Παρασκευή ορού πλούσιου σε αιμοπετάλια με υπερήχους

• Το πλάσμα πλούσιο σε αιμοπετάλια (PRP) είναι πλάσμα αίματος που έχει εμπλουτιστεί με αιμοπετάλια και χρησιμοποιείται για ιατρικές και αισθητικές θεραπείες.
• Η λύση και η προετοιμασία με υπερήχους αποτελούν μια πολύ αποτελεσματική μέθοδο για την παρασκευή πλάσματος πλούσιου σε αιμοπετάλια.
• Η Hielscher Ultrasonics προσφέρει διάφορα συστήματα υπερήχων που ανταποκρίνονται στις απαιτήσεις της επεξεργασίας αίματος (π.χ. για παρασκευή εντός και εκτός καθαρού χώρου).

Ορός πλούσιος σε αιμοπετάλια

Η κατεργασία με υπερήχους είναι μια αξιόπιστη και εύκολη μέθοδος για τη λύση των αιμοπεταλίων σε αυτόλογο ορό αίματος, ώστε να απελευθερωθούν οι αυξητικοί παράγοντες. Τα κλάσματα που προέρχονται από αιμοπετάλια – γνωστά και ως αυτόλογος προετοιμασμένος ορός (ACS) – χρησιμοποιούνται για την αποκατάσταση ιστών ή για αισθητικές θεραπείες. Για την επίτευξη βέλτιστων αποτελεσμάτων, το PRP εμπλουτίζεται πριν από την έγχυση.
Για την παρασκευή πλάσματος εμπλουτισμένου με παράγοντες κυτταρικής ανάπτυξης, η κατεργασία με υπερήχους είναι μια πολύ αποτελεσματική και αποδοτική μέθοδος για τη λύση των κυτταρικών μεμβρανών και την απελευθέρωση σχεδόν του συνόλου των παραγόντων κυτταρικής ανάπτυξης από τα αιμοπετάλια. Με τη λύση και την προετοιμασία με υπερήχους, μπορεί να χρησιμοποιηθεί ακόμη και αίμα στο οποίο έχει προστεθεί αντιπηκτικό.
Η προετοιμασία του PRP μέσω κατεργασίας με υπερήχους είναι ένας εύχρηστος και οικονομικά αποδοτικός τρόπος για τη λήψη συμπυκνωμένων αυξητικών παραγόντων.

Λύση πλάσματος πλούσιου σε αιμοπετάλια (PRP) με υπερήχους

Επιδράσεις της λύσης με υπερήχους

Η επεξεργασία του ορού αίματος με υπερήχους επιφέρει ομοιογενή λύση των αιμοπεταλίων, ώστε να απελευθερωθούν οι εγκλωβισμένοι αυξητικοί παράγοντες (αυξητικός παράγοντας AB (PDGF-AB), αυξητικός παράγοντας AA (PDGF-AA), αυξητικός παράγοντας BB (PDGF-BB), αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας (VEGF), μετασχηματιστικός αυξητικός παράγοντας β (TGF-β), επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF), ινσουλινοειδής αυξητικός παράγοντας (IGF), αυξητικός παράγοντας επιθηλιακών κυττάρων ECGF και αυξητικός παράγοντας ινοβλαστών (FGF)). Τα αιμοπετάλια και τα α-κοκκία τους διαρρηγνύονται με κατεργασία με υπερήχους, αξιοποιώντας το φαινόμενο της ακουστικής σπηλαίωσης. Η χρήση σπηλαίωσης υπερήχων για τη λύση των αιμοπεταλίων μειώνει την πιθανή αρνητική επίδραση της μεθόδου επαναλαμβανόμενης κατάψυξης και απόψυξης στη δραστικότητα των αυξητικών παραγόντων.

Πρωτόκολλο παρασκευής PRP με υπερήχους

Περίπου 16mL πρόσφατα συλλεγμένου δείγματος αυτόλογου αίματος αναστρέφονται ήπια 8–10 φορές μέσα σε σωληνάριο, ώστε το αίμα και τα αντιπηκτικά να αναμειχθούν καλά. Στη συνέχεια, το δείγμα φυγοκεντρείται στα 1800 g για 20 min σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τη φυγοκέντρηση, τα αιμοπετάλια και τα μονοπύρηνα κύτταρα σχηματίζουν μια υπόλευκη στιβάδα στο κάτω μέρος της στιβάδας του πλάσματος, η οποία είναι γνωστή ως πλάσμα πλούσιο σε αιμοπετάλια (PRP). Η ανώτερη στιβάδα είναι γνωστή ως πλάσμα φτωχό σε αιμοπετάλια (PPP). Τα μονοπύρηνα κύτταρα μπορούν να αφαιρεθούν ή να παραμείνουν στο δείγμα. Συχνά, τα μονοπύρηνα κύτταρα παραμένουν στο δείγμα PRP, ώστε να αποφευχθούν πρόσθετα βήματα που ενέχουν κίνδυνο επιμόλυνσης.
Σημείωση: Η επεξεργασία αυτόλογου PRP με υπερήχους πρέπει να πραγματοποιείται υπό στείρες συνθήκες.
Το PRP και το PPP διαχωρίζονται και συλλέγονται. Στο PPP προστίθενται 1,5mL διαλύματος χλωριούχου ασβεστίου 10%, ενώ στο PRP προστίθενται 0,5mL αιθανόλης 5%. Και τα δύο εναιωρήματα αναδεύονται ήπια και αφήνονται σε ηρεμία για 5 min σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, προστίθεται 1mL PPP στο εναιώρημα PRP και το μείγμα αφήνεται σε ηρεμία μέχρι να σχηματιστεί θρόμβος ινώδους.
Επεξεργασία με υπερήχους: Καθώς η γέλη αιμοπεταλίων που σχηματίζεται λειτουργεί ως δεξαμενή για τους απελευθερωμένους αυξητικούς παράγοντες, η γέλη ινώδους πρέπει να διαρραγεί ώστε να απελευθερωθούν οι διαθέσιμοι αυξητικοί παράγοντες. Οι παράμετροι για τη λύση με υπερήχους και την απελευθέρωση αυξητικών παραγόντων είναι οι εξής: Υποβάλετε σε κατεργασία με υπερήχους, με ένα UP200Ht ή UP200St (200W, 26kHz) με ηχοτρόδιο S26d2, το δείγμα μέσα στο σωληνάριο. Για την αποφυγή υπερθέρμανσης του δείγματος αίματος, η κατεργασία με υπερήχους μπορεί να πραγματοποιείται σε παλμικούς κύκλους (π.χ. 10 sec. λειτουργίας, 30 sec. παύσης). Το δείγμα θα πρέπει να τοποθετείται σε πάγο για ψύξη, ώστε η θερμοκρασία να διατηρείται ιδανικά μεταξύ 2 – 5°C. Μετά την κατεργασία με υπερήχους, το δείγμα φυγοκεντρείται στα 16.000 g για 5 min. σε θερμοκρασία δωματίου. Το υπερκείμενο συλλέγεται και μπορεί να αποθηκευτεί στους -70°C.
Η συγκέντρωση αιμοπεταλίων στο κλάσμα PRP αυξήθηκε κατά 1,7 – 4,5 φορές με τη μέθοδο κατεργασίας με υπερήχους, σε σύγκριση με τον μέσο αριθμό αιμοπεταλίων στο ολικό αίμα που αναφέρεται στη βιβλιογραφία.

Το PRP έχει συνδυαστεί με θεραπεία βλαστοκυττάρων προερχόμενων από λιπώδη ιστό (αυτόλογα βλαστοκύτταρα που απελευθερώνονται από λιπώδη ιστό με υπερήχους, αναμειγνύονται με PRP και εγχέονται εκ νέου στον ιστό του ασθενούς για αποκατάσταση).

Εξοπλισμός υπερήχων

Η Hielscher Ultrasonics ειδικεύεται στην προηγμένη και αξιόπιστη τεχνολογία υπερήχων. Οι συσκευές υπερήχων μας χρησιμοποιούνται παγκοσμίως για λύση, εκχύλιση και προετοιμασία δειγμάτων – άμεσα και έμμεσα. Αποστειρώσιμα σε αυτόκαυστο καθώς και μίας χρήσης εξαρτήματα εξασφαλίζουν μια απαλλαγμένη από επιμόλυνση επεξεργασία αυτόλογων δειγμάτων αίματος. Τα περισσότερα από τα συστήματά μας μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη λύση με υπερήχους βλαστοκυττάρων και PRP, γεγονός που καθιστά τις συσκευές υπερήχων μας ακόμη πιο αποδοτικές από οικονομική άποψη.
Ο παρακάτω πίνακας παραθέτει τις συσκευές υπερήχων μας που είναι κατάλληλες για την παρασκευή πλάσματος πλούσιου σε αιμοπετάλια και τον αντίστοιχο συνιστώμενο όγκο δείγματος. Διατίθενται επίσης μεγαλύτερες συσκευές υπερήχων και προσαρμοσμένα συστήματα.

Επικοινωνήστε μαζί μας σήμερα! Θα χαρούμε να σας βοηθήσουμε να βρείτε τη βέλτιστη συσκευή υπερήχων!