C. Elegans նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստում

Կենսաբանության մեջ լայնորեն կիրառվող մոդելային օրգանիզմ է C. elegans-ը, նեմատոդ որդը։ Նմուշի պատրաստումը նախքան վերլուծությունը պահանջում է լիզի, սպիտակուցի և լիպիդների արդյունահանում, ինչպես նաև ՌՆԹ-ի մասնատում, որը կարող է հուսալիորեն իրականացվել ձայնային լուծույթի միջոցով: Ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչները հուսալի, բարդ և հեշտ օգտագործվող սարքեր են C. elegans նմուշների արագ պատրաստման համար:

C. Elegans նմուշների ուլտրաձայնային պատրաստում

C. elegans-ը կլոր որդերն են, որոնք լայնորեն օգտագործվում են հետազոտական լաբորատորիաներում՝ գենոմիկայի, զարգացման կենսաբանության և հիվանդությունների ուսումնասիրության համար: C. elegans-ի գենոմի շատ գեներ ունեն մարդկանց ֆունկցիոնալ նմանակներ: Այսպիսով, նեմատոդ որդը չափազանց օգտակար մոդել է մարդու հիվանդությունների համար։ C. elegans-ի լայն կիրառման մյուս առավելություններն են՝ նրա հեշտ և էժան աճեցումը բակտերիաներ պարունակող ափսեների վրա (օրինակ՝ E. coli), թափանցիկությունը, հարմար մշակումը, ինչպես նաև որդերն ավելի երկար սառեցնելու և պահելու հնարավորությունը:
Սպիտակուցների և լիպիդների վերլուծությունը սովորական ընթացակարգեր են լաբորատորիաներում, և ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստումը հաստատված մեթոդ է C. elegans նեմատոդների լիզավորման համար զարգացման յուրաքանչյուր փուլում (այսինքն՝ սաղմերը, L1-L4 թրթուրները, մեծահասակները): Քանի որ C. elegans-ը նաև օգտագործվում է որպես սպիտակուցային արտահայտման համակարգ՝ նպատակային սպիտակուցների գերարտահայտման համար, պահանջվում է հուսալի, վերարտադրելի լիզի և սպիտակուցի արդյունահանման մեթոդ, որը տալիս է սպիտակուցի բարձր ելք: Ուլտրաձայնային բջիջների խանգարման և արդյունահանման համակարգերը հասանելի են որպես զոնդային տիպի հոմոգենիզատորներ և որպես բազմակի նմուշային ուլտրաձայնիչներ: Նմուշների հարմար պատրաստման և բոլոր տեսակի նմուշների չափերի թվերի համար՝ Hielscher Ultrasonics-ն ունի իդեալական ուլտրաձայնային բջիջների խանգարող ձեր լաբորատոր ընթացակարգի համար:

Ուլտրաձայնային արձանագրություններ C. Elegans-ի խափանումների և լիզիսի համար

C. elegans-ի ուլտրաձայնային համասեռացումը և լիզը, ինչպես նաև սպիտակուցների և լիպիդների հետագա արդյունահանումը կարող են իրականացվել տարբեր պրոցեդուրաների միջոցով՝ օգտագործելով տարբեր համասեռացման և լիզի բուֆերներ և այլն: Լիզիզի բոլոր արձանագրություններն ընդհանուր են, որ նմուշները պետք է անընդհատ պահվեն սառույցի վրա՝ կանխելու սպիտակուցի քայքայումը: Ստորև ձեզ ենք ներկայացնում մի քանի հուսալի և արագ ուլտրաձայնային լիզի և արդյունահանման արձանագրություններ՝ բարձրորակ սպիտակուց կամ լիպիդ պարունակող C. elegans նմուշների պատրաստման համար:

Ուլտրաձայնային C. elegans Lysis-ի առավելությունները

• Հուսալի
• վերարտադրելի
• ճշգրիտ վերահսկվող ջերմաստիճանը
• գործընթացի հուսալի վերահսկում
• նուրբ մեթոդ
• հեշտ է կիրառել
• Անվտանգ

Ուլտրաձայնային սպիտակուցի արդյունահանում C. elegans նմուշներից

C. elegans որդերի ուլտրաձայնային լիզը և սպիտակուցի արդյունահանումը կարող են իրականացվել տարբեր արձանագրությունների միջոցով: Ստորև ձեզ ենք ներկայացնում մի քանի վստահելի և արագ լիզի արձանագրություններ՝ վերարտադրվող սպիտակուցի արդյունահանման արդյունքների համար:

C. elegans Worms-ից ցիտոզոլային էքստրակտի արագ պատրաստում Sonication-ով

Հետևյալ արձանագրությամբ դուք կարող եք պատրաստել C. elegans լիզատները 30 րոպեից պակաս ժամանակում:
C. elegans-ի հավաքածու
Ընտրեք ցանկալի C. elegans որդերը 1,5 մլ խողովակային ֆոսֆատով բուֆերացված ֆիզիոլոգիական լուծույթի մեջ (PBS) կամ լվացեք դրանք ափսեից 1,5 մլ PBS-ով: Ցենտրիֆուգեք 1 րոպե 2000 պտույտ/րոպե արագությամբ դեպի գնդիկավոր: Նմուշները մշտապես պահեք սառույցի վրա:
Այնուհետև որդերը երկու անգամ լվացեք PBS-ով:
Այնուհետև որդերը երկու անգամ լվանալ ddH-ով₂Օ.
Կրկին կասեցրեք որդերը առնվազն 500 մլ հոմոգենացման բուֆերի (HB) մեջ: Որդի նմուշներն այժմ պատրաստ են ուլտրաձայնային լուծարման:
Սպիտակուցի էքստրակտի ավելի բարձր որակի համար դուք կարող եք նվազեցնել բակտերիալ աղտոտվածությունը՝ յուրաքանչյուրը 5 րոպե լվանալով որդերը PBS-ով և ստերիլ, ծայրահեղ մաքուր ջրով (ddH):₂O) կամ կատարել սախարոզայի լողացում: Որդիների նմուշները անընդհատ սառույցի վրա պահեք:

Ուլտրաձայնային C. elegans Lysis արձանագրություն

• Համոզվեք, որ նախապես պատրաստում եք ուլտրաձայնային սարքը, որպեսզի ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորը պատրաստ լինի օգտագործման (զոնդը տեղադրված է, նախապես տեղադրված է ձայնագրման ծրագիրը):

Եթե ձեր ուլտրաձայնային սարքը կանգնած է, տեղադրեք սառցե բաղնիքը ձեր նմուշի խողովակների հետ ուլտրաձայնային զոնդի տակ և մտցրեք ուլտրաձայնային զոնդը 1,5 մլ խողովակի մեջ:

• UP200St կամ UP200Ht-ով C. elegans լիզիսի դեպքում ուլտրաձայնային ախտորոշումը պետք է կատարվի՝ օգտագործելով միկրոծածկույթ (օրինակ՝ 2 մմ զոնդ S26d2, տես ձախ նկարը) 40% ամպլիտուդով 1 վրկ 30 վրկ դադարներով: 5 ձայնային ցիկլեր յուրաքանչյուր 1 վայրկյանի համար 30 վրկ դադարներով իդեալական են C. elegans lysis-ի համար: Եթե դուք կատարում եք լիզի առաջին անգամ, դուք կարող եք ստուգել լիզի առաջընթացը նմուշի փոքր մասերում յուրաքանչյուր իմպուլսից հետո՝ օգտագործելով մանրադիտակ:
• Լիզիսը հաջողությամբ ավարտվում է, երբ որդերն ընդհատվում են: Over-sonication-ը հանգեցնում է միջուկների կոտրմանը և տեսանելի է դառնում, երբ նմուշը դառնում է մածուցիկ կամ փրփուր: Նմուշի քայքայումը կանխելու համար անհրաժեշտության դեպքում օգտագործեք ավելի շատ իմպուլսներ: Մի ավելացրեք յուրաքանչյուր ուլտրաձայնային զարկերակային ցիկլի ժամանակը բարձրորակ սպիտակուցային քաղվածքներ ստանալու համար:
• Մաքրել բջիջների լիզատը՝ ցենտրիֆուգելով ուլտրաձայնային լուծվող որդերը 14000 պտ/րոպե արագությամբ 10 րոպե 4ºC-ում:
• Այնուհետև տեղափոխեք վերին նյութը թարմ խողովակի մեջ և պատրաստվեք իմունային նստվածքի կամ այլ փորձաքննության:

Նշում համասեռացման բուֆերի համար. Պատրաստեք համասեռացման բուֆերը վերը նշված ուլտրաձայնային լիզի արձանագրության համար հետևյալ կերպ.

C. elegans-ի բարձր թողունակության լուծարումը 96 ջրհորի թիթեղներում՝ օգտագործելով UIP400MTP Plate Sonicator

C. elegans Lysis (չափահաս նեմատոդներ)
UIP400MTP 80% ամպլիտուդ, 20 ցիկլ (յուրաքանչյուր ձայնային ցիկլ՝ 30 վ միացված, 30 վայրկյան անջատված)
Լիզիսի բուֆեր.

• Տարբերակ 1) 4% SDS, 0.1 M Tris/HCl pH 8.0, 1 mM EDTA
• Տարբերակ 2) համատեղ իմունային նստվածքի համար (co-IP). 10 mM Tris HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.5 % NP-40 (Complete proteinase inhibitor cocktail)

Բարձր թողունակությամբ ԴՆԹ-ի մասնատում
C. elegans (չափահաս նեմատոդներ) ԴՆԹ 200-300bp՝ UIP400MTP թիթեղների ձայնային սարք – սահմանել 80% ամպլիտուդ, 30 իմպուլս – յուրաքանչյուրը 30 վայրկյան միացված, 30 վայրկյան անջատված

UIP400MTP Plate Sonicator բարձր թողունակությամբ նմուշների պատրաստման համար նմուշները միատեսակ հնչյունավորում է բազմաբնույթ, միկրոտիտրային թիթեղներում և 96 ջրհորի թիթեղներում

C. elegans-ի ուլտրաձայնային լիզիսը հարաբերության քանակական մաքրման վերլուծությունների համար

C. elegans-ի սաղմերը (մեկ կրկնակի մոտ 2 միլիոն) թարմ հավաքվել են կենսաբանական եռակի՝ սպիտակեցնելով երիտասարդ հղի հերմաֆրոդիտները և սառույցի վրա հնչյունավորվել (ցիկլ՝ 0,5 վրկ, ամպլիտուդ՝ 40–45%, 5 հարված/սեսիա, 5 սեանս, սեանսների միջև ընդմիջում։ 30 վրկ; UP200S ուլտրաձայնային պրոցեսոր միկրո ծայրով S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) լիզի բուֆերում (ընդհանուր ծավալը՝ ~600 μl; 50 մմ Tris-HCl, pH 7.4, 100 մմ KCl, 1 մմ MgCl2, 1 մմ EGTA, 1 մմ DTT, 10% DTT, 10% , պրոթեզերոնի ինհիբիտորների խառնուրդ, 0.1% Nonidet P-40 փոխարինող): Sonication-ից հետո Nonidet P-40 Substitute-ը ավելացվել է մինչև 1% և լիզատները ինկուբացվել են գլխի վրայով պոչով պտտմամբ 4°C-ում 30 րոպե, որին հաջորդել է ցենտրիֆուգացիա 20000 × գ 20 րոպե 4°C-ում: Այնուհետև մաքրված լիզատը ասպիրացվել է առանց վերին լիպիդային շերտը խանգարելու և կիսով չափ կիսվել կամ հակա-GFP ագարոզայի ուլունքների կամ արգելափակված հսկիչ բշտիկների (40-50 մկլ): 60–90 րոպե 4°C ջերմաստիճանում պտտվելուց հետո ուլունքները մեկ անգամ լվացվել են լիզի բուֆերով, որը պարունակում է 0,1% Nonidet P-40 փոխարինող, որին հաջորդել է երկու անգամ լվանալ I-ի բուֆերում (25 մմ Tris-HCl, pH): 7.4, 300 մմ NaCl, 1 մմ MgCl2) կամ բուֆեր II (1 մմ Tris-HCl, pH 7.4, 150 մմ NaCl, 1 մմ MgCl2) կամ երկուսն էլ: GFP:MBK-2 pull-down-ների համար երկու առանձին փորձեր են իրականացվել՝ օգտագործելով լվացման տարբեր պայմաններ: Սպիտակուցները զտվել են ուղեծրային թափահարմամբ 50 մկլ 6 մ urea/2 M թիուրիա սենյակային ջերմաստիճանում: MBK-1::GFP pull-down փորձերի համար սպիտակուցները երկու անգամ զտվել են՝ թափահարելով 50 մկլ 8 մ գուանիդինիումի քլորիդում 90°C-ում, որին հաջորդել է էթանոլային տեղումները: Էլյուտացված սպիտակուցի նմուշներն այնուհետև մարսվել են լուծույթում:
(տես Chen et al., 2016)

Ուլտրաձայնային ճիճուների համասեռացում և լիզիս

C.elegans lysis-ի և սպիտակուցի արդյունահանման ընթացակարգի համար մեկ նմուշի համար հավաքվել է համապատասխան փուլի 30000 նեմոտոդ և լվացվել սառցե S-basal-ով, կենտրոնացված ցենտրիֆուգմամբ 1500 rpm-ում 2 րոպե, վեց անգամ լվանալ սառույցով սառը S-ով: բազալ՝ մնացորդային բակտերիաները հեռացնելու համար, այնուհետև պահվում է սառույցի վրա մինչև օգտագործման պատրաստ լինելը: Սպիտակուցի արդյունահանման համար հղիության ընթացքում հասուն որդերին թույլատրվեց ձևավորել կոմպակտ գնդիկ վերջին S-basal լվացումից հետո: Որդիների գնդիկները այնուհետև կրկին կասեցվել են 1 մլ սառույցով արդյունահանման բուֆերի մեջ [20 մՄ կալիումի ֆոսֆատ, pH 7.4, 2 մՄ EDTA, 1% Triton-X-100, պրոթեզերոնի ինհիբիտորներ (Sigma P2714)] և անմիջապես մշակվել:
∼30,000 հղիության ընթացքում հասուն ճիճուներ (համապատասխանում է ~100 մգ թաց քաշին), սառույցի վրա ձայնագրվել են aa զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարքի միջոցով (օրինակ՝ UP50H MS2 միկրո ծայրով) 40% ամպլիտուդով 10 ցիկլով 3 վայրկյան, 30 վայրկյանում: 1 մլ սառույցով արդյունահանման բուֆեր: (տես Բասխարան և այլք 2012 թ.)

Ուլտրաձայնային լիպիդների հեռացում C. elegans-ից

Լիպիդոմիկայի մեջ՝ մետաբոլոմիկայի ճյուղ, կենսաբանական համակարգերի լիպիդային կոմպլեմենտը բնութագրվում և վերլուծվում է։ C. elegans-ը լայնորեն օգտագործվում է լիպիդոմիկայի մեջ՝ ուսումնասիրելու մետաբոլիկ լիպիդների փոխազդեցությունը և դրանց ազդեցությունը առողջության և կյանքի տեւողության վրա:
Ուլտրաձայնային լուծույթը և արդյունահանումը օգտագործվում է C. elegans-ի սաղմերից, թրթուրներից և հասուն որդերից լիպիդներ, ինչպիսիք են սֆինգոլիպիդները, ազատելու համար: Ultrasonication-ը օգտագործվում է ճիճուների համասեռացման պատրաստման և հետագայում նմուշից լիպիդները հանելու համար:
Արձանագրություն C. elegans-ից ուլտրաձայնային լիպիդների արդյունահանման համար
Հալեցրեք C. elegans գնդիկը սառույցի վրա և նորից կասեցրեք 0,5 մլ ուլտրաջրով: C. elegans-ի նմուշները 1,5 մլ փորձանոթների մեջ լուծարեք՝ միաժամանակ պահելով նմուշները սառույցի վրա:
Sonication կարող է իրականացվել օգտագործելով զոնդ-ուլտրաձայնային, ինչպիսիք են UP200Ht, ուլտրաձայնային նմուշի պատրաստման միավորը VialTweeter (10 նմուշի միաժամանակյա ձայնագրում) կամ UIP400MTP (բազմահոր թիթեղների, ինչպիսիք են 96 ջրհորի թիթեղները, ձայնագրման համար): UP200Ht-ով ուլտրաձայնային լուծարման համար օգտագործեք S26d2 միկրո ծայրը: Նախապես սահմանեք ուլտրաձայնային ցիկլի ռեժիմը թվային ընտրացանկում: Սահմանեք ամպլիտուդը 10% և ձայնային ցիկլի ռեժիմը 2 վրկ իմպուլսների 20 ցիկլով 30 վրկ դադարով: յուրաքանչյուր ուլտրաձայնային պուլսացիայի պայթյունի միջև:
Սուպերնատենտները տեղափոխեք պտուտակավոր գլխարկով ապակե խողովակների մեջ: Կատարեք Folch-ի արդյունահանում` յուրաքանչյուր ապակե խողովակին ավելացնելով 1 մլ ուլտրաջուր, որից հետո յուրաքանչյուր ապակե խողովակին ավելացնելով 6 մլ քլորոֆորմ/մեթանոլ (հարաբերակցությունը = 2:1):
Յուրաքանչյուր ապակե խողովակ պտտեցնել 30 վայրկյան 4 անգամ: Խողովակները ցենտրիֆուգեք 1258 xg-ով 15 րոպե (Eppendorf, 5810 R)՝ ֆազային տարանջատումը հետագա ուժեղացնելու համար: Ստորին հիդրոֆոբ մասնիկը տեղափոխեք մաքուր ապակյա խողովակի մեջ ապակե Պաստերի պիպետտի միջոցով: Չորացնել ստորին հիդրոֆոբ մասնիկը ազոտի հոսքի տակ ազոտի գոլորշիացման սարքում: Չորացրած գնդիկը պահեք -80 °C սառնարանում մինչև օգտագործելը:

