Ultrasonik VialTweeter ilə nümunənin hazırlanması

Təhlildən əvvəl nümunənin hazırlanması toxumaların homojenləşməsi, lizisi, zülalların, DNT, RNT, orqanellələrin və digər hüceyrədaxili maddələrin çıxarılması, həll edilməsi və deqazasiyası kimi müxtəlif analitik prosesləri tələb edə bilər. VialTweeter, eyni şəraitdə eyni vaxtda bir neçə nümunə boru hazırlayan unikal ultrasəs cihazıdır. Qapalı sınaq borularının dolayı sonikasiyası sayəsində çarpaz çirklənmə və nümunə itkisinin qarşısı alınır.

ultrasəs nümunəsinin hazırlanması

Ultrasəsləmə nümunəni polimer zəncirvari reaksiya (PCR), Western Blots, analizlər, molekulyar ardıcıllıq, xromatoqrafiya və s. kimi analizlərə hazırlamaq üçün nümunə müalicəsinin ümumi üsuludur. analitik olaraq. Sonikasiyanın əsas üstünlüyü ondan ibarətdir ki, ultrasəsin iş prinsipi sırf mexaniki qüvvələrə əsaslanır. Ultrasəs lizisi və hüceyrənin pozulması, sonomexaniki kəsmə qüvvələri ilə əldə edilir, bu da ultrasəsləmə üstünlüyünü verir ki, zülal çıxarılması üçün istifadə olunan həlledicilər liziz zamanı da istifadə edilə bilər. VialTweeter kimi ultrasəs hüceyrə pozucuları hüceyrə divarlarını / membranlarını qırır və hüceyrə daxili və həlledici arasında kütlə köçürməsini təşviq edir. Beləliklə, analit (məsələn, DNT, RNT, zülallar, orqanellər və s.) hüceyrə matrisindən həllediciyə səmərəli şəkildə köçürülür. Bu, söndürmə və ekstraksiya addımlarının ultrasəs hüceyrənin pozulması prosesi ilə üst-üstə düşməsi deməkdir ki, bu da ultrasəs lizisini çox təsirli edir. Bundan əlavə, ultrasəs nümunəsinin hazırlanması üçün yuyucu vasitələr və digər lizis reagentləri tələb olunmur, bunlar lizatın strukturunu dəyişdirə və məhv edə bilər və təmizlənmə ilə bağlı sonrakı çətinliklərlə tanınır. Başqa bir lizis üsulu olan fermentativ pozulma uzun inkubasiya vaxtlarını tələb edir və çox vaxt təkrar olunmayan nəticələr verir. Ultrasəs nümunəsinin hazırlanması nümunənin hazırlanmasında toxuma homogenləşməsi, hüceyrənin pozulması, liziz, zülal çıxarılması və lizat həlli kimi ümumi problemləri aradan qaldırır. Ultrasəs müalicəsinin intensivliyi bioloji nümunəyə tam olaraq nəzarət edilə və tənzimlənə bildiyindən, deqradasiya və nümunə itkisinin qarşısı alınır. Avtomatik olaraq nəzarət edilən və idarə olunan nümunə temperaturu, nəbz rejimi və sonikasiya müddəti optimal nəticələri təmin edir.
 

VialTweeter xüsusilə eyni şəraitdə birdən çox nümunənin eyni vaxtda hazırlanmasını tələb edən laboratoriya işləri üçün əlverişlidir. VialTweeter 10 flakonu (məsələn, Eppendorf, sentriquq, NUNC boruları, kriyo flakonlar) saxlaya bilən və onları dəqiq idarə olunan şəraitdə intensiv şəkildə sonikləşdirən ultrasəs bloklu sonotroddur. Ultrasəs enerjisi flakonların divarları vasitəsilə nümunə mühitinə birləşdirildiyi üçün, müalicə zamanı flakonlar bağlı qalır. Beləliklə, nümunə itkisi və çarpaz çirklənmə tamamilə qarşısı alınır.

VialTweeter-ə uyğun flakonlar və borular

VialTweeter Eppendorf, sentrifuqa, krio flakonlar və müxtəlif NUNC flakon növləri kimi 10 ümumi konusvari və ya dairəvi dibli boruları tutmaq üçün uyğundur, lakin deşiklər tələb əsasında digər flakon və boru ölçülərinə uyğunlaşdırıla bilər. Zəhmət olmasa, hansı növ sınaq borularından istifadə etmək istədiyinizi bizə bildirin ki, VialTweeter-inizi müvafiq olaraq dəyişdirə bilək. Falcon boruları və digər sınaq qabları, stəkanlar və qablar kimi daha böyük sınaq boruları üçün VialPress əlverişli həll yoludur.

VialPress ilə VialTweeter

10 boru deşikli VialTweeter özü artıq unikal və yüksək funksional ultrasəs cihazı olsa da, VialPress əlavəsi VialTweeter-i daha çox yönlü və işləmək üçün çevik edir. VialPress, Falcon boruları və ya digər kiçik və ya orta ölçülü sınaq şüşələri kimi daha böyük nümunə borularını VialTweeter cəbhəsinə bərkitməyə imkan verən sıxacdan ibarət olan VialTweeter üçün aksesuardır. Soldakı şəkildə blokda 10 Eppendorf flakonu saxlayan VialTweeter, VialPress isə sonikasiya üçün daha böyük bir sınaq borusunu ön tərəfə fiksasiya edir. VialPress intensiv sonication üçün 5-ə qədər daha böyük sınaq borusu tutmağa qadirdir.

VialTweeter Nümunə Hazırlama Protokolları

VialTweeter bioloji nümunələri sonikasiya etmək üçün geniş istifadə olunur. Təhlildən əvvəl nümunələr biokimyəvi və ya biofiziki analizlər və analizlər üçün hazırlanmalıdır, məsələn, liziz, toxuma homogenləşdirilməsi, zülal çıxarılması, DNT/RNT-nin kəsilməsi, qazsızlaşdırma və s. VialTweeter-in ümumi tətbiqi məməlilərin (insan və heyvan) toxumalarının, həmçinin bakteriya hüceyrələrinin və viral hissəciklərin lizisi/hüceyrələrinin pozulmasıdır. VialTweeter ilə uğurla müalicə olunan bioloji nümunələrə insan ağciyər epitel hüceyrələri, hematopoetik kök hüceyrələr, miyeloid leykemiya hüceyrələri, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pnevmoniyası, mikobakteriyalar / Mycobacterium tuberculosis kompleksi (MTBC) və bir çox digər bakteriya, botanika və mikrob hüceyrələri.
Aşağıda VialTweeter-i özündə əks etdirən bir neçə seçilmiş protokolu tapa bilərsiniz.

In-Vivo Qlutatyon Təyinatı üçün VialTweeter ilə E.Coli Lizis

MG1655 ştammının Escherichia coli bakteriyaları A600 0,5-ə çatana qədər MOPS minimal mühitində 200 ml ümumi həcmdə yetişdirildi. Stress müalicəsi üçün kultura 50 ml-lik kulturalara bölündü. 0,79 mM allisin, 1 mM diamid və ya dimetil sulfoksid (nəzarət) ilə 15 dəqiqəlik inkubasiyadan sonra hüceyrələr 10 dəqiqə ərzində 4000 q-da 4°C-də yığılmışdır. 700µl KPE tamponunda qranulların yenidən suspenziyasından əvvəl hüceyrələr iki dəfə KPE tamponu ilə yuyuldu. Deproteinasiya üçün, ultrasəslə hüceyrələrin pozulmasından əvvəl (3 x 1 dəq; VialTweeter ultrasəs cihazı) 300µl 10% (ağırlıq/həc) sulfosalisilik turşu əlavə edildi. Supernatantlar sentrifuqadan sonra toplandı (30 dəq, 13000 q, 4°C). Sulfosalisil turşusunun konsentrasiyası 3 həcmli KPE tamponunun əlavə edilməsi ilə 1%-ə endirildi. Ümumi glutatyon və GSSG ölçüləri yuxarıda göstərildiyi kimi aparılmışdır. Hüceyrə glutatyon konsentrasiyaları E. coli hüceyrələrinin həcmi 6,7×10-15 litr və hüceyrə sıxlığı A600 0,5 (1×108 hüceyrə ml-1 mədəniyyətinə ekvivalent) əsasında hesablanmışdır. GSH konsentrasiyaları ümumi glutatyondan 2[GSSG] çıxılmaqla hesablanmışdır. (Müller et al. 2016)

VialTweeter ilə Alpha-Synuclein Fibril Fragmentation

VialTweeter sonikatoru alfa-sinuklein fibrillərinin və lentlərinin etibarlı və səmərəli parçalanması üçün geniş istifadə olunur. VialTweeter ilə alfa-sinuklein parçalanması üçün ətraflı təsvirləri, protokolları və istinadları tapmaq üçün buraya klikləyin!

Qrafit Ocağından əvvəl VialTweeter ilə Hüceyrə Lizisi Atom Absorbsiya Spektrometriyası

Bacillus subtilis 168 (trpC2) 15 dəqiqəlik antibiotik stressinə məruz qaldı, sonra hüceyrələr 3320 xg-da yığıldı, beş dəfə 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5 ilə yuyuldu, 10 mM Tris-də yenidən dayandırıldı, pH 75 ilə pozuldu. Hielscher VialTweeter alətində. (Wenzel et al. 2014)

Kütləvi Spektrometriyadan əvvəl VialTweeter Nümunəsinin Hazırlanması

İnsan CD34- hematopoetik gövdə/əcdad hüceyrələrinin liyofilləşdirilmiş hüceyrə qranulları 100 mM ammonium hidrogenli karbonatlı karbonatlı və ammonium-hidrogenli sonik-venter ilə 8 M karbamiddə 10µl (peptid seyreltmə seriyası üçün toplu HEK293 preparatı üçün 200µl) içində yenidən dayandırıldı. buz üzərində aralıq soyutma ilə üç dəfə 60% amplituda, 60% dövrü və 20s müddətində. (Amon və başqaları 2019)

VialPress istifadə edərək Nümunə Hazırlama Protokolları

Təzə kahı (Lactuca sativa) 1 q bitkinin (təzə çəki) 200, 100, 50 və ya 20 ml bufer məhluluna nisbətində 0,5 M HEPES tamponunda (pH 8, KOH tənzimlənmiş) homojenləşdirildi. Ümumi homogenat həcmini 3,5 və 12 ml arasında saxlamaq üçün bitki kütləsinin tampon məhlulunun həcminə nisbəti dəyişdirildi. Bitki kütləsinin tampon məhlulunun həcminə nisbəti, homogenatın ümumi həcmini 3,5 və 12 mL arasında saxlamaq üçün dəyişdirilmişdir ki, bu da zondla homogenləşdirməyə imkan verir. Homogenatlar daha sonra 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Almaniya) ilə təchiz olunmuş VialTweeter ilə UP200St istifadə edərək, 3 dəqiqə (80% nəbz və 100% güc) ilə dolayı ultrasəsdən keçdi. Bu cihazın istifadəsi çirklənmənin qarşısını aldı. (Laughton et al. 2019)

VialTweeter ilə Sonikasiya zamanı Etibarlı Temperatur Nəzarəti

Temperatur bioloji nümunələrin müalicəsi üçün xüsusilə vacib olan mühüm prosesə təsir edən amildir. Bütün mexaniki nümunə hazırlama üsulları kimi, sonication istilik yaradır. Bununla belə, VialTweeter istifadə edərkən nümunələrin temperaturu yaxşı idarə oluna bilər. Biz sizə nümunələrinizi VialTweeter və VialPress ilə analiz üçün hazırlayarkən onların temperaturuna nəzarət etmək və nəzarət etmək üçün müxtəlif variantları təqdim edirik.

1. Nümunə temperaturunun monitorinqi: VialTweeter-i idarə edən ultrasəs prosessoru UP200St, ağıllı proqram təminatı və qoşula bilən temperatur sensoru ilə təchiz edilmişdir. Temperatur sensorunu UP200St-ə qoşun və temperatur sensorunun ucunu nümunə borularından birinə daxil edin. Rəqəmsal rəngli toxunma displey vasitəsilə siz UP200St menyusunda nümunə sonikasiya üçün xüsusi temperatur diapazonunu təyin edə bilərsiniz. Maksimum temperatura çatdıqda ultrasəs cihazı avtomatik olaraq dayanacaq və nümunənin temperaturu təyin edilmiş temperaturun ∆ aşağı dəyərinə enənə qədər fasilə verəcəkdir. Sonra sonikasiya avtomatik olaraq yenidən başlayır. Bu ağıllı xüsusiyyət istidən qaynaqlanan deqradasiyanın qarşısını alır.
2. VialTweeter bloku əvvəlcədən soyudula bilər. Titan blokunu əvvəlcədən soyutmaq üçün VialTweeter blokunu (yalnız çeviricisiz sonotrode!) soyuducuya və ya dondurucuya qoyun, nümunədə temperaturun yüksəlməsini təxirə salmağa kömək edir. Mümkünsə, nümunənin özü də əvvəlcədən soyudula bilər.
3. Sonikasiya zamanı sərinləmək üçün quru buzdan istifadə edin. Quru buzla doldurulmuş dayaz nimçədən istifadə edin və VialTweeter-i quru buzun üzərinə qoyun ki, istilik sürətlə dağılsın.

Bütün dünyada müştərilər bioloji, biokimyəvi, tibbi və kliniki laboratoriyalarda gündəlik nümunə hazırlama işləri üçün VialTweeter və VialPress-dən istifadə edirlər. UP200St prosessorunun ağıllı proqram təminatı və temperatur nəzarəti, temperatur etibarlı şəkildə idarə olunur və istiliyin səbəb olduğu nümunənin deqradasiyasının qarşısı alınır. VialTweeter və VialPress ilə ultrasəs nümunəsinin hazırlanması yüksək etibarlı və təkrarlana bilən nəticələr verir!

VialTweeter-in texniki təfərrüatları

VialTweeter, blok daxilindəki deşiklərdə 10 flakon saxlaya bilən titandan hazırlanmış blok sonotroddur. Əlavə olaraq, VialPress istifadə edərək, 5-ə qədər daha böyük sınaq borusu VialTweeter ön hissəsinə bərkidilə bilər. VialTweeter elə qurulmuşdur ki, ultrasəs enerjisi etibarlı və vahid sonikasiya nəticələrini təmin etmək üçün daxil edilmiş hər bir flakona bərabər paylanır. Kiçik bir dönmə VialTweeter sonotrode-ni qeyri-bərabər yerə tənzimləyir və sınaq borularını şaquli olaraq düzəldir.

Bir Baxışda VialTweeter-in üstünlükləri

• Eyni vaxtda 10 flakonun intensiv sonikasiyası
• Nümunəyə damar divarı vasitəsilə yüksək ultrasəs intensivliyində dolayı sonikasiya
• Dolayı sonication çarpaz çirklənmə və nümunə itkisinin qarşısını alır
• Tənzimlənən və idarə oluna bilən sonikasiya amplitudasına görə təkrarlana bilən nəticələr
• VialPress sizə daha böyük boruları sonikasiya etməyə imkan verir
• 20 ilə 100% arasında tənzimlənən amplituda
• 0 ilə 100% arasında tənzimlənən nəbz rejimi
• Avtoklav edilə bilən

Bu VialTweeter tərəfindən təchiz edilmişdir UP200 St, 200 vatt güclü ultrasəs prosessoru. UP200St amplituda, sonikasiya vaxtı, pulsasiya və temperatur kimi bütün vacib ultrasəs proses parametrlərinə dəqiq nəzarət etməyə imkan verən ağıllı proqram təminatı ilə təchiz edilmişdir. Bu, VialTweeter-i bioloji və biokimyəvi laboratoriyalarda uğurlu təkrarlana bilən proses nəticələri üçün etibarlı alətə çevirir.
Amplituda 20 ilə 100% arasında tənzimlənə bilər və bununla da ultrasəs intensivliyini nümunənizə uyğunlaşdırmağa imkan verir. Məsələn, DNT və RNT-nin kəsilməsi və parçalanması çox kiçik DNT fraqmentlərinin istehsalının qarşısını almaq üçün daha yumşaq bir amplituda tələb edir, siçan beyninin toxuma homogenləşməsi üçün yüksək intensivlikli sonikasiya lazımdır. UP200St prosessorunda ağıllı və intuitiv menyu vasitəsilə ideal amplituda, sonikasiya intensivliyi və müddəti seçin. Menyuya və parametrlərə asanlıqla daxil olmaq və rəngli sensorlu displey vasitəsilə idarə etmək olar. Parametrlərdə siz amplituda, pulsasiya / dövr rejimi, sonication müddəti, ümumi enerji girişi və temperatur hədləri kimi sonikasiya parametrlərini əvvəlcədən təyin edə bilərsiniz. Tədqiqat və istehsalatda sınaqların və sınaq nəticələrinin təkrarlanması çox vacibdir. Bu o deməkdir ki, proses şəraitinin dəqiq qeydi və sonikasiya protokolları çox vacibdir. Avtomatik məlumat protokollaşdırılması bütün sonikasiya məlumatlarını inteqrasiya olunmuş SD-kartda CSV faylına yazır ki, siz müxtəlif sonikasiya işlərini asanlıqla yoxlaya və müqayisə edə biləsiniz. Bütün ultrasəs proses məlumatlarına asanlıqla daxil olmaq və CSV faylı kimi paylaşmaq olar.
Hielscher Ultrasonics tədqiqat işinizi asanlaşdırmaq və təkmilləşdirmək üçün sizə qabaqcıl texnologiya təqdim etməyə çalışır!