Արձանագրություն SARS-CoV-2 Coronavirus ապաակտիվացման համար Sonication-ով

Hielscher VialTweeter-ը եզակի ուլտրաձայնային բազմակի նմուշների պատրաստման միավոր է, որն օգտագործվում է SARS-COV-2 կորոնավիրուսն ապաակտիվացնելու համար: VialTweeter-ը թույլ է տալիս միաժամանակ պատրաստել մինչև 10 նմուշի սրվակներ և այդպիսով իդեալական միավոր է զանգվածային նմուշների մշակման համար:

SARS-CoV-2 Coronavirus-ի ապաակտիվացում VialTweeter-ով

Ֆիքսատորը հեռացնելուց հետո մոնաշերտերը երեք անգամ լվացվել են ֆոսֆատով բուֆերացված ֆիզիոլոգիական լուծույթով (PBS) նախքան բջիջները քերել 1 մլ MEM/5% FBS-ի մեջ և ազդել (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատված 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով) օգտագործելով Hielscher: ուլտրաձայնային պրոցեսոր UP200St VialTweeter-ով հավելված. Սուպերնատենտները մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 3000 × գ 10 րոպեի ընթացքում: Կարդացեք այստեղ SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման ամբողջական արձանագրությունը Ուելչի և այլոց կողմից: (2020) ստորև.

Բջիջներ և վիրուսներ

Vero E6 cells (Vero C1008; ATCC CRL-1586) were cultured in modified Eagle’s minimum essential medium (MEM) supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum (FCS). Virus used was SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, isolated by PHE from the first patient cluster in the UK on 29/01/2020. This virus was obtained at passage 1 and used for inactivation studies at passage 2 or 3.
Ռեակտիվների և քիմիական նյութերի համար, որոնք օգտագործվում են SARS-CoV-2-ի ապաակտիվացման, ինչպես նաև ռեագենտի ցիտոտոքսիկության վերացման համար, տես Welch et al-ի գիտական զեկույցը: (2020):

Վիրուսների ապաակտիվացում լվացող միջոցներով – SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivation Protocol by Welch et al. 2020 թ

SARS-CoV-2-ի ապաակտիվացում

Առևտրային արտադրանքների համար, վիրուսային պատրաստուկներ (հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկ, տիտրերը տատանվում են 1 × 10-ից⁶ մինչև 1 × 10⁸ PFU/ml) were treated in triplicate with reagents at concentrations and for contact times recommended in the manufacturers’ instructions for use, where available, or for concentrations and times specifically requested by testing laboratories. Where a range of concentrations was given by the manufacturer, the lowest ratio of product to sample was tested (i.e. lowest recommended concentration of test product). Specimen transport tube reagents were tested using a ratio of one volume of tissue culture fluid to ten volumes of reagent, unless a volume ratio of sample fluid to reagent was specified by the manufacturer. Detergents, fixatives and solvents were tested at the indicated concentrations for the indicated times. All inactivation steps were performed at ambient room temperature (18 – 25°C). For testing of alternative sample types, virus was spiked into the indicated sample matrix at a ratio of 1:9, then treated with test reagents as above. All experiments included triplicate control mock-treated samples with an equivalent volume of PBS in place of test reagent. Immediately following the required contact time, 1mL of treated sample was processed using the appropriately selected filtration matrix. Reagent removal for inactivation testing was carried out in a larger spin column format using Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), or by filling empty Pierce 10mL capacity centrifuge columns (Thermo Fisher) with SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 to give 4mL packed beads/resin. For purification using Amicon filters, 2 × 500μl samples were purified using two centrifugal filters by the method previously described, then pooled together. For formaldehyde and formaldehyde with glutaraldehyde removal, one filter was used with 1× 500μl sample volume, resuspended after processing in 500μl PBS, and added to 400ul MEM/5% FBS. For inactivation of infected միաշերտ, 12,5 սմ² Vero E6 բջիջների կոլբաներ (2,5 × 10⁶ բջիջները/կոլբը 2,5 մլ MEM/5% FBS-ում) վարակվել են MOI 0,001 և ինկուբացվել են 37°C/5% CO₂ 24 ժամվա ընթացքում: Սուպերնաթանտը հեռացվեց և բջիջները ամրացվեցին 5 մլ ֆորմալդեհիդով կամ ֆորմալդեհիդով և գլյուտարալդեհիդով սենյակային ջերմաստիճանում 15 կամ 60 րոպե: Ֆիքսատորը հեռացվեց, և մոնաշերտերը երեք անգամ լվացվեցին PBS-ով, նախքան բջիջները քերելը 1 մլ MEM/5% FBS-ի մեջ և հնչեցվեց (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատված 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով) օգտագործելով UP200St VialTweeter հավելվածով (Hielscher Ultrasound): Տեխնոլոգիա): Սուպերնատենտները մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 3000 × գ 10 րոպեի ընթացքում:

Ուլտրաձայնային VialTweeter-ի միջոցով SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման համար օգտագործվող ռեագենտի մանրամասները՝ համաձայն Welch et al-ի արձանագրության: 2020 թ

Ամբողջական արձանագրությունը, ներառյալ Hielscher VialTweeter-ի օգտագործումը, կարելի է գտնել այստեղ.
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Բարդ ուլտրաձայնային դիսեմբրատորներ և բջջային խանգարիչներ

Բազմաթիվ նմուշների ուլտրաձայնային VialTweeter-ը միայն ուլտրաձայնային լուծումներից մեկն է կենսաբանական, կենսաքիմիական և կլինիկական լաբորատորիաներում նմուշների պատրաստման համար: Hielscher Ultrasonics-ն առաջարկում է իդեալական ուլտրաձայնային դիսեմբրատոր ձեր կիրառման համար, օրինակ՝ բջիջների լիզում, բջիջների արդյունահանում, հյուսվածքների համասեռացում, լիզատի լուծարում, լուծարում, նմուշների գազազերծում և այլն:
Տեղեկացրեք մեզ, թե քանի նմուշ պետք է մշակեք մեկ ժամում և օրում, եթե նախընտրում եք ուղղակի կամ անուղղակի ձայնային ախտահանումը և որն է ուլտրաձայնային նմուշի բուժման թիրախը: Մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը ձեր ամենօրյա աշխատանքային ռեժիմի համար:
Hielscher Ultrasonics’ digital ultrasonic processors are equipped with smart software, automatic data recording, easy pre-setting options for temperature control, sonication duration, cycle/pulse mode as well as sample illumination and browser remote control. We strive to make our ultrasonic devices as smart as possible so that your research and work routine becomes as convenient and successful as possible.
Կտտացրեք այստեղ՝ VialTweeter-ով ավելի շատ հավելվածներ գտնելու համար, ներառյալ ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման արձանագրությունները: