Υπερήχων απομόνωση βλαστικών κυττάρων

• Υπερήχων σπηλαίωση είναι μια εξαιρετικά αποτελεσματική μηχανική μέθοδος για την απομόνωση βλαστικών κυττάρων από τον ανθρώπινο λιπώδη ιστό.
• Υπερήχων απομονωμένο στρωματικό αγγειακό κλάσμα (SVF) δείχνουν υψηλό αναγεννητικό δυναμικό για ιατρικές εφαρμογές.
• Hielscher Υπέρηχοι προσφέρει διάφορες επιλογές άμεσης και έμμεσης υπερήχησης για τη συγκομιδή βλαστικών κυττάρων.

Υπερήχων απομόνωση των βλαστικών κυττάρων

Από το ανθρώπινο σώμα εξάγεται λιπώδης ιστός (μέσω λιποαναρρόφησης) αντιμετωπίζεται με υπερήχους για την απομάκρυνση του ιστού από τα βλαστικά κύτταρα και άλλα κύτταρα ανάπτυξης. Αυτό το διαχωρισμένο τμήμα των κυττάρων είναι γνωστό ως κύτταρα στρωματικού αγγειακού κλάσματος (SVF).
Η τεχνική απομόνωσης υπερήχων βλαστικών κυττάρων από λιπώδη ιστό βασίζεται αποκλειστικά στην αρχή λειτουργίας της σπηλαίωσης που προέρχεται από υπερήχους, η οποία είναι μηχανική διάτμηση. Οι δυνάμεις διάτμησης της σπηλαίωσης διαταράσσουν τον λιπώδη ιστό, έτσι ώστε τα βλαστοκύτταρα να απελευθερώνονται από τη δομή του λιπώδους ιστού. Η απομόνωση βλαστικών κυττάρων υπερήχων είναι μια διαδικασία χωρίς ένζυμα, αποφεύγοντας τη χρήση κολλαγενάσης, θρυψίνης ή dispase.
Για να διαχωριστούν τα εκχυλισμένα βλαστοκύτταρα, τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα, οι ενδοθηλιακές πρόδρομες ουσίες και άλλοι τύποι κυττάρων ανάπτυξης, ο λιπώδης ιστός με υπερήχους φυγοκεντρείται.
Τα διαχωρισμένα βλαστοκύτταρα συλλέγονται και αναλύονται για την ποιότητά τους, συμπεριλαμβανομένου του αριθμού των κυττάρων, της βιωσιμότητας, της ενδοτοξίνης και της χρώσης gram πριν χρησιμοποιηθούν αμέσως για αυτόλογη μεταμόσχευση ή διατηρηθούν σε κρυο-αποθήκευση.

Γιατί να αποφύγετε τα ένζυμα;

Δεδομένου ότι η ενζυματική πέψη για απομόνωση βλαστικών κυττάρων συνοδεύεται από υψηλό κόστος και πιθανούς κινδύνους για την ασφάλεια, καθώς και έλλειψη αποτελεσματικότητας [Oberbauer et al. 2015], προτιμώνται μη ενζυματικές μέθοδοι απομόνωσης όπως η υπερηχητική σπηλαίωση. Το βήμα απομόνωσης υπερήχων αντικαθιστά την ενζυματική πέψη διαχωρίζοντας τα κύτταρα και τα συσσωματώματα κυττάρων μηχανικά από τον λιπώδη ιστό.

Πλεονεκτήματα της κατεργασίας με υπερήχους

• Ταχύς
• Αποδοτικός
• Αναπαραχθούν
• Ασφαλής
• Χωρίς ένζυμα
• Οικονομικά αποδοτική
• Αποστειρωμένες επιλογές

Βλαστοκύτταρα που προέρχονται από λιπώδη ιστό

Απόδοση βλαστικών κυττάρων

Δημοσιευμένη μέθοδος απομόνωσης SVF χρησιμοποιώντας απόδοση σπηλαίωσης υπερήχων σε 1.67-2.24 × 10⁷ κύτταρα με βιωσιμότητα 97,1-98,9% [Victor, S., 2014]. Κυτταρικές αποδόσεις περίπου 2-4 εκατομμυρίων κυττάρων / γραμμάριο λιπώδους ιστού ελήφθησαν με υπερηχητική λύση ώριμων λιποκυττάρων σε διαχωρισμένο λιπώδη ιστό [Bright et al., 2014].
Τα υπερηχητικά παρασκευασμένα κύτταρα διαθέτουν εξίσου υψηλό δυναμικό λιπογονικής και οστεογονικής διαφοροποίησης, σε σύγκριση με μια τυπική μέθοδο ενζυματικής απομόνωσης [Oberbauer et al. 2015].

