ઉચ્ચ તીવ્રતાવાળા સોનિકેશનનો ઉપયોગ કરીને માઇક્રોપ્લેટમાં યીસ્ટ કોષોનું લાયસિસ

સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાનીઓ અને જીવનવિજ્ઞાનના સંશોધકો, જેઓ Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii, અને અન્ય યીસ્ટ પ્રણાલીઓ સાથે કામ કરે છે, તેઓ આ પડકાર જાણે છે: યીસ્ટ કોષો મજબૂત હોય છે, પુનરુત્પાદનક્ષમ લાયસિસ કરવું મુશ્કેલ હોઈ શકે છે, અને જ્યારે અનેક સ્ટ્રેન્સ, ક્લોન્સ, સંવર્ધન પરિસ્થિતિઓ અથવા અભિવ્યક્તિ કન્સ્ટ્રક્ટ્સનું સ્ક્રીનિંગ કરવાનું હોય, ત્યારે નમૂનાઓનું હાથેથી વિઘટન ઝડપથી પ્રક્રિયામાં અવરોધ બની જાય છે.

સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાન, આણ્વિક જીવવિજ્ઞાન અને પ્રોટીન વિશ્લેષણ માટે ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળું યીસ્ટ લાયસિસ

UIP400MTP (400 W) અને UIP550MTP (550 W) જેવા Hielscher માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટર્સ સીધા માઇક્રોપ્લેટમાં યીસ્ટ કોષોના યાંત્રિક લાયસિસ માટે ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળો ઉકેલ પૂરો પાડે છે. પ્રોબ વડે નમૂનાઓની એક પછી એક પ્રક્રિયા કરવાને બદલે, સમગ્ર માઇક્રોપ્લેટનું એકસમાન પરિસ્થિતિઓમાં સોનિકેશન કરી શકાય છે. આથી અલ્ટ્રાસોનિક યીસ્ટ લાયસિસ વધુ ઝડપી, વધુ પુનરુત્પાદનક્ષમ અને આધુનિક સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાન, પ્રોટીન અભિવ્યક્તિ, એન્ઝાઇમ સ્ક્રીનિંગ અને ઓમિક્સ કાર્યપ્રવાહોમાં સંકલિત કરવું વધુ સરળ બને છે.
તમારે P. pastorisમાંથી રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીન મુક્ત કરવાના હોય, એન્ઝાઇમ પરીક્ષણો માટે યીસ્ટ લાયસેટ્સ તૈયાર કરવાના હોય, પ્રોટીન વિશ્લેષણ માટે S. cerevisiaeનું વિઘટન કરવાનું હોય કે ડઝનબંધ યીસ્ટ ક્લોન્સનું સમાંતર સ્ક્રીનિંગ કરવાનું હોય, Hielscher માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટર્સ ચોક્કસ પ્રક્રિયા નિયંત્રણ સાથે શક્તિશાળી કેવિટેશન આધારિત કોષ વિઘટન પ્રદાન કરે છે.

યીસ્ટ કોષો માટે કાર્યક્ષમ યાંત્રિક લાયસિસ શા માટે જરૂરી છે

ઘણા બેક્ટેરિયલ અથવા સસ્તન પ્રાણીઓના કોષોની સરખામણીમાં યીસ્ટ કોષોનું લાયસિસ કરવું વધુ મુશ્કેલ છે, કારણ કે મુખ્યત્વે પોલિસેકેરાઇડ્સ, ગ્લુકાન્સ, મેનોપ્રોટીન્સ અને કાઇટિનથી બનેલી કઠોર કોષભિત્તિ તેમનું રક્ષણ કરે છે. આ કોષભિત્તિ યાંત્રિક સ્થિરતા પૂરી પાડે છે, પરંતુ તે અંતઃકોષીય પ્રોટીન, ન્યુક્લિક એસિડ્સ, ચયાપચયજ પદાર્થો અને એન્ઝાઇમ્સના મુક્ત થવાને પણ મર્યાદિત કરે છે.
યીસ્ટ લાયસિસની પરંપરાગત પદ્ધતિઓમાં બીડ બીટિંગ, એન્ઝાઇમ દ્વારા પાચન, હિમીકરણ–પીગળવાના ચક્રો, રાસાયણિક લાયસિસ અને પ્રોબ પ્રકારનું સોનિકેશન સામેલ છે. આ પદ્ધતિઓ અસરકારક હોઈ શકે છે, પરંતુ તેમની મર્યાદાઓ પણ છે. બીડ બીટિંગથી કચરો ઉમેરાઈ શકે છે અને ગરમી પેદા થઈ શકે છે, એન્ઝાઇમ દ્વારા પાચન ખર્ચ અને પરિવર્તનશીલતા વધારી શકે છે, અને જ્યારે મોટી સંખ્યામાં નમૂનાઓની પ્રક્રિયા કરવાની હોય ત્યારે એક સમયે એક નમૂનાનું પ્રોબ સોનિકેશન સમય માંગી લે છે.
ઉચ્ચ તીવ્રતાવાળું, કેન્દ્રિત અલ્ટ્રાસોનિક કેવિટેશન યીસ્ટ સસ્પેન્શન પર તીવ્ર યાંત્રિક કર્તન બળો, દબાણના વધઘટ અને સૂક્ષ્મ પ્રવાહો લાગુ કરીને આ મર્યાદાઓ દૂર કરે છે. તેના પરિણામે કોષભિત્તિઓ અને કોષપટલોનું ઝડપી વિઘટન થાય છે, અંતઃકોષીય પદાર્થોનું મુક્ત થવું સુધરે છે અને પ્લેટ ફોર્મેટમાં અત્યંત પુનરુત્પાદનક્ષમ નમૂના તૈયારી થાય છે.

યીસ્ટ નમૂનાઓની સમાંતર તૈયારી માટે માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેશન

Hielscher UIP400MTP અને UIP550MTP માઇક્રોપ્લેટ્સ, મલ્ટીવેલ પ્લેટ્સ, PCR પ્લેટ્સ અને યોગ્ય નમૂના રેક્સના એકસમાન સોનિકેશન માટે રચાયેલાં છે. પ્રોબ સોનિકેશનથી વિપરીત, નમૂનાઓની અલગ-અલગ પ્રક્રિયા કરવાની જરૂર પડતી નથી. સમગ્ર પ્લેટને નિયંત્રિત અલ્ટ્રાસોનિક ઊર્જાના સંપર્કમાં લાવવામાં આવે છે, જેથી આ કાર્યપ્રવાહ નમૂનાઓની સમાંતર પ્રક્રિયા માટે અત્યંત યોગ્ય બને છે.

આ ખાસ કરીને નીચેના કાર્યો માટે ઉપયોગી છે:

• સ્ક્રીનિંગ: S. cerevisiae ના મ્યુટન્ટ્સ અથવા અભિવ્યક્તિ સ્ટ્રેન્સ
• રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીનની અભિવ્યક્તિ પછી P. pastoris / K. phaffii ના ક્લોન્સનું લાયસિસ
• એન્ઝાઇમ પરીક્ષણો માટે યીસ્ટ લાયસેટ્સની તૈયારી
• SDS-PAGE, વેસ્ટર્ન બ્લોટ, ELISA, LC-MS/MS અથવા સક્રિયતા પરીક્ષણ માટે પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
• મેટાબોલોમિક્સ માટે અંતઃકોષીય ચયાપચયજ પદાર્થોને મુક્ત કરવા
• યોગ્ય અનુવર્તી શુદ્ધીકરણ પછી DNA અને RNA નમૂનાઓની તૈયારી
• ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા સાથે લાયસિસ બફર્સ, ઉમેરણો અને નિષ્કર્ષણની પરિસ્થિતિઓનું શ્રેષ્ઠીકરણ

અલ્ટ્રાસોનિક કેવિટેશન યીસ્ટ કોષોનું વિઘટન કેવી રીતે કરે છે

સોનિકેશન દરમિયાન, કેન્દ્રિત ઉચ્ચ-શક્તિવાળું અલ્ટ્રાસાઉન્ડ પ્રવાહી નમૂનામાં સંપીડન અને વિરલનનાં વારાફરતી ચક્રો ઉત્પન્ન કરે છે. પૂરતી તીવ્રતાએ, દબાણની આ વધઘટ ધ્વનિક કેવિટેશન સર્જે છે. કેવિટેશનના પરપોટા બને છે, દોલન કરે છે અને તૂટી પડે છે, જેનાથી સ્થાનિક કર્તન બળો, સૂક્ષ્મ પ્રવાહી જેટ, પ્રક્ષુબ્ધતા અને તીવ્ર દબાણ પ્રવણતાઓ ઉત્પન્ન થાય છે.
યીસ્ટના નિલંબનોમાં, આ યાંત્રિક અસરો કોષભિત્તિ અને કોષપટલને નબળાં પાડે છે અને તોડી નાખે છે. અંતઃકોષીય પ્રોટીન, ઉત્સેચકો, ન્યુક્લિક ઍસિડ અને ચયાપચય પદાર્થો લાયસિસ બફરમાં મુક્ત થાય છે. આ પ્રક્રિયા યાંત્રિક હોવાથી, તેનો ઉપયોગ ઘણી જુદી જુદી બફર પ્રણાલીઓ સાથે કરી શકાય છે અને તેને પ્રોટીએઝ અવરોધકો, અપચાયક પદાર્થો, ડિટર્જન્ટ, ક્ષારો અથવા હળવી ઉત્સેચકીય પૂર્વસારવાર સાથે સંયોજિત કરી શકાય છે.

સામાન્ય પ્રોટોકોલ: માઇક્રોપ્લેટમાં યીસ્ટ કોષોનું લાયસિસ

નીચેનો પ્રોટોકોલ Hielscher UIP400MTP અથવા UIP550MTP માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટરનો ઉપયોગ કરીને યીસ્ટના લાયસિસ માટે એક વ્યવહારુ પ્રારંભિક આધાર પૂરો પાડે છે. યીસ્ટની સ્ટ્રેઇન, કોષ ઘનતા, લક્ષ્ય અણુ, બફરની રચના, પ્લેટનો પ્રકાર અને અનુવર્તી પરીક્ષણ અનુસાર પરિમાણોને શ્રેષ્ઠ બનાવવાં જોઈએ.

1. યીસ્ટ કોષોને એકત્રિત કરો અને ધુઓ

Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces અથવા યીસ્ટની અન્ય સ્ટ્રેઇનને ઇચ્છિત સંવર્ધન પરિસ્થિતિઓમાં ઉછેરો. સેન્ટ્રિફ્યુગેશન દ્વારા કોષોને એકત્રિત કરો અને સંવર્ધન માધ્યમ દૂર કરો. અનુવર્તી વિશ્લેષણમાં દખલ કરી શકે તેવા માધ્યમના અવશેષ ઘટકોને દૂર કરવા માટે પેલેટને ઠંડા નિસ્યંદિત પાણી, PBS અથવા પસંદ કરેલા લાયસિસ બફરથી ધુઓ.
પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે નમૂનાઓને ઠંડા રાખો અને ઝડપથી કામ કરો. જો પ્રોટીએઝને કારણે સમસ્યા થવાની ચિંતા હોય, તો બધાં બફર અને વપરાશી સામગ્રીને અગાઉથી ઠંડાં કરો.

2. કોષ પેલેટને ફરીથી નિલંબિત કરો

યીસ્ટ પેલેટને યોગ્ય ઠંડા લાયસિસ બફરમાં ફરીથી નિલંબિત કરો. પ્રોટીનને કાર્યક્ષમ રીતે મુક્ત કરવા માટે ઊંચી કોષ ઘનતા ઘણી વાર ફાયદાકારક હોય છે. પ્રારંભિક આધાર તરીકે, અંદાજે 10–20% w/v ભીનું કોષ પેલેટ અથવા પરીક્ષણના આધારે OD₆₀₀ > 10 ને અનુરૂપ ગાઢ નિલંબન વાપરો.

યીસ્ટના પ્રોટીન લાયસિસ માટેના સામાન્ય બફરમાં નીચેના ઘટકો હોઈ શકે છે:

• Tris-HCl, ફોસ્ફેટ બફર અથવા HEPES જેવી બફર પ્રણાલી
• NaCl અથવા KCl જેવા ક્ષાર
• પ્રોટીએઝ અવરોધકોનું મિશ્રણ
• વૈકલ્પિક અપચાયક પદાર્થ, જેમ કે DTT અથવા β-mercaptoethanol
• અનુવર્તી પ્રક્રિયાઓ સાથેની સુસંગતતાના આધારે વૈકલ્પિક ડિટર્જન્ટ, જેમ કે Triton X-100, NP-40, SDS અથવા CHAPS
• ફોસ્ફોરિલેશનના અભ્યાસો માટે વૈકલ્પિક ફોસ્ફેટેઝ અવરોધકો

વિઘટન કરવું મુશ્કેલ હોય તેવી યીસ્ટ સ્ટ્રેઇન માટે અથવા અત્યંત સૌમ્ય રીતે પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ કરવા માટે, સોનિકેશન પહેલાં Zymolyase, Lyticase અથવા કોષભિત્તિનું પાચન કરતા અન્ય ઉત્સેચકથી ટૂંકી પૂર્વસારવાર કરી શકાય છે. આ ઉત્સેચકીય પૂર્વસારવાર વૈકલ્પિક છે, પરંતુ તે લાયસિસની કાર્યક્ષમતા સુધારી શકે છે અથવા જરૂરી અલ્ટ્રાસોનિક તીવ્રતા ઘટાડી શકે છે.

3. નમૂનાઓને યોગ્ય માઇક્રોપ્લેટમાં સ્થાનાંતરિત કરો

યીસ્ટના નિલંબનને સોનિકેશન સાથે સુસંગત માઇક્રોપ્લેટમાં વિતરિત કરો. ગોળ તળિયાવાળી પ્લેટને ઘણી વાર પ્રાધાન્ય આપવામાં આવે છે, કારણ કે તે નમૂનાના એકત્રીકરણને સુધારે છે અને નિષ્ક્રિય વિસ્તારો ઘટાડે છે. પુનરુત્પાદકતા સુધારવા માટે બધા વેલમાં નમૂનાનું સમાન આયતન વાપરો.
બાષ્પીભવન, એરોસોલનું નિર્માણ અને પરસ્પર દૂષણ અટકાવવા માટે યોગ્ય સીલિંગ મેટ અથવા ફિલ્મથી પ્લેટને સીલ કરો. સીલ પસંદ કરેલા તાપમાન અને સોનિકેશનની પરિસ્થિતિઓ સાથે સુસંગત છે તેની ખાતરી કરો.
સામાન્ય કાર્યકારી આયતનો પ્લેટના ફોર્મેટ અને ઉપયોગ પર આધાર રાખે છે. પ્રચલિત ફોર્મેટમાં 96-વેલ પ્લેટ, ડીપ-વેલ પ્લેટ, PCR પ્લેટ અથવા યોગ્ય ટ્યુબ રેકનો સમાવેશ થાય છે.

4. શીતલનની વ્યવસ્થા કરો

યીસ્ટના લાયસિસ માટે ઊંચી અલ્ટ્રાસોનિક તીવ્રતા જરૂરી છે અને યાંત્રિક વિઘટનથી ગરમી ઉત્પન્ન થાય છે. તેથી તાપમાનનું નિયંત્રણ અત્યંત જરૂરી છે, ખાસ કરીને પ્રોટીન, ઉત્સેચક, RNA અથવા ફોસ્ફોરિલેશનના વિશ્લેષણ માટે.

શીતલન માટે યોગ્ય પદ્ધતિ વાપરો, જેમ કે:

• અગાઉથી ઠંડું કરેલું લાયસિસ બફર
• અગાઉથી ઠંડી કરેલી માઇક્રોપ્લેટ
• સોનિકેશનના અંતરાલો વચ્ચે શીતલન માટે વિરામ
• જ્યાં લાગુ પડતું હોય ત્યાં સોનિકેશન પ્લેટફોર્મનું બાહ્ય શીતલન

હેતુ નમૂનાને પૂરતો ઠંડો રાખવાનો છે, જેથી પ્રોટીનનું વિકૃતીકરણ, ઉત્સેચકનું નિષ્ક્રિયકરણ, RNAનું વિઘટન અને ગરમીને કારણે નમૂનામાં ઉદ્ભવતી પરિવર્તનશીલતા અટકાવી શકાય.

5. યીસ્ટના નિલંબનનું સોનિકેશન કરો

સીલ કરેલી પ્લેટને Hielscher UIP400MTP અથવા UIP550MTP માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટરમાં મૂકો અને પલ્સ આધારિત સોનિકેશન પ્રોગ્રામ પસંદ કરો. પલ્સિંગની ભલામણ કરવામાં આવે છે કારણ કે તે ON તબક્કાઓ દરમિયાન યાંત્રિક વિઘટન અને OFF તબક્કાઓ દરમિયાન ઉષ્માનું વિસર્જન થવા દે છે.
યીસ્ટ કોષોના લાયસિસ માટે પ્રારંભિક આધાર તરીકે:

અત્યંત પ્રતિકારક યીસ્ટ સસ્પેન્શન, ગાઢ P. pastoris જૈવભાર અથવા મુશ્કેલ રિકોમ્બિનન્ટ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ માટે સંચિત ON-સમય તબક્કાવાર વધારો. ઉષ્મા પ્રત્યે સંવેદનશીલ પ્રોટીન અથવા એન્ઝાઇમ પરીક્ષણો માટે ટૂંકા પલ્સ, ઠંડક માટે લાંબા વિરામ અને ઓછો પ્રારંભિક કંપનવિસ્તાર વાપરો.

UIP400MTP વડે મલ્ટીવેલ પ્લેટોમાં ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા સાથે યીસ્ટનું લાયસિસ

6. લાયસેટને સ્વચ્છ કરો

સોનિકેશન પછી માઇક્રોપ્લેટનું સેન્ટ્રિફ્યુગેશન કરો અથવા સેન્ટ્રિફ્યુગેશન માટે નમૂનાઓને ટ્યુબોમાં સ્થાનાંતરિત કરો. યોગ્ય ગતિ અને તાપમાને સેન્ટ્રિફ્યુગેશન કરીને કોષીય કચરો દૂર કરો. અનુવર્તી વિશ્લેષણ માટે ઉપરનું પ્રવાહી એકત્રિત કરો.

ઉપયોગના આધારે, લાયસેટનો ઉપયોગ નીચેના માટે કરી શકાય છે:

• પ્રોટીનનું માત્રાત્મક નિર્ધારણ
• એન્ઝાઇમ સક્રિયતાનાં પરીક્ષણો
• SDS-PAGE અને વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ
• ELISA અને ઇમ્યુનોએસે
• LC-MS/MS પ્રોટિઓમિક્સ
• ચયાપચયજ પદાર્થોનું વિશ્લેષણ
• DNA અથવા RNAનું શુદ્ધીકરણ

7. પદ્ધતિનું શ્રેષ્ઠીકરણ અને દસ્તાવેજીકરણ કરો

પુનરુત્પાદનીય યીસ્ટ લાયસિસ માટે સ્ટ્રેન, સંવર્ધનની પરિસ્થિતિ, OD₆₀₀, ભીના કોષોનું દળ, બફરની સંરચના, પ્લેટનો પ્રકાર, નમૂનાનું કદ, કંપનવિસ્તાર, પલ્સ ચક્ર, સંચિત ON-સમય, ઠંડકની પદ્ધતિ અને નમૂનાનું અંતિમ તાપમાન સહિતનાં તમામ સંબંધિત પરિમાણોનું દસ્તાવેજીકરણ કરો.
જો Hielscher સોનિકેટર સ્વચાલિત ડેટા રેકોર્ડિંગથી સજ્જ હોય, તો પ્રક્રિયાના ડેટાનો ઉપયોગ દસ્તાવેજીકરણ, પદ્ધતિ વિકાસ, પ્રક્રિયાના પાયામાં વધારો અને ગુણવત્તા નિયંત્રણ માટે કરી શકાય છે.

યીસ્ટ લાયસિસના શ્રેષ્ઠીકરણ માટેની ટિપ્સ

પ્રોટીનનું મહત્તમ મુક્તિકરણ મેળવવા માટે ગાઢ યીસ્ટ સસ્પેન્શન, ઉચ્ચ અલ્ટ્રાસોનિક તીવ્રતા અને પૂરતો સંચિત ON-સમય વાપરો. સંવેદનશીલ પ્રોટીન માટે કંપનવિસ્તાર ઘટાડો, ઠંડક માટેના વિરામ લંબાવો અને સમગ્ર પ્રક્રિયા દરમિયાન પ્લેટને ઠંડી રાખો.
જો લાયસિસ અધૂરું હોય, તો સોનિકેશનનો સમય તબક્કાવાર વધારો, એન્ઝાઇમ આધારિત પૂર્વસારવાર અજમાવો, નમૂનાની શ્યાનતા ઘટાડો અથવા બફરનું શ્રેષ્ઠીકરણ કરો. જો પ્રોટીનનું વિઘટન થાય અથવા તે સક્રિયતા ગુમાવે, તો ઠંડકમાં સુધારો કરો, ON અંતરાલો ટૂંકા કરો, અવરોધકો ઉમેરો અને ડિટર્જન્ટ પ્રણાલી લક્ષ્ય પ્રોટીન સાથે સુસંગત છે કે નહીં તેની ખાતરી કરો.
યીસ્ટના સ્ટ્રેનોમાં કોષભિત્તિની રચના, વૃદ્ધિનો તબક્કો, અભિવ્યક્તિ પ્રણાલી અને જૈવભારની ઘનતામાં નોંધપાત્ર તફાવત હોવાથી, શ્રેષ્ઠીકરણ માટે નાના પરીક્ષણ મેટ્રિક્સની ભલામણ કરવામાં આવે છે. ઉદાહરણ તરીકે, ત્રણ કંપનવિસ્તાર, બે પલ્સ ચક્ર અને બે કુલ ON-સમયનું પરીક્ષણ કરો, પછી લાયસિસની કાર્યક્ષમતા અને પ્રોટીનની અખંડિતતાનું મૂલ્યાંકન કરો.

યીસ્ટ લાયસિસ માટે Hielscher માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટરોના ફાયદા

Hielscher માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટરો એવી પ્રયોગશાળાઓ માટે આદર્શ છે જ્યાં અનેક નમૂનાઓમાં પુનરુત્પાદનીય લાયસિસની જરૂર હોય છે. તેઓ પ્રોબ સોનિકેશનમાં એક સમયે એક જ નમૂનાને સંભાળવાની ધીમી પ્રક્રિયાને દૂર કરે છે અને પ્રોબને હાથથી સ્થાન આપવાથી, તેને ડુબાડવાની ઊંડાઈથી તથા જુદા જુદા નમૂનાઓની સંભાળમાં થતા તફાવતોથી ઊભી થતી પરિવર્તનશીલતા ઘટાડે છે.

મુખ્ય ફાયદાઓમાં નીચેનો સમાવેશ થાય છે:

• ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા: માઇક્રોપ્લેટો અથવા સુસંગત નમૂના રૅકોમાં ઘણા યીસ્ટ નમૂનાઓનું સમાંતર સોનિકેશન કરો.
• પુનરુત્પાદનીય પરિસ્થિતિઓ: એકસરખાં, સરખાવી શકાય તેવાં લાયસિસ પરિણામો માટે તમામ વેલમાં સોનિકેશનની સમાન પરિસ્થિતિઓ.
• પ્રોબ દ્વારા પરસ્પર દૂષણ થતું નથી: સોનિકેશન દરમિયાન નમૂનાઓ સીલ કરેલા રહે છે, જેથી એક નમૂનામાંથી બીજા નમૂનામાં પદાર્થનું વહન અને સફાઈનાં પગલાં ઘટે છે.
• મજબૂત કોષો માટે યોગ્ય: ઉચ્ચ તીવ્રતાવાળું અલ્ટ્રાસાઉન્ડ યીસ્ટની કોષભિત્તિઓના વિઘટનમાં સહાય કરે છે.
• કાર્યક્ષમ કાર્યપ્રવાહ: સ્ટ્રેઇન, ક્લોન, અભિવ્યક્તિની પરિસ્થિતિઓ અને કોષલય બફરની સ્ક્રીનિંગ માટે આદર્શ છે.
• કાર્યક્ષમ કાર્યપ્રવાહ: પ્રોગ્રામ કરી શકાય તેવી સેટિંગ્સ અને સ્વચાલિત ડેટા નોંધણી ધરાવે છે તથા પ્રયોગશાળાના સ્વચાલન માટે યોગ્ય છે.

યીસ્ટ જૈવપ્રૌદ્યોગિકી અને જીવનવિજ્ઞાન સંશોધનમાં ઉપયોગો

માઇક્રોપ્લેટમાં અલ્ટ્રાસોનિક યીસ્ટ કોષલય અનેક સંશોધન અને સ્ક્રીનિંગ કાર્યપ્રવાહોને સહાય કરે છે. પુનઃસંયોજિત પ્રોટીનની અભિવ્યક્તિમાં, અભિવ્યક્તિના સ્તરો અથવા એન્ઝાઇમની સક્રિયતાની સરખામણી કરવા માટે P. pastoris અને S. cerevisiae ક્લોનનો સમાંતર રીતે કોષલય કરી શકાય છે. સિસ્ટમ્સ બાયોલોજી અને ઓમિક્સમાં, પ્રમાણભૂત કોષલય વિવિધ પરિસ્થિતિઓ વચ્ચે સરખામણી કરવાની ક્ષમતા સુધારે છે. સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાનમાં, સોનિકેશન વિવિધ સ્ટ્રેઇન, સંવર્ધન માધ્યમની પરિસ્થિતિઓ અથવા તાણ ઉપચારોમાંથી લાઇસેટ ઝડપથી તૈયાર કરવામાં સહાય કરે છે.
સામાન્ય ઉપયોગક્ષેત્રોમાં નીચેનાનો સમાવેશ થાય છે:

• યીસ્ટમાંથી પ્રોટીનનું નિષ્કર્ષણ
• પુનઃસંયોજિત પ્રોટીનની સ્ક્રીનિંગ
• એન્ઝાઇમની સક્રિયતાની સ્ક્રીનિંગ
• રૂપાંતરણ પછી ક્લોનની પસંદગી
• આથવણનું અનુકૂલન
• પ્રોટિઓમિક્સ માટે નમૂનાની તૈયારી
• મેટાબોલોમિક્સ માટે નમૂનાની તૈયારી
• કોષભિત્તિના વિઘટનના અભ્યાસો
• ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળાં સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાન પરીક્ષણો

વિશ્વસનીય યીસ્ટ કોષલયની શરૂઆત નિયંત્રિત સોનિકેશનથી થાય છે

નમૂનાઓની સંખ્યા વધે ત્યારે યીસ્ટ કોષલય મુશ્કેલ બની શકે છે, પરંતુ Hielscher માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટર આ પ્રક્રિયાને વધુ ઝડપી, વધુ સ્વચ્છ અને વધુ પુનરુત્પાદનીય બનાવે છે. UIP400MTP અને UIP550MTP સંશોધકોને નિર્ધારિત અલ્ટ્રાસોનિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ સંપૂર્ણ પ્લેટની પ્રક્રિયા કરવાની સુવિધા આપે છે, જેથી હાથથી કરવી પડતી કામગીરી ઘટે છે અને નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા સુધરે છે.
સૂક્ષ્મજીવવિજ્ઞાનીઓ, આણ્વિક જીવવિજ્ઞાનીઓ, પ્રોટીન વૈજ્ઞાનિકો અને જૈવપ્રૌદ્યોગિકી પ્રયોગશાળાઓ માટે, માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેશન યીસ્ટના અંતઃકોષીય ઘટકોને કાર્યક્ષમ અને પુનરુત્પાદનીય રીતે મુક્ત કરવાનું એક શક્તિશાળી સાધન છે.

સાહિત્ય / સંદર્ભો

• FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
• FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
• Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
• Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics 2024.