Ուլտրաձայնային մշակմամբ պատրաստված բուֆերային լուծույթներ
Լիզիսի բուֆերները կարելի է արդյունավետ և արագ պատրաստել՝ օգտագործելով հյուսվածքների ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ։ Քանի որ ուլտրաձայնային սարքերը խառնման, լուծման և դիսպերսման համար երազանքի գործիք են, դրանք հնարավորություն են տալիս լիզիսի բուֆերները պատրաստել հուսալի և օգտագործողի համար հարմար եղանակով։
Լիզիսի բուֆերների ուլտրաձայնային պատրաստում
Հյուսվածքների ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները բջիջների քայքայման, լիզիսի և էքստրակցիայի համար տարածված գործիք են, ուստի առկա են լաբորատորիաների մեծ մասում։ Զոնդային ուլտրաձայնային սարքերի լրացուցիչ կիրառություններից մեկը լիզիսի բուֆերների պատրաստումն է։
Լիզիսի բուֆերը լուծույթ է, որն օգտագործվում է բջիջները քայքայելու (լիզիսի ենթարկելու) և դրանց պարունակությունը հետագա վերլուծության համար ազատելու նպատակով։ Լիզիսի բուֆերի կոնկրետ բաղադրությունը կարող է տարբերվել՝ կախված լիզիսի ենթարկվող բջիջների տեսակից և հետագա կիրառությունից։ Սակայն սովորական լիզիսի բուֆերը պարունակում է այնպիսի բաղադրիչներ, ինչպիսիք են դետերգենտները, աղերը և պրոտեազների ինհիբիտորները։ Բուֆերացնող աղերը (օրինակ՝ Tris-HCl) և իոնային աղերը (օրինակ՝ NaCl) սովորաբար օգտագործվում են լիզատի pH ցուցանիշը և օսմոլյարությունը կարգավորելու համար։
Լիզիսի բուֆեր պատրաստելու համար բաղադրիչները խառնում են համապատասխան կոնցենտրացիաներով և pH ցուցանիշի համապատասխան արժեքի պայմաններում։ Խառնուրդը սովորաբար խառնում կամ թափահարում են, մինչև բաղադրիչները լուծվեն, և լուծույթը դառնա համասեռ։
Ուլտրաձայնային հոմոգենացումը մեթոդ է, որը կարող է օգնել որակյալ լիզիսի բուֆեր պատրաստել՝ բարելավելով բաղադրիչների խառնումն ու լուծումը։ Այս մեթոդով խառնուրդի վրա ազդում են ուլտրաձայնային ալիքներով՝ սովորաբար 20-ից 30 kHz միջակայքում, ինչի հետևանքով առաջանում են կավիտացիոն պղպջակներ, որոնք փլուզվում են և առաջացնում ինտենսիվ տեղային էներգիա՝ հանգեցնելով մեխանիկական սահքի և բաղադրիչների խառնման։
Ուլտրաձայնային հոմոգենացման գործընթացը կարող է օգնել քայքայել բաղադրիչների ցանկացած կոշտուկ կամ ագրեգատ և ապահովել լուծույթի համաչափ խառնումը։ Հետևաբար, այս կերպ բարելավված լիզիսի բուֆերը կարող է հանգեցնել բջիջների ավելի արդյունավետ քայքայման և էքստրակցված նյութի ավելի բարձր ելքի։ Բացի այդ, ուլտրաձայնային հոմոգենացումը կարող է կրճատել լիզիսի բուֆերի պատրաստման համար պահանջվող ժամանակը՝ համեմատած սովորական խառնման կամ թափահարման մեթոդների հետ։
Ընդհանուր առմամբ, ուլտրաձայնային հոմոգենացումը լիզիսի բուֆերի պատրաստման որակն ու արդյունավետությունը բարելավելու հզոր գործիք է։
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատոր UP200Ht սարքը տարածված է հետազոտական լաբորատորիաներում՝ նմուշների պատրաստման, լիզիսի, էքստրակցիայի, ԴՆԹ-ի ֆրագմենտացման և լուծման համար։
Լիզիսի բուֆերի ուլտրաձայնային պատրաստման ընթացակարգ
Սա զոնդային ուլտրաձայնային սարքի միջոցով լիզիսի բուֆեր պատրաստելու ընդհանուր ընթացակարգ է․
Նյութեր․
- Ընտրված դետերգենտ(ներ) (օրինակ՝ Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Ընտրված աղ(եր) (օրինակ՝ NaCl, KCl)
- Պրոտեազների ինհիբիտորներ (օրինակ՝ PMSF, ապրոտինին, լեյուպեպտին)
- Ուլտրաձայնային սարք
- Խառնիչ
- Դեիոնացված ջուր
- pH չափիչ կամ pH ցուցիչ շերտեր
Քայլ առ քայլ հրահանգներ․
- Որոշեք լիզիսի բուֆերի բաղադրությունը՝ ելնելով այն բջիջներից կամ հյուսվածքից, որոնք ենթարկելու եք լիզիսի, և հետագա կիրառություններից, որոնց համար օգտագործելու եք լիզատը։ Պատրաստեք դետերգենտների, աղերի և պրոտեազների ինհիբիտորների ելակետային լուծույթները՝ ցանկալի կոնցենտրացիաներով։
- Դետերգենտների, աղերի և պրոտեազների ինհիբիտորների ելակետային լուծույթներն ավելացրեք լաբորատոր բաժակի կամ կոլբայի մեջ։
- Ավելացրեք դեիոնացված ջուր՝ բուֆերի ծավալը ցանկալի քանակին հասցնելու համար։
- Բաղադրիչները խառնեք խառնիչով՝ նախնական խառնուրդի լուծույթ ստանալու համար։
- Չափեք բուֆերի pH ցուցանիշը՝ օգտագործելով pH չափիչ կամ pH ցուցիչ շերտեր, և անհրաժեշտության դեպքում կարգավորեք այն՝ փոքր քանակությամբ թթու կամ հիմք ավելացնելով։
- Նախնական խառնուրդի լուծույթը հոմոգենացրեք զոնդային ուլտրաձայնային սարքով՝ բարձր համասեռությամբ լուծույթ ստանալու համար։ Այդ նպատակով լուծույթը մի քանի վայրկյան ենթարկեք ուլտրաձայնային մշակման, մինչև այն մանրակրկիտ խառնվի, և ցանկացած կոշտուկ կամ ագրեգատ քայքայվի։ Ուլտրաձայնային մշակման տևողությունն ու հզորությունը կարելի է օպտիմալացնել՝ ելնելով օգտագործվող կոնկրետ լիզիսի բուֆերից և ուլտրաձայնային սարքից։
- Ուլտրաձայնային մշակումից հետո կրկին չափեք բուֆերի pH ցուցանիշը և անհրաժեշտության դեպքում կարգավորեք այն։
- Բուֆերն անցկացրեք 0,2 միկրոն ֆիլտրով՝ հեռացնելու ցանկացած բեկոր կամ ագրեգատ, որը կարող էր առաջանալ ուլտրաձայնային մշակման ընթացքում։
- Լիզիսի բուֆերն այժմ պատրաստ է օգտագործման։
Նշում․ լիզիսի բուֆերի ճշգրիտ բաղադրությունը և pH ցուցանիշը կարող են տարբերվել՝ կախված լիզիսի ենթարկվող բջիջներից կամ հյուսվածքից և հետագա կիրառություններից։ Վերոնշյալ ընթացակարգը ընդհանուր ուղեցույց է և կարող է օպտիմալացման կարիք ունենալ կոնկրետ կիրառությունների համար։
Ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները սովորաբար օգտագործվում են բջիջների քայքայման և ներբջջային մոլեկուլների էքստրակցիայի համար։ Ուստի լիզիսի բազմաթիվ կիրառություններում զոնդային ուլտրաձայնային մշակումն օգտագործվում է ոչ միայն լիզիսի բուֆերի պատրաստման, այլև բջիջների մեխանիկական քայքայման և էքստրակցիայի համար։
Սա հյուսվածքների ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները դարձնում է լաբորատորիաների համար բազմակողմանի գործիք և բացատրում ուլտրաձայնային սարքերի լայն կիրառությունը մանրէաբանության, կենսատեխնոլոգիայի և կյանքի մասին գիտությունների ոլորտներում։
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատորներ
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն արտադրում և մատակարարում է տարբեր անվանական հզորություններով և նմուշների տարբեր ծավալների համար նախատեսված ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ և զոնդեր (սոնոտրոդներ)։ Սա մեզ թույլ է տալիս ձեր նմուշների պատրաստման համար առաջարկել ամենահարմար ուլտրաձայնային քայքայիչը։ Մենք կենտրոնանում ենք ամենաբարձր որակի, օգտագործման բացառիկ հարմարավետության և ուլտրաձայնային մշակման հուսալի արդյունքների վրա։ Բոլոր թվային ուլտրաձայնային սարքերն ունեն խելացի ծրագրային ապահովում, ուլտրաձայնային մշակման ընթացակարգերի ծրագրավորման և նախադրման հնարավորություն, դիտարկիչով հեռակառավարում, ջերմաստիճանի վերահսկում, նմուշի լուսավորում, ինչպես նաև ներկառուցված SD քարտի վրա տվյալների ավտոմատ գրանցում։
Նախագծում, արտադրություն և խորհրդատվություն – Գերմանիայում ստեղծված որակ
Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հայտնի են իրենց որակի և նախագծման ամենաբարձր չափանիշներով։ Ամրությունն ու շահագործման դյուրինությունն ապահովում են մեր ուլտրաձայնային սարքերի սահուն ինտեգրումը արդյունաբերական օբյեկտներում։ Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը հեշտությամբ աշխատում են ծանր պայմաններում և խիստ պահանջներ ներկայացնող միջավայրերում։
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն ունի ISO հավաստագրում և հատուկ ուշադրություն է դարձնում բարձր արտադրողականությամբ ուլտրաձայնային սարքերին, որոնք առանձնանում են նորագույն տեխնոլոգիայով և օգտագործման հարմարավետությամբ։ Իհարկե, Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը համապատասխանում են CE պահանջներին և բավարարում UL, CSA և RoHs պահանջները։
Ստորև բերված աղյուսակը ներկայացնում է մեր տարբեր լաբորատոր ուլտրաձայնային սարքերի ընդհանուր պատկերը․
| VialTweeter՝ UP200St սարքի վրա | 200W | 26kHz | փոքր սրվակների ուլտրաձայնային մշակում, օրինակ՝ Eppendorf 1,5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | ձեռքում պահվող կամ հենակին ամրացված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP100H | 100W | 30kHz | ձեռքում պահվող կամ հենակին ամրացված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP200Ht | 200W | 26kHz | ձեռքում պահվող կամ հենակին ամրացված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP200St | 200W | 26kHz | հենակին ամրացված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| UP400St | 400W | 24kHz | հենակին ամրացված լաբորատոր հոմոգենիզատոր |
| SonoStep | 200W | 26kHz | ուլտրաձայնային մշակում, պոմպ, խառնիչ և անոթ համատեղող լաբորատոր ռեակտոր |
| GDmini2 | 200W | 26kHz | աղտոտումից զերծ հոսքային խուց |
| CupHorn | 200W | 26kHz | ինտենսիվ ուլտրաձայնային բաղնիք՝ սրվակների և լաբորատոր բաժակների համար |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | ուլտրաձայնային համակարգ՝ բազմահոր թիթեղների / միկրոտիտրային թիթեղների համար |
Ուլտրաձայնային cuphorn սարք՝ փակ փորձանոթների և սրվակների ինտենսիվ ուլտրաձայնային մշակման համար՝ նմուշների ստերիլ հոմոգենացման նպատակով։
Կապվե՛ք մեզ հետ։ / Հարցրե՛ք մեզ։
Ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատոր UP400St սարքը սովորաբար օգտագործվում է լիզիսի բուֆերի պատրաստման և դրան հաջորդող բջիջների քայքայման համար։
Գրականություն / Հղումներ
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound — I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն արտադրում է բարձր արտադրողականությամբ ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ՝ լաբորատոր չափերից մինչև արդյունաբերական չափեր։