Asendage rakkude kraapimine UIP400MTP suure läbilaskevõimega Sonikaatoriga

Kleepuvate rakuliinide eraldamine ja ekstraheerimine mitme kaevuga plaatidest multi-oomika analüüsiks on laborites igapäevane ülesanne. Suure läbilaskevõimega rakkude eraldumine mitme auguga plaadi sonikaatori abil asendab UIP400MTP käsitsi rakkude kraapimist, mille tulemuseks on RNA, lipiidide üldsisalduse ja polaarsete metaboliitide suurem saagis. Uus meetod integreerib Hielscher UIP400MTP sonikaatori Beckman Coulter i7 vedeliku käitlemise tööjaamaga, võimaldades rakkude suure läbilaskevõimega, reprodutseeritavat ja tõhusat töötlemist RNA, metaboliidi ja lipiidide ekstraheerimiseks. Esitatud meetod paistab silma traditsiooniliste käsitsi rakkude kraapimismeetoditega, saavutades suurepärase reprodutseeritavuse ja saagise erinevates rakutüüpides ja katsetingimustes.

Sujuvam rakkude eraldumine mikroplaadiga Sonicator UIP400MTP

Kleepuvatel rakukultuurisüsteemidel on toksikoloogilistes ja biomeditsiinilistes uuringutes kriitiline roll. Selles kontekstis käsitlesid Cruchley-Fuge jt (2024) olulist väljakutset PrecisionToxi projektis, mis keskendus oomikatehnoloogiate kasutamisele keemiliste ohtude hindamiseks. Projekti eesmärk oli tuhandete erinevate kemikaalidega töödeldud proovide suure läbilaskevõimega analüüs. Selle nõudluse rahuldamiseks töötasid teadlased välja automatiseeritud töövoo, mis ühendas UIP400MTP sonikaatori väljakujunenud kahefaasiliste ekstraheerimisprotokollidega vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) analüüsiks. Nende uuringus hinnatakse UIP400MTP Multi-Well Plate Sonikaatori efektiivsust kleepuvate rakkude eemaldamisel võrreldes käsitsi kraapimise ja muude traditsiooniliste meetoditega.

Multi-oomika sujuvamaks muutmine: automatiseeritud kleepuvate rakkude ekstraheerimine UIP400MTP

Laura Cruchley-Fuge'i uurimisrühm Birminghami ülikoolist kasutas kolme inimese rakuliini: HepG2 (maksavähi rakud), HepaRG (diferentseeritud hepatotsüütide sarnased rakud) ja H295R (neerupealiste vähirakud). Neid rakke kultiveeriti 24augulisel ja 96augulisel plaadil ning viidi läbi uuritavate kemikaalidega, nagu aflatoksiin B1 ja forskoliin.

Eksperimentaalne disain:

• 1. etapp: UIP400MTP sonikaatori võimsusseadete optimeerimine ja võrdlemine käsitsi rakkude kraapimise ja heliliste veevannidega. HepG2 rakke kasutati RNA, metaboliitide ja lipiidide taastumise hindamiseks.
• 2. etapp: UIP400MTP integreerimine kahefaasilisse ekstraheerimise töövoogu, kasutades Beckman Coulter i7 süsteemi. Valideerimine viidi läbi HepaRG ja H295R rakkude abil.

Ekstraheerimise töövoog: Töövoog hõlmas keemilist kokkupuudet mitme auguga plaatidel, rakkude eraldumist UIP400MTP abil ja kahefaasilist ekstraheerimist Blighi kaudu & Dyer (B&D) meetod. LC-MS analüüs viidi läbi lipofiilsete ja polaarsete ühendite Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 abil. The B&D-meetod, kuldstandard lipiidide kvantifitseerimiseks, hõlmab kaheastmelist ekstraheerimist metanooli, kloroformi ja veega, millele järgneb lipiidide kvantifitseerimine kloroformifaasis.

UIP400MTP mikroplaadi sonikaator hõlbustab kleepuvate rakuliinide eraldumist mitme auguga plaatidest ja Petri tassidest

Tulemused:

• 1. etapp: Optimaalsed ultrahelitöötluse tingimused tuvastati 60% võimsusega.
  UIP400MTP andis kõrgeima RNA taastumise erakordse reprodutseeritavusega võrreldes käsitsi kraapimise ja helivannidega.
  Polaarsete metaboliitide taastumine oli meetodite lõikes ühtlane, samas kui lipiidide taastumine oli UIP400MTP märkimisväärselt parem.
• 2. etapp: HepaRG ja H295R rakkude valideerimine näitas lipiidoomika ja metaboloomika andmetes suurt reprodutseeritavust, mida näitavad tihedalt klasterdatud PCA skoorid.
  Aflatoksiin B1 ja forskoliini ravi eristati tõhusalt kontrollkatsetest, rõhutades meetodi tundlikkust ja usaldusväärsust.

“Hielscheri UIP400MTP ultrahelitöötlusseade pakub kvaliteetset ja reprodutseeritavat alternatiivset lähenemist käsitsi rakkude kraapimise "kuldstandardile", mille tulemuseks on suurem RNA, kogu lipiidide ja polaarsete metaboliitide saagis.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge jt rõhutavad UIP400MTP sonikaatori eeliseid kleepuvate rakkude töötlemiseks. Käsitsi kraapimise asendamisega suurendab see meetod reprodutseeritavust, läbilaskevõimet ja saagikust, muutes selle hindamatuks tööriistaks suuremahuliste uuringute jaoks, nagu PrecisionTox. UIP400MTP integreerimine automatiseeritud töövoogudesse mitte ainult ei vähenda varieeruvust, vaid lihtsustab ka töömahukaid protsesse, võimaldades kvaliteetset multi-oomika andmete kogumist.

Cruchley-Fuge jt (2024) töö hõlbustab ja lihtsustab kleepuvate rakukultuuride töötlemist multi-oomika analüüsiks. UIP400MTP sonikaatori integreerimine automatiseeritud töövoogudega tagab järjepideva ja tõhusa proovi ettevalmistamise, muutes selle ideaalselt sobivaks suure läbilaskevõimega toksikoloogilisteks uuringuteks.
 

Disain, tootmine ja nõustamine – Kvaliteet Valmistatud Saksamaal

Hielscheri ultrasonikaatorid on tuntud oma kõrgeimate kvaliteedi- ja disainistandardite poolest. Vastupidavus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrasonikaatorite sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Hielscheri ultrasonikaatorid saavad kergesti käsitseda karmid tingimused ja nõudlikud keskkonnad.

Hielscher Ultrasonics on ISO sertifitseeritud ettevõte ja paneb erilist rõhku suure jõudlusega sonikaatoritele, millel on tipptasemel tehnoloogia ja kasutajasõbralikkus. Loomulikult on Hielscheri ultrasonikaatorid CE-nõuetele vastavad ja vastavad UL, CSA ja RoHs nõuetele.