Արձանագրություն SARS-CoV-2 Coronavirus ապաակտիվացման համար Sonication-ով

Hielscher VialTweeter-ը եզակի ուլտրաձայնային բազմակի նմուշների պատրաստման միավոր է, որն օգտագործվում է SARS-COV-2 կորոնավիրուսն ապաակտիվացնելու համար: VialTweeter-ը թույլ է տալիս միաժամանակ պատրաստել մինչև 10 նմուշի սրվակներ և այդպիսով իդեալական միավոր է զանգվածային նմուշների մշակման համար:

SARS-CoV-2 Coronavirus-ի ապաակտիվացում VialTweeter-ով

Ֆիքսատորը հեռացնելուց հետո մոնաշերտերը երեք անգամ լվացվել են ֆոսֆատով բուֆերացված ֆիզիոլոգիական լուծույթով (PBS) նախքան բջիջները քերել 1 մլ MEM/5% FBS-ի մեջ և ազդել (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատված 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով) օգտագործելով Hielscher: ուլտրաձայնային պրոցեսոր UP200St VialTweeter-ով հավելված. Սուպերնատենտները մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 3000 × գ 10 րոպեի ընթացքում: Կարդացեք այստեղ SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման ամբողջական արձանագրությունը Ուելչի և այլոց կողմից: (2020) ստորև.

Բջիջներ և վիրուսներ

Vero E6 բջիջները (Vero C1008; ATCC CRL-1586) մշակվել են մոդիֆիկացված Eagle-ի նվազագույն հիմնական միջավայրում (MEM), որը լրացվել է 10% (v/v) պտղի հորթի շիճուկով (FCS): Օգտագործված վիրուսը SARS-CoV-2 շտամն էր hCOV-19/England/2/2020, մեկուսացված PHE-ի կողմից Մեծ Բրիտանիայում հիվանդների առաջին կլաստերից 29/01/2020-ին: Այս վիրուսը ստացվել է 1-ին հատվածում և օգտագործվել 2-րդ կամ 3-րդ հատվածում ապաակտիվացման ուսումնասիրությունների համար:
Ռեակտիվների և քիմիական նյութերի համար, որոնք օգտագործվում են SARS-CoV-2-ի ապաակտիվացման, ինչպես նաև ռեագենտի ցիտոտոքսիկության վերացման համար, տես Welch et al-ի գիտական զեկույցը: (2020):

Վիրուսների ապաակտիվացում լվացող միջոցներով – SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivation Protocol by Welch et al. 2020 թ

SARS-CoV-2-ի ապաակտիվացում

Առևտրային արտադրանքների համար, վիրուսային պատրաստուկներ (հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկ, տիտրերը տատանվում են 1 × 10-ից⁶ մինչև 1 × 10⁸ PFU/ml) մշակվել են եռակի կրկնակի ռեակտիվներով կոնցենտրացիաներով և կոնտակտային ժամանակների համար, որոնք առաջարկվում են արտադրողների օգտագործման հրահանգներում, որտեղ առկա է, կամ կոնցենտրացիաների և ժամանակի համար, որոնք հատուկ պահանջվում են փորձարկման լաբորատորիաների կողմից: Այն դեպքում, երբ արտադրողի կողմից տրվել է կոնցենտրացիաների մի շարք, փորձարկվել է արտադրանքի և նմուշի ամենացածր հարաբերակցությունը (այսինքն փորձարկվող արտադրանքի ամենացածր առաջարկվող կոնցենտրացիան): Նմուշի տեղափոխման խողովակի ռեակտիվները փորձարկվել են՝ օգտագործելով հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկի մեկ ծավալի և ռեագենտի տասը ծավալների հարաբերակցությունը, բացառությամբ այն դեպքերի, երբ արտադրողի կողմից սահմանված չէ նմուշի հեղուկի և ռեակտիվի ծավալային հարաբերակցությունը: Լվացող միջոցները, ֆիքսատիվները և լուծիչները ստուգվել են նշված կոնցենտրացիաներում նշված ժամանակներում: Անակտիվացման բոլոր քայլերն իրականացվել են շրջակա միջավայրի սենյակային ջերմաստիճանում (18 – 25°C): Այլընտրանքային նմուշների տեսակների փորձարկման համար վիրուսը ցցվել է նշված նմուշի մատրիցում 1:9 հարաբերակցությամբ, այնուհետև բուժվել փորձարկման ռեակտիվներով, ինչպես վերը նշված է: Բոլոր փորձերը ներառում էին եռակի հսկիչ կեղծ մշակված նմուշներ՝ փորձարկման ռեագենտի փոխարեն PBS-ի համարժեք ծավալով: Պահանջվող շփման ժամանակից անմիջապես հետո 1 մլ մշակված նմուշը մշակվել է՝ օգտագործելով համապատասխան ընտրված ֆիլտրման մատրիցը: Անակտիվացման փորձարկման համար ռեագենտի հեռացումն իրականացվել է ավելի մեծ պտտվող սյունակի ձևաչափով՝ օգտագործելով Pierce 4 մլ լվացող միջոցի հեռացման պտտվող սյունակները (Thermo Fisher) կամ Pierce 10 մլ տարողությամբ դատարկ ցենտրիֆուգային սյուները (Thermo Fisher) SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-40 լցնելով: Sephadex LH-20 4 մլ փաթեթավորված ուլունքներ/խեժ տալու համար: Amicon ֆիլտրերի միջոցով մաքրման համար 2 × 500 μl նմուշները մաքրվել են երկու կենտրոնախույս ֆիլտրերի միջոցով՝ նախկինում նկարագրված մեթոդով, այնուհետև միավորվել միասին: Գլյուտարալդեհիդի հեռացմամբ ֆորմալդեհիդի և ֆորմալդեհիդի համար օգտագործվել է մեկ ֆիլտր 1×500 մկլ նմուշի ծավալով, որը վերացվել է 500 մկլ PBS-ում մշակելուց հետո և ավելացվել 400 ուլ MEM/5% FBS: Վարակվածների ապաակտիվացման համար միաշերտ, 12,5 սմ² Vero E6 բջիջների կոլբաներ (2,5 × 10⁶ բջիջները/կոլբը 2,5 մլ MEM/5% FBS-ում) վարակվել են MOI 0,001 և ինկուբացվել են 37°C/5% CO₂ 24 ժամվա ընթացքում: Սուպերնաթանտը հեռացվեց և բջիջները ամրացվեցին 5 մլ ֆորմալդեհիդով կամ ֆորմալդեհիդով և գլյուտարալդեհիդով սենյակային ջերմաստիճանում 15 կամ 60 րոպե: Ֆիքսատորը հեռացվեց, և մոնաշերտերը երեք անգամ լվացվեցին PBS-ով, նախքան բջիջները քերելը 1 մլ MEM/5% FBS-ի մեջ և հնչեցվեց (3 × 10 վայրկյան, 10 վայրկյան անջատված 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով) օգտագործելով UP200St VialTweeter հավելվածով (Hielscher Ultrasound): Տեխնոլոգիա): Սուպերնատենտները մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 3000 × գ 10 րոպեի ընթացքում:

Ուլտրաձայնային VialTweeter-ի միջոցով SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ապաակտիվացման համար օգտագործվող ռեագենտի մանրամասները՝ համաձայն Welch et al-ի արձանագրության: 2020 թ

Ամբողջական արձանագրությունը, ներառյալ Hielscher VialTweeter-ի օգտագործումը, կարելի է գտնել այստեղ.
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Բարդ ուլտրաձայնային դիսեմբրատորներ և բջջային խանգարիչներ

Բազմաթիվ նմուշների ուլտրաձայնային VialTweeter-ը միայն ուլտրաձայնային լուծումներից մեկն է կենսաբանական, կենսաքիմիական և կլինիկական լաբորատորիաներում նմուշների պատրաստման համար: Hielscher Ultrasonics-ն առաջարկում է իդեալական ուլտրաձայնային դիսեմբրատոր ձեր կիրառման համար, օրինակ՝ բջիջների լիզում, բջիջների արդյունահանում, հյուսվածքների համասեռացում, լիզատի լուծարում, լուծարում, նմուշների գազազերծում և այլն:
Տեղեկացրեք մեզ, թե քանի նմուշ պետք է մշակեք մեկ ժամում և օրում, եթե նախընտրում եք ուղղակի կամ անուղղակի ձայնային ախտահանումը և որն է ուլտրաձայնային նմուշի բուժման թիրախը: Մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը ձեր ամենօրյա աշխատանքային ռեժիմի համար:
Hielscher Ultrasonics-ի թվային ուլտրաձայնային պրոցեսորները հագեցած են խելացի ծրագրաշարով, տվյալների ավտոմատ ձայնագրմամբ, ջերմաստիճանի վերահսկման հեշտ նախնական կարգավորումներով, ձայնային ազդանշանի տեւողությամբ, ցիկլի/զարկերակային ռեժիմով, ինչպես նաեւ նմուշի լուսավորությամբ եւ դիտարկիչի հեռակառավարմամբ: Մենք ձգտում ենք մեր ուլտրաձայնային սարքերը հնարավորինս խելացի դարձնել, որպեսզի ձեր հետազոտություններն ու աշխատանքային առօրյան հնարավորինս հարմար և հաջողակ դառնա:
Կտտացրեք այստեղ՝ VialTweeter-ով ավելի շատ հավելվածներ գտնելու համար, ներառյալ ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման արձանագրությունները: