Արձանագրություն SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի անջատման համար `Sonication- ով

Hielscher VialTweeter- ը ուլտրաձայնային բազմակի նմուշների պատրաստման եզակի միավոր է, որն օգտագործվում է կորոնավիրուսը SARS-COV-2-ը պասիվացնելու համար: VialTweeter- ը թույլ է տալիս միաժամանակ պատրաստել մինչև 10 նմուշի սրվակ և դրանով իսկ իդեալական միավոր է զանգվածային նմուշի մշակման համար:

SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ակտիվացում VialTweeter- ի հետ

Ֆիքսատորը հեռացնելուց հետո միաշերտերը երեք անգամ լվացվեցին ֆոսֆատային բուֆերային լուծույթով (PBS), նախքան բջիջները քերելով 1 մլ MEM / 5% FBS և վերամշակվեց (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատված 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով) Hielscher- ի միջոցով ուլտրաձայնային պրոցեսոր UP200St- ը VialTweeter- ի հետ կցորդ Supernatants- ը պարզվել է 10 րոպեում 3000 × գ կենտրոնախմբով: Կարդացեք այստեղ ամբողջական արձանագրությունը Welch- ի և այլնի կողմից SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի անջատման համար: (2020) ստորև ՝

Բջիջներ և վիրուսներ

Vero E6 բջիջները (Vero C1008; ATCC CRL-1586) մշակվել են փոփոխված Eagle- ի նվազագույն էական միջավայրում (MEM), լրացված 10% (v / v) պտղի հորթի շիճուկով (FCS): Օգտագործված վիրուսը եղել է SARS-CoV-2 շտամ hCOV-19 / Անգլիա / 2/2020, որը PHE- ի կողմից մեկուսացվել է 29/01/2020, Միացյալ Թագավորությունում, հիվանդների առաջին կլաստերից: Այս վիրուսը ստացվել է 1-ին հատվածում և օգտագործվել 2-րդ և 3-րդ հատվածներում անգործունակության ուսումնասիրությունների համար:
Ռեակտիվների և քիմիական նյութերի համար, որոնք օգտագործվում են SARS-CoV-2 իակտիվացման, ինչպես նաև ռեագենտների ցիտոտոքսիկությունը հեռացնելու համար, տե՛ս Welch et al. (2020)

Ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման միավորը VialTweeter օգտագործվում է SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման համար

Լվացող միջոցների կողմից վիրուսի ինակտիվացում – Welch- ի և այլոց կողմից SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի անակտիվացման արձանագրություն: 2020 թ

SARS-CoV-2 պասիվացում

Առևտրային ապրանքների համար վիրուսային պատրաստուկներ (հյուսվածքային մշակույթի հեղուկ, տիտրեր `1 ran 10-ից)6 դեպի 1 × 108 PFU / մլ) կրկնակի մշակվել են ռեակտիվներով կոնցենտրացիաներով և արտադրողների օգտագործման ցուցումներում առաջարկված շփման ժամանակներում, երբ առկա է, կամ կոնցենտրացիաների և ժամանակների համար, որոնք հատուկ պահանջել են փորձարկման լաբորատորիաները: Այն դեպքում, երբ արտադրողի կողմից տրվել է մի շարք կոնցենտրացիաներ, փորձարկվել է արտադրանքի և նմուշի ամենացածր հարաբերակցությունը (այսինքն `փորձնական արտադրանքի ամենացածր առաջարկվող կոնցենտրացիան): Նմուշների տրանսպորտային խողովակի ռեակտիվները փորձարկվել են `օգտագործելով հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկի մեկ հատորի և տասը հատ ռեակտիվի հարաբերակցություն, եթե արտադրողը չի սահմանել նմուշի հեղուկի և ռեակտիվի ծավալի հարաբերակցություն: Լվացող միջոցները, ֆիքսատորները և լուծիչները փորձարկվել են նշված կոնցենտրացիաներում նշված ժամանակների համար: Ակտիվացման բոլոր քայլերը կատարվել են շրջակա միջավայրի ջերմաստիճանում (18-25 ° C): Այլընտրանքային նմուշի տեսակների փորձարկման համար վիրուսը ցրվել է նշված նմուշի մատրիցով 1: 9 հարաբերակցությամբ, այնուհետև մշակվել է վերևում փորձարկման ռեակտիվներով: Բոլոր փորձերը ներառում էին կրկնակի կառավարման հեգնական մշակված նմուշներ `համարժեք ծավալի PBS- ով` փորձարկման ռեակտիվի տեղում: Անհրաժեշտ շփման ժամանակից անմիջապես հետո, 1 մլ բուժված նմուշը մշակվեց `օգտագործելով համապատասխանաբար ընտրված ֆիլտրման մատրիցը: Ակտիվացման փորձարկման համար ռեակտիվի հեռացումն իրականացվել է ավելի մեծ պտտվող սյունի ձևաչափով `օգտագործելով Pierce 4mL լվացող միջոցի հեռացման սյուններ (Thermo Fisher) կամ Pierce 10mL հզորությամբ ցենտրիֆուգի սյուները (Thermo Fisher) SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR կամ Sephadex LH-20 տալ 4 մլ փաթեթավորված ուլունքներ / խեժ: Amicon ֆիլտրերի միջոցով մաքրման համար 2 × 500μl նմուշները մաքրվել են երկու կենտրոնախույս ֆիլտրերի միջոցով `նախկինում նկարագրված մեթոդով, ապա միավորվելով միասին: Գլուտարալդեհիդի հեռացումով ֆորմալդեհիդի և ֆորմալդեհիդի համար օգտագործվել է մեկ զտիչ 1 × 500μl նմուշի ծավալով, վերամշակվելուց հետո 500 մգ PBS- ով վերամշակվելուց հետո և ավելացվել 400 մմ MEM / 5% FBS: Վարակվածների ինակտիվացման համար VialTweeter-ը UP200ST ուլտրաձայնային պրոցեսորումմիաշերտ, 12,5 սմ2 Vero E6 բջիջների շշեր (2.5 × 10)6 բջիջները / տափաշիշը 2.5 մլ MEM / 5% FBS- ով) վարակվել են MOI 0.001-ում և ինկուբացվել 37 ° C / 5% CO- ում:2 24 ժամվա ընթացքում: Supernatant- ը հանվեց, և բջիջները ֆիքսվեցին `օգտագործելով 5mL ֆորմալդեհիդ կամ ֆորմալդեհիդ և glutaraldehyde սենյակային ջերմաստիճանում 15 կամ 60 րոպե: Ֆիքսատորը հանվեց, և միաշերտերը երեք անգամ լվացվեցին PBS- ով ՝ բջիջները քերելով 1 մլ MEM / 5% FBS և վերամշակված (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատում 100% հզորությամբ և ամպլիտուդայով) օգտագործելով UP200St VialTweeter հավելվածով (Hielscher ուլտրաձայնային Տեխնոլոգիա): Supernatants- ը պարզվել է 10 րոպեում 3000 × գ կենտրոնախմբով:

VialTweeter- ը փակ փաթիլների ինտենսիվ սառցապատման համար

VialTweeter- ը փակ սրվակների ինտենսիվ Sonication- ի համար

Տեղեկատվության պահանջ





Տարբեր ռեակտիվներ փորձարկվել են SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման համար՝ օգտագործելով ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման միավորը՝ VialTweeter:

Ուլտրաձայնային VialTweeter- ով SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի կորստի համար օգտագործվող ռեակտիվի մանրամասները ՝ համաձայն Welch- ի և այլոց արձանագրության: 2020 թ

Ամբողջական արձանագրությունը, ներառյալ Hielscher VialTweeter- ի օգտագործումը, կարող եք գտնել այստեղ ՝
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Բազմ նմուշների ուլտրաձայնային VialTweeter-ը թույլ է տալիս միաժամանակ պատրաստել մինչև 10 սրվակ՝ նույն գործընթացի պայմաններում: VialTweeter-ը հաստատված ուլտրաձայնային սարք է, որն օգտագործվում է SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման համար (Սեղմեք մեծացնելու համար):

VialTweeter ուլտրաձայնային վիրուսի ինակտիվացման համար

Առավելությունները VialTweeter մի հայացքից

  • Միաժամանակ մինչև 10 սրվակի Sonication
  • Խաչաձեւ աղտոտվածություն չկա
  • Նմուշի կորուստ չկա
  • Տվյալների ավտոմատ գրանցում
  • Հեշտ և անվտանգ գործելու համար
VialTweeter- ը օգտագործվում է նաև դրա համար

  • Բջջային լիզինգ
  • Վիրուսային մասնիկների խափանում
  • Նուկլեինաթթվի արդյունահանում. ԴՆԹ / ՌՆԹ մեկուսացում
  • ԴՆԹ / ՌՆԹ մասնատում
  • Լիզատի լուծույթ
  • Բարդ ուլտրաձայնային դիսեմբրատորներ և բջիջների խանգարող սարքեր

    Ուլտրաձայնային բազմակի նմուշ VialTweeter- ը կենսաբանական, կենսաքիմիական և կլինիկական լաբորատորիաներում նմուշ պատրաստելու բազմաթիվ ուլտրաձայնային լուծումներից մեկն է միայն: Hielscher Ultrasonics- ն առաջարկում է իդեալական ուլտրաձայնային ապամոնտաժիչ ձեր կիրառման համար, օրինակ `բջիջների լիզիզմ, բջիջների արդյունահանում, հյուսվածքների համասեռացում, լիզատի լուծույթ, լուծարում, նմուշազերծում և այլն:
    Տեղեկացրեք մեզ, թե քանի նմուշ պետք է մշակեք մեկ ժամում և օրը, եթե նախընտրում եք ուղղակի կամ անուղղակի ձայնազերծումը և որն է ուլտրաձայնային նմուշի բուժման նպատակը: Մենք խորհուրդ կտանք ձեզ ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը ձեր ամենօրյա աշխատանքային ռեժիմի համար:
    Hielscher Ultrasonics- ի թվային ուլտրաձայնային պրոցեսորները հագեցած են խելացի ծրագրակազմով, տվյալների ավտոմատ ձայնագրմամբ, ջերմաստիճանի կարգավորման, նախալուսացման տևողության, ցիկլի / զարկերակային ռեժիմի, ինչպես նաև նմուշի լուսավորության և զննարկիչի հեռակառավարման ռեժիմի նախադրյալի հեշտ ընտրանքներով: Մենք ձգտում ենք մեր ուլտրաձայնային սարքերը հնարավորինս խելացի դարձնել, որպեսզի ձեր հետազոտական և աշխատանքային ռեժիմը դառնա հնարավորինս հարմար և հաջողակ:
    VialTweeter- ի հետ ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման արձանագրություններ գտնելու համար կտտացրեք այստեղ:

    Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!

    Հարցրեք ավելին

    Խնդրում ենք օգտագործել ստորև բերված ձևը `ուլտրաձայնային պրոցեսորների, ծրագրերի և գնի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մենք ուրախ կլինենք ձեզ հետ քննարկել ձեր գործընթացը և առաջարկել ձեզ ուլտրաձայնային համակարգ, որը բավարարում է ձեր պահանջները:









    Խնդրում ենք նկատի ունենալ մեր Գաղտնիության քաղաքականություն,


    Ուլտրաձայնային բարձր կտրվածքային հոմոգենիզատորները օգտագործվում են լաբորատոր, նստարանային, փորձնական և արդյունաբերական մշակման մեջ:

    Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային համասեռացուցիչներ `լաբորատոր, պիլոտային և արդյունաբերական մասշտաբով ծրագրերը խառնելու, ցրելու, էմուլգացման և արդյունահանման համար:

    Գրականություն / Հղումներ



    Փաստեր Worth Իմանալով

    Որոնք են Վերո բջիջները:

    Vero E6- ը, որը հայտնի է նաև որպես Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586), կլոնավորված բջջային գիծ է Vero 76-ից և օգտագործվում է SARS-CoV և SARS-CoV-2 կորոնավիրուսների հետազոտություններում: Վերո բջիջները բջիջների տոհմ են, որոնք օգտագործվում են բջջային մշակույթներում: The 'Վերո’ տոհմը մեկուսացված էր աֆրիկյան կանաչ կապիկից արդյունահանված երիկամների էպիթելիային բջիջներից (Chlorocebus sp.):
    Vero E6 բջիջները շփման որոշակի արգելակում են ցուցաբերում, ուստի հարմար են դանդաղ բազմացող վիրուսներ տարածելու համար: Vero E6 բջջային շարքերը սովորաբար օգտագործվում են կորոնավիրուսների SARS-CoV և SARS-CoV-2 ցիտոպաթոլոգիան ուսումնասիրելու համար, քանի որ Վերո բջիջները (աֆրիկյան կանաչ կապիկի երիկամների բջիջներ) ցուցադրում են անգիոտենզին փոխակերպող ֆերմենտ 2 (ACE2) ընկալիչների առատ արտահայտություն: ACE2 ընկալիչները SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի հիմնական հանգրվանն են:
    Օրինակ ՝ Օգանդոն և այլք: (2020 թ.) Պարզեց, որ SARS-CoV-2 – համեմատած SARS-CoV- ի հետ – առաջացրել է ներբջջային վիրուսային ՌՆԹ-ի ավելի բարձր մակարդակ, բայց զարմանալիորեն մոտ 50 անգամ պակաս վարակիչ վիրուսային սերունդ ստացվեց մշակութային միջավայրից: Ավելին, նրանք որոշեցին, որ երկու վիրուսների զգայունությունը կորոնավիրուսի վերարտադրության երեք հաստատված արգելակիչների նկատմամբ (Remdesivir, Alisporivir և chloroquine) շատ նման է, բայց որ SARS-CoV-2 վարակը էապես ավելի զգայուն է պեգիլացված ինտերֆերոնով բջիջների նախնական բուժման նկատմամբ: ալֆա Երկու վիրուսների կարևոր տարբերությունն այն փաստն է, որ – Վերո E6 բջիջներում անցնելիս – SARS-CoV-2- ը, ըստ երեւույթին, գտնվում է ուժեղ ընտրության ճնշման ներքո `հասկային սպիտակուցային գենի հարմարվողական մուտացիաներ ստանալու համար: Այս մուտացիաները փոխում կամ ջնջում են ենթադրյալ «ֆուրինանման պառակտման տեղամասը» S1 և S2 տիրույթները միացնող տարածաշրջանում և հանգեցնում են ափսեի վերլուծության շատ ցայտուն ֆենոտիպային փոփոխության: