Uued mikroplaadi sonikaatorid kangekaelsete biokilede lõhkumiseks
, Kathrin Hielscher, avaldatud Hielscheri uudistes
Biokiled – tihedad mikroobikogukonnad, mis kinnituvad pindadele – on mikrobioloogia ja kliinilise diagnostika kõige raskemad väljakutsed. Uus mikroplaatide sonikaator UIP400MTP hõlbustab suure läbilaskevõimega proovide ettevalmistamist. Vastastikuse eksperdihinnangu saanud uuringute analüüsid näitavad, et suure jõudlusega ultrahelisüsteemid, nagu Hielscheri mitme süvendi plaatide sonikaatorid, on kujunemas olulisteks laboratoorseteks vahenditeks nende kangekaelsete struktuuride eemaldamiseks MBEC™-plaatidest, võimaldades täpsemaid antimikroobseid teste ja kiiremaid uurimisprotsesse.
Biokile eemaldamine sonikatsiooni abil
Teadlased tuginevad üha enam mitme augu plaadi sonikatsioonile, sest biokiled võivad olla sadu kordi resistentsemad antibiootikumide suhtes kui vabalt hõljuvad planktoonilised bakterid, nagu selgub kahest suuremast uuringust Staphylococcus aureuse, koagulaasinegatiivsete stafülokokkide ja Staphylococcus saprophyticus biokilede kohta. Biokilemaatriksisse põimunud mikroobid näitavad dramaatiliselt kõrgemaid minimaalseid inhibeerivaid kontsentratsioone (MIC) ja minimaalseid bakteritsiidseid kontsentratsioone (MBC), mis sageli ületavad kliiniliselt saavutatavad ravimitasemed.
Kuid tõhusad katsed algavad biokile rakkude tõhusast ja usaldusväärsest eraldamisest. – ja siinkohal paistab UIP400MTP silma.
Adherentsete rakukultuuride eraldamine mis tahes standardsetelt mikroplaatidelt: suure läbilaskevõimega proovide ettevalmistamine UIP400MTP sonikaatoriga
Biokiled: Antibiootikumide vastane varjatud kilp
Mõlemas viidatud uuringus dokumenteerisid teadlased antimikroobse resistentsuse dramaatilist suurenemist, kui baktereid testiti biokile kujul:
MIC-väärtused suurenesid 2- kuni 32-kordselt ja mõnikord ka rohkem, võrreldes planktiliste rakkudega.
Teatavad isolaadid muutusid antibiootikumidele tundlikust antibiootikumidele täielikult resistentseks, kui nad olid biokilega kaetud.
Mõned biokiled nõudsid MBC-tasemeid, mis ületasid kõrgeimaid katsetatud kontsentratsioone, mis näitab nende äärmuslikku taluvust.
Need leiud rõhutavad, miks biokilede lahutamine on kriitilise tähtsusega: täpne ravimiresistentsuse profiilide koostamine sõltub rakkude vabastamisest kaitsvast maatriksist, et neid saaks eraldi testida.
Lahendus: UIP400MTP mikroplaatide sonikaator.
Mõlemas uuringus kasutati Hielscheri UIP250MTP multi-well plaadi sonikaatorit, et eraldada spetsiaalsetel MBEC™ pin-lide seadmetel kasvatatud biokile. Mitme augu plaadi 5-minutiline sonikatsioon eemaldas edukalt biokile rakud värskesse keskkonda, võimaldades teadlastel mõõta MICB ja MBCB suure reprodutseeritavusega.
See tehnika on laialdaselt kasutusel, sest:
- See töötleb kõiki puurauke samaaegselt ja ühtlaselt, mis on oluline antimikroobsete ainete võrdlevaks testimiseks.
- Akustiline kavitatsioon lõhub tõhusalt rakuvälise maatriksi, ilma rakke hävitamata.
- See töötab tõrgeteta koos MBEC pin-lid platvormidega, mida kasutatakse biokilede resistentsuse uurimisel.
Peamised omadused, mis veenavad teadlasi kohe
- 400 W ultraheli võimsus (20 kHz) kiireks ja põhjalikuks biokile eemaldamiseks.
- Täielik parameetrite kontroll, sealhulgas energia sisend (Ws/mL), amplituud, temperatuur ja aeg.
- Sisseehitatud soojusvaheti koos ringluspumbaga, et hoida plaadid sonikatsiooni ajal jahedad
- Programmeeritavad režiimid korratavate, automatiseeritud töövoogude jaoks
- Ühetaoline sonikatsioon kogu plaadi ulatuses. Vaata videot allpool!
Ühtluse katse kinnitab visuaalselt homogeenset kavitatsioonivälja, mis on vajalik standardiseeritud biokile lõhkumiseks. – tuntud probleem väiksema võimsusega ultrahelivannides.
Mitme kaevuga plaadi sonikaatori UIP400MTP tõhusate MBEC-analüüside jaoks
Miks see on oluline haiglatele, laboritele ja antibiootikumide väljatöötamisele?
Biokilega seotud infektsioonid – alates kuseteede infektsioonidest kuni kateetriga seotud vereringeinfektsioonideni. – on teatavasti raskesti ravitavad. Uuringud näitavad:
- Tavapärane antibiootikumide testimine planktiliste rakkudega alahindab tegelikku resistentsust.
- Kvaliteetne sonikatsioon on elutähtis täpsete biokilest saadud proovide valmistamiseks.
- Tööriistad nagu UIP400MTP aitavad ületada lõhet laborikatsete ja kliinilise reaalsuse vahel.
Kuna antimikroobne resistentsus suureneb jätkuvalt, võivad tehnoloogiad, mis parandavad biokile uurimise reprodutseeritavust ja usaldusväärsust, mängida otsustavat rolli uute ravimeetodite väljatöötamisel.
Lisatud uuringud teevad ühe järelduse üheselt mõistetavaks: biokile moodustavate bakterite puhul on vaja uusi katsemeetodeid ja mitme augu plaadi sonikatsiooni – eriti ülitugevate, ühtlaselt jaotatud ultrahelisüsteemidega nagu Hielscher UIP400MTP – on kiiresti muutumas kuldstandardiks biokilede eemaldamiseks MBEC-plaatidelt.
Mikrobioloogialaborite, ravimite arendajate ja kliiniliste teadlaste jaoks ei ole need seadmed enam ainult mugavused – need on muutumas asendamatuks vahendiks biokilesse kinnistunud patogeenide tegeliku antibiootikumiresistentsuse täpseks mõõtmiseks.
Lisateavet mitme augu plaadi sonikaatori UIP400MTP kohta leiate siit!
Täiendavad viited
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.


