Ultrazvučna priprema seruma bogatog trombocitima

• Plazma bogata trombocitima (PRP) je krvna plazma obogaćena trombocitima, koja se koristi za medicinske i estetske tretmane.
• Ultrazvučna liza i kondicioniranje vrlo su efikasna metoda za pripremu plazme bogate trombocitima.
• Hielscher Ultrasonics nudi razne ultrazvučne sisteme koji odgovaraju zahtjevima tretmana krvi (npr. za pripremu unutar čiste sobe i izvan nje).

Serum bogat trombocitima

Ultrazvučna obrada (sonikacija) pouzdana je i jednostavna metoda za lizu trombocita u autolognom krvnom serumu radi oslobađanja faktora rasta. Frakcije dobivene iz trombocita – poznate i kao autologni kondicionirani serum (ACS) – koriste se za obnovu tkiva ili estetske tretmane. Da bi se postigli optimalni rezultati, PRP se prije injekcije obogaćuje.
Za pripremu obogaćene plazme s faktorima rasta ćelija, sonikacija je vrlo efikasna i djelotvorna metoda za lizu ćelijskih membrana i oslobađanje gotovo svih faktora rasta ćelija iz trombocita. Ultrazvučnom lizom i kondicioniranjem može se koristiti čak i antikoagulirana krv.
Kondicioniranje PRP-a sonikacijom prikladan je i isplativ način za dobivanje koncentriranih faktora rasta.

Ultrazvučna liza plazme bogate trombocitima (PRP)

Efekti ultrazvučne lize

Ultrazvučni tretman krvnog seruma rezultira homogenom lizom trombocita radi oslobađanja zarobljenih faktora rasta (faktor rasta AB (PDGF-AB), faktor rasta AA (PDGF-AA), faktor rasta BB (PDGF-BB), vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), transformirajući faktor rasta β (TGF-β), epidermalni faktor rasta (EGF), inzulinu sličan faktor rasta (IGF), faktor rasta epitelnih ćelija ECGF i fibroblastni faktor rasta (FGF)). Trombociti i njihove alfa-granule razgrađuju se sonikacijom, koristeći fenomen akustične kavitacije. Korištenje ultrazvučne kavitacije za lizu trombocita smanjuje mogući negativan uticaj ponovljene metode zamrzavanja i odmrzavanja na aktivnost faktora rasta.

Protokol za ultrazvučnu pripremu PRP-a

Otprilike 16 mL svježe prikupljenog uzorka autologne krvi pažljivo se okrene 8–10 puta u epruveti kako bi se krv i antikoagulansi dobro izmiješali. Nakon toga uzorak se centrifugira na 1800 g tokom 20 min na sobnoj temperaturi. Nakon centrifugiranja trombociti i mononuklearne ćelije čine bjelkasti sloj na dnu sloja plazme, koji je poznat kao plazma bogata trombocitima (PRP). Gornji sloj poznat je kao plazma siromašna trombocitima (PPP). Mononuklearne ćelije mogu se ukloniti ili ostati u uzorku. Često mononuklearne ćelije ostaju u uzorku PRP-a kako bi se izbjegli dodatni koraci, koji nose rizik od kontaminacije.
Napomena: Ultrazvučni tretman autolognog PRP-a mora se provoditi u sterilnim uslovima.
PRP i PPP se odvajaju i prikupljaju. U PPP se dodaje 1,5 mL 10% otopine kalcijevog hlorida, dok se u PRP dodaje 0,5 mL 5% etanola. Obje suspenzije se pažljivo promiješaju i ostave da stoje 5 min na sobnoj temperaturi. Na kraju se 1 mL PPP-a dodaje suspenziji PRP-a i ostavlja da stoji dok se ne formira fibrinski ugrušak.
Ultrazvučni tretman: Budući da formirani trombocitni gel djeluje kao rezervoar za oslobođene faktore rasta, fibrinski gel mora se razgraditi kako bi se oslobodili dostupni faktori rasta. Parametri za ultrazvučnu lizu i oslobađanje faktora rasta su sljedeći: sonicirajte uzorak u epruveti uređajem UP200Ht ili UP200St (200W, 26kHz) sa sonotrodom S26d2. Da bi se izbjeglo pregrijavanje uzorka krvi, sonikacija se može izvoditi u pulsnim ciklusima (npr. 10 s uključeno, 30 s isključeno). Uzorak treba staviti na led radi hlađenja tako da se temperatura optimalno održava između 2–5°C. Nakon sonikacije uzorak se centrifugira na 16.000 g tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Supernatant se prikuplja i može se čuvati na -70°C.
Koncentracija trombocita u frakciji PRP-a obogaćena je 1,7–4,5 puta u soniciranoj metodi u poređenju s prosječnim brojem trombocita u punoj krvi prema literaturi.

PRP je kombiniran s terapijom matičnim ćelijama dobivenim iz masnog tkiva (ultrazvučno oslobođene autologne matične ćelije iz masnog tkiva, pomiješane s PRP-om i ubrizgane natrag u tkivo pacijenta radi obnove).

Ultrazvučna oprema

Hielscher Ultrasonics je stručnjak za sofisticiranu i pouzdanu ultrazvučnu tehnologiju. Naši ultrazvučni uređaji koriste se širom svijeta za lizu, ekstrakciju i pripremu uzoraka – direktno i indirektno. Autoklavabilni kao i jednokratni pribor osigurava tretman bez kontaminacije autolognih uzoraka krvi. Većina naših sistema može se koristiti za ultrazvučnu lizu matičnih ćelija i PRP-a, što naše ultrazvučne uređaje čini ekonomski još efikasnijim.
U tabeli ispod navedeni su naši ultrazvučni uređaji pogodni za pripremu plazme bogate trombocitima, kao i njihov preporučeni volumen uzorka. Dostupni su i veći ultrazvučni uređaji te sistemi izrađeni po mjeri.

Kontaktirajte nas već danas! Rado ćemo vam pomoći pronaći optimalan ultrazvučni uređaj!