և այլ նյութերի էքստրակցիան։ Բջիջների ուլտրաձայնային լիզիսի և սպիտակուցների առանձնացման առավելությունը դրանց բարձր արդյունավետությունը, հուսալիությունն ու վերարտադրելիությունն են։ Այս բոլոր գործոնները կարևոր են բարձրորակ ախտորոշման և հետազոտական արդյունքների ստացման համար
- Նմուշների համասեռ մշակում
- Ամբողջական լիզիս
- Սպիտակուցների ամբողջական էքստրակցիա (օրինակ՝ հակամարմիններ, DNA)
- Բջջի տեսակին օպտիմալ հարմարեցում
- Ցանկացած չափի նմուշի համար
- Վերարտադրելի
- Ջերմաստիճանի վերահսկմամբ
- Տվյալների ավտոմատ գրանցում SD քարտի վրա
Բջիջների ուլտրաձայնային լիզիսի ընթացակարգ ELISA անալիզից առաջ
- Բջջային կուլտուրաների համար՝ Բջիջների ուլտրաձայնային լիզիսից առաջ բջիջները ցենտրիֆուգեք միկրոցենտրիֆուգում 5 րոպե՝ 270 x g պայմաններում։ Վերնստվածքային հեղուկը հեռացրեք ասպիրացիայի միջոցով և բջիջները կրկին սուսպենդացրեք 30 – 100 μL RIPA բուֆերում։ Այնուհետև բջջային նստվածքը ինկուբացրեք սառույցի վրա 30 րոպե։
- Այժմ բջջային նմուշը պատրաստ է ուլտրաձայնային լիզիսի համար։
Օգտագործեք զոնդային տիպի ուլտրաձայնային սարք (օրինակ՝ UP200Ht սարքը՝ S26d2 զոնդով) կամ բազմաթիվ նմուշների համար նախատեսված ուլտրաձայնային սարք (օրինակ՝ VialTweeter սարքը՝ միաժամանակ մինչև 10 սրվակի ուլտրաձայնային մշակման համար, կամ UIP400MPT սարքը՝ միկրոտիտրային թիթեղների / 96 հորիկով թիթեղների համար)՝ կախված պատրաստման ենթակա նմուշների քանակից։
Առանձին նմուշը զոնդով ուլտրաձայնային մշակման ենթարկելու համար բջիջները տեղադրեք 1,5 mL միկրոցենտրիֆուգային փորձանոթներում։ - Ուլտրաձայնային սարքի թվային ընտրացանկում նախապես սահմանեք ուլտրաձայնային մշակման տևողությունը, մուտքագրվող ընդհանուր էներգիան, ցիկլային ռեժիմը և/կամ ջերմաստիճանի սահմանները։ Սա ապահովում է խիստ հուսալի ուլտրաձայնային մշակում և կրկնելիություն։
- Ներմուծեք սոնոտրոդը և միացրեք ուլտրաձայնային սարքը։ Ուլտրաձայնային զոնդի միկրոծայրակալը մեղմորեն շարժեք նմուշի միջով՝ նմուշը հավասարաչափ ուլտրաձայնային մշակման ենթարկելու համար։
Բջիջների մեծ մասի դեպքում ուլտրաձայնային լիզիսը կավարտվի 10 sec տևողությամբ ուլտրաձայնային մշակման 2–4 ցիկլից հետո։ - Ուլտրաձայնային մշակումից հետո սոնոտրոդը հանեք նմուշից։ Նմուշները պետք է ինկուբացնել սառույցի վրա 5 min։ Այնուհետև ցենտրիֆուգեք 10 000 x g արագացմամբ 20 min՝ բջջային բեկորները նստեցնելու համար։ Վերնստվածքային հեղուկները տեղափոխեք նոր միկրոցենտրիֆուգային փորձանոթի մեջ։ Պիտակավորեք անալիտները և պահեք -20°C ջերմաստիճանում։
- Ուլտրաձայնային սոնոտրոդը կարելի է մաքրել՝ այն պատշաճ կերպով սրբելով սպիրտով կամ ուլտրաձայնային մշակման ենթարկելով սպիրտով, օրինակ՝ 70% էթանոլով լցված լաբորատոր բաժակի մեջ։ Տիտանից պատրաստված բոլոր ուլտրաձայնային զոնդերը կարելի է ավտոկլավացնել։
E.coli բջիջներից սպիտակուցի էքստրակցիա՝ օգտագործելով UP200St ուլտրաձայնային զոնդը
- Հյուսվածքը ողողեք սառցային սառնության PBS լուծույթով (0,01M, pH=7,4)՝ հեմոլիզված արյան ավելցուկը մանրակրկիտ հեռացնելու համար։
- Կշռեք հյուսվածքը (երիկամ, սիրտ, թոք, փայծաղ և այլն) և մացերացրեք այն՝ վերածելով փոքր կտորների, որոնք հոմոգենացվում են PBS լուծույթում։ PBS լուծույթի անհրաժեշտ ծավալը կապված է հյուսվածքի զանգվածի հետ։ Որպես ընդհանուր մոտավոր կանոն՝ 1g հյուսվածքի համար անհրաժեշտ է մոտ 9mL PBS լուծույթ։ Խորհուրդ է տրվում PBS լուծույթին ավելացնել որոշ քանակությամբ պրոտեազի ինհիբիտոր։ (Որպես այլընտրանք կարելի է օգտագործել RIPA կամ հիպոտոնիկ լիզիսի բուֆեր՝ պրոտեազի և ֆոսֆատազի ինհիբիտորների խառնուրդ պարունակող։)
- Կախված հյուսվածքի չափից՝ կարճատև վորտեքսային մշակումը (մոտ 1–2 min՝ 15 sec տևողությամբ իմպուլսներով) կարող է օգտակար լինել հյուսվածքի նախնական մշակման համար։
- Ձեր ուլտրաձայնային սարքին ամրացրեք միկրոծայրակալ, օրինակ՝ S26d2։ Հյուսվածք պարունակող նմուշային փորձանոթը տեղադրեք սառցային բաղնիքում։
- Նմուշը ձեր ուլտրաձայնային սարքով, օրինակ՝ UP200St (80% ամպլիտուդ), մշակեք 1 min՝ իմպուլսային ռեժիմով (15sec միացված, 15sec դադար)։ Նմուշը պահեք սառցային բաղնիքում։
- Այնուհետև հոմոգենատները ցենտրիֆուգում են՝ հատուկ ֆրակցիաներ (ցիտոզոլային, կորիզային, միտոքոնդրիալ կամ լիզոսոմային) ստանալու և վերլուծության համար սպիտակուցը հարստացնելու նպատակով։ Նմուշը 5 րոպե 5000×g արագացմամբ ցենտրիֆուգելու միջոցով ստացվում է վերնստվածքային հեղուկը։
MTP-24-8-96 սոնոտրոդն ունի ութ ուլտրաձայնային զոնդ՝ միկրոտիտրային թիթեղների հորիկների ուլտրաձայնային մշակման համար։
Ջերմաստիճանի հուսալի վերահսկում ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում
Ջերմաստիճանը գործընթացի վրա ազդող առանցքային գործոն է, որը հատկապես կարևոր է կենսաբանական նմուշների մշակման համար, օրինակ՝ սպիտակուցների ջերմային քայքայումը կանխելու նպատակով։ Ինչպես նմուշների պատրաստման բոլոր մեխանիկական մեթոդները, ուլտրաձայնային մշակումը նույնպես ջերմություն է առաջացնում։ Սակայն Hielscher Ultrasonics սարքերն օգտագործելիս նմուշների ջերմաստիճանը կարելի է լավ վերահսկել։ Ձեզ ենք ներկայացնում նմուշների ջերմաստիճանը դիտարկելու և վերահսկելու տարբեր հնարավորություններ՝ դրանք նախավերլուծական փուլում զոնդային ուլտրաձայնային սարքով կամ VialTweeter սարքով պատրաստելիս։
- Նմուշի ջերմաստիճանի դիտարկում. Hielscher ապրանքանիշի բոլոր թվային ուլտրաձայնային պրոցեսորները հագեցած են խելացի ծրագրային ապահովմամբ և միացվող ջերմաստիճանային տվիչով։ Ջերմաստիճանային տվիչը միացրեք ուլտրաձայնային սարքին (օրինակ՝ UP200Ht, UP200St, VialTweeter, բազմահորիկ թիթեղների ուլտրաձայնային մշակման UIP400MTP սարք) և ջերմաստիճանային տվիչի ծայրն իջեցրեք նմուշային փորձանոթներից մեկի մեջ։ Թվային գունավոր սենսորային էկրանի միջոցով ուլտրաձայնային պրոցեսորի ընտրացանկում կարող եք սահմանել ջերմաստիճանի որոշակի միջակայք՝ ձեր նմուշի ուլտրաձայնային մշակման համար։ Ուլտրաձայնային սարքն ինքնաբերաբար կկանգնի առավելագույն ջերմաստիճանին հասնելիս և կմնա դադարի վիճակում, մինչև նմուշի ջերմաստիճանն իջնի մինչև սահմանված ջերմաստիճանային ∆ միջակայքի ստորին արժեքը։ Այնուհետև ուլտրաձայնային մշակումն ինքնաբերաբար կրկին կսկսվի։ Այս խելացի գործառույթը կանխում է ջերմությամբ պայմանավորված քայքայումը։
- Ինչ վերաբերում է բազմաթիվ նմուշների ուլտրաձայնային մշակման VialTweeter սարքին, ապա նմուշային փորձանոթները պահող տիտանե բլոկը կարելի է նախապես սառեցնել։ VialTweeter բլոկը (միայն սոնոտրոդը՝ առանց փոխակերպիչի) դրեք սառնարանի կամ սառցախցիկի մեջ. տիտանե բլոկի նախնական սառեցումն օգնում է հետաձգել նմուշի ջերմաստիճանի բարձրացումը։ Հնարավորության դեպքում կարելի է նախապես սառեցնել նաև նմուշը։
- Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում սառեցնելու համար օգտագործեք սառցային բաղնիք կամ չոր սառույց։ Ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում նմուշով փորձանոթը կամ փորձանոթները տեղադրեք սառցային բաղնիքում։ VialTweeter սարքի համար օգտագործեք չոր սառույցով լցված ոչ խոր սկուտեղ և VialTweeter սարքը տեղադրեք չոր սառույցի վրա, որպեսզի ջերմությունը կարողանա արագ ցրվել։
Ամբողջ աշխարհում հաճախորդներն օգտագործում են Hielscher ընկերության զոնդային տիպի ուլտրաձայնային սարքերը, ինչպես նաև բազմաթիվ նմուշների ուլտրաձայնային մշակման VialTweeter և UIP400MTP սարքերը՝ կենսաբանական, կենսաքիմիական, բժշկական և կլինիկական լաբորատորիաներում նմուշների ամենօրյա նախապատրաստման համար։ Hielscher ընկերության պրոցեսորների խելացի ծրագրային ապահովման և ջերմաստիճանի կառավարման շնորհիվ ջերմաստիճանը հուսալիորեն վերահսկվում է, և կանխվում է ջերմությամբ պայմանավորված նմուշների քայքայումը։ Hielscher ընկերության ուլտրաձայնային լուծումներով նմուշների ուլտրաձայնային նախապատրաստումն ապահովում է խիստ հուսալի և վերարտադրելի արդյունքներ։
Կարդացեք ավելին անալիզների համար նախատեսված UIP400MTP բազմափոսիկ թիթեղների ուլտրաձայնային սարքով մեծ թվով նմուշների բարձր արտադրողականությամբ ուլտրաձայնային մշակման մասին։
Կապվե՛ք մեզ հետ։ / Հարցրե՛ք մեզ։
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն արտադրում է բարձր արդյունավետությամբ ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ՝ լաբորատոր, փորձնական և արդյունաբերական մասշտաբներով խառնման, դիսպերսման, էմուլգացման և էքստրակցիայի կիրառությունների համար։
Գրականություն / Հղումներ
- Brandy Verhalen , Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed. Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
Արժե իմանալ
ELISA-ի ի՞նչ տեսակներ կան։
Գոյություն ունեն ELISA-ի մի քանի տեսակներ, որոնք տարբերվում են իրենց աշխատանքի սկզբունքով։ Դրանք հայտնի են որպես ուղղակի ELISA, անուղղակի ELISA, սենդվիչ ELISA, մրցակցային ELISA և հակադարձ ELISA։ Ստորև ներկայացնում ենք ELISA-ի տարբեր տեսակների, դրանց հիմնական բնութագրերի և տարբերությունների ակնարկը։
ELISA-ն կարող է իրականացվել որակական կամ քանակական ձևաչափով։ Որակական արդյունքները տալիս են պարզ դրական կամ բացասական պատասխան, մինչդեռ քանակական ELISA-ի դեպքում նմուշի օպտիկական խտությունը (OD) համեմատվում է ստանդարտ կորի հետ, որը սովորաբար թիրախային մոլեկուլի՝ հայտնի կոնցենտրացիայով լուծույթի հաջորդական նոսրացումն է։
Ուղղակի ELISA
Ուղղակի ELISA-ն Elisa մեթոդի ամենապարզ անալիզային ձևն է, որի դեպքում օգտագործվում է միայն ֆերմենտով նշագրված առաջնային հակամարմին, իսկ երկրորդային հակամարմիններ չեն պահանջվում։ Ֆերմենտով նշագրված առաջնային հակամարմինն անմիջապես կապվում է թիրախին, այսինքն՝ հակածնին։ Հակածնի բուֆերացված լուծույթն ավելացվում է միկրոտիտրային թիթեղի յուրաքանչյուր փոսիկի մեջ (սովորաբար՝ 96-փոսիկ թիթեղներ, ELISA թիթեղներ), որտեղ այն լիցքային փոխազդեցությունների միջոցով կպչում է պլաստիկ մակերեսին։ Երբ առաջնային հակամարմնին կապված ֆերմենտը փոխազդում է իր սուբստրատի հետ, առաջացնում է տեսանելի ազդանշան, որը կարելի է չափել սպեկտրոֆոտոմետրով, ֆլուորոմետրով կամ լյումինոմետրով։
Անուղղակի ELISA
Անուղղակի ELISA թեստի համար պահանջվում են և՛ առաջնային, և՛ երկրորդային հակամարմիններ։ Սակայն, ի տարբերություն ուղղակի ELISA-ի, ֆերմենտով նշագրվում է ոչ թե առաջնային, այլ երկրորդային հակամարմինը։ Հակածինն անշարժացվում է փոսիկավոր թիթեղի վրա, և առաջնային հակամարմինը կապվում է դրան։ Այնուհետև ֆերմենտով նշագրված երկրորդային հակամարմինը կապվում է առաջնային հակամարմնին։ Վերջապես, երկրորդային հակամարմնին կապված ֆերմենտը փոխազդում է իր սուբստրատի հետ՝ առաջացնելով տեսանելի ազդանշան, որը կարելի է հայտնաբերել։
Սենդվիչ ELISA
Մինչ ուղղակի և անուղղակի ELISA թեստերում հակածինն անշարժացվում է և որպես ծածկույթ նստեցվում փոսիկավոր թիթեղի մակերեսին, սենդվիչ ELISA-ի դեպքում հակամարմինն անշարժացվում է ELISA թիթեղի պլաստիկ մակերեսին։ Սենդվիչ ELISA-ի անշարժացված հակամարմինները հայտնի են որպես որսացող հակամարմիններ։ Բացի որսացող հակամարմիններից, սենդվիչ ELISA-ի համար պահանջվում են նաև այսպես կոչված հայտնաբերող հակամարմիններ։ Հայտնաբերող հակամարմինները ներառում են չնշագրված առաջնային հայտնաբերող հակամարմին և ֆերմենտով նշագրված երկրորդային հայտնաբերող հակամարմին։
Փուլ առ փուլ՝ հետազոտվող հակածինը կապվում է թիթեղի վրա անշարժացված որսացող հակամարմնին։ Այնուհետև առաջնային հայտնաբերող հակամարմինը կապվում է հակածնին։ Դրանից հետո երկրորդային հայտնաբերող հակամարմինը կապվում է առաջնային հայտնաբերող հակամարմնին։ Ռեակցիայի վերջնական փուլում ֆերմենտը փոխազդում է իր սուբստրատի հետ՝ առաջացնելով տեսանելի ազդանշան, որը կարելի է հայտնաբերել օպտիկական եղանակով։
Մրցակցային ELISA
Մրցակցային ELISA-ն, որը հայտնի է նաև որպես արգելակման ELISA, ELISA-ի ամենաբարդ տեսակն է, քանի որ այն ներառում է արգելակիչ հակածնի օգտագործում։ Երեք ձևաչափերից յուրաքանչյուրը՝ ուղղակի, անուղղակի և սենդվիչ ELISA-ն, կարող է հարմարեցվել մրցակցային ELISA-ի ձևաչափին։ Մրցակցային ELISA-ի դեպքում արգելակիչ հակածինը և հետազոտվող հակածինը մրցակցում են առաջնային հակամարմնին կապվելու համար։
Մրցակցային ELISA-ի համար չնշակրված հակամարմինը ինկուբացվում է իր հակածնի, այսինքն՝ նմուշի առկայությամբ։ Այնուհետև հակամարմին/հակածին այս կապակցված համալիրներն ավելացվում են հակածնով պատված հորիկի մեջ։
Թիթեղը լվացվում է՝ չկապված հակամարմինները հեռացնելու համար։ Մրցակցային ELISA-ն իր անվանումն ստացել է այն պատճառով, որ որքան շատ հակածին կա նմուշում, այնքան շատ հակածին–հակամարմին համալիրներ են առաջանում։ Սա նշանակում է, որ հորիկում առկա հակածնին կապվելու համար ավելի քիչ չկապված հակամարմիններ են մնում, և հակածինները պետք է մրցակցեն հասանելի հակամարմնի համար։ Ավելացվում է առաջնային հակամարմնին համապատասխանող երկրորդային հակամարմին։ Այս երկրորդ հակամարմինը կապված է ֆերմենտի հետ։ Սուբստրատն ավելացնելիս մնացած ֆերմենտներն առաջացնում են գունածին կամ ֆլուորեսցենտային ազդանշան։
Այս փուլում ռեակցիան դադարեցվում է՝ ազդանշանի հնարավոր հագեցումից խուսափելու համար։
Մրցակցային ELISA-ի որոշ հավաքածուներ ֆերմենտի հետ կապված հակամարմնի փոխարեն պարունակում են ֆերմենտի հետ կապված հակածին։ Նշակրված հակածինը նմուշի հակածնի՝ չնշակրված հակածնի հետ մրցակցում է առաջնային հակամարմնի կապման տեղամասերի համար։ Որքան քիչ հակածին կա նմուշում, այնքան ավելի շատ նշակրված հակածին է պահպանվում հորիկում, և այնքան ուժեղ է ազդանշանը։
Հակադարձ ELISA
Հակադարձ ELISA-ի դեպքում հորիկավոր թիթեղներ չեն օգտագործվում, այլ հակածինները մնում են կախութային վիճակում՝ փորձարկվող հեղուկում։ Հակադարձ ELISA թեստը հակածնի միջոցով չափում է կապված հակամարմնի քանակը։ Այն մշակվել է հատուկ Արևմտյան Նեղոսի վիրուսի թաղանթի սպիտակուցը հայտնաբերելու և ուսումնասիրելու, ինչպես նաև պարզելու համար, թե ինչպես է այն կարողանում գտնել վիրուսին հատուկ հակամարմիններ։
Ո՞ր ֆերմենտային մարկերներն են օգտագործվում ELISA-ի համար։
Ստորև բերված ցանկում ներկայացված են ELISA անալիզներում առավել հաճախ օգտագործվող ֆերմենտային մարկերները, որոնք թույլ են տալիս անալիզի ավարտից հետո չափել դրա արդյունքները։
- OPD (օ-ֆենիլենդիամինի դիհիդրոքլորիդ) սաթագույն է դառնում HRP (ծովաբողկի պերօքսիդազ) հայտնաբերելիս, որը հաճախ օգտագործվում է որպես կոնյուգացված սպիտակուց։
- TMB (3,3′,5,5′-տետրամեթիլբենզիդին) կապույտ է դառնում HRP հայտնաբերելիս և դեղին է դառնում ծծմբական կամ ֆոսֆորական թթու ավելացնելուց հետո։
- ABTS (2,2′-ազինոբիս [3-էթիլբենզոթիազոլին-6-սուլֆոնաթթվի] դիամոնիումային աղ) կանաչ է դառնում HRP հայտնաբերելիս։
- PNPP (պ-նիտրոֆենիլֆոսֆատ, դինատրիումային աղ) դեղին է դառնում հիմնային ֆոսֆատազ հայտնաբերելիս։