Staphylococcus biokile kasvatamise ja eraldumise protokoll

Standardiseeritud meetodid on usaldusväärsete uurimistulemuste jaoks hädavajalikud. Siit leiate stafülokokkide biokilede kasvatamise ja eraldumise protokolli. See protokoll keskendub sujuvale suure läbilaskevõimega proovi ettevalmistamisele UIP400MTP kasutades mitme auguga plaadisonikaatorit tõhusaks ja suure läbilaskevõimega biokile eraldamiseks 96-augulistes plaatides. Protokoll sisaldab ka biokile kasvatamise, pesemise ja visualiseerimise põhietappe, keskendudes varieeruvuse minimeerimisele ja reprodutseeritavuse tagamisele.

Staphylococcus Biokile ja antibiootikumide uuringud

Staphylococcus biokiled mängivad kriitilist rolli püsivate infektsioonide korral, kuna nad on resistentsed antibiootikumide ja immuunvastuste suhtes. Biokile moodustumine tagab bakteritele kaitsva keskkonna, muutes infektsioonid raskesti ravitavaks. Biokilede uurimine keskendub sageli nende moodustumise, käitumise ja antimikroobikumide suhtes vastuvõtlikkuse mõistmisele, pannes rõhku suure läbilaskevõimega meetoditele eksperimentaalsete töövoogude sujuvamaks muutmiseks.
UIP400MTP mitme kaevuga plaadisonikaator pakub biokile uurimisel olulist eelist, võimaldades biokilede kiiret ja tõhusat eraldumist 96-augulistest plaatidest. See seade tagab ühtlase ultraheli energia kõigile kaevudele, tagades järjepidevad tulemused, minimeerides samal ajal varieeruvust.

Staphylococcus'e biokile kasvatamise ja eraldamise protokoll

Allpool juhendame teid samm-sammult juhistega stafülokoki biokile kasvatamise ja eraldamise protsessi kaudu. Eeskujuliku analüütilise sammuna näitame teile, kuidas kultiveeritud biomassi kristallvioletiga värvimise teel spektrofotomeetriliselt kvantifitseerida.

Staphylococcus Biokile kasvatamine

Vajalikud materjalid:

• Steriilsed lamedapõhjalised 96augulised kaanega polüstüreenkoekultuuriga töödeldud mikrotiiterplaadid
• Trüptiline sojapuljong (TSB) 0,25% glükoosiga
• Bioloogilise ohutuse kapp

Sammud:

1. Saastumise minimeerimiseks valmistage bioloogilise ohutuse kapis ette steriilne töökeskkond.
2. Lisage mikrotiiterplaadi aukudesse TSB, mis sisaldab 0,25% glükoosi. Ilma glükoosita TSB ei toeta üldiselt biokile moodustumist ja seda tuleks kasutada ainult kontrollina, kui see on vajalik.
3. Aukud inokuleeritakse allpool kirjeldatud viisil valmistatud bakteritüvedega:
4. Valmistage ette bakteriaalsed suspensioonid, tagades olemasolevate rakuklastrite puudumise, homogeniseerides suspensioonid ultrahelitöötluse abil või purustades klastrid 23-mõõtmelise nõelaga ja lühikese keerisega.
5. Plaat suletakse kaanega ja inkubeeritakse biokile moodustamiseks optimaalsetes tingimustes (nt 37 °C 24 tundi).
6. Katse tehakse kolmes eksemplaris iga bakteritüve puhul (kolm auku tüve kohta), et tagada usaldusväärsus.
7. Igale plaadile eraldatakse negatiivsete kontrollide jaoks kuus auku. 96-augulise plaadi kohta saab testida kuni 30 tüve.

Biokile visualiseerimine ja pesemine

1. Pärast inkubeerimist visatakse sööde hoolikalt ära, et vältida biokile häirimist.
2. Planktoni bakterite eemaldamiseks peske iga auku neli korda füsioloogilise soolalahusega.
3. Kontrollige kaevude põhjas valgeid laike, mis viitavad biokile olemasolule.

Biokile eraldumine mitme kaevuga plaadi sonikaatori abil UIP400MTP

Seadme seadistamine ja parameetrid:

• UIP400MTP mitme kaevuga plaadi sonikaator
• Tööseaded: 60% amplituud, tsüklirežiim 60 sekundiga ON / 30 sekundit VÄLJAS

Sammud:

1. Pestud mikrotiiterplaat asetatakse UIP400MTP alusele.
2. Sonikeerige proovid soovitatud seadetes (60% amplituud, 60 sekundit SEES, 30 sekundit VÄLJAS). Reguleerige seadeid vastavalt bakteritüvele.
3. Algatage ultrahelitöötluse protsess biokile eemaldamiseks. Ultraheli lained häirivad biokile maatriksit, vabastades kleepuvad bakterid.
4. UIP400MTP tagab ühtlase kokkupuute kõigis kaevudes, et tagada ühtlane eraldumine.

Analüütiline etapp: eraldatud Staphylococcus'e biokile biomassi kvantitatiivne määramine, kasutades kristallvioletti (CV)

Vajalikud materjalid:

• 0.1% kristallvioleti (CV) lahus
• 95% etanool või 30% äädikhape (lahustumiseks)
• Mikroplaadilugeja, mis võimaldab lugeda lainepikkusel 570 nm
• Steriilsed mikrotiiterplaadid värvimiseks

Sammud:

1. Värvimisplaadi ettevalmistamine: Viige 100 μL eraldatud biokile suspensiooni ultraheliga töödeldud plaadi igast august puhta, steriilse 96-augulise mikrotiiterplaadi vastavatesse aukudesse. See tagab selge ja ühtlase keskkonna värvimiseks.
2. Eemaldatud biokile värvimine: igasse auku, mis sisaldab eemaldatud biokile suspensiooni, lisatakse 150 μL 0,1% kristallvioleti lahust. Pipeteeritakse õrnalt, et tagada biokile suspensiooni ja kristallvioleti ühtlane segunemine.
3. Inkubeerimine: plaadil lastakse inkubeerida toatemperatuuril 15 minutit, et kristallviolett saaks biomassi tõhusalt määrida.
4. Pesemine: Pärast inkubeerimist visake kristallvioleti lahus ettevaatlikult kaevudest ära, ilma et see häiriks biomassi. Iga auku pestakse kolm korda steriilse füsioloogilise soolalahusega, et eemaldada sidumata plekk.
5. Kuivatamine: Laske plaadil õhu käes kuivada toatemperatuuril või steriilse õhuvoolu kapoti all. Vältige kuumutamist, kuna see võib tulemusi muuta.
6. Lahustumine: Lisage igasse auku 200 μL 95% etanooli (või 30% äädikhapet, sõltuvalt standardsetest laboritavadest), et seotud kristallviolett lahustada. Segatakse õrnalt, pipeteerides või loksutades plaati 10 minutit toatemperatuuril.
7. Mõõtmine: Mõõdetakse mikroplaadilugeja abil lahustunud kristallvioleti lahuse optiline tihedus (OD) 570 nm juures.
8. Andmete analüüs: negatiivsete kontrollide (TSB-ga, kuid mitte bakteriaalse inokulaadita augud) keskmine OD570 väärtus lahutatakse katseaukudest, et võtta arvesse taustavärvimist. Salvestage ja analüüsige andmeid.

Märkus: Katse tehakse iga tingimuse puhul kolmes eksemplaris, et tagada reprodutseeritavus. Tagage kristallvioleti ja etanooli nõuetekohane käitlemine, järgides ohutus- ja kõrvaldamisprotokolle.
 

Lühidalt UIP400MTP peamised eelised:

• Suure läbilaskevõimega töötlemine: Mõeldud spetsiaalselt mitme kaevuga plaatidele, mis võimaldab teil töödelda mitut proovi samaaegselt.
• Ühtlane ultraheli jaotus: Tagab võrdse ultraheli intensiivsuse kaevudes, pakkudes järjepidevaid tulemusi kõigis proovides.
• Kasutage mis tahes standardplaati: UIP400MTP saab hakkama mis tahes standardsete mitme kaevuga taldrikute, Petri tasside ja toruriiulitega. Kalleid patenteeritud plaate pole vaja!
• Kasutajasõbralik liides: Lihtne seadistada ja juhtida, muutes selle suurepäraseks vahendiks labori tootlikkuse suurendamiseks. Programmeeritavad seaded ja automatiseerimine hõlbustavad protsesside standardimist!