Asendage rakkude kraapimine suure läbilaskevõimega sonikaatoriga UIP400MTP

Adhesiivsete rakuliinide eraldamine mitmekaevulistelt plaatidelt ja ekstraheerimine multioomika analüüsiks on laborites igapäevane ülesanne. Suure läbilaskevõimega rakkude eraldamine mitmekaevuliste plaatide sonikaatoriga UIP400MTP asendab käsitsi rakkude kraapimise, mis annab suurema RNA, lipiidide kogusisalduse ja polaarsete metaboliitide kogusisalduse saagise. Uus meetod ühendab Hielscheri sonikaatori UIP400MTP vedelikkäsitlusjaamaga Beckman Coulter i7, võimaldades rakkude suure läbilaskevõimega, reprodutseeritavat ja tõhusat töötlemist RNA, metaboliitide ja lipiidide ekstraheerimiseks. Esitatud meetod ületab traditsioonilisi käsitsi rakkude kraapimise meetodeid, saavutades parema reprodutseeritavuse ja saagise erinevate rakutüüpide ja katsetingimuste puhul.

Sujuvam rakkude eraldamine mikroplaadi sonikaatoriga UIP400MTP

Adhesiivsed rakukultuurisüsteemid on toksikoloogilistes ja biomeditsiinilistes uuringutes olulisel kohal. Selles kontekstis käsitlesid Cruchley-Fuge et al. (2024) olulist väljakutset projektis PrecisionTox, mis keskendub oomikatehnoloogiate kasutamisele keemiliste ohtude hindamiseks. Projekti eesmärk oli suure läbilaskevõimega analüüs tuhandete erinevate kemikaalidega töödeldud proovide jaoks. Selle nõudluse täitmiseks töötasid teadlased välja automatiseeritud töövoo, mis ühendab sonikaatori UIP400MTP väljakujunenud kahefaasiliste ekstraheerimisprotokollidega vedelikkromatograafia-massispektromeetria (LC-MS) analüüsiks. Nende uuring hindab mitmekaevuliste plaatide sonikaatori UIP400MTP tõhusust adhesiivsete rakkude eraldamisel võrreldes käsitsi kraapimise ja muude traditsiooniliste meetoditega.

Multiooomika sujuvamaks muutmine: adhesiivsete rakkude automatiseeritud ekstraheerimine seadmega UIP400MTP

Birminghami ülikooli teadlaste rühm eesotsas Laura Cruchley-Fuge’iga kasutas kolme inimese rakuliini: HepG2 (maksavähi rakud), HepaRG (diferentseeritud hepatotsüütide sarnased rakud) ja H295R (neerupealisevähi rakud). Neid rakke kasvatati 24-kaevulistel ja 96-kaevulistel plaatidel ning neid mõjutati testkemikaalidega, nagu aflatoksiin B1 ja forskoliin.

Katse ülesehitus:

• 1. etapp: Sonikaatori UIP400MTP võimsusseadete optimeerimine ning võrdlus käsitsi rakkude kraapimise ja ultraheli veevannidega. RNA, metaboliitide ja lipiidide taastumise hindamiseks kasutati HepG2 rakke.
• 2. etapp: Sonikaatori UIP400MTP integreerimine kahefaasilisse ekstraheerimise töövoogu, kasutades süsteemi Beckman Coulter i7. Valideerimine tehti HepaRG ja H295R rakkudega.

Ekstraheerimise töövoog: Töövoog hõlmas keemilist mõjutamist mitmekaevulistel plaatidel, rakkude eraldamist seadmega UIP400MTP ja kahefaasilist ekstraheerimist Bligh & Dyeri (B&D) meetodil. LC-MS analüüs tehti lipofiilsete ja polaarsete ühendite jaoks seadmega Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. B&D meetod, mis on lipiidide kvantifitseerimise kuldstandard, hõlmab kaheastmelist ekstraheerimist metanooli, kloroformi ja veega, millele järgneb lipiidide kvantifitseerimine kloroformifaasis.

Mikroplaadi sonikaator UIP400MTP hõlbustab adhesiivsete rakuliinide eraldamist mitmekaevulistelt plaatidelt ja Petri tassidelt

Tulemused:

• 1. etapp: Optimaalsed sonikeerimistingimused tuvastati 60% võimsusel.
  Sonikaator UIP400MTP andis kõrgeima RNA taastumise erakordse reprodutseeritavusega võrreldes käsitsi kraapimise ja ultraheli vannidega.
  Polaarsete metaboliitide taastumine oli meetodite lõikes ühtlane, samas kui lipiidide taastumine oli seadmega UIP400MTP märgatavalt parem.
• 2. etapp: Valideerimine HepaRG ja H295R rakkudel näitas lipidoomika ja metaboloomika andmete head reprodutseeritavust, mida näitasid tihedalt klasterdunud PCA skoorid.
  Aflatoksiin B1- ja forskoliinitöötlused eristusid kontrollidest tõhusalt, mis rõhutab meetodi tundlikkust ja töökindlust.

“Hielscheri sonikeerimisseade UIP400MTP pakub kvaliteetset ja reprodutseeritavat alternatiivset lähenemist käsitsi rakkude kraapimise „kuldstandardile“, mis annab suurema RNA, lipiidide kogusisalduse ja polaarsete metaboliitide kogusisalduse saagise.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. toovad esile sonikaatori UIP400MTP eelised adhesiivsete rakkude töötlemisel. Käsitsi kraapimise asendamisega parandab see meetod reprodutseeritavust, läbilaskevõimet ja saagist, muutes selle hindamatuks vahendiks suuremahulistes uuringutes, nagu PrecisionTox. Seadme UIP400MTP integreerimine automatiseeritud töövoogudesse mitte ainult ei vähenda varieeruvust, vaid muudab sujuvamaks ka töömahukad protsessid, võimaldades kvaliteetsete multioomika andmete saamist.

Cruchley-Fuge et al. (2024) töö hõlbustab ja muudab sujuvamaks adhesiivsete rakukultuuride töötlemise multioomika analüüsiks. Sonikaatori UIP400MTP integreerimine automatiseeritud töövoogudega tagab ühtlase ja tõhusa proovide ettevalmistamise, muutes selle ideaalselt sobivaks suure läbilaskevõimega toksikoloogilisteks uuringuteks.

Disain, tootmine ja nõustamine – Saksamaal valminud kvaliteet

Hielscheri ultrahelisead on tuntud oma kõrgeima kvaliteedi ja disainistandardite poolest. Töökindlus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrahelisead sujuvalt tööstusrajatistesse integreerida. Hielscheri ultrahelisead tulevad kergesti toime karmide tingimuste ja nõudlike keskkondadega.

Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifitseeritud ettevõte ning pöörab erilist tähelepanu suure jõudlusega sonikaatoritele, mis põhinevad tipptehnoloogial ja on kasutajasõbralikud. Loomulikult vastavad Hielscheri ultrahelisead CE nõuetele ning täidavad UL-i, CSA ja RoHs nõudeid.