FFPE: n korkean suorituskyvyn näytteen valmistelu: proteiiniuutto ja nukleiinihapon leikkaus
Korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteen UIP400MTP, Hielscher Ultrasonics käsittelee formaliinin kiinnityksen ja parafiinin upotetun (FFPE) kudosvalmistuksen haasteita. Opi kuinka ultrasonication käsittelee FFPE-näytettä suurina määrinä FFPE-parafiinointiin, kudoslyysiin, homogenisointiin, proteiinien uuttamiseen ja DNA / RNA-leikkaukseen! Hyödynnä ultraääni FFPE-kudosvalmistetta – suurten näytemäärien käsittely multiwell-levyissä! Hanki korkealaatuisia näytteitä ja hanki korkeat näytemäärät luotettavien tutkimustulosten saamiseksi! Ja viimeisenä, mutta ei vähäisimpänä, säästä aikaa ja rahaa!
FFPE-näytteen valmistelu, jota helpottaa korkean suorituskyvyn sonikaatio
Formaliinin kiinnitys ja parafiinin upottaminen (FFPE) on yleisin menetelmä kiinteiden kudosten säilyttämiseksi ja arkistoimiseksi. Biomolekyylien uuttaminen FFPE-kudosnäytteistä aiheuttaa usein merkittäviä haasteita tallennettujen näytteiden laadun vuoksi. Nämä näytteet, jotka ovat korvaamattomia resursseja molekyylibiologiassa ja kliinisessä tutkimuksessa, tarjoavat rikkaan biologisen tiedon lähteen retrospektiivisiin tutkimuksiin ja diagnostisten biomarkkereiden validointiin. Formaliinin kiinnittymis- ja parafiiniupotusprosessi, säilyttäen samalla kudosarkkitehtuurin ja morfologian, vaikeuttaa kuitenkin korkealaatuisten nukleiinihappojen ja proteiinien uuttamista. Formaliini indusoi nukleiinihappojen ja proteiinien silloittautumista, mikä johtaa molekyylien pirstoutumiseen ja kemiallisiin muunnoksiin. Opi kuinka korkean suorituskyvyn ultraäänilaite UIP400MTP voittaa FFPE-näytteen valmistelun haasteet!
Ultrasonicator tehokkaaseen FFPE-näytteen valmisteluun
- Helppokäyttöinen työnkulku: Yksinkertaistetut prosessit, jotka ovat käyttäjäystävällisiä.
- Parafinisointi, proteiinien uuttaminen, DNA / RNA-leikkaus
- Nopea korkean suorituskyvyn käsittely: Monikuoppalevyjen tehokas käsittely.
- Tehokas parafiinien poisto: Parannettu proteiinien liukoisuus.
- Myrkyttömät liuottimet: Välttää haitallisten orgaanisten liuottimien, kuten ksyleenin, käyttöä.
UIP400MTP korkean suorituskyvyn sonikaattori korkean suorituskyvyn FFPE-näytteiden käsittelyyn monikuoppalevyissä
Edistysaskeleet proteiiniuuttotekniikoissa FFPE-kudoksesta
Hielscher Ultrasonics käsittelee korkean suorituskyvyn FFPE-näytteen valmistuksen haasteita. Sonikaatio käyttää ultraääniaaltoja mekaanisten värähtelyjen ja keskittyneen kavitaation tuottamiseksi, häiritsee tehokkaasti solurakenteita ja parantaa biomolekyylien liukenemista. Tämä tekniikka on saavuttanut suosiota kyvystään lisätä nukleiinihapon ja proteiinien uuttamisen tehokkuutta ja saantoa FFPE-kudoksista sekä DNA- ja RNA-leikkausta kirjaston valmistelua varten. On erittäin tärkeää korostaa, että ultrasonication, jossa käytetään UIP400MTP multiwell plate sonicatoria, ylläpitää näiden biomolekyylien eheyttä loppupään sovelluksissa.
Nukleiinihapon leikkaus käyttämällä korkean suorituskyvyn ultrasonicationia
Monikuoppainen ultraäänilaite UIP400MTP käytettäväksi korkean suorituskyvyn asetuksissa, tuo FFPE-näytteiden valmistuksen uudelle tasolle. Tämä monikaivolevyn sonikaatiomenetelmä tarjoaa tehokkaan ja luotettavan ratkaisun useiden näytteiden samanaikaiseen käsittelyyn. Se helpottaa DNA: n, RNA: n ja proteiinien nopeaa ja toistettavaa uuttamista, jotka ovat kriittisiä erilaisille analyyttisille tekniikoille, mukaan lukien seuraavan sukupolven sekvensointi (NGS), kvantitatiivinen PCR ja proteomiikka-analyysit. Sonikaatioparametrien, kuten amplitudin, keston ja lämpötilan, optimointi parantaa edelleen uutettujen biomolekyylien laatua ja määrää.
Multiwell-levyjen UIP400MTP sonicator tarjoaa merkittäviä etuja DNA: n ja RNA: n pirstoutumiselle ja leikkaamiselle FFPE-kudoksesta. Yksi tämän järjestelmän erottuvista piirteistä on sen kyky saavuttaa DNA: n ja RNA: n kapeat fragmenttikoot, mikä tarjoaa sonikaatiointensiteetin tarkan virityksen lyhyiden fragmenttien saamiseksi 150-200 emäsparista (bp) tai pidemmistä fragmenteista 15-20 kiloemäsparista (kbp). Tämä monipuolisuus tekee UIP400MTP välttämättömän sekä lyhyt- että pitkälukuisissa sekvensointisovelluksissa, mikä takaa korkealaatuiset tulokset seuraavan sukupolven sekvensoinnille (NGS) ja koko genomin sekvensoinnille (WGS). Sen tarkka fragmenttikoon hallinta on ratkaisevan tärkeää kaikkien genomiikan alojen tutkijoille, koska se mahdollistaa näytteiden valmistamisen spesifikaatioiden mukaisesti.
Ota meihin yhteyttä saadaksesi edistyneitä ratkaisuja FFPE-pehmopaperiin
Tutustu UIP400MTP multiwell plate sonicatoriin tehokkaaseen biomolekyylien talteenottoon FFPE-näytteistä, ylläpitämällä uutettujen nukleiinihappojen ja proteiinien eheyttä ja varmistamalla tulosten toistettavuus. Tämä tekniikka integroituu saumattomasti muihin valmisteleviin ja analyyttisiin työnkulkuihin, virtaviivaistaen ja tehostaen molekyylitutkimuksia FFPE-kudosarkistojen avulla.
Fiksatiivit ja niiden vaikutukset
Fiksaatio on ratkaiseva vaihe näytteen valmistuksessa, joka säilyttää solurakenteet, pysäyttää biokemialliset reaktiot ja estää hajoamisen. Erilaisia kiinnitysaineita käytetään erityisten kokeellisten vaatimusten mukaan. Kaksi yleisintä kiinnitysainetta ovat formaldehydi ja paraformaldehydi, jotka silloittavat proteiineja ja nukleiinihappoja säilyttäen solujen ja kudosten morfologian ja antigeenisyyden. Muita kiinnitysaineita, kuten etanolia, metanolia ja glutaraldehydiä, käytetään erityisiin sovelluksiin.
Formaldehydi ja paraformaldehydifiksatiivit muodostavat metyleenisiltoja aminoryhmien välille, mikä johtaa proteiinien silloittumiseen. Tämä prosessi immobilisoi tehokkaasti solukomponentit säilyttäen niiden eheyden seuraavien analyysivaiheiden aikana. Näiden kiinnitysaineiden vaikutuksiin voivat vaikuttaa sellaiset tekijät kuin pitoisuus, pH ja lämpötila, ja näiden parametrien optimointi on ratkaisevan tärkeää solurakenteiden optimaalisen säilymisen varmistamiseksi.
Ultraääni FFPE-valmistuksen edut
Ultrasonication on tehokas tekniikka kiinnittyneiden solujen ja kudosten häiritsemiseksi, joka ylittää tavanomaiset tekniikat. Se tarjoaa useita merkittäviä etuja perinteisiin lyysimenetelmiin verrattuna:
- Nopeus ja tehokkuus: Ultraäänilyysi tarjoaa solujen ja kudosten nopean hajoamisen, mikä vähentää merkittävästi käsittelyaikaa mekaanisiin tai kemiallisiin hajoamismenetelmiin verrattuna. Ultraäänianturin tuottamat korkeataajuiset ääniaallot luovat mekaanisia leikkausvoimia, jotka aiheuttavat kiinnittyneiden solurakenteiden häiriöitä. Tämä nopea ja tehokas häiriö antaa tutkijoille mahdollisuuden käsitellä suuria näytemääriä lyhyessä ajassa.
- Hellävarainen ja säädettävä: Ultraäänilyysi tarjoaa hellävaraisen häiriömekanismin, joka minimoi herkkien biomolekyylien, kuten proteiinien, nukleiinihappojen ja entsyymien, vahingot. Toisin kuin mekaaniset menetelmät, jotka tuottavat liiallista lämpöä tai leikkausvoimia, ultraäänilyysi käyttää hallittua kavitaatiota solujen häiritsemiseksi säilyttäen samalla solunsisäisten komponenttien eheyden ja toimivuuden.
- Monipuolisuus: Ultraäänilyysiä voidaan soveltaa erilaisiin kiinnitysaineisiin, jolloin tutkijat voivat työskennellä monenlaisten kiinnitettyjen näytteiden kanssa. Riippumatta siitä, käytetäänkö formaldehydiä, paraformaldehydiä tai vaihtoehtoisia kiinnitysaineita, ultraäänilyysi tuottaa jatkuvasti tehokkaita häiriöitä, mikä varmistaa solukomponenttien optimaalisen talteenoton.
- Korkea saanto ja laatu: Ultraäänilyysi helpottaa ehjien solukomponenttien suuria saantoja, koska se kykenee häiritsemään kiinnittyneitä soluja ja kudoksia tasaisesti. Tämä mahdollistaa loppupään sovellukset, kuten proteiinianalyysi, nukleiinihappouutto ja entsymaattiset määritykset, tuottamaan luotettavia ja toistettavia tuloksia.
- Automaation yhteensopivuus: Ultraäänilyysi voidaan helposti integroida automatisoituihin järjestelmiin, mikä mahdollistaa korkean suorituskyvyn näytteen käsittelyn. Tämän yhteensopivuuden ansiosta tutkijat voivat virtaviivaistaa työnkulkuaan ja lisätä tuottavuutta erityisesti laajamittaisissa tutkimuksissa.
96-kuoppainen levysonikaattori UIP400MTP mikrotiitteri- ja multiwell-levyjen sonikointiin
Ultraäänilyysi on mullistanut kiinnittyneiden solujen ja kudosten häiriöt ja tarjoaa lukuisia etuja perinteisiin lyysimenetelmiin verrattuna. Sen nopeus, tehokkuus, selektiivisyys, monipuolisuus, korkea saanto ja automaatioyhteensopivuus tekevät siitä välttämättömän työkalun molekyylibiologian ja biotekniikan tutkimuksessa. Tarjoamalla kosketuksettomia sonikaattoreita sekä koetintyyppisiä sonikaattoreita, Hielscher Ultrasonics tarjoaa sopivimman ultraäänihomogenisaattorin biotieteiden sovellukseesi. Haluatko käsitellä yksittäisiä näytteitä, useita näytteitä tai erittäin suuria näytemääriä samanaikaisesti, tarjoamme sinulle parhaan sonikaattorin, joka vastaa tutkimus- ja diagnostisia vaatimuksiasi.
Lue lisää Hielscherin kosketuksettomista sonikaattoreista moninäytteen ja korkean suorituskyvyn näytteen valmistukseen!
- kertaluonteinen investointi
- Käytä omia kulutustarvikkeitasi
- Ei toistuvia kustannuksia patentoiduille lisävarusteille ja kulutustarvikkeille
- korkea suorituskyky
- Tarkka ohjaus
- Uusinta teknologiaa
- luotettavuus & rotevuus
- säädettävä, tarkka prosessinohjaus
- teollisuuslaatu: voidaan käyttää jatkuvasti 24/7
- Helppo ja turvallinen käyttää
- vähän huoltoa vaativa
Levysonikaattori UIP400MTP kaikille 96-kuoppaisille levyille, mikrotitterilevyille ja monikuoppalevyille.
Suunnittelu, valmistus ja konsultointi – Laatu valmistettu Saksassa
Hielscher-ultraääniastiat ovat tunnettuja korkeimmista laatu- ja suunnittelustandardeistaan. Kestävyys ja helppokäyttöisyys mahdollistavat ultraäänilaitteidemme sujuvan integroinnin teollisuuslaitoksiin. Hielscher-ultraäänilaitteet käsittelevät helposti karkeita olosuhteita ja vaativia ympäristöjä.
Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifioitu yritys ja painottaa erityisesti korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteita, joissa on huipputeknologia ja käyttäjäystävällisyys. Tietenkin, Hielscher-ultraäänilaitteet ovat CE-yhteensopivia ja täyttävät UL: n, CSA: n ja RoHs: n vaatimukset.
Ota yhteyttä! / Kysy meiltä!
UIP400MTP Ultraäänilaite: Korkean suorituskyvyn FFPE-näytteen valmistelu Multi-Well-Platessa
UKK
Alla vastaamme usein kysyttyihin kysymyksiin, jotka ovat merkityksellisiä FFPE-kudosten valmistuksessa ja FFPE-näytteiden ultrasonicationissa.
Miten FFPE-kudos valmistetaan?
FFPE-kudoksen valmistelun vaiheet: Tuoreen kudoksen huolellinen käsittely ja käsittely ovat kriittisiä korkealaatuisten FFPE-näytteiden tuottamiseksi. Soluarkkitehtuurin, nukleiinihappojen ja proteiinien säilymisen varmistaminen on välttämätöntä tarkan loppupään analyysin kannalta. Jokainen vaihe – keräämisestä upottamiseen – vaatii tarkkuutta, jotta näytteen eheys säilyy erilaisissa analyyseissä, kuten histologisessa tutkimuksessa, immunohistokemiassa ja molekyylitutkimuksissa. Oikein toteutettuna tämä kiinnitys- ja upotusprosessi varmistaa, että säilynyt kudos heijastaa tarkasti in vivo -tilaa, mikä mahdollistaa luotettavat diagnostiset ja tutkimustulokset.
Opastamme sinut FFPE-kudosnäytteiden upotusprosessin 6 päävaiheen läpi.
- Kudosten keräys
Elävistä nisäkkäistä ja kudosviljelmistä otetut koepalat ovat molemmat käyttökelpoisia lähteitä tuoreen kudoksen saamiseksi FFPE-näytteen valmistusta varten.
On tärkeää käyttää aseptista tekniikkaa: Käytä steriilejä instrumentteja ja käsineitä saastumisen välttämiseksi. Ihannetapauksessa kerää kudokset steriiliin ympäristöön, kuten kirurgiseen sarjaan tai laminaariseen virtaushuppuun.
Koska näyte on hyvin hauras, sen herkkä käsittely on välttämätöntä: Minimoi käsittelyn viiveet ja aloita välittömästi kudoksen käsittely leikkauksen jälkeen. Tämä on ratkaisevan tärkeää autolyysin ja hajoamisen estämiseksi. Pidä kudos huoneenlämmössä; Vältä jäätymistä, koska se voi aiheuttaa jääkiteiden muodostumista ja kudosvaurioita. - Kudosten kiinnitys
Ensinnäkin kudosta käsitellään kiinnitysliuoksella: Käytä 10% neutraalipuskuroitua formaliinia (NBF), joka vastaa 4% formaldehydiä vedessä, puskuroituna neutraaliin pH-arvoon.
Upota kudos kokonaan formaliiniin. Varmista, että kiinnitys-kudostilavuussuhde on vähintään 10:1. Kiinnitysaika vaihtelee tyypillisesti 6-24 tunnin välillä kudostyypistä ja koosta riippuen. On tärkeää, että kiinnitysaine voi tunkeutua kudokseen perusteellisesti. Liiallinen kiinnitys voi kuitenkin johtaa ristisilloitukseen, joka vaikeuttaa antigeenin talteenottoa, kun taas alikiinnitys voi johtaa huonoon kudoksen säilymiseen. - Kudosten leikkaus
Toiseksi leikkaa kudos noin 3-5 mm: n paksuuteen, jotta kiinnitysaine pääsee riittävästi tunkeutumaan. Varmista kudoksen oikea suuntaus asiaankuuluvien histologisten rakenteiden sieppaamiseksi. Tämä helpottaa uuttoprosessia, kun kudosta käytetään myöhemmin analyysiin. - Kiinnitetyn näytteen käsittely
Nyt kiinteä kudos on kuivattava: Kiinnityksen jälkeen kudos on kuivattava, jotta parafiinivaha tunkeutuu perusteellisesti. Kudos johdetaan luokitellun etanolisarjan (70%, 80%, 90% ja 100%) läpi veden poistamiseksi.
Puhdistaminen ksyleenillä: Parafiinivaha ei liukene veteen, mutta liukenee ksyleeniin. Siksi kudoksessa oleva vesi on korvattava ksyleenillä. Ksyleeni itsessään ei kuitenkaan liukene veteen, mutta liukenee alkoholiin, mikä edellyttää välivaihetta, jossa vesi korvataan ensin alkoholilla. Upota kudos ksyleeniin tai ksyleenin korvikkeeseen etanolin poistamiseksi ja valmistele kudos parafiinin tunkeutumista varten.
Tunkeutuminen parafiinilla: Upota kudos sulaan parafiinivahaan varmistaen täydellinen tunkeutuminen. Tämä vaihe sisältää tyypillisesti useita parafiinin vaihtoja perusteellisen kyllästämisen varmistamiseksi. - Kudoksen upottaminen
Tässä vaiheessa kudos muovataan kudoslohkoksi: Aseta kudos haluttuun suuntaan muottiin ja kaada sula parafiini sen päälle. Anna parafiinin jähmettyä jäähdyttämällä huoneenlämmössä tai kylmällä levyllä. - Leikkaus ja asennus
Mikrotomia: Jos haluat viipaloida upotetun kudoksen, leikkaa mikrotoomilla ohuita osia (tyypillisesti 4-5 mikrometriä) parafiinilohkosta. Sitten näyte asennetaan asettamalla osat lasilevyille myöhempää värjäystä ja mikroskooppista analyysiä varten.
Tarkista lopuksi histologian laatu: Arvioi ensimmäiset osat mikroskoopilla varmistaaksesi oikean kiinnityksen ja käsittelyn. Säädä protokollia tarpeen mukaan kudostyypin ja havaitun laadun perusteella.
FFPE-kudoksia voidaan käyttää RNA: n, DNA: n ja proteiinien talteenottoon sekä syövän tai muun sairauden merkkien löytämiseen. Niitä voidaan säilyttää vuosia, ja ne ovat olennainen osa sitä, miten tutkijat ja lääkärit hyödyntävät kudosnäytteitä diagnoosissa ja tutkimuksessa.
Mitkä ovat yleisiä ongelmia ja haasteita FFPE-kudoksessa?
Formaliinikiinnitteisiä, parafiiniin upotettuja (FFPE) kudosnäytteitä käytetään laajalti tutkimuksessa ja diagnostiikassa, mutta niihin liittyy useita haasteita ja yleisiä ongelmia:
- Biomolekyylien hajoaminen: Pitkäaikainen kiinnitys voi johtaa DNA: n, RNA: n ja proteiinien hajoamiseen, mikä vaikeuttaa korkealaatuisten nukleiinihappojen tai proteiinien uuttamista loppupään sovelluksiin. Oikea kiinnitys (ali- ja ylifiksaation välttäminen) on välttämätöntä kudosten säilymiselle.
- Antigeenin peittäminen: Kiinnitysprosessi voi peittää antigeeniset kohdat, mikä vähentää vasta-aineiden sitoutumisen tehokkuutta immunohistokemiassa ja muissa immunologisissa määrityksissä. Tämä vaatii usein antigeenin talteenottoa, menettelyä, jonka avulla epitoopin peitto käännetään ja epitooppi-vasta-ainesitoutuminen palautuu. Täydellistä antigeenisyyttä ei kuitenkaan aina palauteta.
- Muuttuva kiinnityslaatu: Erot kiinnitysajoissa ja -olosuhteissa voivat johtaa epäjohdonmukaiseen näytteen laatuun, mikä vaikuttaa tulosten toistettavuuteen ja vertailtavuuteen. Käytä luotettavia kiinnitysprotokollia ja vältä ali- ja ylikiinnitystä.
- DNA-vauriot ja pirstoutuminen: FFPE-näytteiden formaliinin kiinnittyminen voi aiheuttaa erityyppisiä DNA-vaurioita, mukaan lukien sytosiinin deaminaatio (C-T-mutaatiot), oksidatiiviset vauriot (esim. 8-okso-guaniini, joka johtaa G-T-mutaatioihin) sekä fyysiset häiriöt, kuten nikkejä, aukkoja ja emäksisiä kohtia, jotka estävät DNA-polymeraasiaktiivisuutta. Formaliinin kiinnittymisprosessi voi aiheuttaa DNA: n pirstoutumista, mikä vaikeuttaa geneettisiä ja genomianalyysejä, kuten PCR: ää ja sekvensointia.
- RNA-laatu: FFPE-kudoksista uutettu RNA on usein pirstoutunutta ja kemiallisesti modifioitua, mikä tekee korkealaatuisten transkriptomisten analyysien tekemisestä haastavaa.
- Proteiinien muunnokset: Formaliini voi aiheuttaa kemiallisia modifikaatioita proteiineissa, mikä vaikuttaa niiden rakenteeseen ja toimintaan, mikä voi häiritä proteomiikka-analyysejä.
- Näytteen käsittelyn artefaktit: Upotus- ja leikkausprosessin aikana mekaaninen rasitus ja lämpö voivat tuoda esineitä ja aiheuttaa lisävaurioita kudokseen.
- Erien välinen vaihtelu: Kiinnitys- ja upotusprotokollien vaihtelut eri erien välillä voivat johtaa merkittävään vaihteluun tuloksissa, mikä vaikeuttaa tutkimusten välistä vertailua.
- Tallennusongelmat: FFPE-lohkojen pitkäaikainen varastointi voi johtaa nukleiinihapon eheyden lisääntymiseen ja menetykseen ajan myötä, mikä vaikuttaa arkistonäytteiden elinkelpoisuuteen retrospektiivisiä tutkimuksia varten.
Silloitus: Formaliinin kiinnitys aiheuttaa proteiinien ja nukleiinihappojen ristisidosta, mikä voi estää molekyylianalyysiä ja vaikuttaa immunohistokemian ja muiden määritysten tarkkuuteen.
Optimoitujen protokollien käyttö, huolellinen näytteiden käsittely ja kehittyneiden tekniikoiden soveltaminen auttavat parantamaan FFPE-kudoksista saatujen tietojen laatua ja luotettavuutta.
Mitä eroa on FFPE: n ja jäädytetyn kudoksen välillä?
FFPE (Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded) -kudos säilötään formaliinilla kudoksen kiinnittämiseksi ja upotetaan sitten parafiinivahaan, mikä mahdollistaa pitkäaikaisen varastoinnin huoneenlämmössä säilyttäen samalla kudoksen morfologian. Sitä vastoin jäädytetty kudos säilyy nopeasti jäädyttämällä, mikä ylläpitää paremmin nukleiinihappojen ja proteiinien eheyttä, mutta vaatii varastointia hyvin alhaisissa lämpötiloissa.
Mitä kemikaaleja käytetään FFPE-upottamiseen?
FFPE-upotukseen käytetään yleensä formaliinia kiinnitykseen ja parafiinivahaa upottamiseen. FFPE-upotusta varten kudokset kiinnitetään tyypillisesti käyttämällä joko 10% (v/v) neutraalia puskuroitua formaliinia (FA) tai juuri valmistettua 4% (w/v) formaldehydiliuosta (PFA), joka on valmistettu paraformaldehydijauheesta. Formaliini, joka on formaldehydin liuos vedessä, puskuroidaan neutraaliin pH-arvoon kudosten morfologian säilyttämiseksi ja liiallisen silloituksen estämiseksi. Paraformaldehydipohjainen liuos tarjoaa myös tehokkaan kiinnityksen silloittamalla proteiineja, mikä stabiloi kudosrakenteen myöhempää upottamista varten parafiinivahaan. Nämä kemikaalit ovat välttämättömiä kudosten eheyden ja morfologian ylläpitämiseksi kiinnitys- ja upotusprosessin aikana.
Miten parafiini poistetaan FFPE-näytteistä?
Parafiinin poistamiseksi FFPE-näytteistä kudosleikkeille tehdään tyypillisesti sarja ksyleenipesuja, joita seuraa nesteytys luokitellun alkoholisarjan ja lopuksi veden läpi. Koska ksyleeni on erittäin myrkyllistä ja aiheuttaa terveysriskejä, kuten hengitysvaikeuksia, ihoärsytystä ja mahdollisia pitkäaikaisia vaikutuksia toistuvalla altistuksella, ultraääniparafiinin poisto on tulossa lupaavaksi vaihtoehdoksi monissa laboratorioissa. Tämä menetelmä käyttää voimakkaita ultraääniaaltoja parafiinin tehokkaaseen ja turvalliseen poistamiseen ilman myrkyllisiä liuottimia, kuten ksyleeniä, mikä vähentää laboratoriohenkilöstölle aiheutuvaa riskiä ja luo turvallisemman työympäristön.
Kuinka kauan minun pitäisi kiinnittää kudokseni hyvän FFPE-näytteen laadun saavuttamiseksi?
Yleiset suositukset kiinnityksen kestolle viittaavat tyypillisesti kudosnäytteiden kiinnittämiseen formaliiniin 24–48 tunniksi. Tämä kesto on yleensä riittävä kudoksen morfologian ja solurakenteiden säilyttämiseksi minimoiden samalla liiallisen kiinnittymisen, mikä voi johtaa nukleiinihappojen ja proteiinien liialliseen ristisidokseen ja hajoamiseen. Optimaalinen kiinnitysaika voi kuitenkin vaihdella kudoksen koon ja tyypin mukaan, ja pienemmät tai herkemmät näytteet vaativat lyhyempiä kiinnitysaikoja. On ratkaisevan tärkeää tasapainottaa riittävä kiinnitys kudosten autolyysin ja hajoamisen estämiseksi välttäen samalla pitkäaikaista kiinnittymistä, joka voisi vaikeuttaa loppupään molekyylianalyysejä.