Ուլտրաձայնային նմուշի նախապատրաստում ELISA անալիզների համար

ELISA- ի նման վերլուծությունները լայնորեն օգտագործվում են in-vitro ախտորոշման, հիվանդությունների հետ կապված սպիտակուցների հայտնաբերման և որակի վերահսկման համար (օրինակ ՝ սննդային ալերգենների մոնիտորինգ): Ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստումը արագ, հուսալի և վերարտադրվող տեխնիկա է բջիջները լիզացնելու և ներբջջային սպիտակուցները, ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և օրգանները մեկուսացնելու համար: Hielscher Ultrasonics- ը առաջարկում է ուլտրաձայնային տարբեր լուծումներ միայնակ նմուշների, բազմակի սրվակների, ինչպես նաև միկրոտիտր ափսեների և 96 հորատանցքի թիթեղների հարմարավետ պատրաստման համար:

ԷԼԻՍԱ – Ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտի անալիզ

ELISA- ն նշանակում է ֆերմենտային կապված իմունոսորբենտի անալիզ և լիգանդին կապող անալիզների կատեգորիայի լայնորեն կիրառվող կենսաքիմիական վերլուծության տեխնիկա է: ELISA- ում հեղուկ նմուշը ավելացվում է ստացիոնար պինդ փուլում `հատուկ կապող հատկություններով: Սովորաբար, ստացիոնար պինդ փուլը կիրառվում է որպես ծածկույթ հորատանցքի ափսեի կամ ELISA ափսեի վրա: Դրանից հետո տարբեր հեղուկ ռեակտիվները հաջորդաբար ավելացվում են, ինկուբացվում և լվանում, որպեսզի վերջապես ջրհորի վերջնական հեղուկում տեղի ունենա օպտիկական փոփոխություն (օրինակ ՝ ֆերմենտային ռեակցիայի արտադրանքով գույնի զարգացում): Օպտիկական փոփոխությունը թույլ է տալիս չափել անալիտի քանակը այսպես կոչված քանակականով “ընթերցանություն »: Քանակական ընթերցման համար փոխանցվող լույսի ուժգնությունը հայտնաբերելու և չափելու համար օգտագործվում է սպեկտրոֆոտոմետր, ֆտորաչափ կամ լուսատուաչափ: Հայտնաբերման զգայունության վրա ազդում է վերլուծական ռեակցիաների ընթացքում ազդանշանի ուժեղացումը: Քանի որ ֆերմենտային ռեակցիաները լավ ուսումնասիրված են և հուսալի ուժեղացման գործընթացներ, ազդանշան ստեղծելու համար օգտագործվում են ֆերմենտներ: Ֆերմենտները ֆիքսված համամասնություններով կապված են հայտնաբերման ռեակտիվների հետ ՝ ճշգրիտ քանակականացման թույլ տալու համար, ինչը բացատրում է նաև «ֆերմենտային կապով» իմունոսորբենտի անալիզ անվանումը:
Քանի որ ELISA անալիզները կատարվում են միկրոտիտր ափսեներում / 96 հորատանցքերի ափսեներում, այն հայտնի է որպես ափսեների վրա հիմնված վերլուծության տեխնիկա և օգտագործվում է, օրինակ, կլինիկական in-vitro ախտորոշման, հետազոտության, դեղերի մշակման և այլնի մեջ ՝ հակամարմինների, պեպտիդների, սպիտակուցների, հայտնաբերման և քանակականացման համար: և հորմոններ:
ELISA տեխնիկան հաճախ օգտագործվում է որպես ախտորոշիչ գործիք բժշկության, բիոտեխնիկայի, բույսերի պաթոլոգիայի մեջ և նաև որակի հսկողության կարևոր չափում է բազմաթիվ արդյունաբերություններում:

Complete VialTweeter setup: VialTweeter sonotrode է ուլտրաձայնային պրոցեսոր UP200St

Ուլտրաձայնային նմուշի նախապատրաստման միավորը VialTweeter- ը օգտագործվում է բջիջների լիզիզմի և սպիտակուցների արդյունահանման համար `նախքան ELISA վերլուծությունները

