Hielscher ուլտրաձայնային տեխնոլոգիա

Ուլտրաձայնային պատրաստում C. Elegans նմուշների

C. elegans ՝ նեմատոդային որդ, կենսաբանության մեջ լայնորեն օգտագործված մոդելային օրգանիզմ է: Նմուշի պատրաստումը նախքան վերլուծությունը պահանջում է լիզի, սպիտակուցի և լիպիդների արդյունահանում, ինչպես նաև ՌՆԹ-ի մասնատում, ինչը հուսալիորեն կարող է իրականացվել մոնտաժման միջոցով: Ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչները հուսալի, բարդ և հեշտ օգտագործման սարքեր են `C. elegans նմուշների արագ պատրաստման համար:

Ուլտրաձայնային պատրաստում C. Elegans նմուշների

C. elegans- ը կլոր որդ է, որը լայնորեն օգտագործվում է հետազոտական լաբորատորիաներում `գենոմիկայի, զարգացման կենսաբանության և հիվանդությունների հետազոտման համար: C. elegans- ի գենոմի շատ գեներ ունեն մարդու ֆունկցիոնալ նմանակները: Դրանով իսկ նեմատոդային որդը չափազանց օգտակար մոդել է մարդու հիվանդությունների համար: C. elegans- ի լայն օգտագործման այլ առավելություններն են դրա հեշտ և էժան մշակումը մանրէներ պարունակող թիթեղների վրա (օրինակ `E. coli), դրա թափանցիկությունը, հարմարավետ աշխատանքը, ինչպես նաև որդերն ավելի երկար սառեցնելու և պահելու հնարավորությունը:
Սպիտակուցների և լիպիդների վերլուծությունը լաբորատորիաներում կանոնավոր ընթացակարգեր են, և ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստումը ձևավորված մեթոդ է C. elegans նեմատոդների զարգացման համար յուրաքանչյուր զարգացման փուլում (այսինքն ՝ սաղմեր, L1-L4 թրթուրներ, մեծահասակներ): Քանի որ C. elegans- ն օգտագործվում է նաև որպես սպիտակուցի արտահայտման համակարգ `նպատակային սպիտակուցները գերարտահայտելու համար, պահանջվում է հուսալի, վերարտադրվող լուծույթ և սպիտակուցի արդյունահանման մեթոդ, որը տալիս է բարձր սպիտակուցային բերք: Ուլտրաձայնային բջիջների խափանման և արդյունահանման համակարգերը մատչելի են որպես զոնդի տիպի համասեռացնող միջոցներ և որպես բազմակի նմուշի ուլտրաձայնային միջոցներ: Հաշվի առնելով նմուշի հարմար պատրաստումը և նմուշի բոլոր տեսակի նմուշները, Hielscher Ultrasonics- ն ունի իդեալական ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչ ձեր լաբորատոր ընթացակարգի համար:
C. elegans is a widely used model organism in biological research. Ultrasonic lysis is a sophisticated, reliable, reproducible and rapid technique to prepare high-quality protein extracts from C. elegans.

Ուլտրաձայնային C. elegans Lysis համար

  • Mիճու համասեռացման պատրաստում
  • Protein արդյունահանման
  • Լիպիդների արդյունահանում
  • Սպիտակուցների քանակական գնահատում
  • Իմունային տեղումներ
  • արեւմտյան blotting
  • ՌՆԹ արդյունահանում
  • Ֆերմենտային վերլուծություններ
Sonotrode MTP-24-8-96- ը ունի ութ ուլտրաձայնային զոնդ `միկրոտիտր ափսեների հորերի sonication- ի համար:

Sonotrode MTP-24-8-96- ը ունի ութ ուլտրաձայնային զոնդ `միկրոտիտր ափսեների հորերի sonication- ի համար:

Տեղեկատվության պահանջ





Ուլտրաձայնային պրոտոկոլներ C. Elegans- ի խափանման և քայքայման համար

C. elegans- ի ուլտրաձայնային համասեռացումը և լիզիզմը և դրան հաջորդող սպիտակուցների և լիպիդների արդյունահանումը կարող են իրականացվել `օգտագործելով տարբեր ընթացակարգեր` օգտագործելով տարբեր համասեռացման և լիզի բուֆերներ և այլն: Լիզի բոլոր արձանագրությունները ընդհանուր են, որ նմուշները պետք է շարունակաբար պահվեն սառույցի վրա, որպեսզի կանխեն սպիտակուցների քայքայումը: Ստորև ձեզ ենք ներկայացնում ուլտրաձայնային լուծույթի և արդյունահանման հուսալի և արագ որոշ արձանագրություններ բարձրորակ սպիտակուցային կամ լիպիդ պարունակող C. elegans նմուշների պատրաստման համար:

Ուլտրաձայնային C. elegans Lysis- ի առավելությունները

  • հուսալի
  • reproducible
  • ճշգրիտ ջերմաստիճանի վերահսկմամբ
  • հուսալի գործընթացի վերահսկում
  • նուրբ մեթոդ
  • հեշտ է կիրառել
  • Անվտանգ

