ASTM E2799-22 protokoll antimikroobse toime hindamiseks
Hielscher UIP400MTP on võimas ja tõhus mitmekaevuliste plaatide sonikaator, mis on loodud ASTM E2799-22 protokolli ultraheli töötluse (sonikeerimise) etapi sujuvamaks muutmiseks. Edastades ühtlast ultrahelienergiat kogu mikrotiiterplaadile, tagab UIP400MTP biokilede järjepideva ja usaldusväärse eraldamise tappkaantelt, kahjustamata rakke ega ohustamata proovi terviklikkust. Selle suur läbilaskevõime ja kasutajasõbralik töö lühendavad oluliselt töötlusaega ning parandavad samal ajal korratavust, muutes seadme ideaalseks lahenduseks laboritele, kus tehakse biokile elujõulisuse analüüse ja antimikroobse toime katseid.
ASTM E2799
ASTM E2799 on standardiseeritud katsemeetod, mis on loodud antimikroobsete ainete toime hindamiseks biokilede vastu, keskendudes eelkõige liigile Pseudomonas aeruginosa. Biokiled on keerukad mikroobikooslused, mis kinnituvad pindadele ja on antimikroobse töötluse suhtes tavapärasest vastupidavamad, mistõttu on need oluline väljakutse tervishoius, tööstuses ja keskkonnas. See meetod kasutab minimaalse biokile hävitamise kontsentratsiooni (MBEC) analüüsi, et pakkuda usaldusväärset ja korratavat raamistikku desinfektsioonivahendite testimiseks realistlikes biokile tingimustes.
96-kaevuliste plaatide sonikaator UIP400MTP suure läbilaskevõimega sõeluuringuteks
Kuidas aitab ultraheli töötlus (sonikeerimine) kaasa ASTM E2799 täitmisele?
Ultraheli töötlus (sonikeerimine) mängib ASTM E2799 protokollis olulist rolli, hõlbustades biokilede eraldamist katsepindadelt ning tagades mikroobide elujõulisuse täpse hindamise pärast töötlust. Kontrollitud ultrahelienergiat kasutades saavutab protokoll tõhusa ja järjepideva biokile lõhkumise ilma rakke kahjustamata, võimaldades täpseid ja korratavaid tulemusi. See teeb ASTM E2799-st olulise vahendi biokileuuringute edendamisel ning tõhusate antimikroobsete strateegiate väljatöötamisel.
Kuidas teha MBEC-analüüsi vastavalt standardile ASTM E2799-22
ASTM E2799-22 protokoll kirjeldab etappe antimikroobsete ainete toime hindamiseks biokilede vastu. Hielscher UIP400MTP mikrotiiterplaadi sonikaatori kasutamisel saab protokolli kohandada nii, et see hõlmaks seda arenenud ultraheli töötluse meetodit biokilede eraldamiseks. Allpool on kirjeldus etappidest, mis on kohandatud mikroplaadi sonikaatori UIP400MTP kasutamisele:
- Biokilede ettevalmistamine
Valmistage ette steriilne 96-kaevuline mikrotiiterplaat eemaldatavate tappkaantega.
Inokuleerige kaevud sobivas kasvukeskkonnas standardiseeritud bakterisuspensiooniga.
Asetage tappkaas plaadile, tagades, et tapid on bakterisuspensiooni täielikult sukeldatud.
Inkubeerige plaati kontrollitud tingimustes (nt temperatuur ja aeg), et võimaldada biokile teket tappidel. - Töötlemine antimikroobsete ainetega
Pärast biokile teket asendage keskkond värske keskkonnaga, mis sisaldab erinevates kontsentratsioonides katsetatavaid antimikroobseid aineid.
Paigaldage tappkaas tagasi ja inkubeerige katse kavas määratud tingimustes. - Biokilede eraldamiseks ettevalmistamine
Pärast töötlust loputage tappkaant, sukeldades selle steriilsesse loputuslahusesse, et eemaldada antimikroobsete ainete jäägid ja nõrgalt kinnitunud planktonirakud. - Biokilede eraldamine sonikaatoriga UIP400MTP
Valmistage ette värske 96-kaevuline mikrotiiterplaat, mis sisaldab taastuskeskkonda (nt neutraliseeriv puljong).
Eraldage biokiled, asetades tappkaane taastuskeskkonnaga plaadi kaevudesse.
Paigaldage plaat sonikaatorisse UIP400MTP, tagades kaane ja plaadi õige joonduse.
Seadke sonikaator amplituudile 70%-80% ja sonikeerige 3-4 minutit tsüklirežiimis, et tagada biokilede järjepidev eraldumine ilma rakkude lüüsita. - Biokile elujõulisuse hindamine
Pärast ultraheli töötlust töödelge eraldunud biokilerakke sisaldavat taastuskeskkonda standardsete mikrobioloogiliste või analüütiliste meetoditega, näiteks:- Kolooniaid moodustavate ühikute (CFU) loendamine: tehke seeriaviisilised lahjendused ja külvake agarile elujõuliste rakkude loendamiseks.
- Optilise tiheduse (OD) mõõtmised: kasutage spektrofotomeetrilist analüüsi rakkude tiheduse hindamiseks.
- Fluorestsentsil põhinevad elujõulisuse analüüsid: määrake elusate ja surnud rakkude hulk fluorestseeruvate värvainete abil.
- Andmeanalüüs
Võrrelge töödeldud ja töötlemata biokilede elujõulisuse andmeid, et määrata antimikroobsete ainete toime.
Arvutage minimaalne biokile hävitamise kontsentratsioon (MBEC) kontsentratsiooni põhjal, mis on vajalik elujõuliste biokilerakkude hävitamiseks. - Kvaliteedikontroll
Tagage ühtlased ultraheli töötluse tingimused, kalibreerides UIP400MTP regulaarselt ja kontrollides, et biokilede eraldamise protsess ei põhjusta olulist rakkude lüüsi ega hävimist.
Tulemuste valideerimiseks lisage sobivad kontrollid, näiteks töötlemata biokiled ja ainult keskkonda sisaldavad pimeproovid.
Tappidele tekkinud biokilerakud eraldati ultraheli töötlusega (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Saksamaa, UIP250MTP) 5 min jooksul 96-kaevulistes plaatides, mis sisaldasid rakkude taastamiseks värsket kasvukeskkonda.
(Pilt ja uuring: ©de Oliveira et al., 2016)
UIP400MTP lõimimine ASTM E2799-22 töövoogu optimeerib biokilede eraldamise protsessi järjepidevuse, tõhususe ja suure läbilaskevõimega rakenduste jaoks.
Kirjandus / viited
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Korduma kippuvad küsimused
Mis on ASTM E2799?
ASTM E2799 on ASTM Internationali kehtestatud standardne katsemeetod desinfektsioonivahendi toime testimiseks Pseudomonas aeruginosa biokile vastu MBEC-analüüsi abil. Meetodit kasutatakse laialdaselt biokile tekke, antimikroobse toime ja materjalipindade vastastikmõjude hindamiseks, võimaldades biokilega seotud uuringutes standardiseeritud võrdlusi.
Mis vahe on standarditel ASTM E2799-22 ning ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 ja ASTM E2799-17?
ASTM E2799 on standardiseeritud katsemeetod, mis hindab desinfektsioonivahendite toimet Pseudomonas aeruginosa biokilede vastu, kasutades MBEC (minimaalse biokile hävitamise kontsentratsiooni) analüüsi. Seda meetodit on mitu korda läbi vaadatud, et parandada selle täpsust ja rakendatavust.
- ASTM E2799-11: see oli standardi esmane väljaanne, mis kehtestas põhiprotseduurid desinfektsioonivahendi toime hindamiseks P. aeruginosa biokilede vastu MBEC-analüüsi abil.
- ASTM E2799-12: see redaktsioon sisaldas väiksemaid tehnilisi täiendusi selguse parandamiseks ja 2011. aasta versioonis tuvastatud ebamääraste kohtade täpsustamiseks.
- ASTM E2799-17: selles uuenduses tehti protokolli olulisemaid muudatusi, sealhulgas kohandusi biokilede kasvatamise protsessis, töötluse rakendamises ja neutraliseerimisprotseduurides, eesmärgiga parandada korratavust ja vastavust biokileuuringute edusammudele.
- ASTM E2799-22: kõige uuem redaktsioon kajastab biokileuuringute viimast teaduslikku arusaama ja tehnoloogilisi edusamme. See sisaldab täiustatud meetodeid biokile kasvatamiseks, töötlemiseks ja analüüsiks, tagades, et katsemeetod jääb asjakohaseks ja tõhusaks desinfektsioonivahendite toime hindamisel tänapäeval.
Iga ASTM E2799 redaktsioon on tehtud meetodi usaldusväärsuse, korratavuse ja asjakohasuse parandamiseks, tagades, et see püsib kooskõlas biokileuuringute valdkonna teadusliku ja tehnoloogilise arenguga.
Mis vahe on MBEC- ja MBIC-analüüsidel?
Peamine erinevus MBEC (minimaalne biokile hävitamise kontsentratsioon) ja MBIC (minimaalne biokile kasvu pärssiv kontsentratsioon) analüüside vahel seisneb nende fookuses:
MBEC-analüüsid mõõdavad antimikroobse aine madalaimat kontsentratsiooni, mis on vajalik eelnevalt tekkinud biokilede täielikuks hävitamiseks, hinnates aine võimet tappa biokilesse sulandunud mikroorganisme.
MBIC-analüüsid määravad antimikroobse aine madalaima kontsentratsiooni, mis takistab biokilede esmast teket, hinnates selle võimet pärssida biokile arengut.
Mõlemad analüüsid on olulised antimikroobsete ainete toime mõistmiseks biokilede vastu, kuid sihivad biokile elutsükli erinevaid etappe.
Vaadake, kuidas mikroplaadi sonikaatorit UIP400MTP kasutatakse biokilede eraldamiseks MBIC-analüüsides!
Uued mikroplaadi sonikaatorid visaduse biokilede lõhkumiseks
Hielscher Ultrasonics toodab suure jõudlusega ultraheli homogenisaatoreid alates laborimudelitest kuni tööstusliku mastaabini.