Prøveforberedelse med ultralyd til THC-analyse
- Ultralydsekstraktion er en gennemprøvet metode til fremstilling af THC, men den kan også anvendes til analytiske formål.
- Sonikering er en almindelig metode til prøveforberedelse, der anvendes til analyse af det samlede THC-indhold i cannabisprodukter.
- Prøverne behandles med ultralydsekstraktion før TLC-, GC- og HPLC-analyse.
Ultralydsekstraktion af THC
THC, eller tetrahydrocannabinol (delta-9-tetrahydrocannabinol), er det kemiske stof, der forårsager de fleste af marihuanas psykologiske virkninger. Der kendes mere end 400 forskellige sorter af cannabis. Afhængigt af den specifikke cannabissort kan cannabis indeholde så lidt som 0,3 wt% THC. I andre sorter kan THC-indholdet nå op på 20 wt%.
De forskellige cannabisprodukter varierer også betydeligt: Den gennemsnitlige THC-koncentration i marihuana ligger således mellem 1 og 5%; i hash er THC-indholdet mellem 5 og 15%, og i hasholie er det i gennemsnit 20%. THC-indholdet i doser af marihuana til rekreativ brug varierer meget, og jo lavere THC-indholdet i marihuana er, desto mere skal brugeren indtage for at opleve de ønskede virkninger.
Prøveforberedelse med ultralyd anvendes til at analysere THC-indholdet
- til kvalitetskontrol af THC-produkter til rekreativ brug,
- til kvalitetsbestemmelse af farmaceutiske THC-produkter,
- til at skelne mellem rusmiddelhamp og fiberhamp.
Til THC-analyse anvendes almindeligvis følgende kromatografiske metoder: tyndtlagskromatografi (TLC), gaskromatografi (GC) og højtryksvæskekromatografi (HPLC)
Protokol for prøveforberedelse med ultralyd til TLC-analyse
Prøveforberedelse: Til forberedelse af prøverne skal det tørrede plantemateriale macereres og formales til et homogent pulver. Til ultralydsekstraktionen blandes 500mg cannabisplantepulver og 5mL methanol-chloroform-blanding (forhold 9 : 1) i et prøveglas. Sonikering kan udføres med et ultralydsapparat med mikrospids, VialTweeter eller ultralydsapparatet CupHorn. Sonikeringstiden er ca. 5 min. Lad derefter prøven hvile i mindst 5 min. Fortynd den klare supernatant med ekstraktionsblandingen (v/v: 1 : 10). Frit THC: 1μL på TLC-pladen
Decarboxylering: 100μL af ekstraktet inddampes til tørhed. Resten opvarmes ved 180℃ i 4 min. Tilsæt 500μL methanol-chloroform (v/v 9 : 1). Sonikér i 5 min. Fortynd den klare supernatant med ekstraktionsblandingen (v/v: 1 : 10).
Kalibrering: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC-silicagel F-254, Merck 5729
TLC-scanner II, software CATS3, Camag Muttenz Eluent:
Ethylacetat : Toluen : Chloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postkromatografisk derivatisering: Fast Blue-salt 0,1% i 0,1 M NaOH
Densitometri ved 550 nm
Tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) til analyse og ekstraktion
Protokol for prøveforberedelse med ultralyd til GC-analyse
Prøveforberedelse: Det tørrede plantemateriale macereres og formales til et homogent pulver. Til ekstraktionen blandes 500mg cannabisplantepulver og 10mL methanol-hexan-blanding (forhold 9 : 1) i et prøveglas. Sonikering kan udføres med et ultralydsapparat med sonde med mikrospids, VialTweeter eller ultralydsapparatet CupHorn. Sonikér prøven i 15–20 min. Ryst prøven, og lad den hvile i mindst 5 min. Fortynd den klare supernatant med ekstraktionsblandingen (v/v 1: 20).
Decarboxylering: i indsatsen
Injektortemperatur 250℃
Kalibrering: 5 ng/μL til 250 ng/μL
GC: HP 6890 med 5973 MSD og 7683 autosampler injektion: 1μL, splitless-tid: 2 min.
Kolonne: HP-5 MS, 30m, diameter 250 μm, filmtykkelse 0,25 μm
Bæregas: He, 35 psi, konstant flow: 4 mL/min.
Ovn: 100℃ i 1min.; temperaturstigning på 15℃ /min. til 280℃; 280℃ i 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Protokol for prøveforberedelse med ultralyd til HPLC-analyse
Prøveforberedelse (svarende til GC-forberedelsen): Det tørrede plantemateriale macereres og formales til et homogent pulver. Til ekstraktionen blandes 500mg cannabisplantepulver og 10mL methanol-hexan-blanding (forhold 9 : 1) i et prøveglas. Sonikering kan udføres med et ultralydsapparat med sonde med mikrospids, VialTweeter eller ultralydsapparatet CupHorn. Sonikér prøven i 15–20 min. Ryst prøven, og lad den hvile i mindst 5 min. Fortynd den klare supernatant med ekstraktionsblandingen (v/v 1: 20).
VialTweeter til prøveforberedelse med ultralyd
Forkolonne: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolonne: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: isokratisk 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitril kvantificering ved 210nm
Kalibrering: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrering: 0,01 – 0,50 μg/μL
Retentionstid: for CBD: 6,2 min.; for CBN: 8,0 min.; for THC: 9,4 min.; for THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St med mikrospids til sonikering af prøver
Litteratur/Referencer
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Retskemiske analyser af THC-holdigt hampplantemateriale. Fra TLC via GC til HPLC-metoden. Applica 2006.
Værd at vide
Marihuana består af de tørrede blomster samt de underliggende blade og stængler fra den hunlige cannabisplante. Dette er den form, der indtages mest, og den indeholder ca. 3% til 20% THC. Specifikke, stærkt forædlede former for marihuana når et THC-indhold på mere end 30%. Marihuana er udgangsmaterialet for alle andre varianter af THC-holdige cannabisprodukter. For at omdanne den mest forekommende cannabinoid, tetrahydrocannabinolsyre (THCA), til det psykoaktive THC skal en decarboxyleringsproces igangsættes. Derfor skal cannabis og dets ekstrakter opvarmes eller dehydreres for at fremkalde decarboxylering.
Kief betegner et pulver, der er rigt på trikomer, og som sigtes fra cannabisblade og -blomster. Det indtages enten i pulverform eller komprimeres og anvendes i hashkager.
Hashish eller hash er en koncentreret harpikskage eller -kugle, der fremstilles enten af presset kief eller af harpiks, som skrabes fra plantens overflade og rulles til kugler. Det forekommer i forskellige farver fra sort til gyldenbrun afhængigt af renhed og oprindelse. Det kan indtages oralt eller ryges, f.eks. i en pibe, vandpibe, bong, bubbler eller vaporizer, ved hjælp af en varm kniv, i joints, blandet med cannabisknopper eller tobak, ved flaskerygning eller anvendes som ingrediens i mad.
Cannabistinktur betegner ekstraktet af cannabinoider i alkohol. Cannabinoiderne ekstraheres fra cannabisplanten med spiritus med højt alkoholindhold (oftest kornalkohol) for at fremstille tinkturen.
Hasholie er en harpiksagtig matrix af cannabinoider, der fremstilles ved ekstraktion med opløsningsmiddel og formes til en hærdet eller viskøs masse. Hasholie er et af de mest potente cannabisprodukter på grund af sit høje indhold af psykoaktivt stof. Brugen af hasholie ekstraheret med butan og superkritisk kuldioxid er på det seneste blevet stadig mere populær.
Infusioner betegner forskellige typer cannabisinfusioner, som adskiller sig fra hinanden ved det brede udvalg af ikke-flygtige opløsningsmidler, der kan anvendes til at fremstille en cannabisinfusion. For at fremstille en sådan infusion blandes cannabisplantemateriale med et opløsningsmiddel og presses og filtreres derefter for at overføre olierne fra planten til opløsningsmidlet. Kakaosmør, smør fra mælk, madolie, glycerin og fugtighedscremer til huden er almindeligt anvendte opløsningsmidler.
Medicinsk marihuana betegner brugen af cannabisplanten som en lægeanbefalet urtebehandling samt syntetisk THC og cannabinoider. Denne brug kræver generelt en recept, og distributionen sker sædvanligvis inden for rammer, der er fastlagt af lokal lovgivning. Flere forskningsstudier har vist, at brugen af cannabis eller dets derivater virker mod f.eks. kemoterapiinduceret kvalme og opkastning, neuropatiske smerter og multipel sklerose.