Ճիճու լիզատների ուլտրաձայնային պատրաստում

Որդի լիզատ. L4 փուլի որդերը հավաքվել և երեք անգամ լվացվել են M9 բուֆերով (42,26 մՄ Na₂HPO₄, 22,04 մՄ ԿՀ₂PO₄85,56 մՄ NaCl և 0,87 մՄ MgSO₄) բոլոր բակտերիաները հեռացնելու համար: M9 բուֆերի հնարավորինս շատ հեռացումից հետո որդերը կրկին կասեցվել են լիզի բուֆերում՝ 50 մՄ HEPES, 50 մՄ KCl, 1 մՄ EDTA, 1 մՄ EGTA, 5 մՄ ֆոսֆատ β-գլիցերին, 0,1% (v/v) Triton X-100, 50 մՄ նատրիումի ֆտորիդ, 1 մՄ նատրիումի օրթովանադատ, 5 մՄ նատրիումի պիրոֆոսֆատ, 0,2 մՄ ֆենիլմեթանասուլֆոնիլֆտորիդ և պրոթեզերոնի արգելակիչ: Որդերը սառեցվել են հեղուկ ազոտի մեջ և հալվել 37°C ջերմաստիճանում երեք անգամ, այնուհետև որդերը չոր սառույցի վրա ձայնագրվել են ուլտրաձայնային VialTweeter միավորով՝ 10 նմուշի խողովակների միաժամանակյա պատրաստման համար: Sonication-ը իրականացվել է 50% ամպլիտուդով 2 վրկ 10 ցիկլով: 30 վրկ դադարով` ձայնային ցնցումների միջև ընկած ժամանակահատվածում: Այնուհետև նմուշները ցենտրիֆուգվել են 12000 rpm 4°C-ում 15 րոպե: Սուպերնաթանտը հավաքվել և պահվել է -70°C ջերմաստիճանում: Բրեդֆորդի վերլուծության միջոցով սպիտակուցի քանակական որոշման համար օգտագործվել է մասնիկ:
Ընդհանուր գլուտատիոնի, GSH-ի և GSSG-ի որոշում. գլուտատիոնի քանակականացման համար լիզատները և որոշումը կատարվել են նույն օրը: Գլյուկոզայով սնված և հսկիչ L4 թրթուրները հավաքվել և երեք անգամ լվացվել են M9 բուֆերով: M9 բուֆերը որքան հնարավոր է հեռացնելուց հետո որդերը նորից կախեցին սառցե մետաֆոսֆորական թթուում (5% վ/վ), այնուհետև որդերը սառույցի մեջ ձայնագրվեցին ուլտրաձայնային VialTweeter-ով 50% ամպլիտուդով տասը ձայնային ցիկլերի 2 վայրկյանում: 30 վրկ. դադար յուրաքանչյուր ցիկլի միջև: Այնուհետև ցենտրիֆուգում են 12000 rpm 4 ̊C-ում 15 րոպե:
(տես Alcántar-Fernández et al., 2018)

C. elegans Նմուշի պատրաստում նախքան իմունային տեղումները և Western Blotting-ը

Կարճ ասած, սաղմնային էքստրակտների համար C. elegans L1 թրթուրներն աճեցվել են լայնածավալ հեղուկ S-միջին կուլտուրաներում մինչև հասուն տարիք: Սաղմերը հավաքվել են սպիտակեցնող ստանդարտ մեթոդի կիրառմամբ և կասեցվել լիզի բուֆերի մեջ (50 մՄ Տրիս, pH 7,5, 100 մՄ KCl, 1 մՄ EDTA, 1 մՄ MgCl2, 8,7% գլիցերին, 0,05% NP-40, 1 Հիբիթեյթ, 100 մՄ KCl, 1 mM MgCl2, 8,7% գլիցերին, 0,05% NP-40, 1, 1, 1, 1, 1, 200,000,000 mM) 1 * Ֆոսֆատազի արգելակող կոկտեյլ I և II), արագ սառեցված հեղուկ ազոտի մեջ և լուծարվեց ուլտրաձայնային բջիջների խախտմամբ՝ օգտագործելով ուլտրաձայնային սարք՝ միկրոծածկույթով, ինչպիսին է UP200Ht S26d2-ով 10 վրկ 10 իմպուլսների համար 30% ամպլիտուդով: Եթե ավելի մեծ քանակությամբ նմուշներ պետք է պատրաստվեն ուլտրաձայնային VialTweeter կամ MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP-ը լավ թիթեղների համար խորհուրդ է տրվում: Sonication-ից հետո քաղվածքները նախապես մաքրվել են ցենտրիֆուգմամբ 30000 գ-ում 20 րոպե 4°C-ում: Նախապես մաքրված էքստրակտը (300 մկգ ընդհանուր սպիտակուց) ինկուբացվել է 40 մկ * գ հակա-CDC-25.1 հարաբերակցությամբ մաքրված հակամարմինով (այս ուսումնասիրությունը)՝ խաչաձև կապված A-ագարոզայի սպիտակուցի հետ կամ որպես հսկողություն՝ ճագարի իմունոգլոբուլինի նման քանակություն։ (Ig)G, որը խաչաձև կապված է սպիտակուցի A-agarose-ի հետ, օգտագործվել է 1% NP-40 պարունակող 200 մկլ լիզի բուֆերի ընդհանուր ծավալում, որի ընդգրկումը նվազեցրել է սպիտակուցների ոչ սպեցիֆիկ կապը մատրիցին: Նմուշները պտտվել են 1 ժամ 4°C-ում, ուլունքները երեք անգամ լվացվել են լիզի բուֆերով և զտվել 30 մկլ գլիցին/HCl և 200 մՄ NaCl, pH 2,2: Իմունային նստվածքից հետո էլուատները նոսրացվեցին 30 µ*l SDS նմուշի բուֆերի մեջ, տաքացրին մինչև 95°C 4 րոպե, և սովորաբար ընդհանուրի 3%-ը մուտքագրման համար և 30%-ը լուծվող նյութերի համար կիրառվում էին SDS-PAGE-ի վրա, որին հաջորդում էր Western blotting հակահայկական -CDC-25.1 (1:400), հակա-LIN-23 (1:750), հակա-ուբիկվիտին (1:1000), հակա-GSK3 * (1:500) կամ հակա-***β-ակտին (1: 2000) հակամարմիններ. Այն դեպքում, երբ քաղվածքները չեն ենթարկվել իմունային նստվածքի, այդ քաղվածքներից ստացված ընդհանուր սպիտակուցի նույն քանակությունը կրկին կասեցվել է SDS նմուշի բուֆերում, տաքացվել մինչև 95°C, այնուհետև ուղղակիորեն կիրառվել SDS-PAGE-ի վրա և վերլուծվել Western blotting-ով: (տես Segref et al. 2020)

Ուլտրաձայնային լիզիս ճշգրիտ ջերմաստիճանի հսկողության ներքո

Ջերմաստիճանի ճշգրիտ և հուսալի հսկողությունը կարևոր է կենսաբանական նմուշների հետ աշխատելիս: Բարձր ջերմաստիճանները նմուշներում սկսում են ջերմային ազդեցությամբ առաջացած սպիտակուցի քայքայումը:
Ինչպես բոլոր մեխանիկական նմուշների պատրաստման մեթոդները, այնպես էլ sononication-ը ջերմություն է ստեղծում: Այնուամենայնիվ, նմուշների ջերմաստիճանը կարելի է լավ վերահսկել VialTweeter-ն օգտագործելիս: Մենք ձեզ ենք ներկայացնում տարբեր տարբերակներ՝ վերահսկելու և վերահսկելու ձեր նմուշների ջերմաստիճանը, մինչդեռ դրանք պատրաստում եք VialTweeter-ի և VialPress-ի միջոցով վերլուծության համար:

1. Նմուշի ջերմաստիճանի մոնիտորինգ. UP200St ուլտրաձայնային պրոցեսորը, որը վարում է VialTweeter-ը, հագեցած է խելացի ծրագրաշարով և խցանվող ջերմաստիճանի սենսորով: Միացրեք ջերմաստիճանի ցուցիչը UP200St-ի մեջ և տեղադրեք ջերմաստիճանի սենսորի ծայրը նմուշի խողովակներից մեկում: Թվային գունավոր սենսորային էկրանի միջոցով դուք կարող եք UP200St-ի ընտրացանկում սահմանել հատուկ ջերմաստիճանի միջակայք ձեր նմուշի ձայնային ախտահանման համար: Ուլտրաձայնային սարքը ավտոմատ կերպով կդադարի, երբ առավելագույն ջերմաստիճանը հասնի և կդադարի մինչև նմուշի ջերմաստիճանը իջնի սահմանված ջերմաստիճանի Δ-ի ցածր արժեքին: Այնուհետև նորից ինքնաբերաբար կսկսվի ձայնագրումը: Այս խելացի հատկությունը կանխում է ջերմային դեգրադացիան:
2. VialTweeter բլոկը կարող է նախապես սառեցվել: Տեղադրեք VialTweeter բլոկը (միայն sonotrode-ն առանց փոխարկիչի!) սառնարանի կամ սառնարանի մեջ, որպեսզի նախապես հովացվի տիտանի բլոկը, որն օգնում է հետաձգել ջերմաստիճանի բարձրացումը նմուշում: Հնարավորության դեպքում, նմուշն ինքնին կարող է նաև նախապես սառեցնել:
3. Օգտագործեք չոր սառույցը սառչելու համար՝ ձայնային ախտահանման ժամանակ: Օգտագործեք չոր սառույցով լցված մակերեսային սկուտեղ և տեղադրեք VialTweeter-ը չոր սառույցի վրա, որպեսզի ջերմությունը արագորեն ցրվի:

Գտեք օպտիմալ ուլտրաձայնային բջիջների խանգարիչը ձեր Lysis հավելվածի համար

Hielscher Ultrasonics-ը լաբորատորիաների, նստարանների և արդյունաբերական մասշտաբների համակարգերի համար բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային բջիջների խանգարողների և համասեռացուցիչների երկարամյա փորձառու արտադրող է: Ձեր բակտերիալ բջիջների կուլտուրայի չափը, ձեր հետազոտության կամ արտադրության նպատակը և մեկ ժամում կամ օրում մշակվող բջիջների ծավալը էական գործոններ են ձեր կիրառման համար ուլտրաձայնային բջիջների ճիշտ խանգարող գտնելու համար:
Hielscher Ultrasonics-ն առաջարկում է տարբեր լուծումներ բազմակի նմուշների (մինչև 10 սրվակ), ինչպես նաև զանգվածային նմուշների (այսինքն՝ միկրոտիտրային թիթեղներ / 96 ջրհորի թիթեղներ) միաժամանակյա ձայնագրման համար, դասական զոնդի տիպի լաբորատոր ուլտրաձայնային սարք՝ 50-ից մինչև տարբեր հզորության մակարդակներով։ 400 Վտ մինչև լիովին արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորներ մինչև 16000 վտ հզորությամբ մեկ միավորի համար առևտրային բջիջների խզման և սպիտակուցի արդյունահանման համար մեծ արտադրության մեջ: Hielscher-ի բոլոր ուլտրաձայնային սարքերը կառուցված են 24/7/365 աշխատանքի համար՝ լրիվ ծանրաբեռնվածության ներքո: Ամուրությունն ու հուսալիությունը մեր ուլտրաձայնային սարքերի հիմնական հատկանիշներն են:
Բոլոր թվային ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորները հագեցած են խելացի ծրագրաշարով, գունավոր հպման էկրանով և տվյալների ավտոմատ արձանագրումով, որոնք ուլտրաձայնային սարքը դարձնում են հարմար աշխատանքային գործիք լաբորատորիայում և արտադրական օբյեկտներում:
Տեղեկացրեք մեզ, թե ինչպիսի բջիջներ, ինչ ծավալով, ինչ հաճախականությամբ և ինչ թիրախով պետք է մշակեք ձեր կենսաբանական նմուշները։ Մենք ձեզ խորհուրդ կտանք ուլտրաձայնային բջիջների ամենահարմար խանգարիչը ձեր գործընթացի պահանջներին համապատասխան:

Ստորև բերված աղյուսակը ցույց է տալիս մեր ուլտրաձայնային համակարգերի մոտավոր մշակման հզորությունը՝ կոմպակտ ձեռքի հոմոգենիզատորներից և MultiSample Ultrasonicators-ից մինչև արդյունաբերական ուլտրաձայնային պրոցեսորներ առևտրային կիրառությունների համար.