Սպիտակուցի ուլտրաձայնային արդյունահանում հյուսվածքների և բջիջների մշակույթներից
- Սպիտակուցի արդյունահանումը պրոտեոմիկայի նմուշի պատրաստման էական փուլ է:
- Սպիտակուցները կարող են արդյունահանվել բուսական և կենդանական հյուսվածքներից, խմորիչներից և միկրոօրգանիզմներից:
- Sonication-ը սպիտակուցի արդյունահանման հուսալի, արդյունավետ մեթոդ է, որը տալիս է սպիտակուցի բարձր բերքատվություն կարճ ժամանակում:
Սպիտակուցի արդյունահանում հյուսվածքներից և բջիջներից
Հյուսվածքներից և աճեցված բջիջներից սպիտակուցի արդյունահանումը նմուշի պատրաստման կարևոր քայլ է, որն իրականացվում է բազմաթիվ կենսաքիմիական և անալիտիկ մեթոդների ժամանակ, ինչպիսիք են ELISA, PAGE, Western blotting, զանգվածային սպեկտրոմետրիա կամ սպիտակուցի մաքրում: Ուլտրաձայնային բջիջների խափանումը, լիզացումը և արդյունահանումը ճշգրիտ վերահսկելի, ոչ ջերմային տեխնիկա է սպիտակուցների բարձր բերքատվություն ապահովելու համար:
Բջիջներից սպիտակուցի արդյունահանումը հետ ուլտրաձայնային զոնդ UP200St
- Արագ
- բարձր բերքատվություն
- Բարձր արդյունավետություն
- Ճշգրիտ վերահսկողություն պարամետրերի վրա
- վերարտադրելի արդյունքներ
- գծային մասշտաբայնություն
Ընդհանուր ցուցումներ ուլտրաձայնային լիզի և սպիտակուցի արդյունահանման համար
- Ջերմաստիճանի վերահսկում. Առանց ջերմային դենատուրացիայի բարձր սպիտակուցային ելք ապահովելու համար արդյունահանման ընթացքում ջերմաստիճանը պետք է վերահսկվի: Hielscher-ի ժամանակակից ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ – կոչվում է նաև ուլտրաձայնային դիզինտեգրատոր կամ ուլտրաձայնային սարք – ճշգրիտ կառավարելի են: Նրանք գալիս են միացնող ջերմաստիճանի սենսորով: Ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորի կարգավորումների տարբերակներում կարող է սահմանվել առավելագույն ջերմաստիճան: Երբ այս առավելագույն ջերմաստիճանը հասնում է, ուլտրաձայնային սարքը ավտոմատ կերպով կանգ է առնում, մինչև նմուշը սառչի:
- Բուֆեր: Հարմար բուֆերի և բուֆերի ճիշտ ծավալի ընտրությունը տարբեր հյուսվածքներից տարբերվում է և պետք է պարզվի փորձարկման և սխալի փորձարկումներով:
- Մեկուսացում / մաքրում. Սպիտակուցի լիզատները կարող են պարունակել կենսամոլեկուլների ավելցուկ, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն կամ ածխաջրերը, որոնք կարող են հեռացվել սպիտակուցների նստեցման (դեզօքսիխոլատ-տրիքլորքացախաթթու) կամ բուֆերային փոխանակման միջոցով:
Chittapalo-ն և Noomhorm-ը (2009) իրենց ուսումնասիրության մեջ զեկուցել են, որ սպիտակուցի ելքը մեծանում է ձայնային ախտահանման միջոցով, և որ ուլտրաձայնային հյուսվածքների համասեռացման և լիզի գործընթացը կարող է զգալիորեն բարելավել առկա արդյունահանման գործընթացները: – ընձեռելով առևտրային արդյունահանման նոր հնարավորություններ:
Ուլտրաձայնային CupHorn սպիտակուցի մեկուսացման և ԴՆԹ-ի մասնատման համար մի քանի նմուշների միաժամանակյա, բարձր արդյունավետությամբ նմուշի պատրաստման համար:
Սպիտակուցի արդյունահանում կենդանիների հյուսվածքից
Ամբողջ չափի հյուսվածքի պատրաստման համար (օրինակ՝ երիկամներ, սիրտ, թոքեր, մկաններ և այլն), հյուսվածքը պետք է բաժանվի շատ փոքր կտորների մաքուր գործիքներով, ցանկալի է սառույցի վրա և հնարավորինս արագ՝ պրոթեզերոնի դեգրադացիան կանխելու համար (օրինակ՝ լիզի բուֆեր, ինչպիսին է RIPA-ն կամ հիպոտոնիկ լիզի բուֆերը, որը պարունակում է պրոտեազ և ֆոսֆատազի ինհիբիտոր կոկտեյլ): Հերձումից հետո նմուշը ընկղմվում է հեղուկ ազոտի մեջ՝ արագ սառեցնելու համար: Նմուշը կարող է պահվել -80°C-ում՝ հետագայում օգտագործելու համար կամ պահել սառույցի վրա՝ անհապաղ համասեռացման համար: Ուլտրաձայնային արդյունահանումից անմիջապես առաջ սառույցով լիզի բուֆերը (պրոտեազի ինհիբիտորներով DTT, լեյպեպտին և ապրոտինին) արագորեն ավելացվում է նմուշի խողովակի մեջ (խորհուրդ է տրվում ~10 մգ հյուսվածքի մոտ ~600 մկլ բուֆերի համար): Մոտ. Յուրաքանչյուր նմուշի խողովակի համար առաջարկվում է 20-60 մգ հյուսվածք:
Ուլտրաձայնային համասեռացումը, լիզացումը և արդյունահանումը կատարվում է ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորի միջոցով, ինչպիսին է UP100H կամ UP200Ht, որը հագեցած է միկրո-ծածկույթով sonotrode-ով: Sonication տեւողությունը 60-90 վրկ. 15 վայրկյան ուլտրաձայնային ցիկլի ռեժիմում: sonication եւ 10 վրկ. հանգստի ժամանակ. Նմուշը պետք է մշտապես սառույցի մեջ պահել:
Ուլտրաձայնային հոմոգենացումից / արդյունահանումից հետո լիզատը ցենտրիֆուգվում է 27000 գ-ում մոտ. 20 րոպե Այնուհետև վերին նյութը հավաքվում է, որպեսզի սպիտակուցի կոնցենտրացիան կարող է որոշվել սպիտակուցային վերլուծության միջոցով, ինչպիսին է Pierce սպիտակուցի վերլուծությունը BCA:
Արյան շիճուկից սպիտակուցի արդյունահանում
Շիճուկի և ֆոսֆատային բուֆերի համասեռ խառնուրդի համար նմուշը նախ պտտվում է ուլտրաձայնային բջիջների լիզումից առաջ: Ուլտրաձայնային լուծույթի համար նմուշը ձայնագրվում է ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատորով, ինչպիսին է UP100H-ը 8 ցիկլով 20% ամպլիտուդով, յուրաքանչյուր 5 վայրկյան միացված և 15 վայրկյան անջատված ցիկլերի համար: Սպիտակուցի արդյունահանումն իրականացվում է ցիկլային եղանակով (պուլսացիայի ռեժիմ) ձայնագրման միջոցով և նմուշը սառույցի վրա դնելով, որպեսզի խուսափեն նմուշի գերտաքացումից և ջերմային դեգրադացիայից: Քանի որ շիճուկը պարունակում է մեծ քանակությամբ բարձր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցներ (օրինակ՝ ալբումին, α1-անտրիպսին, տրանսֆերրին, հապտոգլոբուլին, իմունոգլոբուլին G և իմունոգլոբուլին A), որոնք խանգարում են ցածր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցների տարանջատմանը IEF-ի ժամանակ, խորհուրդ է տրվում սպառել դրանք։ շիճուկից, օգտագործելով սպառման սյունակ:
Սպիտակուցի արդյունահանում բույսերի հյուսվածքից
