Lysis માટે Sonication: સેલ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ
કોષનું વિઘટન અથવા લિસિસ એ બાયોટેક પ્રયોગશાળાઓમાં દૈનિક નમૂનાની તૈયારીનો સામાન્ય ભાગ છે. લિસિસનો ધ્યેય કોષની દિવાલના ભાગો અથવા જૈવિક અણુઓને મુક્ત કરવા માટે સંપૂર્ણ કોષને વિક્ષેપિત કરવાનો છે. અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર્સ સફળ સેલ લિસિસ માટે વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાય છે. અત્યાધુનિક અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સનો મુખ્ય ફાયદો એ તીવ્રતા અને તાપમાન જેવા પ્રક્રિયાના પરિમાણો પર ચોક્કસ નિયંત્રણ છે, જે હળવા છતાં અત્યંત કાર્યક્ષમ સેલ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ માટે પરવાનગી આપે છે.
અલ્ટ્રાસાઉન્ડનો ઉપયોગ કરીને સેલ લિસિસ
અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ ખુલ્લા કોષોને તોડવા અને ઉચ્ચ-આવર્તન ધ્વનિ તરંગો, એટલે કે અલ્ટ્રાસાઉન્ડનો ઉપયોગ કરીને સામગ્રીઓ કાઢવા માટે વપરાતી પદ્ધતિ છે. સોનિકેશન એ લિસિસ તકનીક છે, જેનો વ્યાપકપણે સેલ વિક્ષેપ અને અંતઃકોશિક સામગ્રીના નિષ્કર્ષણની સ્થાપિત અને વિશ્વસનીય પદ્ધતિઓ તરીકે ઉપયોગ થાય છે. અલ્ટ્રાસોનિક લિસિસ એ લાયસેટ તૈયાર કરવા માટે વિશ્વસનીય તકનીક છે જેમ કે પ્લાઝમિડ, રીસેપ્ટર એસેસ, પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ વગેરે. પ્રક્રિયાના પરિમાણોને સમાયોજિત કરીને અલ્ટ્રાસોનિક તીવ્રતાને સમતળ કરી શકાય છે, ખૂબ જ નરમથી તીવ્ર સુધીની શ્રેષ્ઠ સોનિકેશન તીવ્રતા વ્યક્તિગત રીતે સેટ કરી શકાય છે. ચોક્કસ એપ્લિકેશન આવશ્યકતાઓને પૂર્ણ કરવા માટે દરેક પદાર્થ અને માધ્યમ. લિસિસના નીચેના પગલાઓ છે ફ્રેક્શનેશન, ઓર્ગેનેલ આઇસોલેશન અથવા/અને પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ અને શુદ્ધિકરણ. કાઢવામાં આવેલી સામગ્રી (= lysate) ને અલગ કરવાની હોય છે અને તે વધુ તપાસ અથવા એપ્લિકેશનને આધીન છે, દા.ત. પ્રોટીઓમિક સંશોધન માટે.
અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર્સ UP100H (100 વોટ્સ) અને UP400St (400 વોટ્સ) નમૂનાની તૈયારી માટે જેમ કે લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ.
અન્ય સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિઓની તુલનામાં, અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસના ઘણા ફાયદા છે:
- ઝડપ: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ એક ઝડપી પદ્ધતિ છે જે સેકંડની બાબતમાં ખુલ્લા કોષોને તોડી શકે છે. આ અન્ય પદ્ધતિઓ જેમ કે હોમોજનાઇઝેશન, ફ્રીઝ-થૉવિંગ અથવા બીડ-મિલિંગ કરતાં વધુ ઝડપી છે.
- કાર્યક્ષમતા: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણનો ઉપયોગ એક જ સમયે નાના, મોટા અથવા બહુવિધ નમૂનાઓની સારવાર માટે થઈ શકે છે, જે તેને અન્ય પદ્ધતિઓ કરતાં વધુ કાર્યક્ષમ બનાવે છે જેને નાના નમૂનાઓની વ્યક્તિગત પ્રક્રિયાની જરૂર હોય છે.
- કેમિકલ મુક્ત: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ બિન-આક્રમક પદ્ધતિ છે જેને કઠોર રસાયણો અથવા ઉત્સેચકોના ઉપયોગની જરૂર નથી. આ તે એપ્લિકેશનો માટે આદર્શ બનાવે છે જ્યાં કોષની સામગ્રીની અખંડિતતા જાળવવાની જરૂર છે. નમૂનાઓના અનિચ્છનીય દૂષણને ટાળી શકાય છે.
- ઉચ્ચ ઉપજ: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ ડીએનએ, આરએનએ અને પ્રોટીન સહિત સેલ્યુલર સામગ્રીની ઉચ્ચ ઉપજ મેળવી શકે છે. આ એટલા માટે છે કારણ કે ઉચ્ચ-આવર્તન ધ્વનિ તરંગો કોષની દિવાલોને તોડે છે અને સમાવિષ્ટોને આસપાસના દ્રાવણમાં મુક્ત કરે છે.
- તાપમાન નિયંત્રણ: અત્યાધુનિક અલ્ટ્રાસોન્સિએટર્સ નમૂનાના ચોક્કસ તાપમાન નિયંત્રણ માટે પરવાનગી આપે છે. Hielscher ડિજિટલ અલ્ટ્રાસોનિક પ્લગેબલ તાપમાન સેન્સર અને તાપમાન મોનિટરિંગ સોફ્ટવેરથી સજ્જ છે.
- પુનઃઉત્પાદનક્ષમ: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ માટેના પ્રોટોકોલ્સને સરળ રેખીય સ્કેલ-અપ દ્વારા સરળતાથી પુનઃઉત્પાદિત કરી શકાય છે અને તે પણ વિવિધ મોટા અથવા નાના નમૂના વોલ્યુમો સાથે મેળ ખાય છે.
- બહુમુખી: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણનો ઉપયોગ બેક્ટેરિયા, યીસ્ટ, ફૂગ, છોડ અને સસ્તન પ્રાણીઓના કોષો સહિત વિશાળ શ્રેણીના કોષોને કાઢવા માટે થઈ શકે છે. તેનો ઉપયોગ પ્રોટીન, ડીએનએ, આરએનએ અને લિપિડ્સ સહિત વિવિધ પ્રકારના પરમાણુઓ કાઢવા માટે પણ થઈ શકે છે.
- અસંખ્ય નમૂનાઓની એકસાથે તૈયારી: Hielscher Ultrasonics એ જ પ્રક્રિયાની શરતો હેઠળ અસંખ્ય નમૂનાઓને આરામથી પ્રક્રિયા કરવા માટે ઘણા ઉકેલો પ્રદાન કરે છે. આ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણના નમૂનાની તૈયારીના પગલાને અત્યંત કાર્યક્ષમ અને સમય બચાવે છે.
- વાપરવા માટે સરળ: અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ સાધનો વાપરવા માટે સરળ છે અને તેને ન્યૂનતમ તાલીમની જરૂર છે. સાધનસામગ્રી પણ આર્થિક છે કારણ કે તે એકલ રોકાણ છે જેમાં નિકાલની પુનઃખરીદીની જરૂર નથી. આ તેને સંશોધકો અને પ્રયોગશાળાઓની વિશાળ શ્રેણી માટે આકર્ષક બનાવે છે.
એકંદરે, અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ એ સેલ્યુલર સમાવિષ્ટો કાઢવા માટે ઝડપી, કાર્યક્ષમ, ચોક્કસ નિયંત્રણક્ષમ અને બહુમુખી પદ્ધતિ છે. વૈકલ્પિક પદ્ધતિઓ પરના તેના ફાયદા તેને સંશોધન અને ઔદ્યોગિક એપ્લિકેશનોની વિશાળ શ્રેણી માટે આકર્ષક પસંદગી બનાવે છે.
અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસના કાર્યકારી સિદ્ધાંત
અલ્ટ્રાસોનિક સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ કોષોને વિક્ષેપિત કરવા અને તેમની સામગ્રીને બહાર કાઢવા માટે ઉચ્ચ-આવર્તન ધ્વનિ તરંગોનો ઉપયોગ કરે છે. ધ્વનિ તરંગો આસપાસના પ્રવાહીમાં દબાણમાં ફેરફાર કરે છે, જેના કારણે નાના પરપોટા બને છે અને પોલાણ તરીકે ઓળખાતી પ્રક્રિયામાં તૂટી જાય છે. આ પરપોટા સ્થાનિક અત્યંત તીવ્ર યાંત્રિક દળો ઉત્પન્ન કરે છે જે ખુલ્લા કોષોને તોડી શકે છે અને તેમની સામગ્રીને આસપાસના દ્રાવણમાં મુક્ત કરી શકે છે.
અલ્ટ્રાસોનિકેટરનો ઉપયોગ કરીને સેલ લિસિસમાં સામાન્ય રીતે નીચેના પગલાં શામેલ હોય છે:
- નમૂનાને પ્રવાહી બફર સાથે ટ્યુબ અથવા કન્ટેનરમાં મૂકવામાં આવે છે.
- નમૂનામાં અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ દાખલ કરવામાં આવે છે, અને ઉચ્ચ-આવર્તન અવાજના તરંગો આશરે સાથે. 20-30 kHz લાગુ કરવામાં આવે છે.
- અલ્ટ્રાસાઉન્ડ તરંગો આસપાસના પ્રવાહીમાં ઓસિલેશન અને પોલાણનું કારણ બને છે, સ્થાનિક બળો ઉત્પન્ન કરે છે જે ખુલ્લા કોષોને તોડે છે અને તેમની સામગ્રીને મુક્ત કરે છે.
- કોઈપણ સેલ્યુલર કચરાને દૂર કરવા માટે નમૂનાને સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે અથવા ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે, અને કાઢવામાં આવેલી સામગ્રીને ડાઉનસ્ટ્રીમ વિશ્લેષણ માટે એકત્રિત કરવામાં આવે છે.
શક્તિશાળી અલ્ટ્રાસાઉન્ડ તરંગો જૈવિક રચનાઓના કોષ મેટ્રિક્સને વિક્ષેપિત કરે છે અને બાયોએક્ટિવ સંયોજનોને મુક્ત કરે છે. છોડની સામગ્રી અને દ્રાવક (દા.ત., બફર) વચ્ચે સામૂહિક ટ્રાન્સફર તીવ્ર બને છે. (ગ્રાફિક: ©વિલ્ખુ એટ અલ., 2006)
સામાન્ય લિસિસ પદ્ધતિઓના ગેરફાયદા
પ્રયોગશાળાઓમાં તમારા કામ દરમિયાન, તમે પરંપરાગત મિકેનિકલ અથવા રાસાયણિક લિસિસ પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરીને સેલ લિસિસની ઝંઝટનો અનુભવ કર્યો હશે.
- મિકેનિકલ લિસિસ: મિકેનિકલ લિસિસ પદ્ધતિઓ, જેમ કે મોર્ટાર અને પેસ્ટલ વડે ગ્રાઇન્ડીંગ અથવા ફ્રેન્ચ પ્રેસ, બીડ મિલ અથવા રોટર-સ્ટેટર સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને એકરૂપીકરણમાં ઘણીવાર ચોક્કસ નિયંત્રણ અને ગોઠવણ વિકલ્પોનો અભાવ હોય છે. આનો અર્થ એ છે કે મિલિંગ અને ગ્રાઇન્ડીંગનો ઉપયોગ ઝડપથી ગરમી અને શીયર ફોર્સ પેદા કરી શકે છે જે નમૂના અને ડિનેચર પ્રોટીનને નુકસાન પહોંચાડી શકે છે. તેઓ સમય માંગી શકે તેવા પણ હોઈ શકે છે અને મોટા પ્રમાણમાં પ્રારંભિક સામગ્રીની જરૂર પડે છે.
- રાસાયણિક લિસિસ: રાસાયણિક લિસિસ પદ્ધતિઓ, જેમ કે ડિટરજન્ટ-આધારિત લિસિસ, લિપિડ બાયલેયરને વિક્ષેપિત કરીને અને પ્રોટીનને વિકૃત કરીને નમૂનાને નુકસાન પહોંચાડી શકે છે. તેઓને બહુવિધ પગલાઓની પણ જરૂર પડી શકે છે અને શેષ દૂષકો છોડી શકે છે જે ડાઉનસ્ટ્રીમ એપ્લિકેશન્સમાં દખલ કરે છે. ડીટરજન્ટની મહત્તમ માત્રા શોધવી એ એક વધારાનો પડકાર છે.
- ફ્રીઝ-થૉ ચક્ર: ફ્રીઝ-થો સાયકલ સેલ મેમ્બ્રેનને ફાટવાનું કારણ બની શકે છે, પરંતુ પુનરાવર્તિત ચક્ર પ્રોટીન ડિનેચરેશન અને ડિગ્રેડેશનનું કારણ પણ બની શકે છે. આ પદ્ધતિમાં બહુવિધ ચક્રની પણ જરૂર પડી શકે છે, જે સમય માંગી શકે છે અને ઘણી વખત ઓછી ઉપજમાં પરિણમે છે.
- એન્ઝાઇમેટિક લિસિસ: એન્ઝાઈમેટિક લિસિસ પદ્ધતિઓ ચોક્કસ કોષ પ્રકારો માટે વિશિષ્ટ હોઈ શકે છે અને તેને બહુવિધ પગલાંની જરૂર પડે છે, જે તેમને સમય માંગી લે છે. તેઓ કચરો પણ ઉત્પન્ન કરે છે અને નમૂનાના અધોગતિને ટાળવા માટે સાવચેતીપૂર્વક ઑપ્ટિમાઇઝેશનની જરૂર છે. એન્ઝાઈમેટિક લિસિસ કિટ્સ ઘણીવાર મોંઘા હોય છે. જો તમારી વર્તમાન એન્ઝાઇમેટિક લિસિસ પ્રક્રિયા અપૂરતા પરિણામો આપે છે, તો કોષના વિક્ષેપને વધુ તીવ્ર બનાવવા માટે સિનર્જિસ્ટિક પદ્ધતિ તરીકે સોનિકેશન લાગુ કરી શકાય છે.
પરંપરાગત યાંત્રિક અને રસાયણો સેલ લિસિસ પદ્ધતિઓથી વિપરીત, સોનિકેશન એ સેલ વિઘટન માટે ખૂબ જ કાર્યક્ષમ અને વિશ્વસનીય સાધન છે જે સોનિકેશન પરિમાણો પર સંપૂર્ણ નિયંત્રણ માટે પરવાનગી આપે છે. આ સામગ્રી પ્રકાશન અને ઉત્પાદન શુદ્ધતા પર ઉચ્ચ પસંદગીની ખાતરી કરે છે. [cf. બાલાસુંદરમ એટ અલ., 2009]
તે તમામ પ્રકારના કોષો માટે યોગ્ય છે અને નાના અને મોટા પાયે સરળતાથી લાગુ પડે છે – હંમેશા નિયંત્રિત સ્થિતિમાં. અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ સાફ કરવા માટે સરળ છે. અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર હંમેશા ક્લીન-ઇન-પ્લેસ (CIP) અને સ્ટરિલાઈઝ-ઈન-પ્લેસ (SIP) ફંક્શન ધરાવે છે. સોનોટ્રોડમાં વિશાળ ટાઇટેનિયમ હોર્ન હોય છે જેને પાણી અથવા દ્રાવકમાં લૂછી અથવા ફ્લશ કરી શકાય છે (કામના માધ્યમ પર આધાર રાખીને). અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સની જાળવણી તેમની મજબૂતતાને કારણે લગભગ ઉપેક્ષિત છે.
અલ્ટ્રાસોનિક લિસીસ અને સેલ વિક્ષેપ
સામાન્ય રીતે, પ્રયોગશાળામાં નમૂનાઓનું લિસિસ 15 સેકન્ડ અને 2 મિનિટમાં લેશે. જેમ જેમ sonication ની તીવ્રતા કંપનવિસ્તાર દ્વારા સંતુલિત કરવા માટે ખૂબ જ સરળ છે એક sonication સમય સેટિંગ તેમજ યોગ્ય સાધનો પસંદ કરીને, તે સેલ સંશ્લેષણ સેલ્યુલર માળખા પર અને lysis હેતુ પર ખૂબ નરમાશથી અથવા ખૂબ અચાનક, વિક્ષેપ શક્ય છે ( દા.ત. ડીએનએ નિષ્કર્ષણ માટે નરમ નૈતિકતાની જરૂર છે, બેક્ટેરિયાની સંપૂર્ણ પ્રોટીન નિષ્કર્ષણને વધુ તીવ્ર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ સારવારની જરૂર છે). આ પ્રક્રિયા દરમિયાન તાપમાનનું સંકલનિત તાપમાન સેન્સર દ્વારા મોનીટર કરી શકાય છે અને તેને સરળતાથી ઠંડક (બરફ સ્નાન અથવા ઠંડક જેકેટ સાથે ફ્લો કોષો) દ્વારા અથવા સ્પંદનીય સ્થિતિમાં સોનાની પ્રક્રિયા દ્વારા નિયંત્રિત કરી શકાય છે. પલ્સ-મોડ sonication દરમિયાન, ટૂંકા sonication 1-15 સેકન્ડ સમયગાળો ચક્ર ફટકો લાંબા સમયથી તૂટક તૂટક સમયગાળા દરમિયાન ગરમી વિસર્જન અને ઠંડક માટે પરવાનગી આપે છે.
બધા અલ્ટ્રાસાઉન્ડ આધારિત પ્રક્રિયાઓ સંપૂર્ણપણે પ્રજનન અને એક સરખી રીતે સ્કેલેબલ છે.
આ VialTweeter અસંખ્ય નમૂનાઓની એકસાથે, સમાન અને ઝડપી જંતુરહિત તૈયારી માટે અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર છે.
સેલ લિસિસ અને નિષ્કર્ષણ માટે અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર્સ
વિવિધ પ્રકારના અલ્ટ્રાસોનિક ઉપકરણો નમૂનાની તૈયારીના ધ્યેયને મેચ કરવા અને વપરાશકર્તા-મિત્રતા અને ઓપરેશન આરામની ખાતરી આપવા માટે પરવાનગી આપે છે. પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ લેબમાં સૌથી સામાન્ય ઉપકરણો છે. તેઓ 1000mL સુધી 0.1mL ના વોલ્યુમો સાથે નાના અને મધ્યમ કદના નમૂનાઓ તૈયાર કરવા માટે સૌથી યોગ્ય છે. વિવિધ પાવર કદ અને સોનોટ્રોડ્સ સૌથી અસરકારક અને કાર્યક્ષમ સોનિકેટિંગ પરિણામો માટે અલ્ટ્રાસોનિકેટરને નમૂનાના વોલ્યુમ અને જહાજમાં અનુકૂલન કરવાની મંજૂરી આપે છે. જ્યારે સિંગલ સેમ્પલ તૈયાર કરવાના હોય ત્યારે અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ ડિવાઇસ શ્રેષ્ઠ પસંદગી છે.
જો વધુ નમૂનાઓ તૈયાર કરવાના હોય તો, દા.ત. સેલ સોલ્યુશનની 8-10 શીશીઓ, અલ્ટ્રાસોનિક સિસ્ટમ્સ સાથે તીવ્ર પરોક્ષ સોનિકેશન જેમ કે VialTweeter અથવા અલ્ટ્રાસોનિક કપહોર્ન એ કાર્યક્ષમ લિસિસ માટે સૌથી યોગ્ય એકરૂપીકરણ પદ્ધતિ છે. ઘણી શીશીઓ એક જ સમયે, એક જ તીવ્રતા પર સોનિક કરવામાં આવે છે. આ માત્ર સમય બચાવે છે, પરંતુ તમામ નમૂનાઓની સમાન સારવારની પણ ખાતરી આપે છે, જે નમૂનાઓ વચ્ચેના પરિણામોને વિશ્વસનીય અને તુલનાત્મક બનાવે છે. વધુમાં, અલ્ટ્રાસોનિક સોનોટ્રોડ (જેને અલ્ટ્રાસોનિક પ્રોબ, હોર્ન, ટીપ અથવા આંગળી તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે) ને ડૂબાડીને પરોક્ષ સોનિકેશન દરમિયાન ક્રોસ-દૂષણ ટાળવામાં આવે છે. વ્યક્તિગત રીતે નમૂનાના કદ સાથે મેળ ખાતી શીશીઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવતો હોવાથી, સમય માંગી લેતી સફાઈ અને જહાજોના ડિકેન્ટિંગને કારણે નમૂનાની ખોટ અવગણવામાં આવે છે. મલ્ટિવેલ અથવા માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ્સના એકસમાન સોનિકેશન માટે, Hielscher UIP400MTP ઓફર કરે છે.
ઊંચા વોલ્યુમો માટે, દા.ત. સેલ અર્ક ની વાણિજ્યિક ઉત્પાદન માટે, ફ્લો સેલ રિએક્ટર સાથે સતત અવાજ સિસ્ટમો સૌથી યોગ્ય છે. પ્રક્રિયા સામગ્રી સતત અને તે પણ પ્રવાહ પણ sonication ખાતરી. અવાજ વિઘટન પ્રક્રિયા બધા પરિમાણો ઑપ્ટિમાઇઝ અને એપ્લિકેશન અને ચોક્કસ સેલ સામગ્રી જરૂરિયાતો માટે સંતુલિત કરી શકો છો.
બેક્ટેરિયલ કોષો અવાજ lysing માટે દ્રષ્ટાંતરૂપ પ્રક્રિયા:
- સેલ સસ્પેન્શન તૈયાર: સેલ ગોળીઓ સંપૂર્ણપણે દેનારા (તમારા બફર ઉકેલ નીચેના વિશ્લેષણ, દા.ત. ચોક્કસ ક્રોમેટોગ્રાફી પદ્ધતિ સાથે સુસંગત પસંદ કરો) દ્વારા બફર ઉકેલ નિલંબિત હોવું જ જોઈએ. lysozymes અને / અથવા અન્ય ઉમેરણો ઉમેરો, જો જરૂરી હોય તો (તેઓ પણ અલગ / શુદ્ધિકરણ અર્થ સાથે સુસંગત હોવું જોઈએ). મિક્સ / હળવા sonication હેઠળ ધીમેધીમે ઉકેલ homogenize સુધી પૂર્ણ સસ્પેન્શન પ્રાપ્ત થાય છે.
- અલ્ટ્રાસોનિક lysis: એક બરફ સ્નાન માં નમૂના મૂકો. સેલ ભંગાણ માટે, 60-90 બીજા બર્સ્ટની (તમારા ultrasonicator માતાનો પલ્સ સ્થિતિને વાપરી રહ્યા હોય) પર સસ્પેન્શન sonicate.
- (. દા.ત. 10 મિનિટ 10,000 ટનના સ્તરે X ગ્રામ; 4degC ખાતે): જુદા સેન્ટ્રીફ્યુજ lysate. સેલ પેલેટ કાળજીપૂર્વક થી supernatant અલગ હતા. supernatant કુલ સેલ lysate છે. supernatant શુદ્ધિકરણ કર્યા પછી, તમે દ્રાવ્ય સેલ પ્રોટીન એક સ્પષ્ટતા પ્રવાહી મેળવે છે.
જીવવિજ્ઞાન અને જૈવ તકનીક માં ultrasonicators માટે સૌથી સામાન્ય કાર્યક્રમો છે:
- સેલ અર્ક તૈયારી
- ખમીર, બેક્ટેરિયા, છોડના કોષો, નરમ અથવા સખત કોષ પેશીઓ, ન્યુક્લિક સામગ્રીનું વિક્ષેપ
- પ્રોટીન નિષ્કર્ષણ
- તૈયારી અને ઉત્સેચકો અલગતા
- એન્ટિજેન્સ ઉત્પાદન
- ડીએનએ નિષ્કર્ષણ અને / અથવા લક્ષિત વિભાજન
- liposome તૈયારી
પ્રોબ-ટાઈપ અલ્ટ્રાસોનિકેટર સાથે સેલ વિક્ષેપ એ એક કાર્યક્ષમ નમૂના તૈયાર કરવાની પદ્ધતિ છે.
નીચે આપેલ કોષ્ટક તમને સેલ વિક્ષેપ અને નિષ્કર્ષણ માટેના અમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ પર વિહંગાવલોકન આપે છે. દરેક અલ્ટ્રાસોનિક હોમોજેનાઇઝર પર વધુ માહિતી મેળવવા માટે ઉપકરણના પ્રકાર પર ક્લિક કરો. અમારા સારી રીતે પ્રશિક્ષિત અને લાંબા સમયના અનુભવોના તકનીકી સ્ટાફને તમારા નમૂનાઓ માટે સૌથી યોગ્ય અલ્ટ્રાસોનિકેટર પસંદ કરવામાં તમારી મદદ કરવામાં આનંદ થશે!
| બેચ વોલ્યુમ | પ્રવાહ દર | ભલામણ ઉપકરણો |
|---|---|---|
| 10 શીશીઓ અથવા ટ્યુબ સુધી | ના | વીયલટેવેટર |
| મલ્ટીવેલ / માઇક્રોટાઇટર પ્લેટો | ના | UIP400MTP |
| બહુવિધ નળીઓ / જહાજો | ના | કપહોર્ન |
| 1 થી 500 એમએલ | 10 થી 200 એમએલ / મિનિટ | UP100H |
| 10 થી 1000 એમએલ | 20 થી 200 એમએલ/મિનિટ | Uf200 ः ટી, UP200St |
| 10 થી 2000 એમએલ | 20 થી 400 એમએલ / મિનિટ | UP400St |
બાયોટેકનોલોજી, બાયોએન્જિનિયરિંગ એવું, માઇક્રોબાયોલોજી, મોલેક્યુલર બાયોલોજી, જીવરસાયણ, ઇમ્યુનોલોજી, બેક્ટેરિયોલોજી, વાઇરોલોજી, પ્રોટિઓમિક્સ, જનનશાસ્ત્ર, શરીરવિજ્ઞાન, સેલ્યુલર જીવવિજ્ઞાન હેમેટોલોજીની, અને વનસ્પતિશાસ્ત્ર ક્ષેત્રોમાં બહાર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ શાખાઓ મેનીફોલ્ડ કાર્યક્રમો.
લિસિસ: બ્રેકિંગ સેલ સ્ટ્રક્ચર્સ
કોષ અર્ધપારગમ્ય પ્લાઝમા મેમ્બ્રેન એક phospho-લિપિડ દ્વિસ્તરમાં (પણ પ્રોટીન-લિપિડ દ્વિસ્તરમાં; હાઇડ્રોફોબિક લિપિડ અને એમ્બેડેડ પ્રોટીન પરમાણુઓ સાથે હાઇડ્રોફિલિક ફોસ્ફરસ અણુ દ્વારા રચના) માં સમાવે છે કે જેના દ્વારા સુરક્ષિત છે અને (કોષરસ) સેલ આંતરિક વચ્ચે અવરોધ બનાવે છે અને બાહ્યકોષીય પર્યાવરણ. પ્લાન્ટ કોશિકાઓ અને પ્રોકાર્યોટિક કોષો સેલ દિવાલ દ્વારા ઘેરાયેલું આવે છે. અનેક સ્તરો સેલ્યુલોઝ જાડા સેલ દિવાલ કારણે, છોડના કોષો પ્રાણી કોશિકાઓમાં કરતાં lyse માટે કઠણ હોય છે. આવા અંગોમાં, બીજક, માઇટોકોન્ડ્રીઓન કોશિકા તરીકે આંતરિક, cytoskeleton દ્વારા સ્થિર છે.
કોષો lysing, તે કાઢવામાં અને અંગોમાં, પ્રોટીન, ડીએનએ, mRNA અથવા અન્ય જૈવિકઅણુઓ અલગ ધ્યાનમાં રાખીને કરવામાં આવે છે.
સેલ લિસિસની પરંપરાગત પદ્ધતિઓ અને તેમની ખામીઓ
ત્યાં કોષો, કે જે યાંત્રિક અને રાસાયણિક પદ્ધતિઓ, જે ડિટર્જન્ટથી અથવા સોલવન્ટ ઉપયોગ, ઉચ્ચ દબાણ ની અરજી, અથવા એક માળાનો મણકો મિલની અથવા ફ્રેન્ચ પ્રેસ ઉપયોગનો સમાવેશ થાય છે વિભાજિત કરી શકાય lysate માટે કેટલીક પદ્ધતિઓ છે. આ પદ્ધતિઓ સૌથી સમસ્યાવાળા ગેરલાભ મુશ્કેલ નિયંત્રણ અને પ્રક્રિયા પરિમાણો ના ગોઠવણ અને તેથી અસર છે.
નીચેનું કોષ્ટક સામાન્ય લિસિસ પદ્ધતિઓના મુખ્ય ગેરફાયદા દર્શાવે છે:
ટેબલ: સેલ lysis ની પરંપરાગત પદ્ધતિઓ મુખ્ય ગેરફાયદા છે
લિસિસની પ્રક્રિયા
Lysis સંવેદનશીલ પ્રક્રિયા છે. lysis દરમિયાન કોશિકા કલા રક્ષણ નાશ પામે છે, તેમ છતાં નિષ્ક્રિયતા, એક unphysiological પર્યાવરણ (પીએચ કિંમત થી વિચલન) દ્વારા ગુણવિકૃતીકરણ અને કાઢવામાં પ્રોટીન અધઃપતન રોકી શકાય જ જોઈએ. તેથી, સામાન્ય lysis એક બફર ઉકેલ માં કરવામાં આવે છે. મોટા ભાગના મુશ્કેલીઓ બધા અંતઃકોશિક સામગ્રી અથવા / અને લક્ષ્ય ઉત્પાદન ગુણવિકૃતીકરણ એક લક્ષ્યાંક ન હોય તેવા પ્રકાશન પરિણમે અનિયંત્રિત સેલ ભંગાણ માંથી પેદા થાય છે.
સાહિત્ય / સંદર્ભો
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.