હિલ્સચર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ ટેકનોલોજી

સોનિકેશન લિસીસ: સેલ ડિસફર & એક્સટ્રેક્શન

સેલ વિઘટન અથવા બાયોટેક પ્રયોગશાળાઓ માં દૈનિક નમૂના તૈયારી એક સામાન્ય ભાગ છે. લિસિસનું ધ્યેય જૈવિક અણુઓ છોડવા માટે સેલ દિવાલ અથવા સંપૂર્ણ કોષના ભાગોને વિક્ષેપિત કરે છે. કહેવાતા lysate દા.ત. પ્લાઝમિડ, રીસેપ્ટર એસેસ, પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ વગેરે ધરાવે છે. લિસિસના નીચેના પગલાઓ વિભાજન, ઓર્ગેલેઇન આઇસોલેશન અથવા / અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ અને શુદ્ધિકરણ છે. આ કાઢેલી સામગ્રી (= lysate) ને અલગ કરવાની જરૂર છે અને વધુ તપાસ અથવા કાર્યક્રમોને આધીન છે, દા.ત. પ્રોટોમીક સંશોધન માટે. અલ્ટ્રાસોનિક homogenizers સફળ સેલ lysis માટે સામાન્ય સાધન છે. અવાજ તીવ્રતા પ્રક્રિયા પરિમાણો વ્યવસ્થિત દ્વારા સમતોલ કરી શકાય છે, ખૂબ જ સોફ્ટ માંથી ખૂબ જ હાર્ડ માટે શ્રેષ્ઠ sonication તીવ્રતા ચોક્કસ પદાર્થો જરૂરિયાત પૂરી કરવા માટે દરેક પદાર્થ અને મધ્યમ માટે વ્યક્તિગત રીતે સુયોજિત કરી શકો છો.

સેલ માળખું

કોષ અર્ધપારગમ્ય પ્લાઝમા મેમ્બ્રેન એક phospho-લિપિડ દ્વિસ્તરમાં (પણ પ્રોટીન-લિપિડ દ્વિસ્તરમાં; હાઇડ્રોફોબિક લિપિડ અને એમ્બેડેડ પ્રોટીન પરમાણુઓ સાથે હાઇડ્રોફિલિક ફોસ્ફરસ અણુ દ્વારા રચના) માં સમાવે છે કે જેના દ્વારા સુરક્ષિત છે અને (કોષરસ) સેલ આંતરિક વચ્ચે અવરોધ બનાવે છે અને બાહ્યકોષીય પર્યાવરણ. પ્લાન્ટ કોશિકાઓ અને પ્રોકાર્યોટિક કોષો સેલ દિવાલ દ્વારા ઘેરાયેલું આવે છે. અનેક સ્તરો સેલ્યુલોઝ જાડા સેલ દિવાલ કારણે, છોડના કોષો પ્રાણી કોશિકાઓમાં કરતાં lyse માટે કઠણ હોય છે. આવા અંગોમાં, બીજક, માઇટોકોન્ડ્રીઓન કોશિકા તરીકે આંતરિક, cytoskeleton દ્વારા સ્થિર છે.
કોષો lysing, તે કાઢવામાં અને અંગોમાં, પ્રોટીન, ડીએનએ, mRNA અથવા અન્ય જૈવિકઅણુઓ અલગ ધ્યાનમાં રાખીને કરવામાં આવે છે.

સોનિફિકેશનનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે સેલ મેટરની નમૂના તૈયાર કરવા માટે થાય છે.

ફિગ 1:. કોશિકાઓમાંથી અલ્ટ્રાસોનિક નિષ્કર્ષણ: Vilkhu એટ અલ: માઇક્રોસ્કોપિક ત્રાંસી વિભાગ (TS) ટંકશાળ (મેન્થા piperita) ના અણિયાળું સ્ટેમ કોશિકાઓ માંથી અવાજ નિષ્કર્ષણ (વિસ્તૃતીકરણ 2000x) [સ્ત્રોત દરમિયાન ક્રિયાઓ પદ્ધતિ બતાવે છે. 2011]

પદ્ધતિઓ

ત્યાં કોષો, કે જે યાંત્રિક અને રાસાયણિક પદ્ધતિઓ, જે ડિટર્જન્ટથી અથવા સોલવન્ટ ઉપયોગ, ઉચ્ચ દબાણ ની અરજી, અથવા એક માળાનો મણકો મિલની અથવા ફ્રેન્ચ પ્રેસ ઉપયોગનો સમાવેશ થાય છે વિભાજિત કરી શકાય lysate માટે કેટલીક પદ્ધતિઓ છે. આ પદ્ધતિઓ સૌથી સમસ્યાવાળા ગેરલાભ મુશ્કેલ નિયંત્રણ અને પ્રક્રિયા પરિમાણો ના ગોઠવણ અને તેથી અસર છે.
સામાન્ય lysis પદ્ધતિઓ મુખ્ય ગેરલાભ:

વિભિન્ન lysis તકનીકો

ટેબલ: સેલ lysis ની પરંપરાગત પદ્ધતિઓ મુખ્ય ગેરફાયદા છે

તેનાથી વિપરિત, sonication કે sonication પરિમાણો પર સંપૂર્ણ નિયંત્રણ માટે પરવાનગી આપે છે સેલ વિઘટન માટે ખૂબ જ કાર્યક્ષમ અને વિશ્વસનીય સાધન છે. આ સામગ્રી પ્રકાશન અને ઉત્પાદન શુદ્ધતા પર ઊંચી પસંદગી ખાતરી આપે છે. [Balasundaram એટ અલ. 2009] તે બધા પ્રકારો સેલ યોગ્ય અને નાના અને મોટા પાયે સરળતાથી લાગુ પડે છે. Ultrasonicators સાફ કરવા માટે સરળ છે. એક અવાજ homogenizer હંમેશા સ્વચ્છ ઈન સ્થળ (CIP) અને sterilize ઈન સ્થળ (SIP) કાર્ય આપે છે. Sonotrode એક વિશાળ ટાઇટેનિયમ હોર્ન જે લૂછી અથવા (કામ માધ્યમ પર આધાર રાખીને) પાણી અથવા દ્રાવક માં ફ્લશ કરી શકાય સમાવેશ થાય છે. ultrasonicators જાળવણી તેમના પ્રમાણિકતાના કારણે લગભગ neglectable છે.

lysis

Lysis સંવેદનશીલ પ્રક્રિયા છે. lysis દરમિયાન કોશિકા કલા રક્ષણ નાશ પામે છે, તેમ છતાં નિષ્ક્રિયતા, એક unphysiological પર્યાવરણ (પીએચ કિંમત થી વિચલન) દ્વારા ગુણવિકૃતીકરણ અને કાઢવામાં પ્રોટીન અધઃપતન રોકી શકાય જ જોઈએ. તેથી, સામાન્ય lysis એક બફર ઉકેલ માં કરવામાં આવે છે. મોટા ભાગના મુશ્કેલીઓ બધા અંતઃકોશિક સામગ્રી અથવા / અને લક્ષ્ય ઉત્પાદન ગુણવિકૃતીકરણ એક લક્ષ્યાંક ન હોય તેવા પ્રકાશન પરિણમે અનિયંત્રિત સેલ ભંગાણ માંથી પેદા થાય છે.

અલ્ટ્રાસોનિક સેલ lysis લેબોરેટરીમાં નમૂના તૈયાર કરવા માટે અને મોટા વોલ્યુમો ઉત્પાદન માટે વાપરી શકાય છે. મોટું માટે ક્લિક કરો!

ફિગ 1:. 200 વોટ શક્તિશાળી અવાજ homogenizer Uf200 ः ટી વિશ્વસનીય અને પ્રજનન સેલ lysis માટે ડિજિટલ નિયંત્રણ અને આપોઆપ માહિતી રેકોર્ડિંગ સાથે.

અલ્ટ્રાસોનિક lysis

સામાન્ય રીતે, પ્રયોગશાળામાં નમૂનાઓનું લિસિસ 15 સેકન્ડ અને 2 મિનિટમાં લેશે. જેમ જેમ sonication ની તીવ્રતા કંપનવિસ્તાર દ્વારા સંતુલિત કરવા માટે ખૂબ જ સરળ છે એક sonication સમય સેટિંગ તેમજ યોગ્ય સાધનો પસંદ કરીને, તે સેલ સંશ્લેષણ સેલ્યુલર માળખા પર અને lysis હેતુ પર ખૂબ નરમાશથી અથવા ખૂબ અચાનક, વિક્ષેપ શક્ય છે ( દા.ત. ડીએનએ નિષ્કર્ષણ માટે નરમ નૈતિકતાની જરૂર છે, બેક્ટેરિયાની સંપૂર્ણ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણને વધુ તીવ્ર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ સારવારની જરૂર છે). આ પ્રક્રિયા દરમિયાન તાપમાનનું સંકલનિત તાપમાન સેન્સર દ્વારા મોનીટર કરી શકાય છે અને તેને સરળતાથી ઠંડક (બરફ સ્નાન અથવા ઠંડક જેકેટ સાથે ફ્લો કોષો) દ્વારા અથવા સ્પંદનીય સ્થિતિમાં સોનાની પ્રક્રિયા દ્વારા નિયંત્રિત કરી શકાય છે. પલ્સ-મોડ sonication દરમિયાન, ટૂંકા sonication 1-15 સેકન્ડ સમયગાળો ચક્ર ફટકો લાંબા સમયથી તૂટક તૂટક સમયગાળા દરમિયાન ગરમી વિસર્જન અને ઠંડક માટે પરવાનગી આપે છે.
બધા અલ્ટ્રાસાઉન્ડ આધારિત પ્રક્રિયાઓ સંપૂર્ણપણે પ્રજનન અને એક સરખી રીતે સ્કેલેબલ છે.

10 ટેસ્ટ ટ્યુબ ના એક સાથે નમૂના તૈયાર કરવા માટે અલ્ટ્રાસોનિક homogenizer VialTweeter. (મોટું માટે ક્લિક કરો!)

અવાજ ઉપકરણ વીયલટેવેટર એ જ પ્રક્રિયા શરતો હેઠળ 10 શીશીઓ ના એક સાથે નમૂના તૈયાર કરવા માટે પરવાનગી આપે છે.

અલ્ટ્રાસોનિક Homogenizers

વિવિધ પ્રકારના અલ્ટ્રાસોનિક ઉપકરણો નમૂના તૈયારી ધ્યેય મેળ ખાતા માટે પરવાનગી આપે છે અને વપરાશકર્તા જતન અને ઓપરેશન આરામ ખાતરી કરવા માટે. ચકાસણી પ્રકારના ultrasonicators લેબ સૌથી સામાન્ય સાધન છે. તેઓ 1000mL સુધી 0.1mL વોલ્યુમ સાથે નાના અને મિડ કદ નમૂનાઓ તૈયાર કરવા માટે સૌથી યોગ્ય છે. વિવિધ પાવર કદ અને sonotrodes નમૂના વોલ્યુમ અને સૌથી વધુ અસરકારક અને કાર્યક્ષમ sonicating પરિણામો માટે જહાજ માટે ultrasonicator સ્વીકારવાનું માટે પરવાનગી આપે છે. અવાજ ચકાસણી ઉપકરણ શ્રેષ્ઠ પસંદગી એક નમૂનાઓ તૈયાર કરવાની હોય ત્યારે છે.

જો વધુ નમૂના તૈયાર કરવા પડે, દા.ત. સેલના ઉકેલની 8 શીશીઓ, વીઆઇએલટીવીટર અથવા અલ્ટ્રાસોનાન્સ કપહાર્ન જેવી ઉપકરણો લિસિસ માટે સૌથી યોગ્ય હોમિયોનેજિસ્ટ છે. કેટલાક શીશીઓ એ જ તીવ્રતા પર એક જ સમયે sonicated છે. આ માત્ર સમય બચાવે છે, પરંતુ તે બધા નમૂનાઓનો એક જ ઉપાય પણ તેની ખાતરી કરે છે, જે નમૂનાઓમાં વિશ્વસનીય અને તુલનાત્મક વચ્ચે પરિણામ બનાવે છે. વળી, અલ્ટ્રાસોનાન્સિક સોનોટ્રોડ (પણ અલ્ટ્રાસોનાન્સ પ્રોબ, હોર્ન, ટીપ અથવા આંગળી તરીકે ઓળખાય છે) ડૂબીને ક્રોસ-પ્રદૂષણ ટાળવામાં આવે છે. શીશીઓનો ઉપયોગ થતો હોવાથી જહાજોને રદબાતલ કરવાના કારણે સમય કાઢતા સ્વચ્છતા અને નમૂના નુકશાનને અવગણવામાં આવે છે.
ઊંચા વોલ્યુમો માટે, દા.ત. સેલ અર્ક ની વાણિજ્યિક ઉત્પાદન માટે, ફ્લો સેલ રિએક્ટર સાથે સતત અવાજ સિસ્ટમો સૌથી યોગ્ય છે. પ્રક્રિયા સામગ્રી સતત અને તે પણ પ્રવાહ પણ sonication ખાતરી. અવાજ વિઘટન પ્રક્રિયા બધા પરિમાણો ઑપ્ટિમાઇઝ અને એપ્લિકેશન અને ચોક્કસ સેલ સામગ્રી જરૂરિયાતો માટે સંતુલિત કરી શકો છો.

બેક્ટેરિયલ કોષો અવાજ lysing માટે દ્રષ્ટાંતરૂપ પ્રક્રિયા:

  • સેલ સસ્પેન્શન તૈયાર: સેલ ગોળીઓ સંપૂર્ણપણે દેનારા (તમારા બફર ઉકેલ નીચેના વિશ્લેષણ, દા.ત. ચોક્કસ ક્રોમેટોગ્રાફી પદ્ધતિ સાથે સુસંગત પસંદ કરો) દ્વારા બફર ઉકેલ નિલંબિત હોવું જ જોઈએ. lysozymes અને / અથવા અન્ય ઉમેરણો ઉમેરો, જો જરૂરી હોય તો (તેઓ પણ અલગ / શુદ્ધિકરણ અર્થ સાથે સુસંગત હોવું જોઈએ). મિક્સ / હળવા sonication હેઠળ ધીમેધીમે ઉકેલ homogenize સુધી પૂર્ણ સસ્પેન્શન પ્રાપ્ત થાય છે.
  • અલ્ટ્રાસોનિક lysis: એક બરફ સ્નાન માં નમૂના મૂકો. સેલ ભંગાણ માટે, 60-90 બીજા બર્સ્ટની (તમારા ultrasonicator માતાનો પલ્સ સ્થિતિને વાપરી રહ્યા હોય) પર સસ્પેન્શન sonicate.
  • (. દા.ત. 10 મિનિટ 10,000 ટનના સ્તરે X ગ્રામ; 4degC ખાતે): જુદા સેન્ટ્રીફ્યુજ lysate. સેલ પેલેટ કાળજીપૂર્વક થી supernatant અલગ હતા. supernatant કુલ સેલ lysate છે. supernatant શુદ્ધિકરણ કર્યા પછી, તમે દ્રાવ્ય સેલ પ્રોટીન એક સ્પષ્ટતા પ્રવાહી મેળવે છે.

જીવવિજ્ઞાન અને જૈવ તકનીક માં ultrasonicators માટે સૌથી સામાન્ય કાર્યક્રમો છે:

  • સેલ અર્ક તૈયારી
  • વિક્ષેપ યીસ્ટના, બેક્ટેરિયા, છોડના કોષો, નરમ & હાર્ડ સેલ પેશી, Nucleic સામગ્રી
  • પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
  • તૈયારી અને ઉત્સેચકો અલગતા
  • એન્ટિજેન્સ ઉત્પાદન
  • ડીએનએ નિષ્કર્ષણ અને / અથવા લક્ષિત વિભાજન
  • liposome તૈયારી
UIP1000hd જેવા ઉચ્ચ શક્તિ અલ્ટ્રાસાઉન્ડ homogenizers સેલ ભંગાણ અને બેચ અથવા સતત પ્રવાહ છતાં સ્થિતિમાં નિષ્કર્ષણ માટે વપરાય છે. (મોટું માટે ક્લિક કરો!)

જેમ કે અલ્ટ્રાસોનિક benchtop સિસ્ટમો યુઆઇપી 1000hd (1kW) જૈવિક સામગ્રી મોટા વોલ્યુમો પ્રક્રિયા કરી શકો છો.

બાયોટેકનોલોજી, બાયોએન્જિનિયરિંગ એવું, માઇક્રોબાયોલોજી, મોલેક્યુલર બાયોલોજી, જીવરસાયણ, ઇમ્યુનોલોજી, બેક્ટેરિયોલોજી, વાઇરોલોજી, પ્રોટિઓમિક્સ, જનનશાસ્ત્ર, શરીરવિજ્ઞાન, સેલ્યુલર જીવવિજ્ઞાન હેમેટોલોજીની, અને વનસ્પતિશાસ્ત્ર ક્ષેત્રોમાં બહાર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ શાખાઓ મેનીફોલ્ડ કાર્યક્રમો.

મૂલ્યાંકન અને ગ્રાહકોની કાર્યક્રમો ઓપ્ટિમાઇઝેશન માટે, Hielscher Ultrasonics સંપૂર્ણપણે સજ્જ આપે અલ્ટ્રાસોનિક પ્રક્રિયા લેબોરેટરી. વધુ માહિતી માટે અમારો સંપર્ક કરો!

સાહિત્ય / સંદર્ભો

  • Balasundaram, બી .; હેરિસન, એસ .; બ્રેસવેલ, ડી જી (2009): ઉત્પાદન પ્રકાશન વ્યૂહરચનાઓ અને બાયોપ્રોસેસ ડિઝાઇન પર અસર એડવાન્સિસ. બાયોટેકનોલોજી 27/8, 2009 પૃ. 477-485 વલણો.
  • Vilkhu, કે .; મનાશ્શાના, આર .; મોસન, આર .; Ashokkumar, એમ (2011): અલ્ટ્રાસોનિક પુનઃપ્રાપ્તિ અને ખાદ્ય કાચા ફેરફાર થાય છે. માં: ફેંગ / બાર્બોસા-Cánovas / વીઝ (2011): ફૂડ અને Bioprocessing માટે અલ્ટ્રાસાઉન્ડ ટેક્નોલોજીસ. ન્યૂ યોર્ક: સ્પ્રિંગર, 2011 પાના 345-368..

અમારો સંપર્ક / વધુ માહિતી માટે કહો

તમારી પ્રક્રિયા જરૂરિયાતો વિશે અમને વાત કરો. અમે તમારા પ્રોજેક્ટ માટે સૌથી યોગ્ય સુયોજિત અને પ્રોસેસિંગ પરિમાણો ભલામણ કરશે.





મહેરબાની કરીને નોંધ કરો ગોપનીયતા નીતિ.