Բուֆերային լուծույթներ պատրաստված ուլտրաձայնային եղանակով
Լիզիսի բուֆերները կարող են արդյունավետ և արագ պատրաստվել՝ օգտագործելով ուլտրաձայնային հյուսվածքների հոմոգենիզատորներ: Քանի որ ուլտրաձայնային սարքերը երազանքի գործիք են խառնելու, լուծարելու և ցրելու համար, նրանք թույլ են տալիս հուսալի և օգտագործողի համար հարմար լիզի բուֆերների պատրաստում:
Լիզիսի բուֆերների ուլտրաձայնային պատրաստում
Հյուսվածքների ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները բջիջների խզման, լուծման և արդյունահանման ընդհանուր գործիք են, հետևաբար հասանելի են լաբորատորիաների մեծ մասում: Զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարքերի երկրորդական կիրառումը լիզի բուֆերների պատրաստումն է:
Լիզիսի բուֆերը լուծույթ է, որն օգտագործվում է բաց բջիջները կոտրելու և դրանց պարունակությունը ներքևի վերլուծության համար: Լիզի բուֆերի հատուկ բաղադրությունը կարող է տարբեր լինել՝ կախված լուծվող բջիջների տեսակից և ներքևում գտնվող կիրառությունից: Այնուամենայնիվ, տիպիկ լիզի բուֆերը պարունակում է այնպիսի բաղադրիչներ, ինչպիսիք են լվացող միջոցները, աղերը և պրոթեզերոնի ինհիբիտորները: Բուֆերային աղերը (օրինակ՝ Tris-HCl) և իոնային աղերը (օրինակ՝ NaCl) սովորաբար օգտագործվում են լիզատի pH-ն ու օսմոլարությունը կարգավորելու համար։
Լիզի բուֆեր պատրաստելու համար բաղադրիչները խառնվում են իրար համապատասխան կոնցենտրացիաներով և pH-ով: Խառնուրդը սովորաբար խառնում կամ թափահարում են, մինչև բաղադրիչները լուծվեն և լուծույթը միատարր դառնա:
Ուլտրաձայնային հոմոգենացումը մեթոդ է, որը կարող է օգտագործվել՝ օգնելու լավ լիզի բուֆեր ստեղծել՝ բարելավելով բաղադրիչների խառնումը և տարրալուծումը: Այս մեթոդով, ուլտրաձայնային ալիքներ – սովորաբար 20-ից 30 կՀց միջակայքում – կիրառվում են խառնուրդի վրա, որը ստեղծում է կավիտացիոն փուչիկներ, որոնք փլուզվում են և առաջացնում ինտենսիվ տեղական էներգիա, ինչը հանգեցնում է մեխանիկական կտրվածքի և բաղադրիչների խառնմանը:
Ուլտրաձայնային հոմոգենացման գործընթացը կարող է օգնել կոտրել բաղադրիչների ցանկացած կույտ կամ ագրեգատ և ապահովել, որ լուծումը միատեսակ խառնված է: Հետևաբար, նման բարելավված լիզի բուֆերը կարող է հանգեցնել ավելի արդյունավետ բջիջների խզման և արդյունահանվող նյութի ավելի բարձր եկամտաբերության: Բացի այդ, ուլտրաձայնային համասեռացումը կարող է նվազեցնել լիզի բուֆեր պատրաստելու համար պահանջվող ժամանակը, համեմատած ավանդական խառնման կամ թափահարման մեթոդների հետ:
Ընդհանուր առմամբ, ուլտրաձայնային համասեռացումը հզոր գործիք է լիզի բուֆերի պատրաստման որակն ու արդյունավետությունը բարելավելու համար:
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատոր UP200Ht տարածված է հետազոտական լաբորատորիաներում նմուշների պատրաստման, լիզիսի, արդյունահանման, ԴՆԹ-ի մասնատման և լուծարման համար:
Արձանագրություն ուլտրաձայնային լիզի բուֆերի պատրաստման համար
Սա ընդհանուր արձանագրություն է՝ լիզի բուֆեր պատրաստելու համար՝ օգտագործելով զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարք.
Նյութեր:
- Ընտրովի լվացող միջոց(ներ) (օրինակ՝ Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Ընտրովի աղ(ներ) (օրինակ՝ NaCl, KCl)
- Պրոտեազի ինհիբիտորներ (օրինակ՝ PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ուլտրաձայնային սարք
- Հարիչ
- Դիոնացված ջուր
- pH մետր կամ pH շերտեր
Քայլ առ քայլ հրահանգներ.
- Որոշեք լիզի բուֆերի բաղադրությունը՝ հիմնվելով այն բջիջների կամ հյուսվածքների վրա, որոնք դուք պետք է լիզեք, և ներքևում գտնվող հավելվածների վրա, որոնց համար դուք կօգտագործեք լիզատը: Պատրաստեք լվացող միջոցների, աղերի և պրոթեզերոնի ինհիբիտորների պահեստային լուծույթները ցանկալի կոնցենտրացիաներով:
- Ավելացրեք լվացող միջոցների, աղերի և պրոթեզերոնի ինհիբիտորների հիմնական լուծույթները բաժակի կամ կոլբայի մեջ:
- Ավելացրեք դեիոնացված ջուր՝ ծավալը բուֆերի ցանկալի քանակին հասցնելու համար:
- Բաղադրիչները հարիչի միջոցով խառնել, որպեսզի ստացվի նախախառնուրդային լուծույթ։
- Չափել բուֆերի pH-ը` օգտագործելով pH մետր կամ pH շերտեր, և անհրաժեշտության դեպքում կարգավորել pH-ը փոքր քանակությամբ թթու կամ հիմքով:
- Օգտագործեք զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարք՝ նախնական խառնուրդի լուծույթը համասեռացնելու համար, որպեսզի ստացվի բարձր համասեռ լուծույթ: Հետևաբար, լուծույթը մի քանի վայրկյան թրմեք, մինչև լուծույթը մանրակրկիտ խառնվի, և ցանկացած կույտ կամ ագրեգատ քայքայվի: Sonication-ի տեւողությունը և ուժը կարող են օպտիմիզացվել՝ հիմնվելով օգտագործվող հատուկ լիզի բուֆերի և ուլտրաձայնային սարքի վրա:
- Ուլտրաձայնացումից հետո կրկին չափեք բուֆերի pH-ը և անհրաժեշտության դեպքում կարգավորեք:
- Զտեք բուֆերը 0,2 մկմ ֆիլտրի միջով, որպեսզի հեռացնեք ցանկացած բեկորներ կամ ագրեգատներ, որոնք կարող են գոյանալ ձայնային ախտահանման ընթացքում:
- Լիզի բուֆերն այժմ պատրաստ է օգտագործման:
Ծանոթագրություն. Լիզի բուֆերի ճշգրիտ բաղադրությունը և pH-ը կարող են տարբեր լինել՝ կախված լուծվող բջիջներից կամ հյուսվածքից և ներքևում գտնվող կիրառություններից: Վերոնշյալ արձանագրությունը ընդհանուր ուղեցույց է և կարող է օպտիմիզացվել հատուկ ծրագրերի համար:
Ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները սովորաբար օգտագործվում են բջիջների խախտման և ներբջջային մոլեկուլների արդյունահանման համար: Հետևաբար, լիզի շատ կիրառություններ օգտագործում են զոնդային տիպի ձայնագրում ոչ միայն լիզի բուֆերի պատրաստման, այլ նաև բջիջների մեխանիկական խանգարման և արդյունահանման համար:
Սա ուլտրաձայնային հյուսվածքների համասեռացուցիչները դարձնում է բազմակողմանի գործիք լաբորատորիաների համար և բացատրում է ուլտրաձայնային սարքերի լայն օգտագործումը մանրէաբանության, կենսատեխնոլոգիայի և կենսաբանության մեջ:
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատորներ
Hielscher Ultrasonics-ը արտադրում և մատակարարում է ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ և զոնդեր (սոնոտրոդներ) տարբեր հզորությունների և նմուշների ծավալներով: Սա թույլ է տալիս մեզ առաջարկել ձեզ ամենահարմար ուլտրաձայնային խանգարիչը ձեր նմուշի պատրաստման համար: Մենք կենտրոնանում ենք ամենաբարձր որակի, օգտագործողի համար ակնառու հարմարավետության և հուսալի ձայնային արդյունքների վրա: Բոլոր թվային ուլտրաձայնային սարքերն ունեն խելացի ծրագրակազմ, ծրագրավորում և ձայնային ազդանշանների նախնական կարգավորում, բրաուզերի հեռակառավարման վահանակ, ջերմաստիճանի վերահսկում, նմուշի լուսավորություն, ինչպես նաև տվյալների ավտոմատ ձայնագրում ներկառուցված SD քարտի վրա:
Դիզայն, արտադրություն և խորհրդատվություն – Որակյալ Արտադրված է Գերմանիայում
Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հայտնի են իրենց բարձր որակի և դիզայնի չափանիշներով: Հզորությունը և հեշտ շահագործումը թույլ են տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերի սահուն ինտեգրումը արդյունաբերական օբյեկտներում: Կոպիտ պայմանները և պահանջկոտ միջավայրերը հեշտությամբ կառավարվում են Hielscher ուլտրաձայնային սարքերի կողմից:
Hielscher Ultrasonics-ը ISO սերտիֆիկացված ընկերություն է և հատուկ շեշտադրում է կատարում բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերի վրա, որոնք բնութագրվում են ժամանակակից տեխնոլոգիաներով և օգտագործողների համար հարմարավետությամբ: Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը համապատասխանում են ԵԽ-ին և համապատասխանում են UL, CSA և RoH-ների պահանջներին:
Ստորև բերված աղյուսակը ձեզ տալիս է մեր տարբեր լաբորատոր ուլտրաձայնային սարքերի ակնարկ.
| VialTweeter-ը UP200 St | 200 Վտ | 26 կՀց | փոքր սրվակների ուլտրաձայնային ախտորոշում, օրինակ՝ Eppendorf 1,5 մլ |
| UP50H | 50 Վտ | 30 կՀց | ձեռքի կամ կանգնած լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP100H | 100 Վտ | 30 կՀց | ձեռքի կամ կանգնած լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP200Ht | 200 Վտ | 26 կՀց | ձեռքի կամ կանգնած լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP200 St | 200 Վտ | 26 կՀց | տեղադրված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP400 Փ | 400 Վտ | 24 կՀց | տեղադրված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| SonoStep | 200 Վտ | 26 կՀց | լաբորատոր ռեակտորի համակցում, ուլտրաձայնայինացում, պոմպ, խառնիչ և անոթ |
| GDmini2 | 200 Վտ | 26 կՀց | աղտոտվածությունից ազատ հոսքի բջիջ |
| բաժակի եղջյուր | 200 Վտ | 26 կՀց | ինտենսիվ ուլտրաձայնային լոգանք սրվակների և բաժակների համար |
| UIP400MTP | 400 Վտ | 24 կՀց | ուլտրաձայնային համակարգ բազմաբնակարան հորատանցքերի? միկրոտիտրային թիթեղների համար |
Ուլտրաձայնային CupHorn Փակ խողովակների և սրվակների ինտենսիվ արտահոսքի համար նմուշների ստերիլ համասեռացման համար:
Կապ մեզ հետ:? Հարցրեք մեզ:
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատոր UP400St սովորաբար օգտագործվում է լիզի բուֆերի պատրաստման և բջիջների հետագա խզման համար:
Գրականություն? Հղումներ
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics-ը արտադրում է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափս.