SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ուլտրաձայնով ինակտիվացման արձանագրություն

Hielscher-ի VialTweeter-ը եզակի ուլտրաձայնային բազմանմուշային նախապատրաստման սարք է, որով ինակտիվացնում են SARS-CoV-2 կորոնավիրուսը։ VialTweeter-ը հնարավորություն է տալիս միաժամանակ պատրաստել մինչև 10 նմուշային սրվակ, և այդպիսով իդեալական սարք է նմուշների զանգվածային մշակման համար։

SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ինակտիվացումը VialTweeter-ով

Ֆիքսատորը հեռացնելուց հետո բջջային միաշերտները երեք անգամ լվացվել են ֆոսֆատ-աղային բուֆերով (PBS)՝ նախքան բջիջները քերելը 1mL MEM/5% FBS-ի մեջ, իսկ ապա ենթարկվել են ուլտրաձայնային մշակման (3 × 10 վայրկյան աշխատանք, 10 վայրկյան դադար՝ 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով)՝ օգտագործելով Hielscher ուլտրաձայնային պրոցեսորը՝ UP200St-ը՝ VialTweeter ամրակով։ Վերնստվածքային հեղուկները պարզեցվել են 10 րոպե 3000 × g-ով ցենտրիֆուգմամբ։ Ստորև կարդացեք SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ինակտիվացման վերաբերյալ Welch et al. (2020)-ի լիարժեք արձանագրությունը՝

Բջիջներ և վիրուս

Vero E6 բջիջները (Vero C1008; ATCC CRL-1586) մեծացվել են Eagle-ի փոփոխված նվազագույն անհրաժեշտ միջավայրում (MEM)՝ լրացված 10% (v/v) պտղային հորթի շիճուկով (FCS)։ Կիրառված վիրուսը SARS-CoV-2 վիրուսի hCOV-19/England/2/2020 շտամն է, որը PHE-ն մեկուսացրել է Մեծ Բրիտանիայում հիվանդների առաջին խմբից 29/01/2020-ին։ Այս վիրուսը ձեռք է բերվել 1 passage-ում և ինակտիվացման ուսումնասիրությունների համար կիրառվել է 2 կամ 3 passage-ով։
SARS-CoV-2-ի ինակտիվացման համար կիրառվող ռեակտիվների և քիմիական նյութերի, ինչպես նաև ռեակտիվների ցիտոտոքսիկության հեռացման վերաբերյալ մանրամասների համար դիմեք Welch et al. (2020) գիտական զեկույցին։

Վիրուսի ինակտիվացում դետերգենտներով — Welch et al. 2020-ի SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ինակտիվացման արձանագրություն

SARS-CoV-2-ի ինակտիվացում


Առևտրային արտադրանքների համար վիրուսային պրեպարատները (հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկ, որի տիտրը կազմում է 1 × 10⁶ – 1 × 10⁸ PFU/ml) մշակվել են եռակի՝ ռեակտիվներով այն խտություններով և շփման այն տևողություններով, որոնք առաջարկվում են արտադրողի կիրառման ցուցումներում՝ որտեղ դրանք առկա են, կամ այն խտություններով և տևողություններով, որոնք հատուկ պահանջվել են թեստավորող լաբորատորիաների կողմից։ Երբ արտադրողը նշել է խտությունների միջակայք, փորձարկվել է արտադրանքի նմուշի նկատմամբ ամենացածր հարաբերակցությունը (այսինքն՝ ստուգող արտադրանքի ամենացածր առաջարկվող խտությունը)։ Նմուշատար խողովակների ռեակտիվները փորձարկվել են մեկ ծավալ հյուսվածքային կուլտուրայի հեղուկի դիմաց տասը ծավալ ռեակտիվի հարաբերակցությամբ, եթե արտադրողը չի նշել նմուշային հեղուկի և ռեակտիվի ծավալային հարաբերակցության մասին։ Դետերգենտները, ֆիքսատորները և լուծիչները փորձարկվել են նշված խտություններով՝ նշված տևողությունների ընթացքում։ Ինակտիվացման բոլոր փուլերը իրականացվել են սենյակային ջերմաստիճանում (18–25°C)։ Այլընտրանքային նմուշների տեսակների թեստավորման համար վիրուսն ավելացվել է նշված նմուշային մատրիքսի մեջ 1:9 հարաբերակցությամբ, այնուհետ մշակվել վերոնշյալ թեստային ռեակտիվներով։ Բոլոր փորձերը ներառել են եռակի հսկիչ կեղծ-մշակված նմուշներ, որոնցում թեստային ռեակտիվի փոխարեն ավելացվել է համարժեք ծավալով PBS։ Պահանջվող շփման ժամանակից անմիջապես հետո մշակված նմուշից 1mL-ը մշակվել է համապատասխան ընտրված զտիչ մատրիքսի միջոցով։ Ինակտիվացման թեստավորման համար ռեակտիվի հեռացումն իրականացվել է ավելի մեծ սպին-սյունակային ձևաչափով՝ կիրառելով Pierce 4mL դետերգենտ-հեռացման սպին-սյունակներ (Thermo Fisher), կամ դատարկ Pierce 10mL տարողությամբ ցենտրիֆուգային սյունակները (Thermo Fisher) լցնելով SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR կամ Sephadex LH-20 գնդիկներով/խեժով՝ ստանալով 4mL խտացված լցվածք։ Amicon ֆիլտրերով մաքրման դեպքում 2 × 500μl նմուշները մաքրվել են երկու ցենտրիֆուգային ֆիլտրերով՝ նախկինում նկարագրված մեթոդով, այնուհետ միավորվել են միասին։ Ֆորմալդեհիդի, ինչպես նաև ֆորմալդեհիդի և գլյուտարալդեհիդի հեռացման դեպքում կիրառվել է մեկ ֆիլտր՝ 1× 500μl նմուշի ծավալով, որը մշակումից հետո վերակախվել է 500μl PBS-ի մեջ և ավելացվել 400ul MEM/5% FBS-ին։ Վարակված միաշերտները ինակտիվացնելու համար՝ 12,5 cm² քոլբաներում՝ Vero E6 բջիջներ (2,5 × 10⁶ բջիջ/քոլբա՝ 2,5mL MEM/5% FBS) վարակվել են MOI 0,001-ով և պահվել են 37°C/5% CO₂ պայմաններում 24 ժամ։ Վերնստվածքային հեղուկը հեռացվել է, և բջիջները ֆիքսվել են 5mL ֆորմալդեհիդով, կամ ֆորմալդեհիդով և գլյուտարալդեհիդով՝ սենյակային ջերմաստիճանում 15 կամ 60 րոպե։ Ֆիքսատորը հեռացվել է, և միաշերտները երեք անգամ լվացվել են PBS-ով, մինչև բջիջները քերելը 1mL MEM/5% FBS-ի մեջ, իսկ ապա ենթարկվել են ուլտրաձայնային մշակման (3 × 10 վայրկյան աշխատանք, 10 վայրկյան դադար՝ 100% հզորությամբ և ամպլիտուդով)՝ օգտագործելով VialTweeter ամրակով UP200St (Hielscher Ultrasound Technology)։ Վերնստվածքային հեղուկները պարզեցվել են 10 րոպե 3000 × g-ով ցենտրիֆուգման միջոցով։


Welch et al. 2020 արձանագրության համաձայն ուլտրաձայնային VialTweeter-ով SARS-CoV-2 կորոնավիրուսի ինակտիվացման համար կիրառված ռեակտիվի մանրամասները

Ամբողջական արձանագրությունը՝ ներառյալ Hielscher VialTweeter-ի կիրառումը, հասանելի է այստեղ՝
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Ժամանակակից ուլտրաձայնային դիզմեմբրատորներ և բջջաքայքայիչներ

Բազմանմուշային VialTweeter ուլտրաձայնային սարքը բազմաթիվ ուլտրաձայնային լուծումներից ընդամենը մեկն է՝ նախատեսված կենսաբանական, կենսաքիմիական և կլինիկական լաբորատորիաներում նմուշների պատրաստման համար։ Hielscher Ultrasonics-ը առաջարկում է Ձեր կիրառության համար իդեալական ուլտրաձայնային դիզմեմբրատոր, օրինակ՝ բջիջների լիզիս, բջջային էքստրակցիա, հյուսվածքի հոմոգենիզացիա, լիզատների լուծարում, լուծելը, նմուշների գազազերծում և այլն։
Ասեք մեզ, թե ժամում և օրական քանի նմուշ եք մշակելու, նախապատվությունը տալիս եք ուղղակի թե անուղղակի ուլտրաձայնային մշակմանը և ինչն է ուլտրաձայնային նմուշային մշակման նպատակը։ Մենք Ձեզ առաջարկելու ենք Ձեր ամենօրյա աշխատանքային ռուտինին ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը։
Hielscher Ultrasonics-ի թվային ուլտրաձայնային պրոցեսորները հագեցած են խելացի ծրագրային ապահովմամբ, տվյալների ավտոմատ գրանցմամբ, ջերմաստիճանի կառավարման, ուլտրաձայնային մշակման տևողության և ցիկլ/պուլսային ռեժիմի հեշտ նախակարգավորման տարբերակներով, ինչպես նաև նմուշի լուսավորմամբ և բրաուզերային հեռակառավարմամբ։ Մենք ձգտում ենք մեր ուլտրաձայնային սարքերն ունենալ որքան հնարավոր է խելացի, որպեսզի Ձեր հետազոտությունն ու աշխատանքային ռուտինը դառնան որքան հնարավոր է հարմար և հաջող։
Սեղմեք այստեղ՝ VialTweeter-ով ուլտրաձայնային նմուշապատրաստման արձանագրություններով այլ կիրառություններ գտնելու համար