Թարմ, փափուկ բույսերի հյուսվածքները, օրինակ՝ մամուռը և այլն, կարող են հեշտությամբ խաթարվել՝ պարզապես թակած նմուշի նյութը դնելով լիզի բուֆերի մեջ՝ sonication-ի համար: Բուսական կոշտ, պինդ հյուսվածքները, ինչպիսիք են սերմերը, եղևնու ասեղները և այլն, պետք է չորացնել: Որոշ կոշտ, փայտային բուսանյութեր պետք է սառեցվեն և մանրացվեն հեղուկ ազոտի մեջ, նախքան արդյունահանումը արտազատման միջոցով: Բուսական բջիջների կուլտուրայի կասեցումների համար ուլտրաձայնային բուժումը 30-ից 150 վայրկյան տևողությամբ լիզի բուֆերում հիմնականում բավարար է: Ավելի կոշտ նյութերը, ինչպիսիք են դդմի սերմերը, պահանջում են ավելի ինտենսիվ ձայնային ախտահանում, ինչպես նկարագրված է ստորև:
Արձանագրություն դդմի սերմերից ալբումինի ուլտրաձայնային արդյունահանման համար
Մանր աղացած դդմի սերմի փոշիից ալբումինի սպիտակուցի ուլտրաձայնային արդյունահանման համար 250 մլ ապակե բաժակում ավելացվում է 10 գ յուղազերծված սերմի փոշի և 100 մլ դեիոնացված ջուր՝ որպես լուծիչ: Սպիտակուցի արդյունահանումը բաղկացած է երկու քայլից. Նախ, նմուշը կատարվում է ձայնով զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարք UP400St (400W, 24kHz) հագեցած sonotrode S24d7-ով: Ուլտրաձայնային հոմոգենացման ժամանակ ապակե բաժակը տեղադրվում է սառը ջրային բաղնիքում: Ուլտրաձայնային սարքի UP400St-ի խցանվող ջերմաստիճանի սենսորը և ջերմաստիճանի վերահսկման կարգավորումները ապահովում են, որ նմուշի ջերմաստիճանը միշտ պահպանվի 30°C-ից ցածր: Ձայնագրման ժամանակ ջերմաստիճանի ճշգրիտ վերահսկման միջոցով խուսափում են ալբումինի դենատուրացիայից: Երկրորդ, արդյունահանումը կատարվել է խառնիչով 200 պտ/րոպե արագությամբ և 30°C ջերմաստիճանում։ Այնուհետև գավաթը տեղափոխվում է թերմոստատիկ թափահարողի մեջ: Գլոբուլինը հեռացվում է թորած ջրով դիալիզի միջոցով: Գլոբուլինի հեռացումից հետո սպիտակուցի էքստրակտը կարող է նմուշառվել ալբումինի պրոֆիլը որոշելու համար և այնուհետև ճշգրտվում է pI=3.0-ի՝ օգտագործելով 0.1 Մ HCl ալբումինի կոագուլյացիայի համար: Պինդ փուլն անջատվում է ցենտրիֆուգմամբ 5000 գ, 20°C ջերմաստիճանում և նորից լուծվում դեոնացված ջրի մեջ: Ալբումինի կոագուլյացիա կատարվում է երկու անգամ՝ ալբումինի խտանյութում սպիտակուցի հարաբերակցությունը բարձրացնելու համար։
Ուլտրաձայնային ալկալային սպիտակուցի արդյունահանումը բրնձի թեփից սպիտակուցի խտանյութ պատրաստելու համար ցույց է տալիս, որ ուլտրաձայնային բուժումը հանգեցնում է սպիտակուցի ավելի բարձր եկամտաբերության՝ արդյունահանման զգալիորեն ավելի կարճ ժամանակում: – արդյունահանման ավանդական մեթոդների համեմատ:
Նմուշի պատրաստման արձանագրություն ֆունկցիոնալ iNOS ֆերմենտի համար
Լիովին ֆունկցիոնալ iNOS ֆերմենտ ստանալու համար (օրինակ՝ դեղերի զննման համար) առաջարկվում է հետևյալ արձանագրությունը. Բջջային կախոցը պետք է տեղադրվի սառույցի վրա և 5 վրկ ցիկլային ռեժիմում 10 մկմ ամպլիտուդով UP100H-ով ախտահանվի: sonication եւ 25 վրկ. հանգստանալ սառույցի վրա. Ընթացակարգը պետք է կրկնել մոտավորապես. 3 անգամ։ Ձայնային ցիկլերի միջև հանգստի ժամանակը նվազեցնում է ջերմաստիճանի բարձրացումը և, հետևաբար, կնվազեցնի դենատուրացիայի ռիսկը:
ուլտրաձայնային սպիտակուցի լուծարում
Sonication-ը կարող է արագացնել սպիտակուցի լուծարման գործընթացը, որը սովորաբար պահանջում է մի քանի ժամ: Նմուշը չգերտաքացնելու և միզանյութ պարունակող լուծույթներում սպիտակուցի դեգրադացիան և փոփոխությունները կանխելու համար ուլտրաձայնային պոռթկումները չպետք է տևեն մի քանի վայրկյանից ավելի:
Ուլտրաձայնային սարք UP200Ht 2 մմ S26d2 միկրոծածկով փոքր նմուշների ձայնագրման համար:
Սպիտակուցի արդյունահանման ուլտրաձայնային սարքավորում
Hielscher Ultrasonics-ն առաջարկում է ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորների լայն տեսականի բջիջների, հյուսվածքների, բակտերիաների, միկրոօրգանիզմների, խմորիչի և սպորների քայքայման համար:
Hielscher lab ultrasonicators հզոր են և հեշտ է գործել: Կառուցված 24/7 աշխատանքի համար, դրանք նախագծված են որպես ամուր և արդյունավետ լաբորատոր և նստարանային սարքեր: Բոլոր սարքերի համար էներգիայի թողունակությունը և ամպլիտուդը կարող են ճշգրիտ վերահսկվել: Աքսեսուարների լայն տեսականի բացում է տեղադրման հետագա տարբերակները: Թվային ուլտրաձայնային սարքերը, ինչպիսիք են VialTweeter-ը, UP200Ht-ը, UP200St-ը և UP400St-ն ունեն ինտեգրված ջերմաստիճանի հսկողություն և ներկառուցված SD քարտ տվյալների ավտոմատ ձայնագրման համար:
Բազմաթիվ նմուշների անուղղակի, խաչաձև աղտոտվածությունից զերծ և միաժամանակյա ձայնագրման համար մենք առաջարկում ենք VialTweeter կամ ուլտրաձայնային CupHorn:
Ստորև բերված աղյուսակը ձեզ տալիս է ակնարկ մեր ուլտրաձայնային սարքերի վերաբերյալ նմուշների պատրաստման, բջիջների խզման և արդյունահանման համար: Կտտացրեք սարքի տեսակի վրա՝ յուրաքանչյուր ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորի մասին լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մեր լավ պատրաստված և երկարամյա փորձ ունեցող տեխնիկական անձնակազմը ուրախ կլինի օգնել ձեզ ընտրել ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը ձեր նմուշի պատրաստման համար:
| Խմբաքանակի ծավալը | Հոսքի արագություն | Առաջարկվող սարքեր |
|---|---|---|
| մինչև 10 սրվակ կամ խողովակ | ԱԺ | VialTweeter |
| բազմաբնակարան / միկրոտիտրային թիթեղներ | ԱԺ | UIP400MTP |
| մի քանի խողովակներ / անոթներ | ԱԺ | բաժակի եղջյուր |
| 1-ից 500 մլ | 10-ից 200 մլ / րոպե | UP100H |
| 10-ից 1000 մլ | 20-ից 200 մլ / րոպե | UP200Ht, UP200 St |
| 10-ից 2000 մլ | 20-ից 400 մլ / րոպե | UP400 Փ |
Կախված ձեր կիրառությունից, նյութից և նմուշի ծավալից՝ մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ամենահարմար կարգավորումը ձեր նմուշի պատրաստման համար: Կապվեք մեզ հետ այսօր:
Կապ մեզ հետ: / Հարցրեք մեզ:
Hielscher թվային ուլտրաձայնային սարքերն ունեն բրաուզերի հեռակառավարման վահանակ և տվյալների ավտոմատ արձանագրում ինտեգրված SD քարտի վրա:
VialTweeter անուղղակի sonication- ի համար:
Փաստեր, որոնք արժե իմանալ
պրոտեոմիկա
Proteomics-ը հետազոտական ոլորտ է, որն ուսումնասիրում է սպիտակուցները և պրոտեոմը: Սպիտակուցները կատարում են օրգանիզմների կենսագործունեության մեծ զանգված: Պրոտեոմը գենոմի, բջիջի, հյուսվածքի կամ օրգանիզմի կողմից որոշակի ժամանակ արտահայտված սպիտակուցների ամբողջությունն է։ Պրոտեոմը տատանվում է ժամանակի և որոշակի պահանջների կամ շեշտադրումների հետ, որոնք ենթարկվում են բջիջը կամ օրգանիզմը: Ավելի կոնկրետ, դա արտահայտված սպիտակուցների ամբողջությունն է տվյալ տեսակի բջիջում կամ օրգանիզմում՝ տվյալ պահին, սահմանված պայմաններում։ Տերմինը սպիտակուցների և գենոմի խառնուրդ է: Պրոտեոմիկան պրոտեոմի ուսումնասիրությունն է։
սպիտակուցը
Սպիտակուցները խոշոր բիոմոլեկուլներ են, այսպես կոչված, մակրոմոլեկուլներ – որոնք կազմված են ամինաթթուների մնացորդների մեկ կամ մի քանի երկար շղթաներից։ Սպիտակուցները առկա են ինչպես բուսական, այնպես էլ կենդանական ծագման բոլոր օրգանիզմներում, և դրանք կարևոր նշանակություն ունեն կենսաբանական գործառույթների մեծ մասի համար: Քանի որ սպիտակուցները պարունակում են շատ կենսաբանական տեղեկատվություն, դրանք արդյունահանվում են վերլուծական նպատակով, օրինակ՝ պրոտեոմիկ հետազոտությունների համար: Սպիտակուցների կողմից կատարվող ամենակարևոր գործառույթները ներառում են նյութափոխանակության ռեակցիաների կատալիզը, ԴՆԹ-ի վերարտադրությունը, գրգռիչներին արձագանքելը և մոլեկուլների տեղափոխումը մի տեղից մյուսը: Սպիտակուցները միմյանցից տարբերվում են հիմնականում ամինաթթուների իրենց հաջորդականությամբ, որը թելադրված է նրանց գեների նուկլեոտիդային հաջորդականությամբ, և որը սովորաբար հանգեցնում է սպիտակուցի ծալման՝ դառնալով հատուկ եռաչափ կառուցվածք, որը որոշում է դրա գործունեությունը: Սպիտակուցներն են – բացի պեպտիդներից – սննդի հիմնական բաղադրիչներից մեկը. Հետևաբար, պրոտեոմիքսը հզոր գործիք է սննդի գիտության մեջ՝ օպտիմալացնելու գործընթացները, սննդի անվտանգությունը և սննդային գնահատումը:
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction անալիտների առանձնացման և նախնական խտացման նախավերլուծական ընթացակարգ է: Ուլտրաձայնային ախտորոշման հետ համատեղ՝ ամպի կետի արդյունահանումը կարող է ուժեղացվել՝ դարձնելով գործընթացը ավելի արդյունավետ, արագ և շրջակա միջավայրի համար բարենպաստ: Ուլտրաձայնային եղանակով ամպային կետի արդյունահանումը անալիտի պատրաստման զգալիորեն ավելի արդյունավետ մեթոդ է: Կարդացեք ավելին ամպային կետի ուլտրաձայնային օգնությամբ արդյունահանման մասին:Գել էլեկտրոֆորեզ
Գելային էլեկտրոֆորեզը մակրոմոլեկուլների առանձնացման և վերլուծության հիմնական մեթոդն է, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ն, ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները, ինչպես նաև դրանց բեկորները՝ ելնելով դրանց չափից և լիցքից: Այն օգտագործվում է կլինիկական քիմիայում՝ սպիտակուցներն ըստ լիցքի և/կամ չափի (IEF ագարոզա, ըստ էության չափից անկախ) և կենսաքիմիայի, մոլեկուլային կենսաբանության և պրոտեոմիկայի մեջ՝ ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի բեկորների խառը պոպուլյացիան ըստ երկարության առանձնացնելու, ԴՆԹ-ի չափը գնահատելու համար։ և ՌՆԹ-ի բեկորները կամ սպիտակուցները լիցքով բաժանելու համար:
բջջային կուլտուրաներ
Բջջային կուլտուրան վերահսկվող աճի գործընթացն է, որով բջիջները մշակվում են վերահսկվող պայմաններում: Բջջային կուլտուրայի պայմանները տարբեր են յուրաքանչյուր բջիջի տեսակի համար: Ընդհանուր առմամբ, բջիջների կուլտուրայի միջավայրը բաղկացած է համապատասխան անոթից (օրինակ՝ Պետրիի ափսե)՝ սուբստրատով կամ միջավայրով, որն ապահովում է էական սննդանյութերը (ամինաթթուներ, ածխաջրեր, վիտամիններ, հանքանյութեր), աճի գործոններ, հորմոններ և գազեր (CO):2, Օ2), և կարգավորում է ֆիզիկաքիմիական միջավայրը (pH բուֆեր, օսմոտիկ ճնշում, ջերմաստիճան): Բջիջների մեծամասնության կարիքը ունի մակերեսային կամ արհեստական սուբստրատ, մինչդեռ մյուս բջիջների կուլտուրաները կարող են մշակվել ազատ լողացող կուլտուրայի միջավայրում (կասեցման կուլտուրա, բջիջների կասեցում):
Կենդանական բջիջների գծերի զանգվածային կուլտուրաներն օգտագործվում են վիրուսային պատվաստանյութերի և կենսատեխնոլոգիայից ստացված այլ արտադրանքների արդյունաբերական արտադրության մեջ: Մարդու ցողունային բջիջները մշակվում են բջիջների քանակն ընդլայնելու և փոխպատվաստման նպատակով բջիջները տարբեր սոմատիկ բջիջների տեսակների տարբերելու համար:
Հյուսվածքների նմուշներ
Հյուսվածք տերմինը բնութագրում է բջջային միջանկյալ նյութը, որտեղ բջջային նյութը գտնվում է բջիջների և ամբողջական օրգանի միջև կազմակերպական մակարդակի վրա: Հյուսվածքում հավաքվում են նույն ծագման բջիջները, որոնք միասին կատարում են որոշակի գործառույթ։ Բազմաթիվ հյուսվածքների ֆունկցիոնալ խմբավորումով ձևավորվում են օրգանների բարդ կառուցվածքները։
Հյուսվածքները նմուշառվում են կենսաբանության, հյուսվածքաբանության/հիստոպաթոլոգիայի, մակաբուծաբանության, կենսաքիմիայի, իմունոհիստոքիմիայի, ինչպես նաև ԴՆԹ մշակման և արդյունահանման համար: Այն կարելի է տարբերել կենդանական (ենթաբաժանում՝ կաթնասունների հյուսվածք) և բուսական հյուսվածքից։ Կենդանական հյուսվածքները խմբավորվում են կապակցող, մկանային, նյարդային և էպիթելային հյուսվածքների չորս հիմնական տեսակների: Բուսական հյուսվածքը ստորաբաժանվում է հետևյալ երեք հյուսվածքային համակարգերի՝ էպիդերմիս, գրունտային հյուսվածք և անոթային հյուսվածք։
Հյուսվածքների նմուշները կարող են պատրաստվել կենդանիների կամ բույսերի մասերից, օրինակ՝ ոսկորներից, մկաններից, տերևներից և այլն:
Մարմնի հեղուկներ
Արյունը, շիճուկը, պլազման, ողնուղեղային հեղուկը, թուքը և սինովիալ հեղուկը մարմնի հեղուկներ են, որոնք ախտորոշիչ առումով համապատասխան տեղեկատվության մեծ աղբյուր են առաջարկում: Հետևաբար, կարևոր է մարմնի հեղուկի նմուշների բարդ պատրաստումը վերլուծության համար: Առաջին դժվարությունը կապված է մարմնի հեղուկներում առկա բաղադրիչների լայն դինամիկ տիրույթի հետ:
Սպիտակուցի կոնցենտրացիայի որոշում
Բրեդֆորդի անալիզը, Լոուրի անալիզը և բիցինխոնինաթթվի (BCA) անալիզը սպիտակուցների կոնցենտրացիան որոշելու համար սովորական անալիզներ են: Տավարի շիճուկի ալբումինը (BSA) սպիտակուցի ամենահաճախ օգտագործվող ստանդարտներից մեկն է:
լիզի բուֆեր
Լիզիսի բուֆերը պետք է ընտրվի բջջի նյութի կամ հյուսվածքի (հյուսվածքային կուլտուրա, բույսեր, բակտերիաներ, սնկեր և այլն) և բջիջների կառուցվածքի և կառուցվածքի տեսակին համապատասխան: Սպիտակուցների, թաղանթների և օրգանելների արդյունահանման համար լիզի բուֆերների լայն տեսականի ձևավորված է մեկ կամ մի քանի լվացող միջոցներով: Լվացող միջոցը սովորաբար ընտրվում է փորձության և սխալի փորձարկումների միջոցով կամ – Եթե առկա է – ըստ գոյություն ունեցող սպիտակուցի արդյունահանման արձանագրության: Լվացող միջոցը պետք է համապատասխանի հյուսվածքի աղբյուրին և սպիտակուցներին: Ընդհանուր առմամբ, առավել մեղմ լվացող միջոցը, որն աշխատում է կոնկրետ հյուսվածքի / սպիտակուցի համար, ընտրվում է մզվածքի առավելագույն ֆունկցիոնալությունը պահպանելու համար: Ավելին, թաղանթների և օրգանելների արդյունահանման դեպքում մեղմ լվացող միջոցը մեմբրանը անձեռնմխելի է պահում: Լիզիսի բուֆերներում սովորաբար օգտագործվող լվացող միջոցները հիմնականում ոչ իոնային կամ զվիտերիոնային են, օրինակ՝ CHAPS, դեզօքսիքոլատ, Triton™ X-100, NP40 և Tween 20:
Օրինակ, հյուսվածքները, ինչպիսիք են ուղեղը, լյարդը, աղիքները, երիկամները, փայծաղը և այլն, կարող են պարզապես բուֆերացվել RIPA-ով: – այնուամենայնիվ, պետք է ներառվեն պրոթեզերոնի ինհիբիտորները և DTT (օրինակ՝ գելային էլեկտրոֆորեզի համար):
Լիզիսային բուֆեր կմախքի մկանային հյուսվածքի համար (սառույցով). 1 մՄ դիթիոթրեյտոլ՝ համալրված պրոթեզերոնի և ֆոսֆատազի արգելակիչ կոկտեյլով
Ընդհանուր բուֆերների աղյուսակ և դրանց pH միջակայքը: Ընդհանուր առմամբ, այս բուֆերները սովորաբար օգտագործվում են 20-50 մՄ կոնցենտրացիաներում:
| բուֆեր | pH միջակայք |
|---|---|
| Կիտրոնաթթու – NaOH | 2.2 – 6.5 |
| Նատրիումի ցիտրատ – Կիտրոնաթթու | 3.0 – 6.2 |
| Նատրիումի ացետատ – քացախաթթու | 3.6 – 5.6 |
| Կակոդիլաթթու նատրիումի աղ – HCl | 5.0 – 7.4 |
| ԱԻՆ – NaOH | 5.6 – 6.8 |
| Նատրիումի երկջրածին ֆոսֆատ – երկնատրիումի ջրածնային ֆոսֆատ | 5.8 – 8.0 |
| իմիդազոլ – HCl | 6.2 – 7.8 |
| MOPS – KOH | 6.6 – 7.8 |
| Տրիէթանոլամինի հիդրոքլորիդ – NaOH | 6.8 – 8.8 |
| Տրիս – HCl | 7.0 – 9.0 |
| ՀԵՊԵՍ – NaOH | 7.2 – 8.2 |
| Տրիցին – NaOH | 7.6 – 8.6 |
| Նատրիումի տետրաբորատ – բորաթթու | 7.6 – 9.2 |
| Հեծանիվ – NaOH | 7.7 – 8.9 |
| գլիցին – NaOH | 8.6 – 10.6 |
Բուֆերների մեծ մասը ցույց է տալիս pH-ի կախվածություն ջերմաստիճանից: Սա հատկապես ճիշտ է Tris բուֆերների համար: pKa-ն փոխվում է 8,06-ից 25°C-ում մինչև 8,85 0°C-ում:
(բուֆերի pH և pKa. pH-ն չափում է ջրածնի իոնների կոնցենտրացիան ջրային լուծույթում: pKa (= թթու դիսոցման հաստատուն) հարակից, բայց ավելի կոնկրետ չափում է, քանի որ այն օգնում է կանխատեսել, թե ինչպես է մոլեկուլը կգործի որոշակի կոնկրետ իրավիճակում: pH արժեք)
ՏՐԻզոլ
ՏՐԻզոլը քիմիական լուծույթ է, որն օգտագործվում է գուանիդինիումի թիոցիանատ-ֆենոլ-քլորոֆորմ արդյունահանման ժամանակ ՌՆԹ/ԴՆԹ/սպիտակուց հանելու համար: Ուլտրաձայնային օգնությամբ TRIZol-ի արդյունահանման օգտագործումը հանգեցնում է ԴՆԹ-ի, ՌՆԹ-ի և սպիտակուցի բարձր բերքատվության նույն նմուշից և դրանով իսկ գերազանցում է արդյունահանման այլ մեթոդները:
Գրականություն/Հղումներ
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.