ASTM E2799-22 antimikroobse hindamise protokoll

Hielscheri UIP400MTP on võimas ja tõhus mitme kaevuga plaadi sonikaator, mis on loodud ultrahelitöötluse sammu sujuvamaks muutmiseks ASTM E2799-22 protokollis. Pakkudes ühtlast ultraheli energiat kogu mikrotiiterplaadil, tagab UIP400MTP biokilede järjepideva ja usaldusväärse eraldumise tihvtikaantest, kahjustamata rakke või kahjustamata proovi terviklikkust. Selle suure läbilaskevõimega ja kasutajasõbralik töö vähendavad märkimisväärselt töötlemisaega, parandades samal ajal reprodutseeritavust, muutes selle ideaalseks lahenduseks laboritele, kus viiakse läbi biokile elujõulisuse teste ja antimikroobse efektiivsuse katseid.

ASTM E2799

ASTM E2799 on standardiseeritud katsemeetod, mille eesmärk on hinnata antimikroobsete ainete efektiivsust biokilede vastu, keskendudes konkreetselt Pseudomonas aeruginosale. Biokiled on keerulised mikroobikooslused, mis kleepuvad pindadele ja millel on kõrgendatud resistentsus antimikroobse ravi suhtes, muutes need oluliseks väljakutseks tervishoiu, tööstuse ja keskkonna kontekstis. Selle meetodi puhul kasutatakse minimaalse biokile likvideerimiskontsentratsiooni (MBEC) analüüsi, et luua usaldusväärne ja reprodutseeritav raamistik desinfektsioonivahendite testimiseks realistlikes biokile tingimustes.

Kuidas ultrahelitöötlus aitab kaasa ASTM E2799-le?

Sonikatsioon mängib ASTM E2799 protokollis kriitilist rolli, hõlbustades biokilede eraldumist katsepindadest, tagades mikroobide elujõulisuse täpse hindamise pärast töötlemist. Kasutades kontrollitud ultraheli energiat, saavutab protokoll tõhusa ja järjepideva biokile katkestuse rakke kahjustamata, võimaldades täpseid ja reprodutseeritavaid tulemusi. See muudab ASTM E2799 oluliseks vahendiks biokileuuringute edendamisel ja tõhusate antimikroobsete strateegiate väljatöötamisel.

Kuidas käivitada MBEC-test vastavalt ASTM E2799-22-le

ASTM E2799-22 protokoll kirjeldab samme antimikroobsete ainete efektiivsuse hindamiseks biokilede vastu. Hielscheri UIP400MTP mikrotiiterplaadi sonikaatori kasutamisel saab protokolli kohandada, et lisada see täiustatud ultrahelitöötlusmeetod biokile eraldamiseks. Allpool on kirjeldatud samme, mis on kohandatud mikroplaadi sonikaatori UIP400MTP kasutamiseks:

1. Biokilede valmistamine
   Valmistage ette eemaldatavate tihvtkaantega steriilne 96-auguline mikrotiiterplaat.
   Augud inokuleeritakse standardiseeritud baktersuspensiooniga sobivas kasvukeskkonnas.
   Asetage tihvti kaas plaadile, tagades, et tihvtid on täielikult bakterisuspensiooni sukeldatud.
   Plaati inkubeeritakse kontrollitud tingimustes (nt temperatuur ja aeg), et tihvtidele tekiks biokile.
2. Ravi antimikroobsete ainetega
   Pärast biokile moodustumist asendatakse sööde värske söötmega, mis sisaldab mikroobivastaseid aineid erinevas kontsentratsioonis.
   Kinnitage tihvti kaas uuesti ja inkubeerige katseplaanis täpsustatud tingimustel.
3. Biokile eraldumise ettevalmistamine
   Pärast töötlemist loputage tihvti kaas, sukeldades selle steriilsesse loputuslahusesse, et eemaldada antimikroobsed ained ja lõdvalt kleepunud planktonirakud.
4. Biokile eraldumine UIP400MTP Sonicatori abil
   Valmistatakse värske 96 auguga mikrotiiterplaat, mis sisaldab taastumissöödet (nt neutraliseerivat puljongit).
   Biokiled eemaldatakse, asetades tihvti kaane regenereerimiskeskkonna plaadi aukudesse.
   Sisestage plaat sonikaatori UIP400MTP, tagades, et kaas ja plaat on korralikult joondatud.
   Seadke sonikaatori amplituudile 70–80% ja sonikeerige tsüklirežiimis 3-4 minutit, et tagada järjepidev biokile eraldumine ilma raku lüüsita.
5. Biokile elujõulisuse hindamine
   Pärast ultrahelitöötlust töödeldakse eraldatud biokilerakke sisaldavat taastussöötmet, kasutades standardseid mikrobioloogilisi või analüütilisi meetodeid, näiteks:
   • Kolooniaid moodustavate ühikute (CFU) arv: tehakse seerialahjendusi ja plaatitakse agaril rakkude eluvõimeliseks loendamiseks.
   • Optilise tiheduse (OD) mõõtmised:Kasutage rakkude tiheduse hindamiseks spektrofotomeetrilist analüüsi.
   • Fluorestsentsil põhinevad eluvõimelisuse analüüsid:Elusad ja surnud rakud kvantifitseeritakse fluorestseeruvate värvainete abil.
6. Andmete analüüs
   Võrrelge töödeldud ja töötlemata biokilede elujõulisusandmeid, et määrata kindlaks antimikroobsete ainete efektiivsus.
   Arvutatakse minimaalne biokile hävitamise kontsentratsioon (MBEC), mis põhineb kontsentratsioonil, mis on vajalik elujõuliste biokilerakkude kõrvaldamiseks.
7. Kvaliteedikontroll
   Tagage järjepidevad ultrahelitöötluse tingimused, kalibreerides regulaarselt UIP400MTP ja kontrollides, et biokile eraldumisprotsess ei põhjusta olulist rakkude lüüsi ega hävimist.
   Tulemuste valideerimiseks tuleb kasutada asjakohaseid kontrolle, nagu töötlemata biokiled ja ainult keskmise suurusega toorikud.

Tihvtidele moodustatud biokilerakud eemaldati ultrahelitöötlusega (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Saksamaa, UIP250MTP) 5 minutiks 96-süvendi plaatidel, mis sisaldasid värsket söödet rakkude taastamiseks.
(Pilt ja uuring: ©de Oliveira et al., 2016)

Integreerides UIP400MTP ASTM E2799-22 töövoogu, optimeeritakse biokile eraldumise protsess järjepidevuse, tõhususe ja suure läbilaskevõimega rakenduste jaoks.