Ուլտրաձայնային սպիտակուցի արդյունահանում C. elegans նմուշներից

C. elegans ճիճուների ուլտրաձայնային լիզիզացումը և սպիտակուցի արդյունահանումը կարող են իրականացվել տարբեր պրոտոկոլների միջոցով: Ստորև ներկայացնում ենք ձեզ մի քանի հուսալի և արագ լիզի արձանագրություններ `սպիտակուցների արդյունահանման արդյունքների վերարտադրման համար:

C. elegans Worms- ից ցիտոզոլիկ քաղվածքի արագ պատրաստում ՝ Sonication- ի միջոցով

Հաջորդ արձանագրությամբ 30 րոպեից պակաս ժամանակահատվածում կարող եք պատրաստել C. elegans լիզատներ:
C. elegans հավաքածու
Ընտրեք C. elegans- ի ցանկալի որդերը 1.5 մլ խողովակի ֆոսֆատային բուֆերային լուծույթի (PBS) մեջ կամ լվացեք դրանք 1.5 մլ PBS- ով ափսեից: Centենտրիֆուգացրեք 1 րոպեի ընթացքում 2000rpm- ից գնդիկավորելու համար: Նմուշները մշտապես պահեք սառույցի վրա:
Ապա, որդերը երկու անգամ լվացեք PBS- ով:
Դրանից հետո երկու անգամ լվացեք որդերը ddH- ով2O.
Վերականգնել որդերն առնվազն 500ul հոմոգենացման բուֆերի մեջ (HB): Որդերի նմուշներն այժմ պատրաստ են ուլտրաձայնային լիզի:
Սպիտակուցի քաղվածքների ավելի բարձր որակի համար գուցե ցանկանաք նվազեցնել մանրէների աղտոտումը `որդերը լվանալով յուրաքանչյուրը 5 րոպեի ընթացքում PBS- ով և ստերիլ, ծայրահեղ մաքուր ջրի մեջ (ddH2Ո) կամ կատարել սախարոզային լողացում: Որդերի նմուշները անընդհատ պահեք սառույցի վրա:

Ուլտրաձայնային C. elegans Lysis պրոտոկոլ

  • Համոզվեք, որ նախօրոք պատրաստում եք ուլտրաձայնային միջոցը, որպեսզի ուլտրաձայնային հոմոգենիչը պատրաստ լինի օգտագործման (զոնդի տեղադրում, նախալրացման ծրագրի նախնական հավաքածու):
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 watts, 26kHz) with microtip S26d2 for the preparation of biological samplesԵթե ձեր ուլտրաձայնային սարքը կանգնած է, տեղադրեք սառցե լոգարանը ձեր ընտրանքային խողովակների հետ ուլտրաձայնային զոնդի տակ և տեղադրեք ուլտրաձայնային զոնդը 1,5 մլ խողովակի մեջ:

  • UP200St- ի կամ UP200Ht- ի հետ C. elegans- ի լիզի համար ուլտրաձայնացումը պետք է իրականացվի մանրադիտակի միջոցով (օրինակ `2 մմ S26d2 զոնդը. Տես նկարը ձախ) 1 վայրկյանում 30 վայրկյան դադարներով 40% ամպլիտուդայով: Յուրաքանչյուր 1 վայրկյանի համար 5 վերամշակման ցիկլ ՝ 30 վայրկյան դադարներով, իդեալական են C. elegans– ի լիզիզմի համար: Եթե լիզը կատարում եք առաջին անգամ, մանրադիտակի միջոցով կարող եք ստուգել լիզի առաջընթացը նմուշի փոքր բաժիններում յուրաքանչյուր զարկերակից հետո:
  • Լիզը հաջողությամբ ավարտվում է, երբ որդերը խանգարում են: Ավելորդ վերամշակումը հանգեցնում է միջուկների կոտրմանը և տեսանելի է դառնում, երբ նմուշը մածուցիկ է կամ փրփրվում: Նմուշի դեգրադացիան կանխելու համար, անհրաժեշտության դեպքում, օգտագործեք ավելի շատ զարկերակներ: Մի բարձրացրեք ուլտրաձայնային զարկերակի յուրաքանչյուր ցիկլի ժամանակը `բարձրորակ սպիտակուցային քաղվածքներ ստանալու համար:
  • Մաքրել բջջային լիզատը `կենտրոնացնելով ուլտրաձայնային լիզացված որդերը 14,000rpm- ում` 10min- ի համար `4ºC:
  • Դրանից հետո, ավելցուկը տեղափոխեք թարմ խողովակի մեջ և պատրաստվեք իմունային նստվածքների կամ այլ վերլուծությունների:

Նշում հոմոգենացման բուֆերի համար. Պատրաստեք համասեռացման բուֆերը վերևում ուլտրաձայնային լիզի արձանագրության համար `

  • 15 մմ Hepes pH 7.6 – 15 մլ 0,5 Մ
  • 10 մմ KCl – 2,5 մլ 2,5 մլ
  • 1.5 մմ MgCl2 – 0.75 մլ 1 Մ
  • 0.1 մմ EDTA – 0,5 Մ-ի 100 ul
  • 0.5 մմ EGTA – 2,5 մլ 0,1 Մ
  • 44 մմ Սախարոզա – 14,7 մլ 50%
  • Օգտագործելուց առաջ ավելացրեք `1 մմ DTT – 1000 մ 1 Մ-ից
  • գումարած պրոտեազի ինհիբիտոր

C. elegans- ի ուլտրաձայնային լուծույթը `քանակական մերձեցման մաքրման վերլուծության համար

C. elegans սաղմերը (յուրաքանչյուր կրկնօրինակում million2 միլիոն) նոր բերք են ստացել կենսաբանական երեք օրինակով `սպիտակեցված երիտասարդ հերմաֆրոդիտները սպիտակեցնելով և սառույցի վրա sonicated (ցիկլ ՝ 0,5 վ, ամպլիտուդա ՝ 40–45%, 5 հարված / նստաշրջան, 5 նստաշրջան, նստաշրջանների միջակայք) 30 վ; UP200S ուլտրաձայնային պրոցեսոր միկրո հուշումով S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) լիզի բուֆերում (ընդհանուր ծավալը ՝ ∼600 մկլ; 50 մմ Tris-HCl, pH 7,4, 100 մմ KCl, 1 մմ MgCl2, 1 մմ EGTA, 1 մմ DTT, 10% գլիցերին , պրոտեազի ինհիբիտորների խառնուրդ, 0,1% Nonidet P-40 փոխարինիչ): Վերամշակումից հետո Nonidet P-40 փոխարինիչը ավելացվեց մինչև 1% և լիզատները ինկուբացվեցին գլխի պոչով պտտվելով 4 ° C ջերմաստիճանում 30 րոպե, որին հաջորդեց ցենտրիֆուգացում 20,000 × գ 20 րոպե 4 ° C ջերմաստիճանում: Մաքրված լիզատը այնուհետև ներծծվեց `չխախտելով վերին լիպիդային շերտը և կիսով բաժանվելով կամ հակա-ԳՖՊ-ագարոզային ուլունքների կամ արգելափակված հսկիչ ուլունքների (40-50 մկլ): 4 ° C ջերմաստիճանում 60-90 րոպե գլխի պտույտով պտտվելուց հետո ուլունքները մեկ անգամ լվացվեցին լիզ-բուֆերով, որը պարունակում էր 0,1% Nonidet P-40 փոխարինիչ, որին հաջորդում էր երկու անգամ լվացում կամ բուֆեր I (25 մմ Tris-HCl, pH 7.4, 300 մմ NaCl, 1 մմ MgCl2) կամ բուֆեր II (1 մմ Tris-HCl, pH 7.4, 150 մմ NaCl, 1 մմ MgCl2) կամ երկուսն էլ: GFP- ի համար `MBK-2 քաշքշուկներ, կատարվել են երկու առանձին փորձեր` օգտագործելով լվացքի տարբեր պայմաններ: Սպիտակուցներն արտանետվել են ուղեծրային ցնցումներով `50 մկլ 6 մմ ուրեա / 2 Մ Thiourea սենյակային ջերմաստիճանում: MBK-1 :: GFP փլուզման փորձերի համար սպիտակուցները երկու անգամ լվացվեցին `թափահարելով 50 մկգ 8 մ գուանիդինի քլորիդ 90 ° C ջերմաստիճանում, որին հաջորդեց էթանոլի տեղումներ: Էլութացված սպիտակուցի նմուշները մարսվել են լուծույթում:
(տես ՝ Chen et al., 2016)

VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

VialTweeter- ը 10 փորձանոթների միաժամանակյա ձայնազերծման համար բազմաքանակ նմուշի պատրաստման միավոր:

Ուլտրաձայնային ճիճուների համասեռացում և լիզացում

C.elegans- ի լիզի և սպիտակուցի արդյունահանման ընթացակարգի համար համապատասխան նմուշի 30,000 նեմոդոդ հավաքվեց մեկ նմուշի համար և լվացվեց սառցե ցրտաշունչ բազալայում, կենտրոնացված էր կենտրոնացումով 1500 պտ / րոպե 2 րոպեի ընթացքում, լվացվեց վեց անգամ սառցե ցրտով S- բազալ ՝ մնացորդային մանրէները հեռացնելու համար, այնուհետև պահվում է սառույցի վրա, մինչև օգտագործման համար պատրաստ: Սպիտակուցի արդյունահանման համար, մեծահասակ ճիճուներին թույլատրվեց վերջին S- բազալ լվացումից հետո կոմպակտ գնդիկ կազմել: Դրանից հետո ճիճու գնդիկները վերակոդավորեցին 1 մլ սառույցով ցրված արդյունահանման բուֆերում [20 մմ կալիումի ֆոսֆատ, pH 7,4, 2 մմ EDTA, 1% Triton-X-100, պրոտեազի ինհիբիտորներ (Sigma P2714)] և անմիջապես վերամշակեցին:
∼ 30,000 գերահասահասակ որդեր (համապատասխանաբար mg 100 մգ խոնավ քաշին) սառեցվել են սառույցի վրա `օգտագործելով զոնդային տիպի ուլտրաձայնիչ (օրինակ` UP50H միկրոտիպով MS2) 40% ամպլիտուդով `3 վայրկյան 10 վայրկյանում, 30 վայրկյան հեռավորության վրա, 1 մլ սառույցի արդյունահանման բուֆեր: (տես ՝ Baskharan et al. 2012)

Ուլտրաձայնային լիպիդների արդյունահանում C. elegans- ից

Լիպիդոմիկայում, նյութափոխանակության ճյուղում, բնութագրվում և վերլուծվում է կենսաբանական համակարգերի լիպիդային լրացումը: C. elegans- ը լայնորեն օգտագործվում է լիպիդոմիկայում նյութափոխանակության լիպիդների փոխազդեցությունը և դրանց ազդեցությունը առողջության և կյանքի տևողության վրա ուսումնասիրելու համար:
Ուլտրաձայնային լուծույթը և արդյունահանումը օգտագործվում է լիպիդների ազատման համար, ինչպիսիք են sphingolipids- ը C. elegans սաղմերից, թրթուրներից և մեծահասակ որդերից: Ուլտրաձայնացումը օգտագործվում է որդերի համասեռացման պատրաստման և հետագայում նմուշից լիպիդների արդյունահանման համար:
C. elegans- ից ուլտրաձայնային լիպիդների արդյունահանման արձանագրություն
C. elegans գնդիկը հալեցնել սառույցի վրա և վերակենդանացնել 0,5 մլ գերլարիչով: Սրբազերծեք C. elegans նմուշները 1,5 մլ փորձանոթների մեջ, միաժամանակ պահպանելով նմուշները սառույցի վրա:
Sonication- ը կարող է իրականացվել, օգտագործելով այնպիսի զոնդ, ուլտրաձայնային, ինչպիսին է Uf200 ः տ, ուլտրաձայնային նմուշի նախապատրաստման միավորը VialTweeter- ը (10 նմուշի միաժամանակյա ձայնազերծում) կամ UIP400MTP (96 հորատանցքի ափսեների նման բազմաբնակարանային ափսեների sonication): UP200Ht- ի հետ ուլտրաձայնային լիզի համար օգտագործեք S26d2 միկրո հուշում: Նախապես նախադրեք ուլտրաձայնային ցիկլի ռեժիմը թվային ընտրացանկում: Սահմանեք ամպլիտուտը 10% և ձայնազերծման ցիկլի ռեժիմ `20 ցիկլի 2 վայրկյան իմպուլսներով` 30 վայրկյան դադար: յուրաքանչյուր ուլտրաձայնային պուլսացիայի պոռթկման միջև:
Գերհեղեղները տեղափոխեք պտուտակային գլխարկով ապակե խողովակներ: Կատարել Folch- ի արդյունահանում `յուրաքանչյուր ապակե խողովակին ավելացնելով 1 մլ ուլտրոգրիչ, այնուհետև յուրաքանչյուր ապակե խողովակին ավելացնելով 6 մլ քլորոֆորմ / մեթանոլ (հարաբերակցություն = 2: 1) խառնուրդ:
Յուրաքանչյուր ապակե խողովակ պտտեք 30 վրկ 4 անգամ 4 անգամ: Խողովակները ցրտահարեք 1,258 xg- ով 15 րոպեի ընթացքում (Eppendorf, 5810 R) `փուլային տարանջատումն էլ ավելի ուժեղացնելու համար: Ստորին հիդրոֆոբ ֆրակցիան տեղափոխեք ապակե մաքուր խողովակ ապակե Պաստեր պիպետով: Ազոտի հոսքի տակ չորացրեք հիդրոֆոբի ստորին հատվածը ազոտի գոլորշիացնող սարքում: Չոր գնդիկը պահեք -80 ° C սառնարանում մինչև օգտագործումը:

Wիճու լիզատների ուլտրաձայնային պատրաստում

Որդի լիզատ. L4 փուլային որդերը հավաքվել և լվացվել են երեք անգամ M9 բուֆերով (42.26 մմ Na2HPO- ն4, 22.04 մմ Խ2PO4, 85,56 մմ NaCl և 0,87 մմ MgSO4) բոլոր մանրէները հեռացնելու համար: M9 բուֆերը հնարավորինս հեռացնելուց հետո ճիճուները վերակայում էին լիզ բուֆերում. 50 մմ HEPES, 50 մմ KCl, 1 մմ EDTA, 1 մմ EGTA, 5 մմ ֆոսֆատ β-գլիցերին, 0,1% (v / v) Triton X-100, 50 մմ նատրիումի ֆտորիդ, 1 մմ նատրիումի orthovanadate, 5 մմ նատրիումի պիրոֆոսֆատ, 0.2 մմ ֆենիլմեթանեսուլֆոնիլֆտլորիդ և պրոտեազի ինհիբիտոր: Որդերը սառեցրեցին հեղուկ ազոտի մեջ և հալվեցին 37 ° C ջերմաստիճանում երեք անգամ, այնուհետև որդերը վերամշակվեցին չոր սառույցի վրա, ուլտրաձայնային VialTweeter միավորով `10 նմուշ խողովակների միաժամանակ պատրաստման համար: Sonication- ն իրականացվել է 50% ամպլիտուդում `2 վայրկյան 10 ցիկլում: ձայնային պոռթկումների միջև 30 վրկ դադարով: Դրանից հետո նմուշները ցրտահարվեցին 12000 rpm- ում 4 ° C ջերմաստիճանում 15 րոպե: Գերհեղեղը հավաքվել և պահվել է -70 ° C ջերմաստիճանում: Բրեդֆորդի անալիզով սպիտակուցի քանակականացման համար օգտագործվել է մի փոքր մասն:
Ընդհանուր glutathione- ի, GSH- ի և GSSG- ի որոշում. Glutathione- ի քանակականացման համար լիզատները և որոշումը կատարվել են նույն օրը: Գլյուկոզայով սնուցված և հսկիչ L4 թրթուրները հավաքվել և լվացվել են M9 բուֆերով երեք անգամ: M9 բուֆերը հնարավորինս հեռացնելուց հետո որդերը վերակենդանացվել են սառույցով ցրված մետաֆոսֆորական թթվի մեջ (5% վտ.), Այնուհետև որդերը վերամշակվել են սառույցով ուլտրաձայնային VialTweeter- ով ՝ 50% ամպլիտուայով, 2 վայրկյան տասը մոնտաժային ցիկլերում: 30 վրկ-ով: դադար յուրաքանչյուր ցիկլի միջեւ: Դրանից հետո 15 րոպե ցենտրիֆուգը կատարվեց 12000 պտ / րոպե 4 ̊C ջերմաստիճանում:
(տես ՝ Ալկանտար-Ֆերնանդես և ուրիշներ, 2018)

C. elegans Sample Prep նախքան իմունային տեղումները և Western Blotting- ը

Կարճ ասած, սաղմնային քաղվածքների համար C. elegans L1 թրթուրները աճեցվել են մեծահասակների համար հեղուկ S- միջին կուլտուրաների մեջ մինչև հասունություն: Սաղմերը հավաքվել են սպիտակեցման ստանդարտ մեթոդով և կասեցվել լիզ բուֆերում (50 մմ Tris, pH 7,5, 100 մմ KCl, 1 մմ EDTA, 1 մմ MgCl2, 8,7% գլիցերին, 0,05% NP-40, 1􏰅 պրոտեազի արգելակիչ կոկտեյլ և 1􏰅 ֆոսֆատազի ինհիբիտոր կոկտեյլ I և II), արագ սառեցված հեղուկ ազոտի մեջ և լիզացված ուլտրաձայնային բջիջների խափանման միջոցով, օգտագործելով ուլտրաձայնային միկրոտիպով Uf200 ः տ S26d2- ի հետ 10 զարկերակի համար `10 վ-ից ավելի 30% ամպլիտուդում: Եթե ավելի մեծ քանակությամբ նմուշներ պետք է պատրաստել ուլտրաձայնային VialTweeter- ը կամ լավ սալիկների համար առաջարկվում է MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP: Մոնուսացումից հետո քաղվածքները նախապես մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 30,000 գ ջերմաստիճանում 20 րոպե 4 ° C ջերմաստիճանում: Նախապես մաքրված քաղվածքը (300 մգ ընդհանուր սպիտակուց) ինկուբացվել է 40 մգ հակա-CDC-25.1 հարազատությամբ մաքրված հակամարմնով (այս ուսումնասիրությունը) խաչաձեւ կապակցված A- ագարոզայի սպիտակուցի հետ, կամ որպես հսկողություն `նապաստակի իմունոգլոբուլինի նման քանակ: (Ig) G- ն խաչաձեւ կապակցված սպիտակուցի A- ագարոզայի հետ օգտագործվել է ընդհանուր 200 մլ լիզի բուֆեր պարունակող 1% NP-40 պարունակության մեջ, որի ներառումը նվազեցրել է սպիտակուցների ոչ սպեցիֆիկ կապը մատրիցային: Նմուշները պտտվել են 1 ժամվա ընթացքում 4 ° C ջերմաստիճանում, ուլունքները երեք անգամ լվացվել են լիզ-բուֆերով և ողողվել 30 μl գլիցինով / HCl և 200 մմ NaCl, pH 2.2: Իմունային նստվածքից հետո էլյուաները նոսրացվեցին 30 մկմ SDS նմուշի բուֆերում, 4 րոպե տաքացրեցին 95 ° C, և ներածման համար սովորաբար ընդհանուր 3% -ը և հեղուկների համար 30% -ը կիրառվեցին SDS-PAGE- ում, որին հետևեց Western blotting հակամանրէային -CDC-25.1 (1: 400), anti-LIN-23 (1: 750), anti-ubiquitin (1: 1000), anti-GSK3􏰁 (1: 500) կամ anti-􏰁β-actin (1: 2000) հակամարմիններ: Այն դեպքում, երբ քաղվածքները չեն ենթարկվել իմունային նստվածքների, այդ քաղվածքներից ստացված ընդհանուր սպիտակուցի նույն քանակը վերակոդավորվել է SDS նմուշի բուֆերում, տաքացվել է մինչև 95 ° C, այնուհետև ուղղակիորեն կիրառվել SDS-PAGE- ի վրա և վերլուծվել Western blotting- ի միջոցով: (տես ՝ Segref et al. 2020)