Տեղեկատվության պահանջ





Ուլտրաձայնային նմուշի նախապատրաստում նախքան ELISA- ն

Նախքան ELISA անալիզը կատարելը, նմուշները պահանջում են պատրաստման այնպիսի փուլեր, ինչպիսիք են բջիջների լիզացումը և ներբջջային սպիտակուցների արդյունահանումը, ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և այլն: Ուլտրաձայնային բջիջների լիզի և սպիտակուցի մեկուսացման առավելությունը դրա բարձր արդյունավետությունն է, հուսալիությունը և վերարտադրելիությունը: Այս բոլոր գործոնները կարևոր են բարձրորակ ախտորոշման և հետազոտության արդյունքներ ստանալու համար

Ուլտրաձայնային լիզի առավելությունները ELISA- ից առաջ

  • Միատարր նմուշի բուժում
  • Ամբողջական լիզիզմ
  • Սպիտակուցի ամբողջական հեռացում (օրինակ ՝ հակամարմիններ, ԴՆԹ)
  • Օպտիմալ հարմարեցում բջիջների տեսակին
  • Sampleանկացած նմուշի չափի համար
  • reproducible
  • վերահսկվում է ջերմաստիճանից
  • Տվյալների ավտոմատ արձանագրում SD քարտի վրա

Արձանագրություն Pre-ELISA ուլտրաձայնային բջիջների լիզացման համար

Probe տիպի insonifier UP200St համար lysis

  • Բջջային մշակույթների համար. Նախքան ուլտրաձայնային բջիջների լիզը, ցենտրիֆուգային բջիջները 5 րոպեի ընթացքում `270 xg- ով, միկրոցենտրիֆուգով: Մանրէազերծումը հեռացրեք մղումով և վերակենդանացրեք բջիջները 30 - 100 μL RIPA բուֆերում: Ապա, բջիջների գնդիկը ինկուբացրեք սառույցի վրա 30 րոպե:
  • Այժմ բջջային նմուշը պատրաստ է ուլտրաձայնային լիզի համար.
    Օգտագործեք զոնդի տիպի ուլտրաձայնիչ (օրինակ Uf200 ः տ S26d2 զոնդով) կամ ուլտրաձայնային բազմամոնտաժային սարք (օրինակ ՝ VialTweeter մինչև 10 սրվակի միաժամանակյա ձայնազերծման համար կամ UIP400MPT միկրոտիտր ափսեների համար / 96 հորատանցքի ափսեներ) ՝ կախված նմուշների քանակից, որոնք անհրաժեշտ է պատրաստել:
    Մեկ նմուշի հետաքննության տիպի ձայնազերծման համար բջիջները տեղադրեք 1,5 մլ միկրոցենտրիֆուգային խողովակների մեջ:
  • Ուլտրաձայնային սարքի թվային ընտրացանկում նախապես տեղադրեք ձեր ուլտրաձայնային տևողությունը, էներգիայի ընդհանուր ներածումը, ցիկլի ռեժիմը և (կամ) ջերմաստիճանի սահմանները: Սա ապահովում է բարձր հուսալի ձայնայնացում և կրկնվողություն:
  • Տեղադրեք sonotrode- ը և միացրեք ուլտրաձայնային սարքը: Նրբորեն տեղափոխեք ուլտրաձայնային զոնդի միկրո ծայրը նմուշի միջով `նմուշը միատեսակ ձայնազերծելու համար:
    Բջիջների մեծ մասի համար ուլտրաձայնային լուծույթը կավարտվի 10 վայրկյան մոնտաժի 2-4 ցիկլից հետո:
  • Sonication- ից հետո հեռացրեք sonotrode- ը նմուշից: Նմուշները պետք է ինկուբացվել սառույցի վրա 5 րոպե: Ապա 20 րոպե ցենտրիֆուգեք 10,000 xg ջերմաստիճանում, որպեսզի աղբը թափի: Գերհեղեղները տեղափոխեք միկրո կենտրոնախույս նոր խողովակի մեջ: Անալիտները պիտակավորեք և պահեք -20 ° C ջերմաստիճանում:
  • Ուլտրաձայնային սոնոտրոդը կարելի է մաքրել ալկոհոլով կամ սոնիկատով պատշաճ կերպով սրբելով ալկոհոլով լցված բաժակի մեջ, օրինակ `70% էթանոլ: Տիտանից պատրաստված բոլոր ուլտրաձայնային զոնդերը ինքնալուսավորվում են:

Հյուսվածքների հոմոգենների համար.

  • Հյուսվածքը լվանալ սառցե ցրտաշունչ PBS- ով (0,01 Մ, pH = 7,4), որպեսզի հեմոլիզի ավելցուկային արյունը մանրակրկիտ հեռացվի:
  • Կշռել հյուսվածքը (երիկամ, սիրտ, թոք, փայծաղ և այլն) և մակարել այն փոքր կտորների, որոնք համասեռացվում են PBS- ում: Պահանջվող PBS- ի ծավալը կապված է հյուսվածքի քաշի հետ: Որպես կանոն, 1 գ հյուսվածքը պահանջում է մոտավոր: 9 մլ PBS: Խորհուրդ է տրվում PBS- ին ավելացնել որոշ պրոտեազի ինհիբիտոր: (Այլընտրանք կարող է օգտագործվել RIPA կամ հիպոթոնիկ լիզ բուֆեր, որը պարունակում է պրոտեազ և ֆոսֆատազի ինհիբիտոր կոկտեյլ):
  • Հյուսվածքների չափից կախված, կարճ պտույտով բուժումը (մոտավորապես 1-2 րոպե 15 վայրկյանում իմպուլսներում) կարող է օգտակար լինել հյուսվածքի նախնական բուժման համար:
  • Ձեր ուլտրաձայնային սարքին միացրեք միկրո հուշում, օրինակ ՝ S26d2: Նմուշի խողովակը հյուսվածքով դրեք սառցե բաղնիքում:
  • Պատրաստեք նմուշը ձեր ուլտրաձայնի միջոցով, օրինակ ՝ UP200St (80% ամպլիտուդ) 1 րոպեի ընթացքում: զարկերակային ռեժիմում (15 վայրկյան միացված, 15 վայրկյան դադար): Նմուշը պահեք սառցե լոգարանում:
  • Դրանից հետո համասեռացվածները ցենտրիֆուգվում են ՝ հատուկ լողավազաններ ստանալու համար (ցիտոսոլային, միջուկային, միտոքոնդրիալ կամ լիզոսոմային) ՝ սպիտակուցը հարստացնելու համար վերլուծության համար: Նմուշը 5 րոպե ցենտրիֆիկացնելով 5000 the գ-ի վրա, վերահոսքը ստացվում է:
Sonotrode MTP-24-8-96- ը ունի ութ ուլտրաձայնային զոնդ `միկրոտիտր ափսեների հորերի sonication- ի համար:

Sonotrode MTP-24-8-96- ը ունի ութ ուլտրաձայնային զոնդ `միկրոտիտր ափսեների հորերի sonication- ի համար:

Հուսալուծման ընթացքում ջերմաստիճանի հուսալի հսկողություն

Երմաստիճանը գործընթացի վրա ազդող կարևոր գործոն է, որը հատկապես կարևոր է կենսաբանական նմուշների բուժման համար, օրինակ ՝ սպիտակուցների ջերմային դեգրադացիան կանխելու համար: Նմուշի պատրաստման բոլոր մեխանիկական տեխնիկայում, մթնեցումը ջերմություն է ստեղծում: Այնուամենայնիվ, նմուշների ջերմաստիճանը կարելի է լավ վերահսկել Hielscher Ultrasonics սարքերն օգտագործելիս: Մենք ձեզ ներկայացնում ենք տարբեր ընտրանքներ ձեր նմուշների ջերմաստիճանը վերահսկելու և վերահսկելու համար, մինչդեռ դրանք նախապատրաստում ենք զոնդային տիպի ուլտրաձայնային սարքով կամ VialTweeter- ով ՝ նախանալիտիկորեն:

  1. Նմուշի ջերմաստիճանի մոնիտորինգ. Բոլոր Hielscher թվային ուլտրաձայնային պրոցեսորները հագեցած են խելացի ծրագրակազմով և խցանվող ջերմաստիճանի տվիչով: Միացրեք ջերմաստիճանի տվիչը ուլտրաձայնային սարքի մեջ (օրինակ ՝ Uf200 ः տ,, UP200St,, VialTweeter- ը, UIP400MTP) և տեղադրեք ջերմաստիճանի տվիչի ծայրը նմուշի խողովակներից մեկում: Թվային գունավոր սենսորային էկրանով դուք կարող եք ուլտրաձայնային պրոցեսորի ընտրացանկում տեղադրել ձեր նմուշի ձայնազերծման համար նախատեսված հատուկ ջերմաստիճանի տիրույթ: Ուլտրաձայնագրիչը ավտոմատ կերպով կդադարի, երբ առավելագույն ջերմաստիճանը հասնի և դադարի, մինչև նմուշի ջերմաստիճանը իջնի սահմանված ջերմաստիճանի temperature ցածր արժեքի: Ապա վերամշակումը կրկին ավտոմատ կերպով սկսվում է: Այս խելացի առանձնահատկությունը կանխում է ջերմության պատճառով դեգրադացիան:
  2. Ինչ վերաբերում է ուլտրաձայնային բազմաքանակ նմուշի VialTweeter- ին, տիտանի բլոկը, որոնք պահում են նմուշի խողովակները, կարող է նախապես հովացվել: Տեղադրեք VialTweeter բլոկը (միայն սոնոտրոդը առանց փոխարկիչի!) Սառնարանի կամ սառցարանի մեջ, որպեսզի տիտանի բլոկը նախապես հովացնի, օգնում է հետաձգել նմուշի ջերմաստիճանի բարձրացումը: Հնարավորության դեպքում նմուշը կարող է նաև նախապես հովացվել:
  3. Օգտագործեք սառցե բաղնիք կամ չոր սառույց `հովացման ընթացքում զովացնելու համար: Տեղադրեք ձեր ընտրանքային խողովակը (ներ) ը ձայնամեկուսացման ընթացքում սառույցի լոգարանում: VialTweeter- ի համար օգտագործեք մակերեսային սկուտեղ, որը լցված է չոր սառույցով և տեղադրեք VialTweeter- ը չոր սառույցի վրա, որպեսզի ջերմությունն արագ տարածվի:

Հաճախորդները ամբողջ աշխարհում օգտագործում են Hielscher զոնդ-ուլտրաձայնային սարքերը, ինչպես նաև բազմալեզու ձայնային ստորաբաժանումներ VialTweeter- ը և UIP400MTP- ը կենսաբանական, կենսաքիմիական, բժշկական և կլինիկական լաբորատորիաներում իրենց ամենօրյա նմուշ պատրաստելու աշխատանքների համար: Hielscher պրոցեսորների խելացի ծրագրակազմը և ջերմաստիճանի հսկողությունը, ջերմաստիճանը հուսալիորեն վերահսկվում է, և խուսափվում է ջերմության հետևանքով նմուշի դեգրադացիայից: Ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստումը Hielscher ուլտրաձայնային լուծույթներով ապահովում է բարձր հուսալի և վերարտադրելի արդյունքներ:

Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!

Հարցրեք ավելին

Խնդրում ենք օգտագործել ստորև բերված ձևը `ուլտրաձայնային պրոցեսորների, ծրագրերի և գնի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մենք ուրախ կլինենք ձեզ հետ քննարկել ձեր գործընթացը և առաջարկել ձեզ ուլտրաձայնային համակարգ, որը բավարարում է ձեր պահանջները:









Խնդրում ենք նկատի ունենալ մեր Գաղտնիության քաղաքականություն,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային համասեռացուցիչներ `լաբորատոր, պիլոտային և արդյունաբերական մասշտաբով ծրագրերը խառնելու, ցրելու, էմուլգացման և արդյունահանման համար:

Գրականություն / Հղումներ



Փաստեր Worth Իմանալով

ELISA- ի տեսակները

Գոյություն ունեն ELISA- ի մի քանի տեսակներ, որոնք առանձնանում են իրենց գործունեության սկզբունքով: Դրանք հայտնի են որպես ուղղակի ELISA, անուղղակի ELISA, սենդվիչ ELISA, մրցակցային ELISA և հակադարձ ELISA: Ստորև մենք ձեզ ենք ներկայացնում ELISA- ի տարբեր տեսակների և դրանց հիմնական բնութագրերի և տարբերությունների ակնարկ:
ELISA- ն կարող է վարվել որակական կամ քանակական ձևաչափով: Որակական արդյունքները տալիս են պարզ դրական կամ բացասական արդյունք, մինչդեռ քանակական ELISA- ում նմուշի օպտիկական խտությունը (OD) համեմատվում է ստանդարտ կորի հետ, որը սովորաբար թիրախային մոլեկուլի հայտնի կոնցենտրացիայի լուծույթի սերիական նոսրացում է:

Ուղղակի ELISA

Ուղղակի ELISA- ն Elisa- ի ամենապարզ փորձարկման ձևն է, որտեղ օգտագործվում է միայն ֆերմենտով պիտակավորված առաջնային հակամարմին, և երկրորդական հակամարմիններ չեն պահանջվում: Ֆերմենտով պիտակավորված առաջնային հակամարմինը կապվում է անմիջապես թիրախին, այսինքն ՝ անտիգենին: Բուֆերային անտիգենային լուծույթը ավելացվում է միկրոտիտր ափսեի յուրաքանչյուր հորատանցքում (սովորաբար 96 հորատանցքի ափսե, ELISA- ափսե), որտեղ լիցքավորված փոխազդեցությունների միջոցով կպչում է պլաստիկ մակերեսին: Երբ առաջնային հակամարմնի հետ կապված ֆերմենտը արձագանքում է իր սուբստրատի հետ, այն առաջացնում է տեսանելի ազդանշան, որը կարող է չափվել սպեկտրաֆոտոմետրով, ֆտորաչափով կամ լուսատուաչափով:

Անուղղակի ELISA

Անուղղակի ELISA թեստի համար անհրաժեշտ է ինչպես առաջնային, այնպես էլ երկրորդային հակամարմիններ: Սակայն, հակառակ ուղղակի ELISA- ին, ոչ թե առաջնային, այլ երկրորդային հակամարմինները պիտակավորված են ֆերմենտով: Հակագենը անշարժացված է ջրհորի ափսեի մեջ և կապված է առաջնային հակամարմնով: Դրանից հետո ֆերմենտով պիտակավորված երկրորդական հակամարմինը կապվում է առաջնային հակամարմնին: Վերջապես, երկրորդային հակամարմնի հետ կապված ֆերմենտը արձագանքում է իր սուբստրատի հետ և առաջացնում տեսանելի ազդանշան, որը հնարավոր է հայտնաբերել:

Սենդվիչ ELISA

Չնայած ELISA- ի ուղղակի և անուղղակի փորձարկումներին `անտիգենն անշարժացված է և պատված է ջրհորի ափսեի մակերևույթին, ELISA բուտերբրոդում հակամարմինն անշարժացված է դեպի ELISA- ափսեի պլաստիկ մակերեսը: ELISA բուտերբրոդում անշարժացված հակամարմինները հայտնի են որպես գրավիչ հակամարմիններ: Բացի գրավման հակամարմիններից, բուտերբրոդում ELISA պահանջվում են նաև այսպես կոչված հայտնաբերող հակամարմիններ: Հայտնաբերող հակամարմինները ներառում են չպիտակավորված առաջնային հայտնաբերման հակամարմին և ֆերմենտային պիտակավորված երկրորդային հայտնաբերման հակամարմին:
Քայլ առ քայլ հետաքրքրության անտիգենը կապվում է ափսեի մեջ անշարժացված գրավիչ հակամարմնին: Դրանից հետո առաջնային հայտնաբերման հակամարմինը կապվում է անտիգենի հետ: Դրանից հետո երկրորդական հայտնաբերման հակամարմինը կապվում է առաջնային հայտնաբերման հակամարմնին: Արձագանքի վերջին փուլում ֆերմենտն արձագանքում է իր հիմքի հետ և առաջացնում տեսանելի ազդանշան, որը հնարավոր է օպտիկականորեն հայտնաբերել:

Մրցակցային ELISA

Մրցակցային ELISA- ն, որը հայտնի է նաև որպես ELISA- ի արգելակումը, ELISA- ի ամենաբարդ տեսակն է, քանի որ այն ներառում է արգելակիչ անտիգենի օգտագործումը: Երեք ձևաչափերից յուրաքանչյուրը ՝ ուղղակի, անուղղակի և բուտերբրոդային ELISA, կարող է հարմարեցվել մրցունակ ELISA ձևաչափին: Մրցակցային ELISA- ում արգելակիչ անտիգենը և հետաքրքրության անտիգենը մրցում են առաջնային հակամարմնին կապելու համար:
Մրցակցային ELISA- ի համար ոչ պիտակավորված հակամարմինները ինկուբացվում են իր հակագենի, այսինքն ՝ նմուշի առկայության դեպքում: Այս կապված հակամարմինների / հակագենի բարդույթները այնուհետև ավելացվում են անտիգենով պատված հորատանցքում:
Թիթեղը լվանում է, որպեսզի չկապված հակամարմինները հանվեն: Մրցակցային ELISA- ն իր անունն ունի այն բանի շնորհիվ, որ նմուշում որքան շատ հակագեն կա, այնքան ավելի շատ հակագեն-հակամարմինների բարդույթներ են առաջանում: Դա նշանակում է, որ ջրհորի անտիգենին միանալու համար առկա են ավելի քիչ չկապված հակամարմիններ, և անտիգենները պետք է մրցակցեն մատչելի հակամարմնի ձեռքբերման համար: Ավելացվում է երկրորդային հակամարմին, որը համապատասխանում է առաջնային հակամարմինին: Այս երկրորդ հակամարմինը կապված է ֆերմենտի հետ: Սուբստրատի ավելացման ժամանակ մնացած ֆերմենտները առաջացնում են քրոմոգեն կամ ցերեկային լույսի ազդանշան:
Այս պահին արձագանքը դադարեցվում է `ազդանշանի վերջնական հագեցումից խուսափելու համար:
Որոշ ELISA մրցունակ հավաքածուներ ֆերմենտային կապակցված հակամարմնի փոխարեն ներառում են ֆերմենտային կապակցված անտիգեն: Պիտակավորված անտիգենը մրցակցում է առաջնային հակամարմինների պարտադիր տեղամասերի հետ նմուշային անտիգենի հետ (առանց պիտակավորված): Նմուշում որքան քիչ է անտիգենը, այնքան ավելի պիտակավորված անտիգենը պահվում է ջրհորում և այնքան ուժեղ է ազդանշանը:

Հակադարձ ELISA

Հակադարձ ELISA- ն չի օգտագործում լավ ափսեներ, բայց թողնում է անտիգենները կասեցված փորձարկման հեղուկում: Հակադարձ ELISA թեստը չափում է կապած հակամարմնի քանակը անտիգենի միջոցով: Այն մշակվել է հատուկ ՝ Արևմտյան Նեղոս վիրուսի ծրարի սպիտակուցը հայտնաբերելու և ուսումնասիրելու համար, և թե ինչպես է այն կարողանում գտնել վիրուսին բնորոշ հակամարմիններ:

Ֆերմենտային նշիչ, որն օգտագործվում է ELISA- ի համար

Ստորև բերված ցուցակը տալիս է ELISA- ի անալիզներում օգտագործված ամենատարածված ֆերմենտային մարկերները, որոնք թույլ են տալիս վերլուծության արդյունքները չափել ավարտից հետո:

  • OPD- ն (o-fenylenediamine dihydrochloride) սաթ է վերածում ՝ հայտնաբերելու HRP (ծովաբողկ պերօքսիդազ), որը հաճախ օգտագործվում է որպես զուգակցված սպիտակուց:
  • TMB (3,3′, 5,5′-tetramethylbenzidine) կապտավուն է HRP- ն հայտնաբերելիս և դեղին է դառնում ծծմբական կամ ֆոսֆորական թթու ավելացնելուց հետո
  • ABTS (2,2′-Ազինոբիս [3-էթիլբենզոթիազոլին-6-սուլֆոնաթթու] -դիամոնիումի աղ) դառնում է կանաչ `HRP- ի հայտնաբերման ժամանակ:
  • PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Disodium աղ) ալկալային ֆոսֆատազը հայտնաբերելիս դեղնում է: