Ուլտրաձայնային սպիտակուցը հյուսվածքից եւ բջջային մշակույթներից
- Protein արդյունահանման էական նմուշ պատրաստման քայլ է Պրոտեոմիկա.
- Սպիտակուցներ կարող է արդյունահանվող գործարանը եւ կենդանական հյուսվածքների, խմորասնկերի եւ միկրոօրգանիզմների.
- Sonication է հուսալի, արդյունավետ սպիտակուցը արդյունահանման մեթոդը տալով բարձր սպիտակուցային զիջում է կարճ արդյունահանման ժամանակ:
Սպիտակուցների արդյունահանումը հյուսվածքներից և բջիջներից
Հյուսվածքներից և աճեցված բջիջներից սպիտակուցի արդյունահանումը նմուշի պատրաստման կարևոր քայլ է, որն իրականացվում է բազմաթիվ կենսաքիմիական և անալիտիկ մեթոդների ժամանակ, ինչպիսիք են ELISA, PAGE, Western blotting, զանգվածային սպեկտրոմետրիա կամ սպիտակուցի մաքրում: Ուլտրաձայնային բջիջների խափանումը, լիզացումը և արդյունահանումը ճշգրիտ վերահսկելի, ոչ ջերմային տեխնիկա է սպիտակուցների բարձր բերքատվություն ապահովելու համար:
Բջիջներից սպիտակուցի արդյունահանումը հետ ուլտրաձայնային զոնդ UP200St
- արագ
- բարձր զիջում
- բարձր արդյունավետ
- Ճշգրիտ նկատմամբ վերահսկողությունը պարամետրերի
- վերարտադրելի արդյունքներ
- գծային scalability
Ընդհանուր ցուցումներ ուլտրաձայնային լիզի և սպիտակուցի արդյունահանման համար
- Ջերմաստիճանի: Է ապահովել բարձր սպիտակուցը եկամտաբերություն առանց ջերմային denaturation, ջերմաստիճանը ընթացքում արդյունահանման պետք է վերահսկվի: Hielscher պետական- of-արվեստի Ուլտրաձայնային Homogenizers – կոչվում է նաև ուլտրաձայնային դիզինտեգրատոր կամ ուլտրաձայնային սարք – են հենց վերահսկելի: Նրանք գալիս են մի plugable ջերմաստիճանի սենսորային. Ընդլայնված տարբերակներից ուլտրաձայնային homogenizer, առավելագույն ջերմաստիճանը կարող է սահմանվել: Երբ այս ջերմաստիճանը առավելագույնը է հասել, որ ultrasonicator ինքնաբերաբար դադարում է, մինչեւ նմուշ cooled ներքեւ.
- բուֆեր: Հանձին հարմար բուֆերի եւ ճիշտ ծավալի բուֆերի տատանվում է հյուսվածքի հյուսվածքի եւ պետք է լինի նախշավոր դուրս է դատավարությունը ու սխալի փորձարկման.
- Մեկուսացումը / մաքրում: Սպիտակուցային lysates կարող է պարունակել գերազանցող biomolecules, ինչպիսիք են ԴՆԹ կամ ածխաջրերի, որը կարող է հեռացվել սպիտակուցը տեղումների (deoxycholate-տրիքլորքացախաթթվի) կամ բուֆերային փոխանակում:
Chittapalo-ն և Noomhorm-ը (2009) իրենց ուսումնասիրության մեջ զեկուցել են, որ սպիտակուցի ելքը մեծանում է ձայնային ախտահանման միջոցով, և որ ուլտրաձայնային հյուսվածքների համասեռացման և լիզի գործընթացը կարող է զգալիորեն բարելավել առկա արդյունահանման գործընթացները: – հնարավորություն տալով նոր առեւտրային արդյունահանման հնարավորությունների.
Ուլտրաձայնային cuphorn սպիտակուցի մեկուսացման և ԴՆԹ-ի մասնատման համար մի քանի նմուշների միաժամանակյա, բարձր արդյունավետությամբ նմուշի պատրաստման համար:
Սպիտակուցը արդյունահանման կենդանական հյուսվածքի
Ընդհանուր չափի հյուսվածքների պատրաստման համար (օրինակ `երիկամ, սրտի, թոքերի, մկանների եւ այլն), հյուսվածքները պետք է բաժանվեն շատ փոքր մասերի, մաքուր գործիքներով, սառույցի վրա, ինչպես նաեւ հնարավորինս արագ, կանխելու համար պրոտիտաներով դեգրադացիան (օրինակ, լիզի բուֆեր, ինչպիսիք են RIPA կամ hypotonic lizis բուֆեր պարունակող protease եւ phosphatase inhibitor կոկտեյլ): Կերակրման արդյունքում նմուշը ներծծվում է հեղուկ ազոտի մեջ, սեղմվելու համար: Նմուշը կարող է պահվել -80 ° C-ում հետագայում օգտագործելու կամ անմիջապես սառույցի վրա անմիջապես հոմոգենացման համար: Ուլտրաձայնային արդյունահանման անմիջապես առաջ, սառույցի սառը լիզի բուֆերը (ինչպես նաեւ պրոտեուսի inhibitors DTT, leupeptin եւ aprotinin) արագորեն ավելացվում են նմուշային խողովակի մեջ (մոտ 10 մգ հյուսվածքի մոտ ~ 600 մկլ բուֆեր են առաջարկվում): Մոտավորապես: 20-60 մգ հյուսվածքների խորհուրդ է տրվում մեկ նմուշի խողովակի մեջ:
Ուլտրաձայնային համասեռացումը, լիզացումը և արդյունահանումը կատարվում է ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորի միջոցով, ինչպիսին է UP100H կամ UP200Ht, որը հագեցած է միկրո-ծածկույթով sonotrode-ով: Sonication տեւողությունը 60-90 վրկ. 15 վայրկյան ուլտրաձայնային ցիկլի ռեժիմում: sonication եւ 10 վրկ. հանգստի ժամանակ. Նմուշը պետք է մշտապես սառույցի մեջ պահել:
Այն բանից հետո, ուլտրաձայնային միատարրություն / արդյունահանման, որ lysate է centrifuged է 27,000g համար մոտ. 20 րոպե. Որից հետո supernatent է հավաքվում, այնպես, որ սպիտակուցը կոնցենտրացիան կարող է որոշվել է սպիտակուցային պարունակությունը, ինչպիսիք են Pierce սպիտակուցային հարգը BCA:
Սպիտակուցը արդյունահանման արյան շիճուկում
Շիճուկի և ֆոսֆատային բուֆերի համասեռ խառնուրդի համար նմուշը նախ պտտվում է ուլտրաձայնային բջիջների լիզումից առաջ: Ուլտրաձայնային լուծույթի համար նմուշը ձայնագրվում է ուլտրաձայնային լաբորատոր հոմոգենիզատորով, ինչպիսին է UP100H-ը 8 ցիկլով 20% ամպլիտուդով, յուրաքանչյուր 5 վայրկյան միացված և 15 վայրկյան անջատված ցիկլերի համար: Սպիտակուցի արդյունահանումն իրականացվում է ցիկլային եղանակով (պուլսացիայի ռեժիմ) ձայնագրման միջոցով և նմուշը սառույցի վրա դնելով, որպեսզի խուսափեն նմուշի գերտաքացումից և ջերմային դեգրադացիայից: Քանի որ շիճուկը պարունակում է մեծ քանակությամբ բարձր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցներ (օրինակ՝ ալբումին, α1-անտրիպսին, տրանսֆերրին, հապտոգլոբուլին, իմունոգլոբուլին G և իմունոգլոբուլին A), որոնք խանգարում են ցածր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցների տարանջատմանը IEF-ի ժամանակ, խորհուրդ է տրվում սպառել դրանք։ շիճուկից, օգտագործելով սպառման սյունակ:
Սպիտակուցը հանույթ բուսական հյուսվածքի
Թարմ, փափուկ գործարանը հյուսվածք, օրինակ մամուռ եւ այլն, կարելի է հեշտությամբ դադարեցրեցին, պարզապես դնելով թակած օրինակելի նյութը lysis բուֆերի համար sonication. Կոշտ, ligenous բույսերի հյուսվածքներում, ինչպիսիք են սերմեր, եղեւնի ասեղներ եւ այլն, պետք է հիմնավորի չոր: Որոշ ծանր, փայտային բուսական նյութերը պետք է սառեցվում է եւ հիմք է հեղուկ ազոտի առաջ արդյունահանվող կողմից sonication. Համար գործարանը բջջային մշակույթի suspensions, ուլտրաձայնային բուժում միջեւ 30 եւ 150 վայրկյան է lysis բուֆերի հիմնականում բավարար է: Ավելի կոշտ նյութական, ինչպիսիք են դդմի սերմերը պահանջում է ավելի ինտենսիվ sonication, ինչպես նկարագրված է ստորեւ:
Արձանագրություն ուլտրաձայնային արդյունահանման ալբումինի ից դդում սերմերը
Դդմի սերմի մանրացված փոշուց ալբումինի սպիտակուցի ուլտրաձայնային արդյունահանման համար 250 մլ ապակե բաժակի մեջ ավելացվում է 10 գ յուղազերծված դդումի սերմի փոշի և 100 մլ դեզոնացված ջուր՝ որպես լուծիչ: Սպիտակուցի արդյունահանումը բաղկացած է երկու քայլից. Նախ, նմուշը կատարվում է ձայնով զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարք UP400St (400W, 24kHz) հագեցած sonotrode S24d7-ով: Ուլտրաձայնային հոմոգենացման ժամանակ ապակե բաժակը տեղադրվում է սառը ջրային բաղնիքում: Ուլտրաձայնային սարքի UP400St-ի խցանվող ջերմաստիճանի սենսորը և ջերմաստիճանի վերահսկման կարգավորումները ապահովում են, որ նմուշի ջերմաստիճանը միշտ պահպանվի 30°C-ից ցածր: Ձայնագրման ժամանակ ջերմաստիճանի ճշգրիտ վերահսկման միջոցով խուսափում են ալբումինի դենատուրացիայից: Երկրորդ, արդյունահանումը կատարվել է խառնիչով 200 պտ/րոպե արագությամբ և 30°C ջերմաստիճանում։ Այնուհետև գավաթը տեղափոխվում է թերմոստատիկ թափահարողի մեջ: Գլոբուլինը հեռացվում է թորած ջրով դիալիզի միջոցով: Գլոբուլինի հեռացումից հետո սպիտակուցի էքստրակտը կարող է նմուշառվել ալբումինի պրոֆիլը որոշելու համար և այնուհետև ճշգրտվում է pI=3.0-ի՝ օգտագործելով 0.1 Մ HCl ալբումինի կոագուլյացիայի համար: Պինդ փուլն անջատվում է ցենտրիֆուգմամբ 5000 գ, 20°C ջերմաստիճանում և նորից լուծվում դեիոնացված ջրի մեջ: Ալբումինի կոագուլյացիա կատարվում է երկու անգամ՝ ալբումինի խտանյութում սպիտակուցի հարաբերակցությունը բարձրացնելու համար։
Ուլտրաձայնային ալկալային սպիտակուցը արդյունահանման համար նախապատրաստման սպիտակուցային խտանյութ ից Բրինձի Հատիկների ցույց է տալիս, որ ուլտրաձայնային բուժման արդյունքները բարձրագույն սպիտակուցային եկամտաբերության մի զգալիորեն կարճ արդյունահանման ժամանակ – համեմատ սովորական արդյունահանման մեթոդներով:
Նմուշի նախապատրաստումը արձանագրություն ֆունկցիոնալ inos enzyme
Լիովին ֆունկցիոնալ iNOS ֆերմենտ ստանալու համար (օրինակ՝ դեղերի զննման համար) առաջարկվում է հետևյալ արձանագրությունը. Բջջային կախոցը պետք է տեղադրվի սառույցի վրա և 5 վրկ ցիկլային ռեժիմում 10 մկմ ամպլիտուդով UP100H-ով ախտահանվի: sonication եւ 25 վրկ. հանգստանալ սառույցի վրա. Ընթացակարգը պետք է կրկնվի մոտավորապես. 3 անգամ. Ձայնային ցիկլերի միջև հանգստի ժամանակը նվազեցնում է ջերմաստիճանի բարձրացումը և, հետևաբար, կնվազեցնի դենատուրացիայի ռիսկը:
Ուլտրաձայնային Protein Solubilization
Sonication կարող է արագացնել սպիտակուցը solubilization գործընթացը, որը, որպես կանոն, պահանջում է մի քանի ժամ: Որպեսզի չի գերտաքացում նմուշը եւ կանխելու սպիտակուցային դեգրադացիայի եւ փոփոխությունների լուծումների պարունակող urea, ուլտրաձայնային bursts չպետք է տեւի, քան մի քանի վայրկյանից:
Ուլտրաձայնային սարք UP200Ht 2 մմ S26d2 միկրոծածկով փոքր նմուշների ձայնային ախտահանման համար:
Ուլտրաձայնային Սարքավորանք Protein արդյունահանման
Hielscher Ultrasonics առաջարկում է լայն շրջանակ ուլտրաձայնային homogenizers համար փլուզումից բջիջների, հյուսվածքների, բակտերիաների, միկրոօրգանիզմների, խմորիչ, եւ սպորների.
Hielscher lab ultrasonicators հզոր են և հեշտ է գործել: Կառուցված 24/7 աշխատանքի համար, դրանք նախագծված են որպես ամուր և արդյունավետ լաբորատոր և նստարանային սարքեր: Բոլոր սարքերի համար էներգիայի թողունակությունը և ամպլիտուդը կարող են ճշգրիտ վերահսկվել: Աքսեսուարների լայն տեսականի բացում է տեղադրման հետագա տարբերակները: Թվային ուլտրաձայնային սարքերը, ինչպիսիք են VialTweeter-ը, UP200Ht-ը, UP200St-ը և UP400St-ն ունեն ինտեգրված ջերմաստիճանի հսկողություն և ներկառուցված SD քարտ տվյալների ավտոմատ ձայնագրման համար:
Բազմաթիվ նմուշների անուղղակի, խաչաձև աղտոտվածությունից զերծ և միաժամանակյա ձայնագրման համար մենք առաջարկում ենք VialTweeter կամ ուլտրաձայնային CupHorn:
Ստորև բերված աղյուսակը ձեզ տալիս է ակնարկ մեր ուլտրաձայնային սարքերի վերաբերյալ նմուշների պատրաստման, բջիջների խզման և արդյունահանման համար: Կտտացրեք սարքի տեսակի վրա՝ յուրաքանչյուր ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորի մասին լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մեր լավ պատրաստված և երկարամյա փորձ ունեցող տեխնիկական անձնակազմը ուրախ կլինի օգնել ձեզ ընտրել ամենահարմար ուլտրաձայնային սարքը ձեր նմուշի պատրաստման համար:
| խմբաքանակի Volume | Ծախսի Rate | Առաջարկվող սարքեր |
|---|---|---|
| մինչև 10 սրվակ կամ խողովակ | na | VialTweeter- ը |
| բազմաբնակարան / միկրոտիտրային թիթեղներ | na | UIP400MTP |
| բազմաթիվ խողովակներ / անոթներ | na | Cuphorn |
| 1-ից 500 մլ | 10-ից մինչեւ 200 մլ / վրկ | UP100H |
| 10-ից 1000 մլ | 20-ից 200 մլ / րոպե | Uf200 ः տ,, UP200St |
| 10-ից մինչեւ 2000 մլ | 20-ից 400 մլ / վրկ | UP400St |
Կախված Ձեր դիմումի, նյութական, եւ ընտրանքի ծավալի, մենք խորհուրդ ենք առավել հարմար Ստեղծեք ձեր ընտրանքային Prep. Կապվեք մեզ այսօր!
Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!
Hielscher թվային ուլտրաձայնային սարքերն ունեն բրաուզերի հեռակառավարման վահանակ և տվյալների ավտոմատ արձանագրում ինտեգրված SD քարտի վրա:
VialTweeter- ը անուղղակի sonication.
Փաստեր Worth Իմանալով
Պրոտեոմիկա
Պրոտեոմիկա է հետազոտական դաշտ, որ հետաքննում են սպիտակուցներ եւ proteome: Սպիտակուցներ fullfil մի հսկայական զանգված կենսագործունեության ընթացքում օրգանիզմների. Որ proteome է ամբողջ փաթեթը սպիտակուցներ արտահայտած մի գենոմի, խցում, հյուսվածքի կամ օրգանիզմի որոշակի ժամանակ: The proteome տատանվում ժամանակի եւ հստակ պահանջներին, կամ ընդգծում է, որ բջջային կամ օրգանիզմ է ենթարկվում: Ավելի կոնկրետ, դա այն է, որ փաթեթը արտահայտված սպիտակուցների տվյալ տեսակի խցում կամ օրգանիզմի, տվյալ պահին, համաձայն սահմանված պայմաններում: Տերմինը մի խառնուրդ է սպիտակուցների եւ գենոմի. Պրոտեոմիկա է ուսումնասիրություն է proteome:
Սպիտակուց
Սպիտակուցներ են են խոշոր biomolecules, այսպես կոչված, մակրոմոլեկուլների – որոնք կազմված են ամինաթթուների մնացորդների մեկ կամ ավելի երկար շղթաներից: Սպիտակուցները ներառում են ինչպես բուսական, այնպես էլ կենդանական ծագման բոլոր օրգանիզմներում, եւ դրանք կենսական կարեւոր գործառույթների մեծ մասի համար կարեւոր են: Քանի որ սպիտակուցները պարունակում են բազմաթիվ կենսաբանական տեղեկություններ, դրանք վերլուծվում են վերլուծական նպատակով, օրինակ, պրոտոմիկային հետազոտության համար: Սպիտակուցների կատարած ամենակարեւոր գործառույթը ներառում է մետաբոլիկ ռեակցիաների, DNA կրկնօրինակի, խթանիչ արձագանքման եւ մոլեկուլների տեղափոխումը մեկ վայրից մյուսը: Սպիտակուցները տարբերվում են միմյանցից, հիմնականում ամինաթթուների հերթականությամբ, որոնք թելադրված են իրենց գեների nucleotide հաջորդականությամբ, եւ որը սովորաբար առաջացնում է սպիտակուցի ծալման մեջ որոշակի եռաչափ կառուցվածք, որը որոշում է իր գործունեությունը: Սպիտակուցներ են – բացի պեպտիդների – մեկը առանցքային բաղադրամասերից սնունդ. Հետեւաբար, Պրոտեոմիկա է հզոր գործիք է սննդի գիտության օպտիմալացնել գործընթացները, սննդի անվտանգության եւ սննդային գնահատման.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction անալիտների առանձնացման և նախնական խտացման նախավերլուծական ընթացակարգ է: Ուլտրաձայնային ախտորոշման հետ համատեղ՝ ամպի կետի արդյունահանումը կարող է ուժեղացվել՝ դարձնելով գործընթացը ավելի արդյունավետ, արագ և շրջակա միջավայրի համար բարենպաստ: Ուլտրաձայնային եղանակով ամպային կետի արդյունահանումը անալիտի պատրաստման զգալիորեն ավելի արդյունավետ մեթոդ է: Կարդացեք ավելին ամպային կետի ուլտրաձայնային օգնությամբ արդյունահանման մասին:գել Էլեկտրաֆորեզ
Գել electrophoresis է հիմնական մեթոդը առանձնացման եւ վերլուծության մակրոմոլեկուլների, ինչպիսիք են ԴՆԹ, ՌՆԹ եւ սպիտակուցներ, ինչպես նաեւ դրանց բեկորները, որոնք հիմնված են իրենց մեծությամբ ու պատասխանատու: Այն օգտագործվում է կլինիկական քիմիայի առանձնացնել սպիտակուցներ կողմից մեղադրանքի եւ / կամ չափի (IEF agarose, ըստ էության չափը անկախ) եւ կենսաքիմիայի, մոլեկուլային կենսաբանության եւ Պրոտեոմիկա է առանձնացնել մի խառը բնակչությանը ԴՆԹ-ի եւ ՌՆԹ դրվագներ երկարությամբ, գնահատել չափը ԴՆԹ եւ ՌՆԹ-ի բեկորները կամ առանձնացնել սպիտակուցներ կողմից մեղադրանքով:
բջջային կուլտուրաների
Բջջային մշակույթը վերահսկվում աճում գործընթացը, որի բջիջները կարող են մշակվում է հսկվող պայմաններում: Բջջային մշակույթի պայմանները տարբեր լինել յուրաքանչյուր բջջային տեսակի. Ընդհանուր առմամբ, շրջակա միջավայրը, որը բջջային մշակույթի բաղկացած է հարմար նավի (օրինակ Petri կերակրատեսակ) հետ substrate կամ միջին, որ մատակարարում է էական nutrients (amino թթուներ, ածխաջրեր, վիտամիններ, հանքային), աճի գործոնները, հորմոնների, եւ գազերի (CO2, The2), Եւ կարգավորում է Physio-քիմիական միջավայր (pH բուֆերային, osmotic ճնշման, ջերմաստիճանի). Շատ բջիջները պետք է մակերեսի կամ արհեստական substrate, մինչդեռ այլ բջջային մշակույթները կարող են աճեցված ազատ լողացող մշակույթի միջին (կասեցման մշակույթի, բջջային կասեցնելու):
Զանգվածային մշակույթները կենդանիների բջջային գծերի օգտագործվում են արդյունաբերական արտադրության վիրուսային պատվաստանյութերի եւ այլ biotechnologically դրանցից ստացված մթերքների. Մարդու ցողունային բջիջները կարող են բարեկիրթ է ընդլայնել շարք բջիջների եւ տարբերակել բջիջները տարբեր սոմատիկ բջիջների տեսակների համար փոխպատվաստման նպատակով:
հյուսվածքի Օրինակներ
Տերմինը հյուսվածք նկարագրում է բջջային միջանկյալ, որտեղ բջջային նյութը է կազմակերպական մակարդակով միջեւ բջիջների եւ ամբողջական մարմին: Ի հյուսվածքի, նմանատիպ բջիջները, նույն ծագման, որ միասին իրականացնել որոշակի գործառույթ են հավաքվել. Ըստ ֆունկցիոնալ խմբավորման բազմաթիվ հյուսվածքների, համալիր կառույցները օրգանների ձեւավորվում են.
Հյուսվածք, որը sampled հետազոտությունների կենսաբանության, histology / histopathology, մակաբուծաբանության, կենսաքիմիայի, immunohistochemistry, ինչպես նաեւ մշակել եւ հանենք ԴՆԹ. Այն կարելի է տարբերել միջեւ կենդանիների (ստորաբաժանման կաթնասուն հյուսվածքները) եւ բուսական հյուսվածքի. Կենդանական հյուսվածքների խմբավորված են չորս հիմնական տեսակների կապ, մկանային, նյարդային, եւ epithelial հյուսվածքի. Գործարանը հյուսվածք, որը բաժանվում է հետեւյալ երեք հյուսվածքների համակարգերից epidermis, ցամաքային հյուսվածքի, եւ անոթային հյուսվածքի.
Հյուսվածքների նմուշները կարող է պատրաստված կենդանիների կամ բույսերի մասերի, օրինակ ոսկրային, մկանային, տերեւները, եւ այլն:
մարմնի հեղուկների
Արյան, շիճուկ, պլազմային, cerebrospinal հեղուկ, թուք ու synovial հեղուկ են մարմնի հեղուկների, որոնք առաջարկում են մեծ աղբյուր diagnostically համապատասխան տեղեկատվություն: Հետեւաբար, մի բարդ նախապատրաստում մարմնի Հեղուկի նմուշների վերլուծության կարեւոր է: Առաջին դժվարությունը կապված է լայն դինամիկ շարք բաղադրիչների ներկա մարմնի fluids մասին:
Ինքնորոշման սպիտակուցային կոնցենտրացիայի
Bradford հարգը, Lowry հարգը եւ bicinchoninic թթու (ԵՀՀ) հարգը են ընդհանուր assays որոշելու կոնցենտրացիան սպիտակուցներ: Խոշոր եղջերավոր անասունների շիճուկ սպիտ (BSA) մեկն է առավել հաճախակի օգտագործվող սպիտակուցային ստանդարտի:
lysis բուֆերային
Lysis բուֆերային պետք է ընտրված, համաձայն բջջային նյութի կամ անձեռոցիկով (հյուսվածքները մշակույթի, բույսերի, բակտերիաների, fungi, եւ այլն), եւ արդյոք բջիջները գտնվում են կառուցվածքի եւ տեսակից կառույցի: Լայն շրջանակ lysis buffers արդյունահանման սպիտակուցների, մեմբրաններ, եւ organelles են ձեւակերպված մեկ կամ ավելի ներգործության մաքրող նյութեր: Լվացքի, որը սովորաբար ընտրել միջոցով դատավարությունը եւ սխալվելու թեստերի կամ – Եթե առկա է – ըստ գոյություն ունեցող սպիտակուցային արդյունահանման արձանագրության. Լվացքի պետք է լինի համատեղելի է հյուսվածքների աղբյուր եւ սպիտակուցներ: Ընդհանուր առմամբ, հոտ ախտահանող, որը աշխատում է կոնկրետ հյուսվածքները / սպիտակուցային, ընտրվում է, որպեսզի պահպանել առավելագույն ֆունկցիոնալությունը քաղվածքների: Ավելին, դեպքում արդյունահանման թաղանթներ եւ organelles, մեղմ ախտահանող պահում թաղանթ անձեռնմխելի. Սովորաբար օգտագործվող ներգործության մաքրող նյութեր lysis բուֆերների են հիմնականում ոչ իոնոգեն կամ zwitterionic, օրինակ Chaps, deoxycholate, Տրիտոնը ™ X-100, NP40, եւ Tween 20:
Օրինակ, հյուսվածքների, ինչպիսիք են ուղեղի, լյարդի, աղիների, երիկամների, փայծաղի եւ այլն կարող են պարզապես buffered հետ Ռիպա – սակայն պրոտեազների inhibitors եւ DTT (օրինակ գել electrophoresis) պետք է ներառվեն:
Lysis բուֆերային skeletal մկանային հյուսվածքի (սառույց սառը): 20 մմ Tris (pH 7,8), 137 մմ NaCl, 2.7 մմ kcl, 1 մմ MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (Վտ / V) գլիցերինի, 1 մմ EDTA , 1 մմ dithiothreitol համալրվեց պրոտեազների եւ phosphatase inhibitor կոկտեյլ
Աղյուսակ ընդհանուր բուֆերների եւ դրանց pH միջակայք: Ընդհանուր առմամբ, այդ buffers են սովորաբար օգտագործվում է կոնցենտրացիաների 20-50 մմ:
| բուֆեր | pH տեսականին |
|---|---|
| Կիտրոնաթթու – NaOH- ը | 2.2 – 6.5 |
| նատրիումի ցիտրատ – Կիտրոնաթթու | 3.0 – 6.2 |
| նատրիումի acetate – քացախաթթու | 3.6 – 5.6 |
| Cacodylic թթու նատրիումի աղ – HCl | 5.0 – 7.4 |
| MY – NaOH- ը | 5.6 – 6.8 |
| Նատրիումի դեհիդրոֆոսֆատ – երկնատրիում ջրածնի ֆոսֆատ | 5.8 – 8.0 |
| imidazole – HCl | 6.2 – 7.8 |
| mops – KOH- ը | 6.6 – 7.8 |
| տրիէթանոլամին հիդրոքլորիդ – NaOH- ը | 6.8 – 8.8 |
| Tris – HCl | յոթ – ինը |
| HEPES – NaOH- ը | 7.2 – 8.2 |
| Տրինին – NaOH- ը | 7.6 – 8.6 |
| նատրիումի tetraborate – բորային թթու | 7.6 – 9.2 |
| Bicine – NaOH- ը | 7.7 – 8.9 |
| Գլիցինի – NaOH- ը | 8.6 – 10.6 |
Շատ buffers ցույց են տալիս, pH-կախվածությունը հետ ջերմաստիճանի. Սա հատկապես ճիշտ է Tris buffers. The pka փոխում է 8.06 ին, ժամը 25 ° C մինչեւ 8.85 0 ° C:
(PH եւ pka մի բուֆերի: pH չափում կոնցենտրացիան ջրածնային իոնների տված նստվածքային լուծման. Pka (= թթու բաժանում հաստատուն) հանդիսանում է կապված, բայց ավելի կոնկրետ միջոցը, որ դա օգնում է կանխատեսել, թե ինչպես է մոլեկուլ, որը գործելու է մի կոնկրետ pH արժեքը):
TRIzol
TRIzol է քիմիական լուծում կորզվում ՌՆԹ / ԴՆԹ / սպիտակուցը ընթացքում guanidinium thiocyanate-ֆենոլ-քլորոֆորմի արդյունահանման. Օգտագործումը Ultrasonically օժանդակած TRIzol արդյունահանման արդյունքների բարձր ԴՆԹ, ՌՆԹ, եւ սպիտակուցային զիջում են նույն նմուշի եւ գերազանցում է դրանով այլ արդյունահանման մեթոդները:
Գրականություն / հղումներ
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.