Probe տիպի insonifier UP200St համար lysis

Ուլտրաձայնային բջիջների խանգարող UP200St միկրո հուշող S26d2- ով `լիզիզմի և սպիտակուցի արդյունահանման համար

Ուլտրաձայնային քսուկը նախասահմանված ջերմաստիճանի վերահսկողության ներքո

The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.Կենսաբանական նմուշները մշակելիս կարևոր է ջերմաստիճանի ճշգրիտ և հուսալի կարգավորումը: Բարձր ջերմաստիճանը նմուշներում սկսում է ջերմորեն հարուցված սպիտակուցի քայքայումը:
Նմուշի պատրաստման բոլոր մեխանիկական տեխնիկայում, մթնեցումը ջերմություն է ստեղծում: Այնուամենայնիվ, VialTweeter- ի օգտագործման ժամանակ նմուշների ջերմաստիճանը կարելի է լավ վերահսկել: Մենք ձեզ ներկայացնում ենք տարբեր ընտրանքներ ձեր նմուշների ջերմաստիճանը վերահսկելու և վերահսկելու համար, մինչդեռ դրանք պատրաստում ենք VialTweeter- ի և VialPress- ի հետ վերլուծության համար:

  1. Նմուշի ջերմաստիճանի մոնիտորինգ. Ուլտրաձայնային UP200St պրոցեսորը, որը վարում է VialTweeter- ը, հագեցած է խելացի ծրագրակազմով և խցանվող ջերմաստիճանի տվիչով: Միացրեք ջերմաստիճանի տվիչը UP200St- ի մեջ և տեղադրեք ջերմաստիճանի տվիչի ծայրը նմուշի խողովակներից մեկում: Թվային գունավոր սենսորային էկրանով UP200St- ի ընտրացանկում կարող եք տեղադրել ձեր նմուշի ձայնազերծման համար նախատեսված հատուկ ջերմաստիճանի տիրույթ: Ուլտրաձայնագրիչը ավտոմատ կերպով կդադարի, երբ առավելագույն ջերմաստիճանը հասնի և դադարի, մինչև նմուշի ջերմաստիճանը իջնի սահմանված ջերմաստիճանի temperature ցածր արժեքի: Ապա վերամշակումը կրկին ավտոմատ կերպով սկսվում է: Այս խելացի առանձնահատկությունը կանխում է ջերմության պատճառով դեգրադացիան:
  2. VialTweeter բլոկը կարող է նախապես հովացվել: Տեղադրեք VialTweeter բլոկը (միայն սոնոտրոդը առանց փոխարկիչի!) Սառնարանի կամ սառցարանի մեջ, որպեսզի տիտանի բլոկը նախապես հովացնի, օգնում է հետաձգել նմուշի ջերմաստիճանի բարձրացումը: Հնարավորության դեպքում նմուշը կարող է նաև նախապես հովացվել:
  3. Օգտագործեք չոր սառույց `հովացման ընթացքում սառչելու համար: Օգտագործեք չոր սառույցով լցված մակերեսային սկուտեղ և տեղադրեք VialTweeter- ը չոր սառույցի վրա, որպեսզի ջերմությունն արագ ցրվի:

Գտեք ուլտրաձայնային բջիջների օպտիմալ խանգարիչը ձեր լիզի կիրառման համար

Hielscher Ultrasonics- ը լաբորատորիաների, նստարանային և արդյունաբերական մասշտաբային համակարգերի բարձրորակ ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչների և միատարրացուցիչների երկար տարիների փորձառու արտադրող է: Ձեր մանրէային բջիջների մշակույթի չափը, ձեր հետազոտության կամ արտադրության նպատակը և բջիջի ծավալը, որը պետք է մշակվի մեկ ժամում կամ օրը, էական գործոններ են ՝ ձեր դիմումի համար ուլտրաձայնային բջիջների ճիշտ խանգարիչը գտնելու համար:
Hielscher Ultrasonics- ն առաջարկում է բազմազան նմուշների միաժամանակյա ձայնազերծման տարբեր լուծումներ (մինչև 10 սրվակ), ինչպես նաև զանգվածային նմուշներ (այսինքն `միկրոտիտր ափսեներ / 96 հորատանցք), դասական զոնդային տիպի լաբորատոր ուլտրաձայնիչ` տարբեր հզորության 50 մակարդակից մինչև 400 վտ ամբողջությամբ արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորների համար `մինչև 16,000 վտ մեկ միավորի համար` խոշոր արտադրության մեջ բջիջների առևտրի խափանումների և սպիտակուցների արդյունահանման համար: Բոլոր Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը կառուցված են 24/7/365 գործողության համար ՝ լիարժեք բեռի տակ: Ուժեղությունն ու հուսալիությունը մեր ուլտրաձայնային սարքերի հիմնական հատկություններն են:
Բոլոր թվային ուլտրաձայնային համասեռացուցիչները հագեցած են խելացի ծրագրակազմով, գունավոր սենսորային էկրանով և տվյալների ավտոմատ պրոտոկոլինգով, որոնք ուլտրաձայնային սարքը դարձնում են հարմար աշխատանքային գործիք լաբորատոր և արտադրական հաստատություններում:
Տեղեկացրեք մեզ, թե ինչպիսի բջիջներ, ինչ ծավալ, ինչ հաճախականությամբ և ինչ թիրախով պետք է մշակեք ձեր կենսաբանական նմուշները: Մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ուլտրաձայնային բջիջների ամենահարմար խանգարիչը `ձեր գործընթացի պահանջների համար:

Ստորև բերված աղյուսակը ցույց է տալիս մեր ուլտրաձայնային համակարգերի մոտավոր մշակման կարողության ցուցումը կոմպակտ ձեռքի հոմոգենիզատորներից և MultiSample ուլտրաձայնիչներից մինչև արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորներ առևտրային ծրագրերի համար.

խմբաքանակի Volume Ծախսի Rate Առաջարկվող սարքեր
96 հորատանցք / միկրոտիտր ափսեներ na UIP400MTP
10 սրվակ 0,5-ից 1,5 մլ-ով na VialTweeter ժամը UP200St
0.01-ից 250 մլ 5-ից 100 մլ / րոպե UP50H- ը
0.01-ից 500 մլ 10-ից մինչեւ 200 մլ / վրկ UP100H
10-ից մինչեւ 2000 մլ 20-ից 400 մլ / վրկ Uf200 ः տ,, UP400St
01-ից մինչեւ 20 լ 02-ից 4 լ / րոպե UIP2000hdT
10-ից 100 լ 2-ից 10 լ / րոպե UIP4000hdT
na 10-ից 100 լ / րոպե UIP16000
na ավելի մեծ Կլաստերի UIP16000

Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!

Հարցրեք ավելին

Խնդրում ենք օգտագործել ստորև բերված ձևը `ուլտրաձայնային պրոցեսորների, ծրագրերի և գնի վերաբերյալ լրացուցիչ տեղեկություններ ստանալու համար: Մենք ուրախ կլինենք ձեզ հետ քննարկել ձեր գործընթացը և առաջարկել ձեզ ուլտրաձայնային համակարգ, որը բավարարում է ձեր պահանջները:









Խնդրում ենք նկատի ունենալ մեր Գաղտնիության քաղաքականություն,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային համասեռացուցիչներ `լաբորատոր, պիլոտային և արդյունաբերական մասշտաբով ծրագրերը խառնելու, ցրելու, էմուլգացման և արդյունահանման համար:

Գրականություն / Հղումներ



Փաստեր Worth Իմանալով

Caenorhabditis elegans

C. elegans- ը շուրջ 1 մմ երկարությամբ ազատ ապրող թափանցիկ նեմատոդ է (կլոր որդ), որը սնվում է բակտերիաներով (օր. E. coli) և ունի համեմատաբար կարճ կյանքի ցիկլ: 20 ° C ջերմաստիճանում C. elegans- ի (N2) լաբորատոր շտամը միջին կյանքի տևողություն ունի մոտ 2-3 շաբաթ և սերնդի տևողություն `3-ից 4 օր: Երբ C. elegans- ը մեծ քանակությամբ աճեցվի, ինչը հեշտությամբ կարելի է անել ճշգրիտ վերահսկվող լաբորատոր պայմաններում, դրանք հեշտությամբ հնարավոր կլինի ստուգել նոր դեղամիջոցների աշխատանքային սկզբունքի, ինչպես նաև դրանց ազդեցության և փոխազդեցության համար մարդու հիվանդության բարդ մոլեկուլային գործընթացներում: Կարճ գենոմը, կյանքի կարճ ցիկլը և լաբորատոր պայմաններում պարզ վարվելը C. elegans- ը դարձնում են իդեալական մոդել օրգանիզմ այնպիսի հետազոտությունների համար, ինչպիսիք են գենոմիկան, պրոտեոմիկան, զարգացման կենսաբանությունը, հիվանդությունների հետազոտությունը, դեղերի զարգացումը և այլն:
Caenorhabditis elegans որդերը կարող են լինել կամ արական կամ հերմաֆրոդիտ: Հերմաֆրոդիտներն ունեն ինչպես տղամարդկանց, այնպես էլ կանանց վերարտադրողական օրգաններ: Այնուամենայնիվ, իգական որդեր գոյություն չունեն: Հերմաֆրոդիտները կարող են կամ ինքնաբերաբար բեղմնավորվել, կամ կարող են նաև բազմանալ արու որդերով: C. elegans- ն ամեն օր կարող է արտադրել ավելի քան 1000 ձու:
Քանի որ C. elegans- ը նյարդային համակարգ ունեցող ամենապարզ օրգանիզմներից մեկն է, նեմատոդային որդն օգտագործվում է 1963 թվականից ի վեր ՝ որպես հետազոտական հետազոտությունների օրինակելի օրգանիզմ: Նեյրոնները չեն արձակում գործողության ներուժը և չեն արտահայտում նատրիումի ցանկացած փակ լարում: Հերմաֆրոդիտում այս համակարգը բաղկացած է 302 նեյրոնից, որի օրինակը համապարփակ քարտեզագրվել է, այն, ինչ հայտնի է որպես կոնեկտոմ:
C. elegans գենոմի գեներից շատերն ունեն մարդու ֆունկցիոնալ նմանակները, ինչը այն դարձնում է չափազանց օգտակար մոդել մարդու հիվանդությունների համար և, օրինակ, օգտագործվում է զարգացման կենսաբանության, ծերացման և երկարակեցության վրա ազդող գործոնների ուսումնասիրության համար: Ավելին, C. elegans մուտանտները տրամադրում են մարդկային շատ հիվանդությունների օրինակներ ՝ ներառյալ նյարդաբանական խանգարումները (օրինակ ՝ Ալցհայմեր), բնածին սրտի հիվանդությունը և երիկամների հիվանդությունները:
Այս գործոնները C. elegans- ը դարձան խիստ արժեքավոր մոդել հետազոտական շատ ոլորտների համար: Հետևաբար, C. elegans- ը առաջին բազմաբջիջ օրգանիզմն էր, որն իր ամբողջ գենոմը հաջորդականացրեց: Գենոմը պարունակում է գնահատված 20,470 սպիտակուցային կոդավորող գեներ: C. elegans գեների մոտ 35% -ը ունեն մարդու հոմոլոգներ: Հատկանշական է, որ բազմիցս ցուցադրվել է, որ մարդու գեները փոխարինում են իրենց C. elegans հոմոլոգներին, երբ դրանք ներմուծվում են C. elegans: Ընդհակառակը, C. elegans- ի շատ գեներ կարող են գործել կաթնասունների գեների նման:

C. elegans– ի կյանքի տևողությունը մոտավոր է: 3 շաբաթ և բաղկացած է վեց կյանքի փուլերից. Սաղմնանյութ (ձվի փուլ), չորս թրթուրի փուլ (L1- ից L4) և մեծահասակների փուլ: Նեմատոդները դուրս են գալիս ձվերից, քանի որ L1- ի թրթուրները բաղկացած են 560 բջիջներից: Թրթուրի յուրաքանչյուր փուլում աճը տեղի է ունենում բջիջների բաժանման և բջիջների հիպերտրոֆիայի միջոցով: Կուտիկուլյար մոլտինգը կետադրում է յուրաքանչյուր թրթուրի փուլը: Եթե շրջակա միջավայրի ծանր պայմանները ազդարարում են զարգացող որդին, որ պայմանները դժվար թե աջակցեն մեծահասակների պտղաբերությանը, C. elegans- ը կարող է փոխել դրա զարգացումը և կազմել այլընտրանքային L3 թրթուրի փուլ, որտեղ թրթուրները անցնում են ավելի ցնցող փուլ: Այս վիճակում կենդանիները արտասովոր սթրեսի են ենթարկվում և երկարակյաց են և կարող են գոյատևել երեքից ինը ամիս: Dauer- ի թրթուրները մեկուսանում են դժվարություններից `կնքելով ինչպես աղեղային, այնպես էլ անալային խոռոչները, նեղացնելով աղիքները և միացնելով daf-16 / FOXO կախված գենետիկ ծրագիրը, որը, ի միջի այլոց, հանգեցնում է հատուկ dauer կուտիկուլի արտահայտմանը: (տես ՝ Հենդերսոն և ուրիշներ, 2006)

C. elegans Dauer larvae

Dauer larvae- ը նեմատոդային թրթուրների հասկացությունն է, որն անցել է զարգացման այլընտրանքային փուլ: «Դաուրի թրթուրներ» տերմինը, մասնավորապես, օգտագործվում է ռաբդիտիդների ընտանիքի որդերի համար, այդ թվում `Caenorhabditis elegans: «Դաուեր» բառը գերմանական ծագում ունի և նշանակում է «տևողություն” իմաստով “որոշակի ժամանակահատված »: Dauer- ի թրթուրները մտնում են լճացման մի տեսակ և կարող են գոյատևել ծանր պայմաններում: Եթե և երբ թրթուրը մտնում է ցնցող փուլ, կախված է շրջակա միջավայրի պայմաններից: Dauer- ի թրթուրները լայնորեն ուսումնասիրված են կենսաբանության մեջ, քանի որ լավարանները ցույց են տալիս դաժան միջավայրում գոյատևելու և երկար ժամանակ ապրելու արտակարգ ունակություն: Օրինակ, C. elegans dauer- ի թրթուրները կարող են գոյատևել մինչև չորս ամիս, ինչը շատ ավելի երկար է, քան բնականոն վերարտադրողական զարգացման ընթացքում նրանց կյանքի միջին տևողությունը ՝ մոտ երեք շաբաթ: