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Détachement cellulaire par ultrasons

Le détachement cellulaire par ultrasons est une technique de préparation d'échantillons très efficace et fiable utilisée dans divers domaines de la biologie cellulaire et de la biotechnologie. En utilisant des ondes ultrasoniques, le sonicateur pour plaques multipuits UIP400MTP détache les cellules adhérentes des surfaces de culture et prépare les suspensions cellulaires pour les applications en aval. La sonication offre plusieurs avantages par rapport aux techniques traditionnelles de détachement enzymatique, chimique et mécanique, ce qui en fait un outil précieux pour les chercheurs.

Principe du détachement cellulaire par ultrasons

Le détachement cellulaire par ultrasons repose sur l'utilisation d'ultrasons puissants pour perturber les interactions entre les cellules et le substrat auquel elles sont attachées. Les ondes ultrasoniques génèrent des microbulles, une cavitation acoustique et des vibrations dans le milieu de culture, produisant des forces mécaniques qui délogent doucement mais efficacement les cellules. Ce processus est généralement réalisé à l'aide du sonicateur sans contact UIP400MTP pour les plaques multipuits.

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Les plaques à 96 puits et autres plaques multipuits sont mieux traitées avec le sonicateur UIP400MTP. Ce système à ultrasons est idéal pour le détachement des cellules, le délogement des biofilms, la lyse, la fragmentation de l'ADN et la solubilisation des cellules lors du traitement d'échantillons à haut débit.

Sonicateur sans contact UIP400MTP pour le détachement des cellules

Le détachement des cellules est crucial lors de la culture de cellules adhérentes. Bien que la trypsinisation soit la technique la plus couramment utilisée, elle peut diminuer la viabilité des cellules en endommageant la membrane cellulaire et la matrice extracellulaire. Pour améliorer l'efficacité de la culture cellulaire, il est important de minimiser ces dommages. Le détachement cellulaire par ultrasons est une technique sans enzyme très efficace et fiable. Le sonicateur pour microplaques UIP400MTP est donc une excellente alternative à la séparation cellulaire enzymatique. La sonication applique la cavitation acoustique et l'agitation dans un milieu sans sérum, ce qui déloge doucement les cellules sans les endommager.

Comparaison du détachement cellulaire par ultrasons avec les techniques traditionnelles

Avantages Détachement par ultrasons Détachement enzymatique Détachement chimique
Viabilité cellulaire élevé Moyen Variable
Vitesse Rapide (minutes) Modéré (de quelques minutes à quelques heures) Variable (de quelques minutes à quelques heures)
Préservation des marqueurs de surface Excellent Peut être modifié Peut être modifié
Évolutivité élevé Moyen Variable
Sans résidus Oui Non (résidu d'enzyme) Variable (résidus chimiques)
Coût de l'équipement Investissement unique, pas de produits jetables exclusifs, pas de coûts récurrents Coûts récurrents Coûts récurrents
Facilité d'optimisation facile facile Variable

 
 

Avantages du sonicateur pour plaques multipuits pour la préparation d'échantillons à haut débit tels que le détachement des cellules, le délogement du biofilm, la solubilisation des cellules, la lyse et le cisaillement de l'ADN.

Le sonicateur pour plaques multi-puits UIP400MTP offre de nombreux avantages pour la préparation d'échantillons à haut débit tels que le détachement de cellules.

 

Cette vidéo présente le sonicateur Hielscher UIP400MTP, un outil puissant pour la sonication d'échantillons dans des boîtes de Petri (plaques d'agar). Perturbez les cellules pour une analyse plus poussée, extrayez les protéines pour la recherche, homogénéisez divers échantillons. L'UIP400MTP est beaucoup plus puissant que les bains ultrasoniques et délivre une sonication uniforme sur l'ensemble de la boîte de Petri. Vous avez un contrôle précis sur l'amplitude, la puissance et les impulsions. Une minuterie et une sonde de température intégrées garantissent des résultats constants. Le sonicateur de plaques UIP400MTP refroidit les échantillons avec un bain d'eau (refroidisseur externe en option). Il est livré avec un boîtier en acrylique durable pour l'observation pendant la sonication.
Ce sonicateur Hielscher est certifié ISO, UL, RoHs et CE. Il peut fonctionner 24 heures sur 24 et 7 jours sur 7 pour les flux de travail à haut débit.

Sonicateur pour boîtes de Petri, plaques d'agar et plaques multi-puits

Vignette vidéo

 

Vous trouverez ci-dessous un exemple d'instruction pour le détachement de cellules à l'aide du sonicateur pour plaques multi-puits UIP400MTP.
 

Équipement et matériel pour le détachement cellulaire par ultrasons

  • Sonicateur sans contact pour plaques multi-puits UIP400MTP : Ce sonicateur à haut débit est l'outil clé. Le sonicateur de plaques UIP400MTP convient à toutes les plaques multi-puits et microtitres standard ainsi qu'aux boîtes de Pétri. Les ondes ultrasonores fournissent l'énergie mécanique nécessaire au détachement des cellules.
  • Plaques de culture cellulaire ou boîte de Petri : Récipients standard utilisés pour les cultures de cellules adhérentes.
  • Milieu de culture : Milieu liquide dans lequel les cellules sont cultivées et maintenues.
  • PBS stérile (solution saline tamponnée au phosphate) : Utilisé pour laver les cellules avant le détachement.
  • Tubes de collecte : Pour recueillir la suspension de cellules détachées.

Protocole pour le détachement par ultrasons à l'aide du sonicateur de plaque UIP400MTP

  1. Préparation
    – Veiller à ce que tout le matériel soit propre et stérile afin d'éviter toute contamination.
    – Préchauffer le milieu de culture et le PBS à la température appropriée (généralement 37°C).
  2. Lavage des cellules
    – Aspirer le milieu de culture de la fiole ou de la plaque de culture cellulaire.
    – Laver délicatement les cellules avec du PBS stérile pour éliminer tout résidu de milieu et les cellules détachées.
  3. Sonication
    – Ajouter un petit volume de PBS ou de milieu de culture frais à la fiole ou à la plaque pour couvrir la monocouche de cellules.
    – Placer la boîte de Petri ou la plaque dans le sonicateur UIP400MTP.
    – Soniquer pendant une durée déterminée, généralement de quelques secondes à quelques minutes, en fonction du type de cellule et de la force de l'attachement.
  4. Collecte de suspensions cellulaires
    – Après la sonication, observer les cellules au microscope pour s'assurer de leur détachement.
    – Pipeter doucement la suspension cellulaire pour recueillir les cellules détachées.
    – Transférer la suspension dans un tube de collecte.
  5. Traitement après détachement
    – Centrifuger la suspension cellulaire si nécessaire pour concentrer les cellules.
    – Remettre les cellules en suspension dans un milieu de culture frais ou un tampon pour les applications en aval.

Notes : Les paramètres (tels que la durée et l'intensité de la sonication) doivent être optimisés pour les différents types de cellules afin d'éviter de les endommager. Certains types de cellules délicates peuvent être plus sensibles au traitement par ultrasons, ce qui nécessite une optimisation minutieuse.

Applications pratiques du détachement cellulaire par ultrasons

Le détachement cellulaire par ultrasons est utilisé dans divers contextes cliniques et de recherche :

  1. Cytométrie en flux : Préparation des suspensions de cellules uniques pour l'analyse.
  2. Dénombrement des cellules et essais de viabilité : Détachement des cellules pour un comptage précis et une évaluation de la viabilité.
  3. Sous-culture : Transfert de cellules d'un récipient de culture à un autre.
  4. Expériences de biologie moléculaire : Isolement des cellules pour l'extraction de l'ADN, de l'ARN et des protéines.

Lisez ici comment le sonicateur UIP400MTP pour plaques à 96 puits est utilisé pour déloger les biofilms dans les essais sur les biofilms tels que le protocole ASTM E2799 !

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Pourquoi remplacer le raclage cellulaire par le détachement cellulaire avec le sonificateur de microplaques UIP400MTP ?

Le remplacement du raclage des cellules par le détachement des cellules à l'aide du sonicateur pour microplaques UIP400MTP offre plusieurs avantages aux chercheurs. Contrairement au grattage manuel, la sonication précisément contrôlable de l'UIP400MTP assure un détachement constant et en douceur des cellules, minimisant les dommages mécaniques et préservant la viabilité des cellules. L'UIP400MTP permet un contrôle précis des paramètres de sonication, ce qui permet un traitement uniforme dans tous les puits et élimine la variabilité entre les échantillons. Cette méthode est plus rapide, plus efficace et évolutive, ce qui la rend idéale pour les applications à haut débit tout en préservant la reproductibilité et l'intégrité des cultures cellulaires sensibles. Retrouvez l'étude comparative ici !

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Sonicator pour plaques de 96 puits UIP400MTP pour le détachement et la lyse des cellules, l'extraction de l'ADN, la fragmentation de l'ADN, la solubilisation des cellules et la purification des protéines.

Sonicateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP pour la sonication de plaques microtitriques et multipuits

Sonicateur de plaques multipuits UIP400MTP pour la préparation d'échantillons à haut débit

Sonicateur pour plaques à 96 puits UIP400MTP : le liquide transmettant les ultrasons entoure tous les puits et assure une sonication uniforme de chaque échantillon.

 

Types de cellules communes pour le détachement cellulaire par ultrasons

  • Fibroblastes :
    Utilisé couramment dans la recherche sur l'ingénierie tissulaire et la cicatrisation des plaies.
    Cellules adhérentes qui doivent être détachées pour le passage et les expériences.
  • Cellules épithéliales :
    Utilisé dans les études sur les barrières tissulaires, la recherche sur le cancer et les tests de médicaments.
    Nécessite un détachement pour l'analyse et la sous-culture.
  • Cellules endothéliales :
    Important pour la recherche vasculaire et les études sur l'angiogenèse.
    Cellules adhérentes devant être détachées pour les essais in vitro.
  • Cellules souches :
    Y compris les cellules souches mésenchymateuses et les cellules souches pluripotentes induites.
    Nécessitent des méthodes de détachement douces pour maintenir la viabilité et la pluripotence.
  • Lignées de cellules cancéreuses :
    Largement utilisé dans la recherche sur le cancer et le développement de médicaments.
    Cellules adhérentes qui doivent être détachées régulièrement pour la manipulation expérimentale.
  • Hépatocytes :
    Utilisé dans les études de la fonction hépatique et dans la recherche sur le métabolisme des médicaments.
    Nécessite un détachement pour les modèles et les essais in vitro.
  • Kératinocytes :
    Type de cellule prédominant dans l'épiderme et couramment utilisé dans la recherche sur la peau, les études de cicatrisation et les tests cosmétiques.
    Comme d'autres cellules adhérentes, les kératinocytes se fixent à la surface des flacons ou des plaques de culture et doivent être détachés pour diverses procédures expérimentales, notamment le passage, l'analyse et la sous-culture.
  • Macrophages :
    Nécessitent souvent un détachement lorsqu'ils sont cultivés in vitro.
    Les macrophages sont des cellules adhérentes qui se fixent généralement à la surface des flacons ou des plaques de culture. Pour les prélever en vue d'applications en aval telles que l'analyse, la sous-culture ou les expériences, il est nécessaire de les détacher de la surface de culture.


Littérature / Références

Qu'il faut savoir

Qu'est-ce que le décollement des cellules ?

Le détachement cellulaire est le processus de séparation des cellules adhérentes de la surface de leur récipient de culture, ce qui permet de les collecter et de les préparer pour d'autres procédures expérimentales ou analyses. Cette opération peut être réalisée par des méthodes enzymatiques, chimiques, mécaniques ou ultrasoniques.

Qu'est-ce que la dissociation cellulaire ?

La dissociation cellulaire est le processus de décomposition des agrégats cellulaires ou des tissus en cellules individuelles viables. Pour ce faire, la matrice extracellulaire et les adhésions cellule-cellule sont rompues par des méthodes enzymatiques, mécaniques (par exemple, la sonication) ou chimiques. La dissociation cellulaire est essentielle pour diverses applications, notamment la culture de cellules primaires, l'analyse de cellules individuelles et la préparation de suspensions cellulaires à des fins expérimentales et thérapeutiques.

Quelle est la différence entre une culture de cellules adhérentes et un biofilm ?

La culture de cellules adhérentes fait référence à la croissance de cellules, généralement eucaryotes, qui s'attachent à un substrat dans un environnement de laboratoire contrôlé, en s'appuyant sur les nutriments fournis par le milieu de culture. En revanche, un biofilm est une communauté microbienne complexe et naturelle qui adhère à une surface et est enveloppée dans une matrice extracellulaire, avec des cellules présentant un comportement collectif, des gradients chimiques et une résistance accrue aux agressions extérieures. Alors que les cultures de cellules adhérentes sont artificielles et utilisées à des fins de recherche, les biofilms sont des écosystèmes dynamiques que l'on trouve dans des environnements naturels ou artificiels.
La sonication avec l'UIP400MTP est une technique très efficace, sans enzyme, pour détacher les cellules adhérentes et déloger les biofilms. En savoir plus sur les avantages du délogement du biofilm des microplaques et des boîtes de Petri à l'aide du sonificateur pour plaques multi-puits UIP400MTP !

Quels sont les avantages du détachement cellulaire par ultrasons ?

  • Doux pour les cellules : Le détachement par ultrasons est moins brutal que les méthodes enzymatiques (comme la trypsinisation) et le grattage mécanique, préservant la viabilité des cellules et les marqueurs de surface.
  • Rapide et efficace : Le processus est rapide, ne prenant souvent que quelques minutes, et permet de détacher efficacement les cellules, même sur de grandes surfaces de culture.
  • Évolutivité : Il convient aussi bien aux applications de laboratoire à petite échelle qu'aux processus biotechnologiques de plus grande envergure.
  • Pas de résidu enzymatique : Élimine le besoin d'enzymes, réduisant ainsi le risque d'altérer les protéines de surface des cellules ou d'introduire des contaminants.

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