Συστήματα υπερήχων για απομόνωση βλαστικών κυττάρων

Για να εξασφαλιστεί η υψηλότερη ασφάλεια και η καλύτερη ποιότητα, αξιόπιστος εξοπλισμός υπερήχων, ο οποίος επιτρέπει τον ακριβή έλεγχο της θεραπείας με βλαστοκύτταρα, αποτελεί βασικό παράγοντα για την επιτυχή θεραπεία των ασθενών. Hielscher Υπέρηχοι προσφέρει διάφορες επιλογές για μια αυτόλογη υπερήχων διαδικασία διαχωρισμού σπηλαίωση για την απομόνωση και τη συγκομιδή στέλεχος και ενδοθηλιακή πρόδρομα κύτταρα.

Άμεση υπερήχηση

Για τη διαδικασία απομόνωσης βλαστικών κυττάρων μέσω άμεσης υπερήχων, το υπερηχητικό κέρατο (sonotrode, υπερηχητική άκρη / καθετήρας) βυθίζεται στον λιπώδη λιπώδη ιστό. Μέσω του sonotrode, τα κύματα υπερήχων συνδέονται απευθείας στο αυτόλογο λίπος, έτσι ώστε η υπερηχητική σπηλαίωση απελευθερώνει τα βλαστικά κύτταρα και τα στρωματικά κύτταρα από τον υπολειμματικό ιστό. Hielscher υπερήχων επεξεργαστές UP200Ht και UP200St με sonotrode S26d14 χρησιμοποιούνται συνήθως συστήματα για την αυτόλογη θεραπεία βλαστοκυττάρων. Η απομόνωση SVF με άμεση υπερήχηση είναι ως επί το πλείστον κατάλληλη για χρήση σε εγκαταστάσεις καθαρού δωματίου.

έμμεση υπερήχηση

Δεδομένου ότι τα βλαστοκύτταρα χρησιμοποιούνται για αυτόλογες εφαρμογές, η στειρότητα της διαδικασίας είναι πολύ σημαντική. Ως εκ τούτου, Hielscher έχει αναπτύξει διάφορες επιλογές έμμεσης υπερήχων, όπως GDmini2, VialTweeter και άλλα προσαρμοσμένα συστήματα. Με έμμεση υπερήχηση, τα κύματα υπερήχων συνδέονται μέσω του δοχείου τοίχου στον λιπώδη ιστό. Το στρωματικό αγγειακό κλάσμα (SVF) διαχωρίζεται από τον λιπώδη ιστό με υπερηχητική σπηλαίωση όπως και κατά τη διάρκεια της άμεσης υπερήχων.
Η έμμεση διαδικασία υπερήχων προσφέρει το πλεονέκτημα της επεξεργασίας των κυττάρων σε ένα κλειστό δοχείο κάτω από Συνθήκες χωρίς μόλυνση δεδομένου ότι εξαλείφεται ο κίνδυνος διασταυρούμενης μόλυνσης με την εισαγωγή του κέρατος υπερήχων (sonotrode). Η απομόνωση των κυττάρων πραγματοποιείται σε κλειστό σύστημα εξασφαλίζοντας αποστειρωμένες συνθήκες διεργασίας.

Οι ψηφιακές συσκευές υπερήχων της Hielscher μπορούν να ελεγχθούν με ακρίβεια μέσω οθόνης αφής ή ελέγχου προγράμματος περιήγησης. Οι διαδικασίες κατεργασίας με υπερήχους μπορούν να προρυθμιστούν μέσω του διαισθητικού μενού. Οι συσκευές υπερήχων είναι εξοπλισμένες με αυτόματη καταγραφή δεδομένων (όλα τα δεδομένα διαδικασίας υπερήχων αποθηκεύονται σε μια ενσωματωμένη κάρτα SD). Η είσοδος ισχύος υπερήχων μπορεί να ρυθμιστεί ακριβώς στο πρωτόκολλο απομόνωσης κυττάρων.